流式细胞术免疫标记简介(完整)演示教学
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医学免疫学实验五 流式细胞术检测免疫细胞表面标记PPT文档42页
36、自己的鞋子，自己知道紧在哪里。——西班牙
37、我们唯一不会改正的缺点是软弱。——拉罗什福科
xiexie! 38、我这个人走得很慢，但是我从不后退。——亚伯拉罕·林肯
39、勿问成功的秘诀为何，且尽全力做你应该做的事吧。——美华纳
40、学而不思则罔，思而不学则殆。——孔子
医学免疫学实验五 流式细胞术检测免疫 细胞表面标记
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46、寓形宇内复几时，曷不委心任去 留。
பைடு நூலகம்
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47、采菊东篱下，悠然见南山。
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48、啸傲东轩下，聊复得此生。
•
49、勤学如春起之苗，不见其增，日 有所长 。
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50、环堵萧然，不蔽风日；短褐穿结 ，箪瓢 屡空， 晏如也 。
谢谢！
医学免疫学实验五 流式细胞术检测免疫细胞表面标记
流式细胞术检测免疫细胞表面标记
实验目的
1 了解BD FACS Verse的流式细胞术 2 学习并掌握FCM 的原理 3了解FCM 的运用 4 简单运用FCM检测免疫细胞特性
✓ Introduction FCM Principles FCM Applications
Introduction
BD是由Maxwell W. Becton和Fairleigh S. Dickinson 于
BD Introduction FCM Principles ✓ FCM Applications
Flow Cytometry Applications Flow Cytometry Applications
• 细胞结构
• • 细胞大小 • • 细胞颗粒度 量与细 胞周 期
利用优化的缓冲液和抗体借 助 流式细胞仪检测转录因子 表达
用流式细胞仪分选细胞或 检测细胞表面蛋白表达
用 BD Phosflow 抗 体 检测关键蛋白的磷酸化水平
用 ELlSA或 ELISPOT方 法 检 测
分泌的细胞因子
..，.---\1 用 流 式 细 胞 仪 检 测 特 异 细 胞 胞内细胞因子表达
1897年在纽约创立的，总部设在新泽西州。
Maxwell W. Becton
Fairlegh S. Dickinson
经过一百多年的发展，BD已成为世界上最大的医疗技术及医
疗设备公司之一，它以领先的技术、卓越的产品质量和诚实可
信的服务赢得了全球用户及合作伙伴的广泛赞誉。
BD Introduction ✓ FCM Principles
Flow Cytometry Principles
某些物质在特定波长范围内的光线照射下，可发出波长比 照射光波长长的光线-即荧光。而这些受激发后能产生荧 光的物质称为荧光素
实验目的
1 了解BD FACS Verse的流式细胞术 2 学习并掌握FCM 的原理 3了解FCM 的运用 4 简单运用FCM检测免疫细胞特性
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Introduction
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Flow Cytometry Applications Flow Cytometry Applications
• 细胞结构
• • 细胞大小 • • 细胞颗粒度 量与细 胞周 期
利用优化的缓冲液和抗体借 助 流式细胞仪检测转录因子 表达
用流式细胞仪分选细胞或 检测细胞表面蛋白表达
用 BD Phosflow 抗 体 检测关键蛋白的磷酸化水平
用 ELlSA或 ELISPOT方 法 检 测
分泌的细胞因子
..，.---\1 用 流 式 细 胞 仪 检 测 特 异 细 胞 胞内细胞因子表达
1897年在纽约创立的，总部设在新泽西州。
Maxwell W. Becton
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经过一百多年的发展，BD已成为世界上最大的医疗技术及医
疗设备公司之一，它以领先的技术、卓越的产品质量和诚实可
信的服务赢得了全球用户及合作伙伴的广泛赞誉。
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Flow Cytometry Principles
某些物质在特定波长范围内的光线照射下，可发出波长比 照射光波长长的光线-即荧光。而这些受激发后能产生荧 光的物质称为荧光素
医学免疫学实验五 流式细胞术检测免疫细胞表面标记
➢每管分1mL细胞； ➢4℃，400g离心5min； ➢弃尽上清，每管加50μL Fc block彻底悬浮，4℃孵育
15min； ➢每管加10μL对应的抗体稀释液，4℃避光孵育30min（铝
箔包好）； ➢每管加500μL PBS，4℃，400g离心5min； ➢弃尽上清，每管加500μL PBS悬浮细胞，尼龙膜过滤后流
1897年在纽约创立的，总部设在新泽西州。
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流式细胞术检测免疫细胞表面标记
实验目的
1 了解BD FACS Verse的流式细胞术 2 学习并掌握FCM 的原理 3了解FCM 的运用 4 简单运用FCM检测免疫细胞特性
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Introduction
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利用优化的缓冲液和抗体借 助 流式细胞仪检测转录因子 表达
用流式细胞仪分选细胞或 检测细胞表面蛋白表达
用 BD Phosflow 抗 体 检测关键蛋白的磷酸化水平
用 ELlSA或 ELISPOT方 法 检 测
分泌的细胞因子
..，.---\1 用 流 式 细 胞 仪 检 测 特 异 细 胞 胞内细胞因子表达
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15min； ➢每管加10μL对应的抗体稀释液，4℃避光孵育30min（铝
箔包好）； ➢每管加500μL PBS，4℃，400g离心5min； ➢弃尽上清，每管加500μL PBS悬浮细胞，尼龙膜过滤后流
1897年在纽约创立的，总部设在新泽西州。
Maxwell W. Becton
Fairlegh S. Dickinson
经过一百多年的发展，BD已成为世界上最大的医疗技术及医
疗设备公司之一，它以领先的技术、卓越的产品质量和诚实可
信的服务赢得了全球用户及合作伙伴的广泛赞誉。
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流式细胞术检测免疫细胞表面标记
实验目的
1 了解BD FACS Verse的流式细胞术 2 学习并掌握FCM 的原理 3了解FCM 的运用 4 简单运用FCM检测免疫细胞特性
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Introduction
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利用优化的缓冲液和抗体借 助 流式细胞仪检测转录因子 表达
用流式细胞仪分选细胞或 检测细胞表面蛋白表达
用 BD Phosflow 抗 体 检测关键蛋白的磷酸化水平
用 ELlSA或 ELISPOT方 法 检 测
分泌的细胞因子
..，.---\1 用 流 式 细 胞 仪 检 测 特 异 细 胞 胞内细胞因子表达
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流式细胞术免疫标记简介完整ppt课件
免疫标记技术
免疫标记技术（immunolabelling technique）:是指用荧光素、放射性同位 素、酶、发光剂或电子致密物质等作为 示踪剂，标记抗体或抗原进行的抗原抗 体反应。
流式细胞术检测蛋白质分子：免疫荧光 标记技术
“雪亮工程"是以区（县）、乡（镇） 、村（ 社区） 三级综 治中心 为指挥 平台、 以综治 信息化 为支撑 、以网 格化管 理为基 础、以 公共安 全视频 监控联 网应用 为重点 的“群 众性治 安防控 工程” 。
FACSCalibur流式细胞仪能够检测的荧 光（Fluorescence）信号
FL1 （第一荧光） -FITC(异硫氰酸荧光素） FL2 （第二荧光） -PE（藻红蛋白） FL3 （第三荧光） -PerCP, PeCy5等 PL4 （第四荧光） -APC（藻青蛋白）
双色直接染色
“雪亮工程"是以区（县）、乡（镇） 、村（ 社区） 三级综 治中心 为指挥 平台、 以综治 信息化 为支撑 、以网 格化管 理为基 础、以 公共安 全视频 监控联 网应用 为重点 的“群 众性治 安防控 工程” 。
正常外周血中通常存在的T细胞亚群
CD3+、CD4+、CD8-：T辅助/诱导细胞（Th/Ti），
占T细胞总数的60%~70%；
CD3+、CD4-、CD8+：T抑制/杀伤细胞（Ts/Tc） ，
20%~30%； CD3+ CD4+ CD8+ ： 1%~3%； CD3+ CD4- CD8-：1%~10%。
CD7+、CD1+、CD2+、CD3+、CD4+、CD8+、TCR+ （即CD4、CD8双阳性）
流式细胞术 ppt课件
制备(如染色)无关。
✓前向角散射(FS)反映被测细胞的大小，它由 正对着流动室的光电二极管装置，接收并 转变为电信号。
✓侧向角散射(SS)反映被测细胞的细胞膜、细 胞质、核膜的折射率和细胞内颗粒的性状， 它由一个光电倍增管(PMT) 接收并转变为 电信号，这些电信号存储在流式细胞仪的 计算机硬盘或软盘内。
➢荧光信号也有两种：
✓一种是细胞自发荧光，它一般很微弱。
✓一种是细胞样本经标有特异荧光素的单克 隆抗体染色后，经激光激发发出的荧光， 它是我们要测定的荧光，荧光信号较强。
✓这两种荧光信号的同时存在是我们测定时 需要设定阴性对照的理由，以便从测出的 荧光信号中减去细胞自发荧光和抗体非特 异结合产生的荧光。
(1)单参数数据显示和分析
➢ 细胞的每一个单参数测 量数据用直方图来显示
➢ 横坐标表示散射光或荧 光信号相对强度值，其 单位是道数，可以是线 性的，也可以是对数的
➢ 纵坐标表示细胞数。
(2)双参数数据显示和分析：
➢细胞的双参数测量数据和细胞数量的关系 用一维直方图、二维点阵图、假三维地形 图、等高线图和密度图显示和分析。
✓流动室孔径有60μm、100μm、150μm 、 250μm等多种，供检测者选择。小型仪器一 般固定装置了一定孔径的流动室。
➢流动室里的鞘液流一般是稳定流动，控制鞘 液流的装置是在流体力学理论的指导下由一 系列压力系统、压力感受器组成。
➢调整好鞘液压力和标本管压力, 鞘液流包绕 样品流并使样品流保持在液流的轴线方向， 能够保证每个细胞通过激光照射区的时间相 等，从而使激光激发的荧光信息准确无误。Fra bibliotek等高线图
分别是测定细胞的两种荧光双参数数据，横坐标 和纵坐标分别代表一种荧光参数，同理只要设定 “十字门”就可得到两种荧光的各种测定值，密 度图和等高线图较点阵图更直观。
✓前向角散射(FS)反映被测细胞的大小，它由 正对着流动室的光电二极管装置，接收并 转变为电信号。
✓侧向角散射(SS)反映被测细胞的细胞膜、细 胞质、核膜的折射率和细胞内颗粒的性状， 它由一个光电倍增管(PMT) 接收并转变为 电信号，这些电信号存储在流式细胞仪的 计算机硬盘或软盘内。
➢荧光信号也有两种：
✓一种是细胞自发荧光，它一般很微弱。
✓一种是细胞样本经标有特异荧光素的单克 隆抗体染色后，经激光激发发出的荧光， 它是我们要测定的荧光，荧光信号较强。
✓这两种荧光信号的同时存在是我们测定时 需要设定阴性对照的理由，以便从测出的 荧光信号中减去细胞自发荧光和抗体非特 异结合产生的荧光。
(1)单参数数据显示和分析
➢ 细胞的每一个单参数测 量数据用直方图来显示
➢ 横坐标表示散射光或荧 光信号相对强度值，其 单位是道数，可以是线 性的，也可以是对数的
➢ 纵坐标表示细胞数。
(2)双参数数据显示和分析：
➢细胞的双参数测量数据和细胞数量的关系 用一维直方图、二维点阵图、假三维地形 图、等高线图和密度图显示和分析。
✓流动室孔径有60μm、100μm、150μm 、 250μm等多种，供检测者选择。小型仪器一 般固定装置了一定孔径的流动室。
➢流动室里的鞘液流一般是稳定流动，控制鞘 液流的装置是在流体力学理论的指导下由一 系列压力系统、压力感受器组成。
➢调整好鞘液压力和标本管压力, 鞘液流包绕 样品流并使样品流保持在液流的轴线方向， 能够保证每个细胞通过激光照射区的时间相 等，从而使激光激发的荧光信息准确无误。Fra bibliotek等高线图
分别是测定细胞的两种荧光双参数数据，横坐标 和纵坐标分别代表一种荧光参数，同理只要设定 “十字门”就可得到两种荧光的各种测定值，密 度图和等高线图较点阵图更直观。
流式细胞术简介课件
PPT学习交流
37
PPT学习交流
12
流式细胞仪可检测到的细胞参数 • 荧光信号
PPT学习交流
13
R1
File: 4
Acquisiti on Date: 06-Mar-03
Quad UL UR LL LR
Events % Gated
254
2.40
1067 10.08
5291 49.98
3975 37.55
X Mean 37.47
密度图
二维等高图ຫໍສະໝຸດ 直方图图 报告中常见的几种流式细胞图
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24
仪器设置调节
1. 用未染色细胞 2. 调整仪器PMT电压
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26
开机需准备试剂
• 建议首次试机避免进行大量试验，仅需准备下列 样品
（1）Negative Control（不加任何抗体）。 （2）CD3-FITC（FL1 单染） （3）CD19-PE（FL2 单染） （4）CD3-FITC /CD19-PE（FL1/FL2 双染）。
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数据分析
• 设门 • 设定阴性与阳性群体的界限 • 确定阳性与阴性细胞群体 • 统计阳性或阴性细胞群体的百分率，平
均荧光值，绝对数或抗体结合数
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2. 用单染色的细胞调节仪器补偿
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流式细胞术(免疫学检验课件)
Region设置 Gate设置
第四节 FCM的临床应用
一、淋巴细胞亚群分析
淋巴细胞是机体免疫系统中的一群重要细胞群， 是执行免疫功能和参与免疫调节的免疫活性细胞， 主要分为T细胞、B细胞和NK细胞3大类。
不同淋巴细胞表达的CD抗原都有独自的抗原特性， 在临床疾病发生过程中对各淋巴细胞的CD抗原进 行测定，对于判断机体免疫功能状态、了解免疫 相关疾病的发病机制具有十分重要的意义。
最常用的方法是酶消化法、机械法、化学处理法 和表面活性剂处理法等。
（四）石蜡包埋组织单细胞悬液制备
该制备方法的建立扩大了流式细胞术的应用范围， 有利于进行临床回顾性研究和利用。
常用的方法有二甲苯脱蜡法、组织清洁剂脱蜡法和 甲氧-双氧水处理法。
石蜡切片一般适宜厚度是40μm~50μm，脱蜡须彻底， 获取组织后，用酶进行消化处理，消化时间不宜过 长，以免细胞核被消化溶解，经过滤、漂洗后即可 获得单细胞悬液。
三、三参数直方图
三维坐标均为参数 （散射光或荧光）而 非细胞数
对复杂的细胞亚群观 察更为直观、准确， 但对其数据的统计分 析较难
四、多参数组合分析
FCM常常需要分析三个以上的参数，但软件技术 能够无法显示四维空间结构。
随着FCM多色荧光信号检测的发展，所得到的荧 光信号和散射光信号需根据需要进行组合分析以 获得所需的信息。
SSC信号的强弱与 细胞内颗粒结构的 质量成正比，用于 检测细胞内部结构 属性
前向散射光示意图 细胞大小
结构复杂程度
侧向散射光示意图
血
液
白
细
胞
粒细胞
散
点
单核细胞
图
淋巴细胞
荧光信号：由待检细胞上标记的特异性荧光染料 受激光激发后产生。
流式细胞术PPT课件
电荷式分选
lasers
–超声振动器(15-100kHz)
–液流充电系统
–高压偏转板
–收集装置(流式管、培养板)
断裂点(充电) 高压偏转板
29
四路分选原理
电荷式分选装置
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分选指标
• 分选时间由三方面决定：进样速度、目标细胞所占比例、 需要收集的细胞数。
需要细胞数
目标细胞所占比例(%)
1
5
50
104
• Hoechst（343, 450）常见为Hoechst33342和Hoechst33258，非嵌入的 方式与DNA链上的A-T碱基对结合。能对活细胞染色，用于活细胞 DNA定量分析，如精子分选；还用于侧群细胞的分选。
• PY（派若宁 560, 573） RNA染料，能进入活细胞。
• AO（吖啶橙 509, 525） DNA、RNA染料，染色后DNA呈黄绿色荧光， RNA呈橙黄色荧光，可进行DNA/RNA双参数分析。
• 多色标记荧光素搭配原则：每个通道只能选择一种荧光素； 各个通道之间的荧光素可以随意搭配。
FACSCalibur常用四色搭配：FITC、PE、PerCP、APC。
33
B 根据抗原表达强弱合理选择 抗体
• 不同的荧光素强度有所不同；
CD5
• 高表达的抗原可用不太“亮” 的染料，更“亮”的荧光素分 配给表达低的抗原：
99%以上。 • 分选收获率是指被分选出的细胞与原来总细胞的百分比。 • 分选纯度和收获率永远是相互矛盾的，纯度提高，收获率
降低，反之亦然。
– 富集模式(enrich mode) – 纯化模式(purify mode) – 单细胞模式(single cell mode)
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（2）前B细胞（pre-B）：CD34和TdT消失，出现 CyCD79 、 CD10 、 CD20 、 CD9 、 CDw78 、 CD74 ， cμ+ （胞浆IgM重链）。
（ 3 ） 未 成 熟 （ 早 期 ） B 细 胞 （ immature B cell）：CD9、CD10消失，出现 SIgM、CD22。 CD20、CD24、CD40、CD72、CD74、CDw78、CD79 表达增加。其他新的B抗原CD37、CD2、CDw75、 CDw76相继出现。
检测细胞表面蛋白抗原 检测细胞胞浆内蛋白性抗原 检测细胞内细胞因子 优势：在同一细胞上同时检测
多种标志
血液系统各型细胞免疫标志
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
造祖/干细胞
CD34+抗原在早期造血祖细胞内呈高水平表达，随着 细胞成熟其表达呈进化性下降，继而消失。
CD38抗原是造血干细胞向多系定向分化的标志之一， 并随一定的分化过程表达上调
细胞功能 细胞表面蛋白抗原 细胞胞浆内蛋白性
抗原 细胞内细胞因子 细胞增殖 细胞内钙离子浓度
免疫标记技术
免疫标记技术（immunolabelling technique）:是指用荧光素、放射性同位 素、酶、发光剂或电子致密物质等作为 示踪剂，标记抗体或抗原进行的抗原抗 体反应。
流式细胞术检测蛋白质分子：免疫荧光 标记技术
80％～90％和95％以上的NK细胞表达CD16 和CD56。用CD3-CD16+CD56+可定义NK 细胞。
B细胞标记
B细胞 B细胞的分化主要分为B祖细胞、前B细 胞、未成熟B细胞、成熟B细胞、活化B细胞和浆细 胞6个阶段。
（1）B祖细胞（pro-B）：此期最早表达的B细胞 特异性抗原是CD19，同时表达CD34、细胞核TdT、 HLA-DR、CD40、CyCD22。
最近发现CD90（Thy-1）是比CD34更早的干、祖细胞 标志
结合多种分化抗原的表达可以作为造血细胞不同发育 阶段的标志。 如CD34+、CD33+细胞群为多能干细胞向髓系定向的标 志； CD34+、CD19+多为多能干细胞向B系定向的祖细胞。 CD34+、TdT+、CD10+、CD7+则被认为是向T系定向 的祖细胞。
CD5、CD7是T细胞白血病较特异的标记， 也是髓系白血病时最常见的伴随标记。 CD45则是白细胞的共同标记抗体
CD25和CD28主要分布于活化T淋巴细胞表 面，为活化T淋巴细胞标志。胸腺细胞、静 止T细胞、静止B细胞以及NK细胞表面无表 达。
末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）和II类人类 白细胞抗原（HLA-DR）的阳性表达对早期 T细胞白血病的诊断有重要价值。
前 三 种 表 型 细 胞 的 TCR 主 要 为 TCRαβ ， 而 CD4CD8- T细胞主要表达TCRγδ，他们都执行细胞免 疫功能。
CD2是绵羊红细胞受体和淋巴细胞功能相 关抗原-2（LFA-2），表达于人95%T细胞、 50%～70％胸腺细胞和大颗粒淋巴细胞 （LGL／NK）的表面。
CD3是T细胞表面抗原，表达于成熟胸腺细 胞、静息和激活的的外周血T细胞，是鉴定 T细胞的重要标志，其胞浆和膜CD3是早期 和普通型T细胞白血病的主要分型标记。
（6）浆细胞（plasma cell）：激活B细胞进 一步分化成为产生抗体的浆细胞，这时获得 PC-1、PCA-1和CD138浆细胞特异抗原，CD85表 达增加，CD38抗原再出现。而SIg和上述B抗原 消失。CD79仍可存在于胞质中。
CD7+、CD2-、CD3-、CD4-、CD8-、TCR-
CD7+、CD2+、CD3+、CD4-、CD8-、TCR（即CD4、CD8双阴性）
CD7+、CD1+、CD2+、CD3+、CD4+、CD8+、TCR+ （即CD4、CD8双阳性）
CD7+、CD2+、 CD3+、CD4+、 CD8-、TCR+
（4 ）成熟B 细 胞（mature B cell）：SIgM 和 IgD同时表达，并出现CR、FcR和丝裂原受体，上 述B细胞抗原继续存在。
（5）活化B细胞（activated B cell）：成熟 B细胞被抗原或丝裂原刺激后，成为活化B细胞， 继之增生和分化。在此过程伴随表达B细胞激 活抗原CD23、CD77、CD80、CD86和其他激活相 关 抗 原 如 CD25 、 CD26 、 CD30 、 CD69 、 CD70 、 CD71、CD38等。膜结合型Ig逐渐减少，分泌型 Ig逐渐增加。
CD7+、CD2+、 CD3+、CD4-、 CD8+、TCR+
进入外周淋巴器官和血液，执行免疫功能
正常外周血中通常存在的T细胞亚群
CD3+、CD4+、CD8-：T辅助/诱导细胞（Th/Ti），
占T细胞总数的60%~70%；
CD3+、CD4-、CD8+：T抑制/杀伤细胞（Ts/Tc） ，
20%~30%； CD3+ CD4+ CD8+ ： 1%~3%； CD3+ CD4- CD8-：1%~10%。
T细胞标志
T细胞及其亚群 T祖细胞（pro-T）的表型为CD34+、TdT+、CD10+、
CD7+ 未成熟T细胞标志CD3、CD4和CD8。 在T细胞发育过程中，CD7是最早出现的T细胞标志，
且贯穿表达在整个T细胞分化发育过程中。 胸腺细胞要分化发育为有功能的成熟T细胞，细胞
表面标志需经历一定的变化过程。
流式细胞术系列讲座之——免疫标记
流式细胞术免疫标记应用简介
2009-12-03
上次流式细胞术讲座内容（概述）
流式细胞术的一般介绍 流式细胞术在临床检测和科研中的应用
流式细胞仪可检测的细胞参数
细胞结构 细胞大小 细胞颗粒性程度 细胞表面面积 核浆比例 DNA含量与细胞周
期 RNA含量
FACSCalibur流式细胞仪能够检测的荧 光（Fluorescence）信号
FL1 （第一荧光） -FITC(异硫氰酸荧光素） FL2 （第二荧光） -PE（藻红蛋白） FL3 （第三荧光） -PerCP, PeCy5等 PL4 （第四荧光） -APC（藻青蛋白）
双色直接染色
流式细胞术免疫荧光标记的应用
（ 3 ） 未 成 熟 （ 早 期 ） B 细 胞 （ immature B cell）：CD9、CD10消失，出现 SIgM、CD22。 CD20、CD24、CD40、CD72、CD74、CDw78、CD79 表达增加。其他新的B抗原CD37、CD2、CDw75、 CDw76相继出现。
检测细胞表面蛋白抗原 检测细胞胞浆内蛋白性抗原 检测细胞内细胞因子 优势：在同一细胞上同时检测
多种标志
血液系统各型细胞免疫标志
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
造祖/干细胞
CD34+抗原在早期造血祖细胞内呈高水平表达，随着 细胞成熟其表达呈进化性下降，继而消失。
CD38抗原是造血干细胞向多系定向分化的标志之一， 并随一定的分化过程表达上调
细胞功能 细胞表面蛋白抗原 细胞胞浆内蛋白性
抗原 细胞内细胞因子 细胞增殖 细胞内钙离子浓度
免疫标记技术
免疫标记技术（immunolabelling technique）:是指用荧光素、放射性同位 素、酶、发光剂或电子致密物质等作为 示踪剂，标记抗体或抗原进行的抗原抗 体反应。
流式细胞术检测蛋白质分子：免疫荧光 标记技术
80％～90％和95％以上的NK细胞表达CD16 和CD56。用CD3-CD16+CD56+可定义NK 细胞。
B细胞标记
B细胞 B细胞的分化主要分为B祖细胞、前B细 胞、未成熟B细胞、成熟B细胞、活化B细胞和浆细 胞6个阶段。
（1）B祖细胞（pro-B）：此期最早表达的B细胞 特异性抗原是CD19，同时表达CD34、细胞核TdT、 HLA-DR、CD40、CyCD22。
最近发现CD90（Thy-1）是比CD34更早的干、祖细胞 标志
结合多种分化抗原的表达可以作为造血细胞不同发育 阶段的标志。 如CD34+、CD33+细胞群为多能干细胞向髓系定向的标 志； CD34+、CD19+多为多能干细胞向B系定向的祖细胞。 CD34+、TdT+、CD10+、CD7+则被认为是向T系定向 的祖细胞。
CD5、CD7是T细胞白血病较特异的标记， 也是髓系白血病时最常见的伴随标记。 CD45则是白细胞的共同标记抗体
CD25和CD28主要分布于活化T淋巴细胞表 面，为活化T淋巴细胞标志。胸腺细胞、静 止T细胞、静止B细胞以及NK细胞表面无表 达。
末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）和II类人类 白细胞抗原（HLA-DR）的阳性表达对早期 T细胞白血病的诊断有重要价值。
前 三 种 表 型 细 胞 的 TCR 主 要 为 TCRαβ ， 而 CD4CD8- T细胞主要表达TCRγδ，他们都执行细胞免 疫功能。
CD2是绵羊红细胞受体和淋巴细胞功能相 关抗原-2（LFA-2），表达于人95%T细胞、 50%～70％胸腺细胞和大颗粒淋巴细胞 （LGL／NK）的表面。
CD3是T细胞表面抗原，表达于成熟胸腺细 胞、静息和激活的的外周血T细胞，是鉴定 T细胞的重要标志，其胞浆和膜CD3是早期 和普通型T细胞白血病的主要分型标记。
（6）浆细胞（plasma cell）：激活B细胞进 一步分化成为产生抗体的浆细胞，这时获得 PC-1、PCA-1和CD138浆细胞特异抗原，CD85表 达增加，CD38抗原再出现。而SIg和上述B抗原 消失。CD79仍可存在于胞质中。
CD7+、CD2-、CD3-、CD4-、CD8-、TCR-
CD7+、CD2+、CD3+、CD4-、CD8-、TCR（即CD4、CD8双阴性）
CD7+、CD1+、CD2+、CD3+、CD4+、CD8+、TCR+ （即CD4、CD8双阳性）
CD7+、CD2+、 CD3+、CD4+、 CD8-、TCR+
（4 ）成熟B 细 胞（mature B cell）：SIgM 和 IgD同时表达，并出现CR、FcR和丝裂原受体，上 述B细胞抗原继续存在。
（5）活化B细胞（activated B cell）：成熟 B细胞被抗原或丝裂原刺激后，成为活化B细胞， 继之增生和分化。在此过程伴随表达B细胞激 活抗原CD23、CD77、CD80、CD86和其他激活相 关 抗 原 如 CD25 、 CD26 、 CD30 、 CD69 、 CD70 、 CD71、CD38等。膜结合型Ig逐渐减少，分泌型 Ig逐渐增加。
CD7+、CD2+、 CD3+、CD4-、 CD8+、TCR+
进入外周淋巴器官和血液，执行免疫功能
正常外周血中通常存在的T细胞亚群
CD3+、CD4+、CD8-：T辅助/诱导细胞（Th/Ti），
占T细胞总数的60%~70%；
CD3+、CD4-、CD8+：T抑制/杀伤细胞（Ts/Tc） ，
20%~30%； CD3+ CD4+ CD8+ ： 1%~3%； CD3+ CD4- CD8-：1%~10%。
T细胞标志
T细胞及其亚群 T祖细胞（pro-T）的表型为CD34+、TdT+、CD10+、
CD7+ 未成熟T细胞标志CD3、CD4和CD8。 在T细胞发育过程中，CD7是最早出现的T细胞标志，
且贯穿表达在整个T细胞分化发育过程中。 胸腺细胞要分化发育为有功能的成熟T细胞，细胞
表面标志需经历一定的变化过程。
流式细胞术系列讲座之——免疫标记
流式细胞术免疫标记应用简介
2009-12-03
上次流式细胞术讲座内容（概述）
流式细胞术的一般介绍 流式细胞术在临床检测和科研中的应用
流式细胞仪可检测的细胞参数
细胞结构 细胞大小 细胞颗粒性程度 细胞表面面积 核浆比例 DNA含量与细胞周
期 RNA含量
FACSCalibur流式细胞仪能够检测的荧 光（Fluorescence）信号
FL1 （第一荧光） -FITC(异硫氰酸荧光素） FL2 （第二荧光） -PE（藻红蛋白） FL3 （第三荧光） -PerCP, PeCy5等 PL4 （第四荧光） -APC（藻青蛋白）
双色直接染色
流式细胞术免疫荧光标记的应用