真菌诊断思路与方法
植物内生真菌的分类鉴定方法
植物内生真菌的分类鉴定方法
植物内生真菌是一类与植物共生的真菌，能够在植物体内生存和繁殖。
它们对植物的
生长和健康起着重要的作用。
对于研究内生真菌的分类鉴定方法，主要有以下几种。
1. 形态鉴定法：
形态鉴定是最常用和基础的方法之一。
通过观察内生真菌的形态特征，如菌丝、子实
体等，结合专门的分类鉴定书籍或数据库，进行分类和命名。
这种方法对于那些已知的内
生真菌具有较高的精确度和准确性。
2. 生理鉴定法：
除了形态特征外，内生真菌还可根据其在培养基上表现的生理特征进行分类鉴定。
对
内生真菌的产孢能力、生长速度、培养基酸碱度等进行观察和比较，来判断其属种和亲缘
关系。
3. 分子鉴定法：
随着分子生物学技术的发展，分子鉴定法成为目前研究植物内生真菌最常用和准确的
方法之一。
通过提取内生真菌的基因组或某些特定的基因片段（如ITS序列），使用相关
的引物进行PCR扩增和测序，然后与数据库中的已知序列比对，从而确定其分类。
4. 生态学鉴定法：
内生真菌的分类鉴定也可以通过其在植物体内的生态学特征来进行。
通过观察和分析
内生真菌在植物内的分布、数量和相互作用等特征，以及内生真菌与植物共生的生态关系，来辅助进行分类鉴定。
分类鉴定植物内生真菌的方法包括形态鉴定法、生理鉴定法、分子鉴定法和生态学鉴
定法。
不同的方法可以相互结合，提高分类鉴定的准确性和可靠性。
随着科学研究的不断
发展，未来还可能出现更多的分类鉴定方法。
真菌感染的诊断与治疗
约有高达85%的播散性念珠菌病患者无法获得及时和正确的诊断，并给予适当的抗真菌药物治疗。
病情恶化快
Nolla-Salas J, Sitges-Serra A, Leon-Gil C, et al. Intensive Care Med 1997;23:23-30
肝脾念珠菌病
由门脉循环引起
系统性念珠菌病
由胃肠道播散
白念珠菌 热带念珠菌 光滑念珠菌 克柔念珠菌
白念珠菌
念珠菌血症菌种分布 （1992-2003）
% of Isolates by Year(no.tested) 1992 1995 1997 1999 2001 2003 Species (235) (332) (413) (320) (2770) (1715) Candida albicans 44.3 53.3 54.0 54.7 59.8 65.1 Candida glabreta 16.6 20.5 15.3 15.3 16.4 14.2 Candida parapsilosi 21.7 9.0 18.9 10.3 10.7 9.3 Candida tropicalis 11.9 11.4 7.0 11.9 7.9 6.9 Candida krusei 2.6 4.2 1.7 2.8 2.7 2.7 Candida lusitaniae 2.1 0.6 0.0 2.2 1.3 0.4 Candida guilliermondii 0.4 0.4 1.9 0.9 0.6 0.3
现状
病原体：白色念珠菌为第一位，但有下降趋势；非白念珠菌增加（其中热带第一位，克柔、近平滑增加）
途径：内源性为主（正常菌群）
检验真菌的方法
检验真菌的方法
1. 直接镜检法：将短柄棉签蘸取患部分泌物、皮屑、毛发等样本，涂于玻璃片上，用40倍至100倍的显微镜下观察，检测真菌的形态和数量。
2. 细胞学检查法：可采用细胞学方法检查骨髓、淋巴结等组织样本中是否存在真菌，包括涂片法、细胞学初筛法、细胞学制片法等。
3. 培养法：将样本接种于含有丰富营养成分的培养基上，利用真菌的生长特点判定是否存在真菌的培养。
4. 核酸检测法：查找真菌的DNA或RNA序列，并使用PCR 技术的手段拓展浓度，最后用电泳技术侦察出真菌的情况。
5. 基于免疫学的检测：包括诸如ELISA和荧光法等方法，主要检测真菌产生的免疫球蛋白或抗原，以用于检测真菌是否存在。
真菌感染的微生物学实验室检查方法
真菌感染的微生物学实验室检查方法对真菌的诊断需要了解真菌寄生的部位，完整的病史，包括职业、业余爱好和旅游史。
检查一般采用直接镜检和真菌培养两种方法即可确诊。
必要时再进行实验、血清学反应或动物接种等。
标本的采集用无菌操作收集适宜部位的标本，可疑浅部真菌感染应取病变部位的毛发、指（趾）甲屑及皮屑等，可疑深部真菌感染的病人应根据临床症状和体征选取、脑脊液或分泌物、排泄物及痰液等并及时检查，一般不超过1～2小时，以免变质污染。
真菌的直接镜检皮屑、指（趾）甲和毛发等致密而难以透明的标本应先用10%的KOH微加温处理，溶解角质层和细胞基质，然后进行镜检。
脓、痰或血标本可直接涂片镜检。
镜下观察是否有孢子、菌丝或假菌丝。
若怀疑新生隐球菌等有荚膜的真菌感染，根据所致疾病选取标本，经墨汁负染后镜检，见有芽生菌体外围绕着宽厚的荚膜即可做出诊断。
真菌的分离培养一般用于直接镜检不能确诊时。
病原性真菌培养用沙保弱培养基（pH5.6，不适宜生长）培养，为了防止细菌或腐生性真菌的污染，经常加入放线（菌）酮、青霉素、链霉素或其他抑制性抗生素。
如果是皮肤、毛发和甲屑等标本，需经70%乙醇或2%石炭酸浸泡2～3分钟杀死杂菌，再经无菌盐水洗净后接种于沙保弱培养基上，在25℃～28℃的条件下培养数日至数周，观察菌落特征。
可疑深部真菌感染的标本可接种于血平板、肉渣培养基或硫酸钠肉汤内，分别在室温和37℃培养数日至数周。
必要时可在玻片上做真菌小培养，能在光镜下观察真菌的形态和结构的特点及生长发育的全过程，便于鉴别。
阴道或口腔粘膜处标本可直接用棉拭子取材，在血平板上分离。
血液标本需事先增菌，脑脊液标本则取其沉淀物接种于血平板上，于37℃培养。
若疑为假丝酵母菌，可取菌落接种于0.5ml血清试管内，37℃1h后涂片，革兰染色后镜下见有假丝酵母菌细胞长出芽管即可初步鉴定为白假丝酵母菌。
血清学诊断可辅助检查深部真菌感染。
通常使用的方法是乳胶凝集和补体结合等试验。
微生物学真菌镜检
微生物学真菌镜检微生物学是研究微生物的科学，而真菌是微生物学中的一类重要微生物。
真菌是一类具有真核细胞结构的生物，包括了酵母菌、霉菌和伞菌等。
镜检是一种常用的检测手段，可以通过显微镜观察微生物的形态和结构。
因此，微生物学真菌镜检是研究真菌的一种方法，本文将从真菌的特点、真菌镜检方法和应用等方面进行阐述。
一、真菌的特点真菌是一类独特的微生物，与细菌、病毒等其他微生物有着明显的区别。
真菌在形态上多为菌丝状，有时也可以呈现为单细胞的酵母菌。
真菌的细胞壁由纤维素和壳聚糖构成，这也是真菌与细菌的重要区别之一。
此外，真菌在生物学上被归纳为真核生物，与人类和动物的细胞结构相似。
二、真菌镜检的方法真菌镜检是一种通过显微镜观察真菌形态和结构的方法，常用的方法有直接镜检和培养镜检两种。
1. 直接镜检直接镜检是一种简便的真菌镜检方法，适用于临床和实验室的常规检测。
该方法通常采用标本涂片，将待检标本制备成薄片，然后使用染色剂染色，使真菌在显微镜下更容易观察。
常用的染色剂有苏木精、甲苯酚蓝等。
直接镜检可以观察到真菌的菌丝、分生孢子和孢子囊等结构，对于真菌感染的初步判断有很大帮助。
2. 培养镜检培养镜检是一种较为复杂的真菌镜检方法，需要将待检标本进行培养，使真菌生长繁殖，然后再观察其形态和结构。
培养镜检可以确定真菌的种类、判断其对药物的敏感性和抗药性等。
常用的培养基有Sabouraud葡萄糖琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基等。
三、真菌镜检的应用真菌镜检在临床和科研中有着广泛的应用。
在临床上，真菌镜检可以帮助医生判断患者是否存在真菌感染，并确定感染的真菌种类。
例如，对于呼吸道感染或皮肤感染的患者，通过镜检可以迅速确定真菌感染的病原菌，从而指导临床治疗。
在科研领域，真菌镜检是研究真菌的基础方法之一，可以观察真菌的形态变化、生长规律和细胞结构，为深入研究真菌提供了重要的实验依据。
四、真菌镜检的局限性尽管真菌镜检是一种常用的检测方法，但也存在一定的局限性。
真菌培养检查方法
真菌培养检查方法真菌培养检查是医院常用的检查方法，用于检测和鉴定真菌感染。
以下是真菌培养检查的步骤和注意事项：1. 采集标本：根据感染部位的不同，采集不同的标本。
例如，对于皮肤真菌感染，可以从病灶边缘刮取皮屑；对于深部真菌感染，可能需要采集血液、尿液等标本。
采集的标本应该尽快送往实验室进行培养，以免影响检查结果。
2. 培养基选择：根据不同的真菌种类，选择不同的培养基。
常用的培养基有沙保弱培养基、孟加拉红培养基等。
培养基的选择应该根据实验室的具体要求进行选择。
3. 接种：将采集的标本接种在培养基上，接种时要避免污染。
接种后将培养基放入恒温箱中进行培养。
4. 观察：在培养期间，需要定期观察培养基上是否有菌落生长。
一般情况下，真菌在培养基上生长需要几天到几周的时间。
如果发现有菌落生长，需要进行形态学鉴定和生化反应等试验，以确定真菌的种类。
5. 鉴定：通过形态学鉴定和生化反应等试验，可以确定真菌的种类。
有时还需要进行其他检查，如药敏试验等，以确定真菌对不同药物的敏感性。
6. 报告：鉴定完成后，医生会将结果报告给患者。
报告中包括真菌的种类、药敏试验结果等内容。
根据报告，医生可以制定相应的治疗方案。
注意事项：1. 在采集标本前，应该注意个人卫生，避免污染标本。
2. 培养期间，应该保持恒温箱的温度和湿度，以确保培养基上的真菌能够正常生长。
3. 在鉴定真菌时，应该注意观察菌落的形态和颜色等特征，以及进行生化反应等试验，以确保鉴定结果的准确性。
4. 对于深部真菌感染，需要进行多次检查，以排除假阳性的可能。
真菌检测方法
真菌检测方法真菌是一类微生物，广泛存在于自然界中，包括土壤、空气、水体等环境中。
在生活和生产中，真菌不仅对人类和动植物健康造成威胁，还会对食品、饮用水、药品等产品质量产生影响。
因此，对真菌的检测至关重要。
本文将介绍几种常见的真菌检测方法。
首先，传统的真菌检测方法之一是培养法。
这是一种常用的方法，通过将样品接种在含有营养物质的培养基上，利用真菌在培养基上生长繁殖的特性，观察和统计培养基上的真菌数量和种类。
这种方法简单易行，对于一些真菌种类的检测效果较好，但是需要较长的培养周期，并且对于一些难以培养的真菌种类可能无法进行检测。
其次，PCR法是一种利用聚合酶链式反应（PCR）技术进行真菌检测的方法。
这种方法可以通过扩增真菌DNA或RNA的特定片段，来检测样品中的真菌数量和种类。
PCR法具有高灵敏度和高特异性的优点，可以快速准确地进行真菌检测，尤其适用于对样品中真菌种类进行快速筛查和鉴定。
另外，生物传感器技术也被广泛应用于真菌检测领域。
生物传感器是一种利用生物元件（如酶、抗体、细胞等）与传感器技术相结合的检测方法。
通过生物元件与目标真菌的特异性反应，可以实现对真菌的快速检测和定量分析。
生物传感器技术具有检测速度快、操作简便、灵敏度高等优点，对于一些需要快速检测的场合具有很大的应用潜力。
最后，近年来，基于光学技术的真菌检测方法也得到了广泛的关注和应用。
例如，荧光显微镜技术可以通过观察样品中真菌的荧光特性来进行检测；激光散射技术则可以通过检测样品中真菌颗粒的散射光信号来实现真菌的快速检测。
这些基于光学技术的检测方法具有操作简便、检测速度快的优点，对于真菌检测领域具有重要的应用价值。
综上所述，针对不同的真菌检测需求，可以选择合适的检测方法进行应用。
传统的培养法适用于一般真菌的检测；PCR法适用于快速准确的真菌鉴定；生物传感器技术和基于光学技术的检测方法则具有快速、灵敏的特点，适用于一些需要快速检测的场合。
在实际应用中，可以根据具体的检测需求和实际情况选择合适的真菌检测方法，以确保检测结果的准确性和可靠性。
真菌感染诊断标准与治疗指南
2021/5/9
26
念珠菌血症治疗指南*
伴随情况
非粒缺成人
首选
两性B或氟康唑IV或 PO；或卡泊芬净
替代选用
两性B联合氟康唑4-7 日，继以氟康唑
疗程及备注
末次血培养阳性和临 床症状及体症消失后 14日，拔除静脉导管
儿童 s
两性B或氟康唑IV或 PO
卡泊芬净
临床症状和体症消失 14-21日
反复血培养阴性
□几种抗真菌药物的病原学特性、适应性 及安全性比较
□常见深部真菌感染的治疗
■念珠菌、隐球菌 ■曲霉、毛霉属
2021/5/9
4
深部真菌病
□各脏器、皮下组织、皮肤（除表皮外）、 粘膜由真菌引起的感染－深部真菌病
□表皮、毛发、甲床（角质层）真菌所致感 染－浅部真菌病
2021/5/9
5
病原菌
□致病性真菌－组织孢浆菌、球孢子菌、类 球孢子菌、皮炎芽生菌、着色真菌、足分 支菌、孢子丝菌等
侵袭性真菌感染 诊断标准与治疗原则
2021/5/9
1
深部真菌感染呈持续增多趋势
真菌病
每年每百万人发病率
组织胞浆菌病 球孢子菌病 曲霉病 隐球菌病 念珠菌病 孢子丝菌病 芽生菌病
1970年 19.7 10.3 1.9 1.3 1.8 0.9 0.6
1976年 23.0 17.9 4.8 2.3 1.8 0.2 0.5
□临床诊断
■至少符合宿主因素1项+微生物标准1项+临床主要 标准1项（或次要2项）
□拟诊
■至少符合宿主因素1项+微生物标准1项或临床主 要标准1项（或次要2项）
2021/5/9
19
侵袭性肺部真菌感染诊断标准与治疗原则 （草案）国内
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
诊断思路及方法之三：了解曲霉菌的病理特点
• 主要是急性渗出性炎、脓肿、坏死性溃疡、肉和支气管为表现方式。
• 小血管受侵后的出现梗死、化脓、出血、水肿；而支气管侵犯后则表现为支 气管肉芽肿及侵入性支气管炎
诊断思路及方法之四：了解曲霉菌的典型征象
• ①空洞：小空洞，不规则空洞，空气新月征空洞； • ②结节伴晕征； • ③支气管树芽征及支气管侵犯 • ④磨玻璃影，均在结节、空洞、实变、肿块性病灶周围； • ⑤空气新月征或球形空洞+结节浸润伴有中心坏死是本型曲霉菌特征性表现
肺部侵袭性曲霉菌病诊断的具体方法2
• 无条件进行病原学检查（气管镜与活检均不能做时） • ①非典型征象+宿主因素 疑诊 影像学动态观察（建议复查1次2次/周CT） 当病变从非典型向典型转变时 立即启动诊断驱动治疗 观察疗效及影像 学好转情况 启动诊断驱动治疗 观察疗效及影像学好转情况。
• 非典型病变比较弥漫或病情危重：非典型征象+宿主因素 疑诊 广覆盖治 疗【抗细菌+抗真菌治疗（诊断驱动治疗】，治疗同时争取条件进行寻找病 原学及病理学的检查，也需要复查影像学了解疗效及好转情况。
诊断思路与方法之二：烟曲霉菌相关检查
• G实验/和GM实验：尤其GM实验 • 曲霉菌的病原学证据：包括各种培养、涂片及病理学证据，。其中培养有： 痰培养、血培养，组织培养、灌洗液培养、分泌物培养、胸腔积液培养等等； 涂片：常有支气管灌洗液、支气管活检、穿刺活检组织；病理学：常常是经 支气管镜活检及穿刺组织 • 影像学检查：HRCT平扫、HRCT增强、CTPA以及HRCT复查，尤其影像学 复查尤为重要
诊断思路及方法之五：曲霉菌的演变特点
诊断思路及方法之五：曲霉菌的演变特点
• ①征象：非典型（单一） 典型（多种征象共存）：即从结节 磨玻璃影 实变 磨玻璃结 •节 支气管侵犯（小气道-树芽征） 新月征）； • ②症状：轻度 • ③范围：局限 • ④疗效：疗效好 重度； 弥漫； 疗效差； 空洞（空气
肺部侵袭性曲菌病诊断的具体方法1
• 无宿主因素：非典型征象（较少有典型征像）+大量真菌接触史 疑诊 真菌检测（诊断驱动治疗） 积极寻找病原学（血培养、支气管灌洗液或组 织做涂片、病理、培养） • 宿主因素：①非典型征象+宿主因素 疑诊 真菌检测（诊断驱动治疗） 寻找病原学（血培养、支气管灌洗液或活检组织做涂片、病理、培养） • ②典型征象+宿主因素+真菌检测（符合临床诊断） 诊断驱动治疗的同时寻 找病原学或病理证据
真菌诊断思路与方法
开封市中心医院影像科 李红敏
诊断思路与方法之一：了解真菌感染的相关知识
了解真菌的发生条件：①真菌的特性和接触数量；②宿主的免疫状态；③环 境条件条件影响宿主与真菌之间的关系。 了解宿主因素：①基础疾病影响：常见的有结核、恶性肿瘤、糖尿病、营养 不良、烧伤、严重的创伤、肝硬化、血液系统疾病及慢阻肺等；②长期大量 使用广谱抗生素；③使用肾上腺皮质激素、免疫抑制剂、放化疗后，器官移 植、气管插管等；④获得性免疫缺陷综合征 对于无宿主因素患者：需要了解是否有接触大量真菌的病史，比如隧道工、 拆房、蔬菜大鹏种植户、接触大量霉烂物质等
肺曲霉菌病影像诊断价值
• ①.发现病变 • ②提示病变严重程度 • ③了解曲霉菌的疾病的进展变化以及对疗效的评估 • ④从而为临床进一步的确诊提供依据
小结
1.IPA的病因、临床及影像学表现复杂，给我们诊疗带来很大困难 2.了解大量真菌接触史或宿主因素是诊疗第一步 3.对于真菌检测的意义，包括血清G实验、GM实验及支气管灌洗液的 G实验、GM实验对于我们诊断有很大帮助 4.非典型征象的影像学动态变化或典型征象为临床进一步确诊和治疗 提供了依据 5.IPA的病原学检车至关重要，是我们目标治疗的依据 6.IPA的早期诊断及早期治疗尤为重要；临床拟诊-尽早规范的影像学 检查及复查-提出可疑诊断-尽早细菌培养、支气管镜检查、穿刺活检 和尽早应用抗真菌药物实验性治疗--早期诊断---较为满意的疗效！ 7.无条件进行病原学或病理学检查者：尽早影像学检查及及时复查是 了解曲霉菌的影像学演变特点是可靠方法，并及时启动诊断驱动治疗 对曲霉菌并诊断及治疗是有意义的，也是病人受益最大的！！！