大鲵皮肤分泌液中抗菌肽的鉴定及生物活性研究
海洋水生动物抗菌肽的研究及在养殖业中的应用
海洋水生动物抗菌肽的研究及在养殖业中的
应用
1海洋--一座宝库
海洋是人类发展和繁荣的重要资源，蕴藏着无尽的宝藏，丰厚的营养物质也给人们带来了大量的精神和物质上的财富。
随着人类技术的进步，通过采捕渔业，发现了海洋生物中的一些宝藏，有的可以为我们的食品添加珍贵的营养物，有的还可以用来抗菌。
2海洋水生动物抗菌肽的研究
近些年来，研究者们将目光聚焦在海洋水生动物身上寻找新型抗菌肽，因为海洋水生动物体内含有大量的抗菌肽，不仅能够有效抑制细菌的生长，还可以抑制细菌的袭击和感染，在增强动物体内免疫力上有着重要作用。
研究者们已经从海洋水生动物体内分离出了数百种抗菌肽，有些肽段具有非常好的抗菌性能，对于重要的。
常见病原体如金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和大肠杆菌（Escherichia coli）有着良好的阻断作用，并且抗菌肽中具有耐药性低、复苏低、低毒性和较好的生物安全性，可以有效防止海洋水生动物养殖中的病害。
3海洋水生动物抗菌肽在养殖业的应用
海洋水生动物抗菌肽的临床应用已经得到确认，在养殖业也得到了广泛的应用，如添加抗菌肽抑制海洋水生动物养殖过程中的致病菌
的感染，从而确保养殖的效果。
此外，还可以借助抗菌肽调控海洋水生物生长发育，从而提高养殖收获效率，增加海洋水生物养殖价值，从而对海洋生态系统做出重要贡献。
4总结
海洋水生动物抗菌肽的研究和在养殖业中的应用，这不仅可以有效抑制海洋水生动物病害，提高养殖效率，而且能够调节海洋生物的生长发育，保护海洋生态系统，为人类的经济发展和生活繁荣提供强有力的支撑。
大鲵多肽制备工艺的研究精选全文完整版
可编辑修改精选全文完整版大鲵多肽制备工艺的研究大鲵多肽是一种具有生物活性的多肽物质，具有抗菌、抗氧化、抗炎等多种生物活性。
因此，大鲵多肽在医药、保健品等领域具有广泛的应用前景。
本文将介绍大鲵多肽的制备工艺。
大鲵多肽的制备方法主要有酸解法、酶解法、超声波法等。
其中，酶解法是目前应用最广泛的制备方法。
酶解法的优点是反应温度低、反应时间短、产物纯度高等。
酶解法的具体步骤如下：1. 大鲵的肌肉组织经过清洗、切碎、研磨等处理后，制成粉末状。
2. 将大鲵肌肉粉末加入适量的缓冲液中，pH值控制在6.0-8.0之间。
3. 加入适量的蛋白酶，如胰蛋白酶、木瓜蛋白酶等，反应温度控制在40-60℃之间，反应时间根据酶的种类和浓度而定。
4. 反应结束后，用酸或碱调节pH值，使其达到最适宜沉淀的范围。
5. 用离心机将沉淀物离心分离，得到大鲵多肽。
大鲵多肽的制备工艺还可以通过超声波法进行。
超声波法的优点是反应速度快、产物纯度高等。
具体步骤如下：1. 将大鲵肌肉粉末加入适量的缓冲液中，pH值控制在6.0-8.0之间。
2. 加入适量的蛋白酶，如胰蛋白酶、木瓜蛋白酶等，反应温度控制在40-60℃之间。
3. 将反应液置于超声波器中，超声波的频率和功率根据反应液的体积和浓度而定。
4. 反应结束后，用酸或碱调节pH值，使其达到最适宜沉淀的范围。
5. 用离心机将沉淀物离心分离，得到大鲵多肽。
大鲵多肽的制备工艺主要有酸解法、酶解法、超声波法等。
其中，酶解法是目前应用最广泛的制备方法。
大鲵多肽具有广泛的应用前景，可以应用于医药、保健品等领域。
大鲵皮肤黏液中抑菌成分的提取与分析
别为 ２ ． ５ ５ ％、 ３ ． ２ ９ ％、 ０ ． ８ ５ ％、 ０ ． ５ ５ ％【 ４ １ 。
疾 病 和恶性 肿瘤 ［ ３ １ 。
人工养殖 的大鲵 皮中富含 皎原 蛋 白 ， 其含 量 约 占大鲵 皮
中 蛋 白质 总量 的 ６ ３ ． ６ ９ ％， 大鲵 皮 胶原 蛋 白多肽 还 含 有 ７种
经 测定 。 大鲵 低 聚 糖 肽 中氨基 酸 含量 丰富 。 符 合 人体 营 养需求 。 除 色氨 酸 未测 出 外 ， 还 含 有较 高 的人 体 其他 ７种 必 需氨基酸 ， 其 中 苏氨 酸 （ Ｔ ｈ ｒ ） 、 谷 氨 氨 酸， 酰胺 （ Ｇ １ ｘ ） 、 丝 氨 酸
（ Ｓ ｅ ｒ ） 的含 量分 别达 １ ３ ． ８ ％、 １ ２ ． ６ ％、 ０ ． ２ ３ ％ ５ １ ， 以苏氨 酸 （ Ｔ ｈ ｒ ） 的含量 最 高 。 １ ． ５ 不 同剂量 大鲵 低 聚糖 肽对 小 鼠免疫 功能 的 影响
关 键 词 大 鲵 ； 皮肤 黏 液 ； 抑 茵成 分 ； 提取； 低 聚 糖肽
中圈分 类号
Ｔ Ｓ ２ ５ ４ ． １
文献标 识 码
Ａ
大鲵皮抗菌肽的制备、性质研究及产品开发
大鲵皮抗菌肽的制备、性质研究及产品开发目录一、内容简述 (2)1. 研究背景和意义 (3)2. 研究目的和任务 (4)3. 国内外研究现状及发展趋势 (4)二、大鲵皮抗菌肽的制备 (5)1. 原料准备与处理 (6)2. 抗菌肽的提取工艺 (8)3. 抗菌肽的分离与纯化 (8)4. 抗菌肽的鉴定与表征 (9)三、大鲵皮抗菌肽的性质研究 (10)1. 抗菌肽的理化性质 (11)2. 抗菌肽的生物活性 (12)3. 抗菌肽的稳定性研究 (14)4. 抗菌肽的作用机制 (14)四、大鲵皮抗菌肽产品开发 (16)1. 抗菌肽在食品领域的应用 (17)2. 抗菌肽在医药领域的应用 (18)3. 抗菌肽在日用化妆品领域的应用 (19)4. 抗菌肽其他应用领域及产品设想 (20)五、实验设计与研究方法 (21)1. 实验材料与方法 (22)2. 实验设计与步骤 (23)3. 数据采集与分析方法 (24)六、结果分析与讨论 (25)1. 大鲵皮抗菌肽制备结果分析 (26)2. 抗菌肽性质研究结果讨论 (27)3. 抗菌肽产品开发进展报告 (28)七、结论与展望 (30)一、内容简述本论文主要研究了大鲵皮抗菌肽的制备、性质及其在医药和生物工程领域的应用潜力。
大鲵皮抗菌肽是一种具有广谱抗菌活性的多肽，由大鲵皮肤细胞中的特定基因编码。
本研究旨在通过提取、纯化和性质分析，深入了解大鲵皮抗菌肽的组成、结构和功能特点，并探讨其在医药、生物工程等领域的应用价值。
我们利用生物技术从大鲵皮肤中提取出抗菌肽，然后通过离子交换色谱、反相色谱和金属亲和色谱等方法进行分离和纯化。
通过质谱、核磁共振等手段对所得到的抗菌肽进行结构鉴定，确定其氨基酸序列和分子量。
我们对所得抗菌肽进行了性质研究，包括其抗菌活性、稳定性、抗氧化性和抗炎性等方面。
实验结果表明，大鲵皮抗菌肽具有良好的抗菌活性，对多种细菌和真菌均表现出显著的抑制作用。
该抗菌肽具有良好的稳定性和抗氧化性，能在极端条件下保持活性。
大鲵黏液糖蛋白及其润肤品制备研究
大鲵黏液糖蛋白及其润肤品制备研究大鲵是我国珍稀物种,其皮肤表面易分泌出黏液。
目前,研究内容主要集中于黏液中的成分及其生物活性方面。
本文主要对子二代大鲵黏液中的糖蛋白进行提取纯化、纯度鉴定、理化性质、体外抗氧化性及润肤品制备工艺方面进行研究。
主要方法与结果如下:以子二代大鲵黏液为原料,经过冷冻干燥成粉后,测定大鲵黏液冻干粉的基本营养成分:粗蛋白82.12%、总糖11.710%、粗脂肪4.05%、灰分1.63%。
采用水提醇沉法提取黏液糖蛋白MGP-。
通过正交试验,得到最佳提取条件为:料液比为1:35,提取时间为12h,温度为70℃。
在此条件下,粗糖蛋白MGP-I的得率为8.36%。
经测定,MGP-Ⅰ的总糖含量为55.54%,蛋白质含量为22.03%,还原糖含量为10.38%。
采用DEAE-52柱层析和Sephadex G-100柱层析对粗糖蛋白MGP-Ⅰ分离纯化后得到糖蛋白MGP-Ⅲ。
采用紫外吸收光谱分析、SDS-PAGE电泳分析、HPLC法检测大鲵黏液糖蛋白MGP-Ⅲ的纯度。
紫外分析分别在193 nm、284 nm处有明显的吸收峰;SDS-PAGE电泳分析,MGP-Ⅲ泳道只有单一的染色带,分子量约为58,000Da;HPLC法,MGP-Ⅲ在RID检测和UV检测中均显示单一的对称峰,并且此峰的保留时间基本相同,约为12 min。
结合上述三种方法,可证明MGP-Ⅲ为单一成分。
黏液糖蛋白MGP-Ⅲ的理化分析。
MGP-Ⅲ的总糖含量为61.83%,蛋白质含量为30.32%;通过茚三酮反应、斐林反应、双缩脲反应,表明MGP-Ⅲ是糖蛋白;吸湿性和保湿性实验结果,MGP-Ⅲ在RH 43%条件下比RH 81%的吸湿率高,在RH 43%条件下比RH 81%的保湿性强,MGP-Ⅲ具有一定的吸湿和保湿作用。
采用体外化学模拟体系测定了大鲵黏液糖蛋白的还原力、羟自由基清除能力、DPPH-自由基清除能力、超氧阴离子自由基清除能力、抗紫外线性能。
中国大鲵皮肤分泌物的研究现状
中国大鲵皮肤分泌物的研究现状黄林艳;黄晓;张婉清;朱广香;王勤【摘要】Chinese giant salamander(Andrias davidianus) is a unique amphibian species in China, and the current research on Chinese giant salamander is mainly about biological evolution,biodiversity, and the molecular mechanisms of gender deter mination. However, with the rise of the study of amphibian skin secretion, people gradually found that the skin of Chinese giant salamander can secrete large amounts of active substances, which have good medicinal and nutritional value. In order to provide valuable reference for researchers, we collated and reviewed the researches of Chinese giant salamander skin secretion,which involved nutritional composition, pharmacological activity and gene,and looked forward to its future research.%中国大鲵(Andrias davdianus)是我国特有的两栖物种,目前对于中国大鲵的研究,多涉及生物进化、生物多样性、性别决定分子机制等问题.而随着两栖动物皮肤分泌物研究的兴起,人们逐渐发现了大鲵的皮肤能够分泌大量的活性物质,这些分泌物具有较好的药用价值以及营养价值.本文整理和回顾了有关中国大鲵皮肤分泌物的营养成分,药理活性以及基因方面的研究成果,并对其以后需要深入研究的内容进行了展望,以期为研究者们提供有价值的参考资料.【期刊名称】《河北渔业》【年(卷),期】2018(000)005【总页数】4页(P57-60)【关键词】中国大鲵(Andrias davidianus);皮肤分泌物;营养物质;药理活性;基因【作者】黄林艳;黄晓;张婉清;朱广香;王勤【作者单位】四川农业大学生命科学学院动物学系,四川雅安 625014;四川农业大学生命科学学院动物学系,四川雅安 625014;四川农业大学生命科学学院动物学系,四川雅安 625014;四川农业大学生命科学学院动物学系,四川雅安 625014;四川农业大学生命科学学院动物学系,四川雅安 625014【正文语种】中文中国大鲵(Andrias davidianus)俗称娃娃鱼，属两栖类,有尾目,隐鳃鲵科，为我国特有的大型珍稀两栖动物，广泛分布于陕西、江西、四川、湖南、湖北等17个省。
4种蛙皮肤活性肽的提取及生物活性比较
4 种蛙皮肤活性肽的提取及生物活性比较
韩俊友1 ,赵瑞利1 ,韩文瑜1 3 ,雷连成1 ,冯 新1 ,江丽娜1 ,乔红伟2 ,胡 博1 (1. 吉林大学 畜牧兽医学院 ,
吉林 长春 130062 ;2. 中国医学科学院 实验动物研究所 ,北京 100021)
摘要 :利用 80 %甲醇和乙醚刺激方法 ,分别提取了 4 种两栖类动物皮肤粗提物和分泌物 ,并进行了生物学活性的测 定 。结果表明 ,4 种蛙皮肤粗提物具有广谱抗菌活性 ,其中中国林蛙有轻微的溶血性 ,牛蛙与美国青蛙粗提物具有 胰蛋白酶抑制剂活性 ;而 4 种蛙皮肤粗提物均无胰蛋白酶活性 ,牛蛙 、美国青蛙与东北林蛙具有很强的凝集素活 性 。利用 M T T 法检测到 4 种蛙皮粗提物具有抗肿瘤细胞与抗病毒活性 。 关键词 :蛙 ;皮肤活性肽 ;生物学活性 ;M T T 法 中图分类号 : S852. 4 ; S859. 79 文献标识码 :A 文章编号 :100524545 (2009) 0520576204
Comparative of biological activities of skin peptides from f our amphibians HAN J un2yo u1 ,ZHAO Rui2li1 , HAN Wen2yu1 3 ,L EI Lian2cheng1 , F EN G Xin1 ,J IAN G Li2na1 ,Q IAO
Abstract : Four kinds of f rog ( R ana catesbei ana , R ana g ry lio , R ana tem porari a chensi nensis and R ana d y bowskii Gurnt her) were involved in t he experiment . Their crude ext ractio ns ,f ro m skin were isolated ,respectively. The crude ext ractions of four Chinese amp hibians were st udied fo r t heir biological activity. The result s indicated all t he four skin ext ractio ns displayed wide spect rum antimicro bial activity. Sample f ro m R ana tem porari a chensi nensis had a lit2 tle Hemolytic. All t he fo ur skin ext ractions had no p roteolytic activity , skin secretions f rom R ana catesbei ana and R ana g ry lio have t ryp sin inhibitory activity. Samples f rom R ana catesbei ana , R ana g ry lio and R ana d y bowskii Gurnt her have significant effect s o n mammalian blood agglutinatio n. On t he ot her hand ,all t he fo ur skin ext ractions showed cytoto xicity on human cancer cells and antivirus activity wit h M T T met hod. Key words :f rog ; skin peptides ;biological activities ;M T T
大鲵皮肤黏液中抑菌成分的提取与分析
大鲵皮肤黏液中抑菌成分的提取与分析作者：王茁来源：《现代农业科技》2017年第16期摘要分别使用电刺激法和直接刮擦法刺激大鲵，收集其所分泌的黏液。
利用海洋曲霉菌酸性蛋白酶酶解大鲵体表黏液获得了大鲵低聚糖肽，研究大鲵低聚糖肽的酶解法条件、生物学特性、理化活性。
结果表明，大鲵皮肤黏液中存在抑菌成分，即低聚糖肽。
关键词大鲵；皮肤黏液；抑菌成分；提取；低聚糖肽中图分类号 TS254.1 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2017）16-0226-01Abstract Andrias davidianus were stimulated by electrical stimulation and direct scratches to collect the mucus. The enzymatic conditions，biological characterisics，physical and chemical activity of oligosaccharides from Andrias davidianus boby mucus were studied by enzymolysis of marine aspergillus acidic protease.The results showed that there was antibacterial component in the skin mucus of Andrias davidianus，that was oligosaccharide peptide.Key words Andrias davidianus；skin mucus；antibacterial component；extraction；oligosaccharide peptide中国大鲵（Andrias davidianus），属于两栖纲有尾目隐鳃鲵科，是我国二级保护动物[1]。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
大鲵皮肤分泌液中抗菌肽的鉴定及生物活性研究王利锋;李学英;王大忠【摘要】目的:鉴定大鲵皮肤分泌液中抗菌肽,研究其部分生物活性.方法:5%醋酸浸提和Sephadex G-50、G-25凝胶过滤色谱等方法分离纯化抗菌肤;采用抑菌圈法检测抗菌活性,Tricine-SDS-PAGE电泳和等电聚焦电泳鉴定其抗菌活性成份.结果:大鲵皮肤分泌液中舍有抗菌活性物质.对革兰阴性菌、革兰阳性菌和真菌均具有较强的抗菌活性;电泳检测显示该小分子多肽相对分子质量约为4300,具有较强的碱性.结论:首次从大鲵皮肤分泌液中分离纯化到一种抗菌肽,此抗菌肽可能是一个具有较强阳离子特征的碱性肽.%Purpose To characterize the antimicrobial peptides from the skin secretions of the Andrias davidianus and to study its bioactivity. Methods This antimicrobial peptide was purified by 5％acetic acid extraction and Sephadex G-50, G-25 gel filtration chromatography. The antimicrobial ability was characterized by inhibiting zone determination. The antimicrobial active substance was identified by tricineSDS-PAGE electrophoresis and isoelectric focusing(IEF) electrophoresis. Results The skin secretions of the Andrias davidianus contain antibiotic active substance. It strongly inhibited Gram-negative, Gram-positive bacteria and fungus. The electrophoresis results showed that its molecular weight was about 4 300 with a strong alkaline property. Conclusion An antibacterial peptide was isolated from the skin secretions of the Andrias davidianus for the first time and this antimicrobial peptide may be a strong feature of the basic peptide cation.【期刊名称】《中国生化药物杂志》【年(卷),期】2011(032)004【总页数】4页(P269-272)【关键词】大鲵;皮肤;抗菌肽;分离纯化【作者】王利锋;李学英;王大忠【作者单位】遵义医学院细胞生物学与遗传学教研室,贵州遵义,563003;遵义医学院细胞生物学与遗传学教研室,贵州遵义,563003;遵义医学院细胞生物学与遗传学教研室,贵州遵义,563003;铜仁学院,贵州铜仁,554300【正文语种】中文【中图分类】R282.74;R961两栖类皮肤湿润、裸露，无疑给外界微生物的侵入提供了便利条件，为了自身生存和适应栖息地多样化生态环境的需要，它们依靠皮肤腺体分泌出一系列抗菌肽，防御外界病原菌的侵袭[1]。
相关研究结果显示，两栖类皮肤抗菌肽呈现出超乎想象的分子和功能的多样性[2-3]。
国内外对于两栖类皮肤抗菌肽的研究主要集中在无尾目两栖类，例如最广泛分布的蛙科(Ranidae)，它们皮肤抗菌肽在种类和数量等方面，都是极其惊人的[4]。
而对于有尾目两栖类，除红瘰疣螈[5](Tylototriton verrucosus)和山溪鲵[6](Batrachuperus)外，目前尚未见文献报道其皮肤分泌液存在抗菌活性物质。
大鲵(Megalobatrachus japonicus daridianus Blanchard)属大型两栖纲有尾目隐鳃鲵科，是我国二级保护动物，有活化石之称。
人们在欧洲、东亚和北美地区发现的大约距今300万至7000万年的大鲵化石暗示其在地球上曾广泛分布[7]。
目前我国大鲵的人工养殖已经实现产业化，为从大鲵皮肤分泌液中提取抗菌肽提供了丰富的资源。
作为现存个体最大的两栖类动物，其皮肤腺发达，在试验中观察到大鲵皮肤在受到理化刺激时能分泌大量白色状黏液，最初呈白浆状，后渐变为黏稠胶状物，具浓涩气味。
本实验对大鲵皮肤分泌液中是否含有抗菌活性物质进行了检测，并鉴定其部分性质，为进一步的研究工作奠定基础。
1 材料1.1 动物和菌种成年大鲵雌雄各一尾，购于贵州锦江娃娃鱼有限公司。
菌种:大肠埃希菌(Escherichia coli)No.ATCC 25922、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)No.ATCC 29213、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)No.ATCC 35984、铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)No.ATCC 27853、白色念珠菌(canidia Albicans)No.ATCC 10213、溶血性链球菌(Hemolytic streptococcus)No.CMCC(B)32264，遵义医学院微生物学教研室保藏。
1.2 试剂葡聚糖凝胶SephadexG-50和SephadexG-25，GE Healthcare公司;低相对分子质量(Mr)标准蛋白，北京经科宏达生物技术有限公司;TEMED、Tris、Tricine、丙烯酰胺、过硫酸铵、考马斯亮蓝R-250，美国Sigma公司;BCA法蛋白定量试剂盒，上海碧云天生物公司;营养肉汤培养基、MH(A)培养基，北京奥博星生物技术有限责任公司。
2 方法2.1 皮肤分泌液的粗提采用电刺激法诱导大鲵皮肤分泌黏液。
按体积比1∶1将收集到的皮肤分泌液用5%乙酸浸提，4℃下搅拌24 h。
12000 r/min离心30 min取上清，用磷酸盐缓冲液调pH至7.2，12000 r/min离心30 min，取上清冷冻干燥，2.2 抗菌肽分离纯化粗提物用注射用水溶解，截留Mr10000的超滤膜4℃下超滤分离，收集Mr大于10000和小于10000两部分溶液，抑菌圈法[7]筛选有抗菌活性的溶液，经 0.45 μm 膜过滤后，Sephadex G-50 凝胶色谱(1.6 cm ×60 cm)分离，用0.05 mol/L 的Tris-HCl缓冲液(pH 7.2)平衡色谱柱，样品上样后用同样的缓冲液洗脱，流速为2.0 mL/8 min，每8 min收集1管，测定A280nm，绘制洗脱曲线，收集各峰。
同样方法筛选具有较强抗菌活性的峰，冷冻干燥浓缩样品至4.5 mL，再采用相同方法，进行Sephadex G-25凝胶色谱(1.6 cm×60 cm)分离，得到具有抗菌活性的溶液浓缩后4℃保存。
2.3 蛋白质含量检测BCA法蛋白定量试剂盒检测抗菌肽溶液的蛋白质含量，按试剂盒说明书操作。
2.4 电泳鉴定2.4.1 Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳分离胶、夹层胶、浓缩胶分别为16.5%，10%和4%的丙烯酰胺凝胶，厚度为0.75 mm，3 种胶长度比例为4∶1.5∶1，阳极缓冲液为0.2 mol/L Tris缓冲液(pH 8.9)，阴极缓冲液为 0.1 mol/L Tris(内含 0.1 mol/L Tricine，0.1%SDS，pH 8.25)溶液。
每孔上样量15 μL，30 V恒压电泳约30 min，当样品进入分离胶时，电压升至100 V约3 h。
2.4.2 等电聚焦电泳按《中国药典》三部(2005版)方法进行，不同之处在于配制凝胶时加入尿素，使最终的电泳胶含33%的尿素。
2.5 抗菌活性检测大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、铜绿假单胞菌培养基为MH(A)培养基;溶血性链球菌的培养基为在MH(A)培养基中加入10%的脱纤维羊血;白色念珠菌培养基为沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂培养基(SDA)。
采用抑菌圈法，中央孔加入注射用水作为阴性对照，其中一孔加入相应抗生素为阳性对照，37℃恒温培养18 h(白色念珠菌28℃恒温培养2 d)，观察抑菌圈大小。
抑菌圈10 mm作为样品最小抑菌浓度的检测标准。
2.6 溶血活性检测微量溶血试验评估溶血活性。
取健康人血液用生理盐水洗涤红细胞至上清无色，3000 r/min离心1～2 min，弃上清，用生理盐水配成2%红细胞悬液，将抗菌肽溶液用生理盐水稀释成500，100，50，40，30，20，10 μg/mL 的溶液，加入等体积的2% 红细胞悬液，阳性对照为0.1%TritonX-100，阴性对照为生理盐水，每个样品设3个平行孔，37℃孵育1 h，离心去掉完整的红细胞。
取上清，540 nm波长处测定各管的吸光度值。
2.7 稳定性实验2.7.1 热稳定性实验100 μg/mL抗菌肽溶液分别在 40，50，60，70，80，90，100，121 ℃下处理 10 min，冰浴冷却，以金黄色葡萄球菌和大肠杆菌为试验菌，未处理抗菌肽溶液为对照，测定其抑菌圈直径，每个处理样品重复试验3次，根据抑菌圈直径大小确定其热稳定性。
2.7.2 酸碱稳定性实验100 μg/mL抗菌肽溶液用0.1 mol/L HCl溶液或 0.1mol/L NaOH 溶液调整样品pH 2.5～10.0;室温放置2 h，用磷酸盐缓冲液将样品pH值复调至7.2，未经处理的抗菌肽溶液为对照，以金黄色葡萄球菌和大肠杆菌为试验菌，每个处理样品重复试验3次，根据抑菌圈直径大小确定其酸碱稳定性。
3 结果3.1 大鲵皮肤分泌物中抗菌肽的分离纯化超滤液抗菌活性检测，Mr小于10000的溶液具有明显的抗菌活性。
Sephadex G-50柱色谱分离，得到2个明显的主峰(图1)。
抗菌试验表明，第2个主峰36～89管收集液有明显的抗菌活性。
Sephadex G-25柱色谱分离，得到3个明显的峰(图2)。
抗菌试验表明，第2个峰11～40管收集液有明显的抗菌活性。
图1 Sephadex G-50凝胶过滤色谱结果Fig.1 The result of gel chromatography by Sephadex G-50图2 Sephadex G-25凝胶过滤色谱结果Fig.2 The result of gel chromatography by Sephadex G-253.2 蛋白质含量检测线性回归方程为:A=0.344 C+0.145，r=0.997，根据回归方程计算出抗菌肽溶液蛋白质含量为 0.95 mg/mL。