4CN显色试剂盒(HRP显色)
hrp显色技术的基本流程
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1. 样品制备，将待检测的样品用适当的溶剂稀释或处理，以达到检测要求的浓度范围。
HRP标记
●产品简介※ Galaxybio 公司研发的活化HRP，对优质辣根过氧化物酶次序偶联，再活化，使辣根酶富含活性基团。
一经活化的HRP，极易和含氨基NH2的小分子或蛋白氨基NH2的共价结合。
因此使用本方法标记物，具有标记率高、活性好、本底低及非常敏感等特点。
敏感性一般是传统过碘酸法标记3~5倍。
微量包装的活化HRP，特别适合科研用的昂贵抗体的标记。
也适合抗体抗原活性的检测。
※一步标记，简便快速。
与待记抗原或抗体混合后（约12个小时过夜标记或37℃2小时。
）※可以微量标记，节省昂贵的抗原抗体※无需透析，即时使用；※标记率极高，可大于95%；敏感性一般是传统过碘酸法标记3~5倍。
※本试剂盒针对氨基进行标记，故只对含有氨基的分子。
可以进行抗原或其他蛋白的标记。
小分子的标记，如瘦肉精、DNA、多肽等等，标记时，如要提高HRP的利用率，可以加入过量的小分子，然后透析除去游离的小分子；如果要即时使用，参考蛋白抗原的标记，减少小分子的用量，从而减少游离的小分子。
※本底远远低于其它方法。
●注意事项：1. 抗原抗体如果是存在于硫酸铵、甘氨酸或Tris缓冲液中，需以PBS缓冲液充分透析，也可以超滤离心管进行超滤；微量的含NH2 的小分子，会严重影响标记率。
2. 反应体系一般100μl～300ul /1mgHRP；太小，可能发生自身交联；也不要太大，太大会影响标记率。
3. REAGENT Ⅲ 终止液，封闭残余活化基团。
4. 注意反应 pH值约维持在9.5左右。
pH值太低，多加反应启动剂。
5.特别提醒，是后续试验中，酶标板条种类不同，本底差异特别大。
当本底高时，以较高浓度蛋白溶液封闭的酶标板，同时把酶标稀释液的蛋白浓度加大。
如果问题依旧存在，请联系我们技术咨询。
6 本试剂仅用于科学研究；●操作步骤：以1mg活化HRP，标记抗体为例（反应体系根据HRP的mg数相应增加）1. 准备待标记物：以蒸馏水或超纯水把待标记物溶解成约1mg/ml。
Western-Blot显色篇
Western Blot显色篇WB蛋白印迹在生物化学这一块是常规实验，就像有人说炒菜中境界最高也最难的是蛋炒饭一样，实验中常规实验也是很考验技能的，除了潜心研究原理、认真揣摩技巧以外，对于新实验试剂的信息把握，勇于尝试新方法也是非常之重要的——各大厂家都在不断开发更方便更灵敏的新产品，“idea是生产力”嘛，因此生物通这里介绍一些能把我们从日常操作中解脱出来，获得“升级版”效果WB产品。
讲完了Western Blotting的电泳转移仪器，蛋白分子量标准和转移膜之后，我们最后来探讨一下WB的检测系统。
一般的WB检测过程中，都会有封闭、一抗、二抗和底物显色这四道工序要“加工”。
我个人觉得底物显色这最后一步是最关键的，也是最有文章可以作的一个部分。
你看，光标记方式就有生物素标记，地高辛标记，各种酶标记等等，酶标的底物又有各种生色底物、化学发光法底物和荧光底物可供选择；就连识别一抗的配体也不一定非要二抗不可，也可以是抗生物素蛋白，链亲和素或者Protein A或G等，更别说各种试剂盒琳琅满目，叫人好像无从下手！不过不急，生物通帮你作个参考，让你对各种产品的优点缺点一览无遗，真正成为一个WB高手。
另外如果实验室有已经建立的固定的显色方法，那也没关系，有时候不经意浏览到的方法可能就会对你的实验有莫大的帮助——这也就达到我们的目的了。
与蛋白质组学一线专家面对面，赶快报名参加第二期蛋白质组学技术与应用高级培训班！封闭和一抗的选择没有太多的选择余地——封闭前面介绍过了；一抗？现在的抗体产品说明书一般都有注明应用范围的，说明可以用于WB的就OK。
如果没有这些信息可以遵从以下原则：单抗专一性高，但是经过SDS-PAGE变性胶电泳的蛋白质可能由于原来的识别位点构象发生改变而不被识别，多抗不如单抗专一性高但更容易得到结果。
如果还有多种抗体选择，那当然是来源于兔或者小鼠抗体为好，因为后继的检测试剂盒一般都是针对兔鼠的居多，因而选择范围更大通用性也更强。
多色免疫荧光染色试剂盒使用说明
多色免疫荧光染色试剂盒使用说明多色免疫荧光染色试剂盒使用说明酪酰胺信号放大(TSA，Tyramide signal amplification)技术是一类利用辣根过氧化酶(HRP)对靶蛋白进行标记的酶学检测方法，类似常规免疫组化的DAB显色方法，TSA技术同样采纳HRP标记的二抗，同样有对应的“显色”步骤(HRP催化加入反应体系的酪胺荧光素底物，产生活化荧光底物，活化底物可与抗原上的酪氨酸等残基共价结合，使样品上稳定的共价结合酪胺荧光素。
之后用热修复法洗去非共价结合的一抗-二抗-HRP复合物，重复下一种一抗-hrp二抗来其次轮孵育，换另一种酪胺荧光素底物，如此往复就可实现多重标记。
TSA具体原理是利用酪胺Tyramide的过氧化物酶反应(酪胺盐在HRP催化H202下形成共价键结合位点)，产生大量的酶促产物，该产物能与四周的蛋白残基(包括色氨酸、组氨酸和酪氨酸残基)结合，这样在抗原-抗体结合部位就有大量的荧光素沉积，结果使其检测信号得到10-100倍增加。
简洁来说，用这种方法做多重免疫荧光是利用二抗上带有的HRP(而不是直接偶联荧光素)，来催化后续添加入体系的非活性荧光素。
荧光素在HRP和过氧化氢的作用下被活化，跟接近蛋白的酪氨酸残基共价偶联，使得蛋白样品与荧光素稳定结合。
然后微波或煮沸或者水浴等热修复处理，前一轮非共价结合的抗体被洗掉，共价结合的荧光素稳定共价结合在样本切片蛋白上。
再换个一抗来其次轮孵育，周而复始。
等到全部抗体孵育结束，荧光素都结合好后，最终去检测结果。
由于每次体系中都只有单一抗体孵育，因此无需担忧抗体交叉反应，以及一抗二抗种属匹配问题，大大削减了试验设计时不同种属抗体选择匹配的限制。
也就是说，假如用TSA技术，同一张片子上全部的靶标都可以选用特异性高的兔单克隆抗体。
搭配同一支抗兔的HRP二抗就可以进行试验，而且信号放大的倍数大大增加。
茹创生物开发的试剂盒详细酪胺荧光染料为以下其中一种或者多种：TYR-480，TYR-520，TYR-570，TYR-620，TYR-690，TYR-780。
人4-羟基壬烯酸(HNE)ELISA试剂盒说明书
人4-羟基壬烯酸（4-HNE）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书厦门慧嘉生物科技有限公司本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆,组织及相关液体样本中4-羟基壬烯酸（4-HNE）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人4-羟基壬烯酸（4-HNE）水平。
用纯化的人4-羟基壬烯酸（4-HNE)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入4-羟基壬烯酸（4-HNE），再与HRP标记的4-羟基壬烯酸（4-HNE）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的4-羟基壬烯酸（4-HNE）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人4-羟基壬烯酸（4-HNE）浓度。
样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
神经HRP示踪显色液(TMB法)
神经HRP 示踪显色液(TMB 法)简介：上个世纪70年代，Kristensopn 和Olsson 报道了HRP 可神经末梢摄取，经轴浆逆行运输至神经元胞体，经组织化学方法可显示出神经元的轮廓，从而开发出HRP 追踪神经元示踪技术，即为HRP 法。
3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)是非常优越的酶免试验显色剂，能溶解于多种有机溶剂和双蒸水中，为稳定的无色溶液，与适量过氧化脲或双氧水与缓冲液混匀后，与过氧化物酶作用产生清晰的蓝色产物，极易观察，在辣根过氧化物酶的催化下, TMB 会产生蓝色沉淀，该沉淀不溶于水和乙醇，显色后呈蓝色，可在显微镜下观察。
Leagene 神经HRP 示踪显色液(TMB 法)是动物经麻醉、注入HRP 后，游离或络合型的HRP 与氧化剂反应生成络合物，该络合物氧化供氢的TMB 显色剂，呈蓝色，在显微镜下清晰可见，该检测法较DAB 法灵敏。
该显色液仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：操作步骤(仅供参考)：(一)、准备工作1、动物麻醉：多用(3.5%)戊巴比妥钠作为麻醉剂，大鼠的麻醉剂量。
2、导入HRP ：有压力注射法、电泳法以及周围神经系统的注射涂抹等法。
3、确定动物存活期。
4、动物灌注：麻醉后，经左心室升主动脉插管行心内灌注固定。
先用生理盐水或PBS 快速灌注。
随后用的多聚甲醛固定液灌注，先快后慢，时间控制在30-40min 。
最后用蔗糖磷酸缓冲液(pH7.4)。
5、取材：取组织置于蔗糖磷酸盐缓冲液中，切片，存于蔗糖磷酸盐缓冲液备用。
(二)、显色反应1、配制TMB 孵育液：取适量的TMB assay buffer 和TMB 显色液，TMB assay buffer ：TMB 显色液按一定的比例混合，即为TMB 孵育液，即配即用，不宜保存。
编号 名称DK0045 50T Storage试剂(A): TMB assay buffer 2×500ml RT 避光 试剂(B): TMB 显色液 30ml -20℃ 避光 试剂(C): TMB 增强剂 2×1mlRT使用说明书1份2、配制TMB显色工作液：取适量的TMB孵育液和TMB增强剂，TMB孵育液：TMB增强剂按一定的比例混合(具体比例应根据具体时间摸索确定)，即为TMB显色工作液，即配即用，不宜保存。
hrp标记二抗的显色原理
hrp标记二抗的显色原理
HRP（Horseradish Peroxidase，辣根过氧化物酶）标记二抗是一种被广泛用于免疫
染色的技术。
该技术是一种非常敏感的技术，能够快速准确的检测和定位细胞的特定抗原。
它的基本原理是利用多氧化物酶HRP的特定特性配合荧光物质和碘醛来染色检测抗原，具
体的检测过程如下：
首先，把HRP标记的抗体和抗原结合在一起，结合相应的抗原，无论是单链抗体还是
双链抗体，它们都能够与抗原结合形成特异性抗原抗体复合物，HRP标记抗体在此过程中
就充当特异性抗原抗体的角色。
接着，在抗原抗体复合物的反应中添加一种叫做TMB的化学物质，此时HRP标记的抗
体就会利用原子氧做过氧化反应，产生了装着三价碘原子的化合物，即碘醛。
碘醛与TMB
发生反应，溶解发生发蓝色，最终形成显色物质，就可以对抗原进行检测出来。
HRP标记二抗的显色原理是基于HRP标记抗体发挥结合特异性反应，以及HRP多氧化
活性，HRP标记抗体结合到目标抗原所产生的特异性抗原抗体复合物中，利用HRP的多氧
化特性加氧反应，将氧化现象应用到与其体外透明的TMB的溶液系统中，TMB与碘醛发生
反应，并生成特征的蓝色，形成蓝色沉淀，而这种蓝色沉积的大小就代表了物体存在的抗
原抗体的数量，因此我们就可以用这种来方法判断抗原的存在数量。
TMB和HRP显色原理
TMB和HRP显色原理TMB和HRP是两种常用的生化试剂，它们可以被用于检测蛋白质、核酸等生物分子。
这两种试剂在实验室中被广泛应用，尤其是在免疫学和分子生物学领域。
本文将介绍TMB和HRP显色原理的基本知识，并探索它们在实验中的应用。
TMB显色原理TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯基二胺）是一种常用的底物，它可以被氧化酶催化剂转化成可见的蓝色产物。
这种催化剂通常是过氧化物酶（POD）或碱性磷酸酶（AP）。
TMB的显色原理可以用以下反应式表示：TMB + H2O2 + POD/AP → OX-TMB + H2OOX-TMB是一种氧化物，它的颜色比TMB更深。
因此，当TMB被氧化后，溶液会从无色或浅黄色变为蓝色或深紫色。
这种反应的灵敏度很高，因此可以用于检测很低浓度的蛋白质或其他生物分子。
HRP显色原理HRP（辣根过氧化物酶）是一种常用的酶标记试剂，它可以与抗体或其他分子结合，用于检测蛋白质、核酸等生物分子。
HRP的显色原理也是氧化还原反应。
HRP可以将底物（如TMB）氧化成可见的产物。
HRP的显色原理可以用以下反应式表示：HRP + H2O2 + Substrate → OX-Substrate + H2OOX-Substrate是一种氧化产物，它的颜色比底物更深。
因此，当底物被氧化后，溶液会从无色或浅黄色变为蓝色或深紫色。
这种反应的灵敏度很高，因此可以用于检测很低浓度的蛋白质或其他生物分子。
应用TMB和HRP显色原理在实验室中被广泛应用，尤其是在免疫学和分子生物学领域。
以下是一些应用示例：1. 酶联免疫吸附试验（ELISA）ELISA是一种常用的免疫学检测方法，它可以用于检测蛋白质、抗体、荷尔蒙等生物分子。
在ELISA中，TMB和HRP被用作底物和酶标记试剂，用于检测特定分子的存在和浓度。
这种技术被广泛应用于医学、生物技术和环境监测等领域。
2. 蛋白质印迹（Western blot）Western blot是一种常用的蛋白质检测方法，它可以用于检测特定蛋白质的存在和表达量。
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4CN 显色试剂盒(HRP 显色)
简介：
4CN 是4-氯-1-萘酚的缩写，属于辣根过氧化物酶(HRP)发色系统，与DAB 、TMB 显色原理类似。
Leagene 4CN 显色试剂盒(HRP 显色)其显色原理是4CN 与氧化物形成紫色沉淀，可以用于细胞或组织在免疫组化或原位杂交时结合的辣根过氧化物酶显色，也可用于Western 等结合有辣根过氧化物酶的膜的显色检测，同时也可以用于细胞或组织内源性的辣根过氧化物酶显色。
该显色试剂盒灵敏度一般，过多的吐温20会抑制其显色反应，光照下易褪色。
该试剂盒仅用于科研领域，不用于临床诊断或治疗。
组成：
自备材料：
1、 洗涤液
2、 蒸馏水
操作步骤(仅供参考)：
1、常规组织切片、细胞样品、膜与辣根过氧化物酶标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用适当洗涤液洗涤3～5次，每次3～5min 。
对于检测内源性辣根过氧化物酶的组织或细胞样品，在适当固定后，也可用洗涤液洗涤3～5次，每次3～5min 。
2、按4CN 显色液：4CN 氧化剂=比例混合, 即为4CN 显色工作液，即配即用。
3、洗涤过组织后，去除洗涤液，加入适量4CN 显色工作液，确保覆盖样品。
4、室温避光孵育或更长时间，直至显色至预期深浅。
5、去除4CN 显色工作液，用蒸馏水清洗1～2次即可终止显色反应。
6、对组织切片或细胞样品，反应终止后，如有必要可用中性红染色液染色，便于观察。
对于膜染色，反终止后可室温晾干避光保存。
注意事项：
1、 本试剂盒给予的4CN 氧化剂多于实际使用量，请按比例使用。
编号 名称 PW0070 100ml Storage 试剂(A): 4CN 显色液 100ml 4℃ 避光 试剂(B): 4CN 氧化剂 2×1ml RT 使用说明书 1份
2、4CN氧化剂易挥发，请注意密闭保存，以免效率下降，一旦开封请尽快使用。
3、4CN氧化剂有腐蚀性，请勿直接接触于人皮肤、毛发等。
4、显色后易褪色，请注意避光，以减少染料分解。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
常见问题及可能原因：
1、背景显色太深
①_x0001_在免疫组化时如果背景显色太深，考虑使用适当的封闭液进行封闭，例如选
购适当的封闭液或使用和一抗相同来源的血清(10%)进行封闭。
也应请注意选购经过适当吸附的二抗，以减小二抗的非特异性吸附。
2、没有显色或显色太弱
①当提高一抗或二抗的浓度。
检测二抗效果，滴一滴稀释二抗在膜上，检测二抗是否可以被正常显色。
②考虑使用更加灵敏的放大检测体系，例如使用生物素检测体系。
③适当延长显色时间，另外确定抗原修复是否对于使用的一抗是必需的。
有效期：6个月有效。
相关：
编号名称
PS0008 通用细胞裂解液
PT0001 BCA蛋白定量试剂盒
PW0040 Western blot一抗稀释液
PW0054 Western抗体洗脱液(酸性)
TE0002 碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(PNP微板法)。