流式细胞仪在白血病免疫分型诊断
白血病免疫分型测定
临床意义
用于血液病的诊断和分型诊断
方案（Protocol）
2．首先每管中加入标本(骨髓或外周血)100ul(根据细胞的多少决定)，5ulCD45-PC5抗体。室温避光20分钟。
3．每管中加入固定液100ul，剧烈振荡混匀，室温避光15分钟。
4．各管中加入PBS4ml。
5．300g离心5分钟后，弃去上清液，振荡混匀。透膜剂100ul，轻轻混匀，室温避光5分钟。
采集部位骨髓采血
抗凝剂EDTA或肝素抗凝
要求1．样本量1ml。
2．样本应在采集后6小时内处理，冷冻或溶血的标本不能用。
3．样本白细胞计数应在4.0-10.0×109/L之间。若>10.0×109/L，样本需要稀释，用PBS稀释；若<4.0×109/L，应分离单个核细胞。
试剂
品牌剂型规格贮存
贝克曼库尔特
白血病免疫分型测定
方法
流式细胞仪(BeckmanCoulter，贝克曼库尔特)
原理：
双色直接免疫荧光法。荧光素标记的各种单克隆抗体加入到全血中，与细胞膜上或膜内相应的抗原结合，经过溶血、洗涤（和固定）等步骤后，在流式细胞仪上进行分析，从而得到百分数。
标本采集与处理
受检者的准备检查对象生活饮食处于日常状态。
2．首先每管中加入5ulCD45-PC5抗体。
3．然后，按管上的标记，加入相应抗体各10ul(注意：必须是FITC和PE标记的抗体搭配)
4．各管中加入标本(骨髓或外周血)30～100u1(根据细胞的多少决定)，振荡混匀，室温避光20～30分钟。
5．溶血：a. OptiLyse C(按说明书步骤溶血)
7．加抗体，阴性对照管中加入10ul，其余各管加入相应抗体各10ul，室温避光15分钟。
流式细胞仪在白血病免疫分型诊断
流式细胞仪在白血病免疫分型诊断一、概述近年来白血病的免疫分型已成为诊断血液恶性肿瘤不可缺少的重要标准之一。
早年曾用过的荧光显微镜或APAAP方法基本被废弃。
国际上公认的通用的方法是流式细胞术（FCM）。
流式细胞术白血病免疫分型是利用荧光素标记的单克隆抗体（McAb）作分子探针，多参数分析白血病细胞的细胞膜和细胞浆或细胞核的免疫表型，由此了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。
1．流式细胞仪诊断白血病的依据⑴FCM能快速，多参数，客观的定性又定量测定细胞膜、浆、核的抗原表达⑵至今尚未发现白血病的特异抗原。
⑶能用正常血细胞的单抗来进行免疫分型是基于白血病形成的分化阻断学说。
即白血病细胞基因异常，分化受阻于某阶段形成不同亚型的白血病。
这群细胞充盈于骨髓。
正常血细胞从多能干细胞分化、发育、成熟为功能细胞的过程中，细胞膜、细胞浆或胞核抗原的出现、表达增多与减少甚至消失与血细胞的分化发育阶段密切相关，而且表现出与细胞系列及其分化程度相关的特异性。
因此，这些抗原的表达与否可作为鉴别和分类血细胞的基础。
白血病是造血系统的恶性肿瘤，在形态上变化虽相当大，但仍能表达正常血细胞所具有的抗原，因而仍可依据其抗原的表达谱对白血病进行免疫分型。
2．流式细胞仪诊断白血病的意义⑴骨髓血细胞是形态学分型的基础，FCM白血病免疫分型是对形态学分型的重要补充和进一步深化，国际白血病MIC分型协作组认为免疫分型对每一例急性白血病都是必不可少的，对下列情况意义更大：①用形态学、细胞化学染色不能肯定细胞来源的白血病。
②形态学为急性淋巴细胞白血病（ALL）或急性未分化白血病（AUL）但缺乏特异性淋巴细胞系列抗原标记。
③混合性白血病。
④部分髓系白血病。
目前，免疫分型对粒细胞和单核细胞白血病的鉴别尚有一定困难。
⑤慢性淋巴细胞白血病。
⑥微小残留白血病。
⑵临床预测；可根据抗原的表达情况预测病情的预后：如白血病患者有CD7+与CD34+共表达，预后不好。
四色流式细胞术用于急性白血病免疫分型的中国专家共识(完整版)
四色流式细胞术用于急性白血病免疫分型的中国专家共识（完整版）白血病免疫分型是利用不同单克隆抗体检测白血病细胞胞膜和胞质抗原，通过流式细胞术(FCM）分析其表型，实现对白血病细胞系列来源及其分化程度的诊断。
白血病免疫分型已成为诊断白血病的必要依据，同时也可为微小残留病（MRD)的检测以及白血病的治疗和预后提供重要信息。
白血病免疫分型是细胞形态学分型的重要补充和进一步深化，以荧光标记技术联合FCM检测并判定白血病免疫表型，具有准确、快速、客观、重复性好、特异性强等特点，提高了白血病诊断的准确性[1, 2]。
采用不同数量及组合的荧光标记免疫抗体处理白血病细胞并进行荧光检测及分型是免疫分型的关键环节。
准确诊断需要选择一定数量的抗体，白血病免疫分型涉及多个造血系列的抗原，但目前国内甚至国际上均无规范化的方案可以借鉴；国内不同的医疗单位所用的抗体数量和种类均有较大的异质性，有些单位由于应用的抗体数量较少或抗体选择不当，影响对疾病的诊断、分期和预后的判断。
鉴于国内的实际情况，中国免疫学会血液免疫分会临床流式细胞术学组经过多次讨论，提出以CD45/侧向散射光（SSC）为基础的中国FCM急性白血病免疫分型四色方案，本方案以2组表面抗原作为筛查抗原，试图利用相对少的抗体，达到对各个类型白血病进行较全面的检测，具有快速、客观、准确的特点。
已在国内的多家医疗单位试用，证明此方案能够满足临床的需要[3, 4]。
目前，虽然国际上有八色甚至十色方案[5, 6, 7]，但对仪器及操作人员的技术要求较高。
鉴于国内的实际情况，我们首先提出中国FCM急性白血病免疫分型四色方案，供从事急性白血病免疫分型的实验室参考，以期促进我国急性白血病免疫分型诊断的规范化及整体水平的提高。
一、四色方案的基本要求理想的急性白血病免疫分型方案应满足以下几点要求：①识别白血病细胞，能将其与正常细胞或反应性细胞相区别；②鉴别白血病细胞的系列来源；③根据细胞的分化程度对疾病进行亚型分型；④鉴别用于检测MRD 的白血病相关免疫表型(LAIP) ;⑤帮助判断某些特异分子改变，即基因型检测；⑥提供预后相关及治疗靶点的免疫标志检测结果。
流式细胞仪的三大应用范围
2，白血病的免疫分型：
白血病免疫学分型是利用单克隆抗体 (McAb)检测白血病细胞的细胞膜和细 胞浆抗原（CD）,分析其表现型,以了解被 测白血病细胞所属细胞系列（如髓系、 红系、淋巴系等白血病亚型）及其分化 程度。对白血病细胞抗原的分析研究有 助于对白血病分型，为诊断和治疗提供 依据。
举例：T系急性淋巴细胞白血病免疫表 型特点（T-ALL）： 根据T淋巴细胞在胸腺内的成熟顺序， 将T-ALL分为早期、中期和晚期三类。 早期T-ALL：表达CD7和CD1a，CD4、 CD8膜CD3均为阴性；中期T-ALL：除 表达CD7和CD1a外，还表达CD2、 CD5，CD4/CD8同时表达，膜CD3仍为 阴性；晚期T-ALL：膜CD3为阳性，但 丢掉CD1a，其他标志同中期。通过检测 CD抗原来确定白血病分期。
流式细胞仪的主要应用范围
• 1，流式细胞仪的免疫荧光检测； • 2，流式细胞仪的细胞周期检测； • 3，流式细胞仪的细胞分选；
（一）在免疫学中的应用 ----重要的免疫学实验技术
• 抗原(antigen，Ag)是指能刺激机体 免疫系统诱导免疫应答并能与应答 产生如抗体或致敏淋巴细胞发生特 异反应的物质。 • 抗原多为相对分子质量在10,000以上 的蛋白质和多糖大分子.
File: 2006/9/20 Yang.002 Acquisition Date: 19-Sep-06 Quad Events % Gated % Total X UL 2 0.03 0.02 UR 121 1.57 1.21 LL 5939 77.05 59.39 1646 21.35 16.46 LR
File: 2005/2/28 319 Zho Acquisition Date: 28-Fe R1 Quad% Gate % Tota UL 23.30 9.77 UR 1.86 0.78 LL 16.24 6.81 LR 58.60 24.57
白血病免疫分型讲课最终本
白血病免疫分型讲课最终本引言白血病是一种常见的血液系统恶性肿瘤，其发生与免疫系统的异常功能有着密切的联系。
免疫分型是指根据白血病细胞表面的免疫表型特征对其进行分类和鉴定的方法。
通过免疫分型，我们可以更好地理解白血病的发生机制，为个体化治疗提供参考依据。
本文将重点介绍白血病的免疫分型方法及其临床应用。
1. 白血病的免疫分型白血病的免疫分型是基于白血病细胞的免疫表型特征进行分类和鉴定的方法。
在临床上，常用的免疫分型方法主要包括免疫组织化学染色、流式细胞术和免疫基因重排检测等。
1.1 免疫组织化学染色免疫组织化学染色是一种通过对组织切片中的细胞进行特异性标记，以观察和分析细胞表面抗原表达情况的方法。
通过对白血病组织切片进行免疫组织化学染色，可以确定白血病细胞的免疫表型特征，从而进行免疫分型。
1.2 流式细胞术流式细胞术是一种通过流式细胞仪对细胞进行单个细胞的快速、准确地分析的方法。
通过标记白血病细胞表面的特定抗原，并利用流式细胞仪进行检测和分析，可以确定白血病细胞的免疫表型特征，进而进行免疫分型。
1.3 免疫基因重排检测免疫基因重排检测是一种通过检测白血病细胞中免疫相关基因的DNA或RNA重组情况，来确定白血病细胞的免疫表型特征的方法。
通过免疫基因重排检测，可以发现白血病细胞克隆性演变和克隆扩增的过程，为免疫分型提供重要依据。
2. 白血病免疫分型的临床应用白血病免疫分型在临床上有着重要的应用价值。
通过免疫分型，可以更准确地确定白血病的诊断和分型，为患者提供个体化的治疗方案。
此外，免疫分型还可以评估患者的预后风险和治疗反应，指导治疗方案的调整。
2.1 诊断和分型免疫分型可以通过确定白血病细胞的免疫表型特征，帮助医生更准确地进行白血病的诊断和分型。
不同类型的白血病具有不同的免疫表型特征，通过免疫分型可以将白血病分为急性淋巴细胞白血病（ALL）、急性非淋巴细胞白血病（AML）等不同亚型，进而为患者提供合理的治疗方案。
流式细胞术临床应用范围
流式细胞术临床应用范围流式细胞术是一种广泛应用于生物医学领域的高端技术，通过流式细胞仪可以对细胞进行高通量单细胞分析。
随着技术的不断创新和发展，流式细胞术在临床应用中的范围也逐渐扩大，为疾病的诊断、治疗和预防提供了重要的支持和帮助。
一、疾病诊断流式细胞术在临床诊断中的应用范围非常广泛，可以用于各种类型的疾病的确诊和分型。
例如，在血液学领域，流式细胞术可以用于白血病和淋巴瘤等血液系统疾病的诊断与鉴别诊断；在免疫学领域，流式细胞术可以用于自身免疫性疾病的诊断和病情监测。
二、免疫细胞治疗随着免疫细胞治疗技术的不断成熟，流式细胞术在该领域的应用也越来越广泛。
通过流式细胞术可以对患者的免疫细胞进行分选、激活和扩增，用于治疗各种肿瘤和疾病。
例如，CAR-T细胞治疗就是基于流式细胞术的原理开发而来，已经在临床上取得了较好的疗效。
三、药物筛选在药物研发领域，流式细胞术被广泛应用于药物的筛选和评估。
通过流式细胞术可以快速、准确地评估药物对细胞的毒性和活性，为药物研发提供重要的数据支持。
同时，流式细胞术还可以用于研究药物的作用机制和药效评价。
四、疾病预防与流行病学研究流式细胞术在疾病预防和流行病学研究中也发挥着重要作用。
通过流式细胞术可以对疫情中的病原体进行快速检测和鉴定，为疾病的早期诊断和防控提供重要的支持。
此外，流式细胞术还可以用于研究疾病的发病机制和流行规律，为疾病的预防和控制提供科学依据。
综上所述，流式细胞术在临床应用中的范围十分广泛，涉及到疾病诊断、治疗、药物研发、疾病预防和流行病学研究等多个领域。
随着技术的不断进步和应用的深化，相信流式细胞术将在未来发挥更加重要的作用，为人类健康事业作出更大的贡献。
运用流式细胞术对75例急性白血病免疫分型的表型分析
对 我院 ７ ５ 例 初 诊 ＡＬ患 者 进 行 免 疫 表 型 分 型 的 资 料分 析如 下 。
１ 资料 与方 法
１ ． １ 临床资 料 随机 选 择 ７ ５例 经 Ｆ ＡＢ分 型 初 诊
为 ＡＬ的我 院 ２ ０ １ １年 ３月 至 ２ ０ １ ４年 ６月 住 院 患 者， 男性 ３ ９例 ， 女性 ３ ６例 ； 年龄 １ ３ ～７ ７岁 。 按
率≥ １ ０ ， 判 定为 阳性 表达 ； 免疫 分 型依据 国际 白血 病 欧 洲协作 组 （ Ｅ Ｇ Ｉ Ｌ ） 的积分 标准 Ｌ ２ ］ 。
２ 结 果
Ｆ ＡＢ分 型标 准＿ １ 分为： 急性 髓 系 白血 病 （ ＡＭＬ ） ４ ５ 例， 其 中 Ｍ。 ２例 ， Ｍ ９例 ， Ｍ ２ Ｏ例 ， Ｍ。 ４例 ， Ｍ ５ 例， Ｍ ４例 ， Ｍ。１例 ； 急 性 淋 巴 细 胞 白血 病 （ ＡＬ Ｌ） ２ ５例 ， 其中 Ｌ ７例 ， Ｌ １ ３例 ， Ｌ 。 ５例 ； 另有 ５例未 能 明确 分 型 。 １ ． ２ 仪 器 与试 剂 流 式 细 胞 分 析 仪 为 美 国 Ｂ ｅ ｃ ｋ — ｍｅ ｎ Ｃ ｏ ｕ ｌ ｔ ｅ ｒ 公 司生 产 ， 型号 Ｅ ｐ ｉ ｃ ｓ － ＸＬ； 试 剂 为美 国 贝克 曼库 尔特 公 司生 产 的单 克 隆 抗 体 ， 髓 系 标 志 抗 体有： ＭＰ ０、 Ｃ Ｄ１ ３ 、Ｃ Ｄ１ ４ 、Ｃ Ｄ ３ ３ 、Ｃ Ｄ ４ １ 、 Ｃ Ｄ１ １ ７ 、 Ｇｌ ｙ Ａ； Ｔ 淋 巴标 志抗 体 有 ： ｃ Ｃ Ｄ３ 、 Ｃ Ｄ２ 、 Ｃ Ｄ ５ 、 Ｃ Ｄ ７ ； Ｂ 淋 巴标 志 抗 体 有 ： ｃ Ｃ Ｄ ７ ９ ａ 、 Ｃ ＤＩ Ｏ 、 Ｃ Ｄ１ ９ 、 Ｃ Ｄ ２ ０ ； ＮＫ 细胞 抗 体 有 ： Ｃ Ｄ（ １ ６ ＋５ ６ ） ； 非 系列抗 体 有 ： Ｃ Ｄ ４ ５ 、
血液流式细胞免疫分型
血液流式细胞免疫分型血液流式细胞免疫分型（Flow Cytometry Immunophenotyping）是一种常用于研究血液细胞群体特征的实验技术。
它通过流式细胞仪对单个细胞进行高速连续检测和分析，可以准确地鉴定和定量不同细胞类型及其亚群。
血液流式细胞免疫分型广泛应用于临床诊断、疾病监测和研究领域。
血液流式细胞免疫分型的原理是利用细胞表面分子的特异性抗原与相应荧光标记的抗体结合，通过流式细胞仪检测细胞中荧光标记物的荧光强度和散射信号，进而确定细胞的免疫表型。
不同的抗体标记不同的细胞表面标志物，可以对不同类型的细胞进行鉴定和分类。
血液流式细胞免疫分型可用于鉴定和分类多种血液细胞，如淋巴细胞、单核细胞、粒细胞和红细胞等。
在临床诊断中，血液流式细胞免疫分型常用于血液肿瘤的诊断和分期，如白血病和淋巴瘤等。
通过分析细胞表面标志物的表达情况，可以确定细胞的来源和分化状态，帮助医生制定合理的治疗方案。
血液流式细胞免疫分型还可以用于疾病监测和治疗效果评估。
在治疗过程中，通过连续追踪特定细胞亚群的变化，可以评估治疗效果和预测预后。
例如，在HIV感染者中，可以通过测定CD4+T细胞数量来监测疾病进展和指导抗病毒治疗。
此外，血液流式细胞免疫分型还可以用于检测免疫功能异常和自身免疫性疾病等。
血液流式细胞免疫分型的优势在于其高灵敏度、高特异性和高通量性。
通过流式细胞仪的高速连续检测，可以迅速分析大量样本，提高工作效率。
此外，血液流式细胞免疫分型还可以进行多参数分析，同时检测多个细胞表面标志物，更全面地了解细胞特征。
然而，血液流式细胞免疫分型也存在一些局限性。
首先，对于少数细胞数量较少的样本，如骨髓或淋巴结穿刺液，可能需要进行前处理或增加检测敏感性。
其次，标记物的选择和抗体的质量也会影响结果的准确性。
因此，在进行血液流式细胞免疫分型时，需要选择适当的抗体组合，并进行质量控制。
血液流式细胞免疫分型是一种重要的实验技术，可用于研究血液细胞群体特征、临床诊断和疾病监测。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
流式细胞仪在白血病免疫分型诊断一、概述近年来白血病的免疫分型已成为诊断血液恶性肿瘤不可缺少的重要标准之一。
早年曾用过的荧光显微镜或APAAP方法基本被废弃。
国际上公认的通用的方法是流式细胞术（FCM）。
流式细胞术白血病免疫分型是利用荧光素标记的单克隆抗体（McAb）作分子探针，多参数分析白血病细胞的细胞膜和细胞浆或细胞核的免疫表型，由此了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。
1．流式细胞仪诊断白血病的依据⑴FCM能快速，多参数，客观的定性又定量测定细胞膜、浆、核的抗原表达⑵至今尚未发现白血病的特异抗原。
⑶能用正常血细胞的单抗来进行免疫分型是基于白血病形成的分化阻断学说。
即白血病细胞基因异常，分化受阻于某阶段形成不同亚型的白血病。
这群细胞充盈于骨髓。
正常血细胞从多能干细胞分化、发育、成熟为功能细胞的过程中，细胞膜、细胞浆或胞核抗原的出现、表达增多与减少甚至消失与血细胞的分化发育阶段密切相关，而且表现出与细胞系列及其分化程度相关的特异性。
因此，这些抗原的表达与否可作为鉴别和分类血细胞的基础。
白血病是造血系统的恶性肿瘤，在形态上变化虽相当大，但仍能表达正常血细胞所具有的抗原，因而仍可依据其抗原的表达谱对白血病进行免疫分型。
2．流式细胞仪诊断白血病的意义⑴骨髓血细胞是形态学分型的基础，FCM白血病免疫分型是对形态学分型的重要补充和进一步深化，国际白血病MIC分型协作组认为免疫分型对每一例急性白血病都是必不可少的，对下列情况意义更大：①用形态学、细胞化学染色不能肯定细胞来源的白血病。
②形态学为急性淋巴细胞白血病（ALL）或急性未分化白血病（AUL）但缺乏特异性淋巴细胞系列抗原标记。
③混合性白血病。
④部分髓系白血病。
目前，免疫分型对粒细胞和单核细胞白血病的鉴别尚有一定困难。
⑤慢性淋巴细胞白血病。
⑥微小残留白血病。
⑵临床预测；可根据抗原的表达情况预测病情的预后：如白血病患者有CD7+与CD34+共表达，预后不好。
⑶疾病监测：可监测病程的发展，疗效，可进行微小残留白血病的检测。
二、免疫分型常用的免疫标志及其意义1．白血病系列分化抗原T淋巴细胞白血病：CD3、CD5、CD7。
B淋巴细胞白血病：CD10、CD19、CD22。
NK淋巴细胞白血病：CD16、CD56、CD57。
髓系白血病：CD13、CD14、CD33、MPO（髓过氧化物酶）。
红白血病：GlyA（血型糖蛋白A）。
巨核细胞白血病：CD41、CD42、CD61。
2．白血病系列非特异性抗原CD34、HLA－DR为早期细胞抗原，无系列特异性，可与CD38联合运用于免疫分型。
一般而言，干/祖细胞CD34＋、HLA－DR＋、CD38－，原始细胞CD34＋、HLA－DR＋、CD38＋，而幼稚细胞（如早幼粒细胞）CD34－、HLA－DR－、CD38＋。
3．白血病分化阶段抗原T细胞抗原CD4、CD8。
B细胞抗原：CD10、Cyμ（胞浆μ链）、SmIg（表面膜免疫球蛋白）、CD38和CyIg（胞浆免疫球蛋白）、CD11C。
4．白细胞共同抗原CD45为白细胞共同抗原，其表达量在淋巴细胞最高，单核细胞，成熟粒细胞，早期造血细胞（blasts）依次减弱。
红细胞（中，晚幼红细胞，成熟红细胞）不表达CD45。
用SSC/CD45 PerCP双参数分析可十分容易鉴别骨髓和血液中的原始或成熟细胞。
用两个系列或阶段特异性McAb加CD45进行三色免疫荧光染色，经FSC、SSC、McAbl-FITC、McAb2-PE、CD45 PerCP五参数分析，可特异地分析原幼白血病细胞的免疫表型而不受成熟细胞的干扰。
三、白血病及淋巴瘤免疫分型1．AMLMO：有低的SSC和FSC。
在CD45－SSC图上出现在淋巴细胞位置上，至少表达一个特异性标志如CD13或CD116，但MPO比CD13与CD33更灵敏。
一般淋系标志阴性，但也可表达CD7或CD4。
一般HLA－DR、CD34阳性，有些研究表明CD7与CD34共表达在AML且预后差。
M1：流式上M1与M0相似不易区分，M1一般CD13＋、CD33＋、HLA－DR－，但CD34表达少于M0，可能表达部分CD15。
M2：M0与M1的主要区别是成熟度增加，blasts减少，CD15较M1较显著，CD34弱于M1，CD13有时表达强于CD33，多数病例HLA－DR（-）。
CD45－SSC图显示从髓系blast区至成熟骨髓细胞区的连续细胞带，CD45－SSC图有助于确定blasts比例。
M3、高颗粒性，具较高的SSC，但CD45较成熟C少，多数情况HLA－DR（-）或表达减少，CD34少于M2、一般CD13弱（＋），可有CD2表达。
M4与M5：两型表型相似，但M4较M5表达更多的CD34（＋），较之M0、M1，M4与M5有更大的FSS 和SSC，CD45－SSC图上，成熟C出现在单核区，重要的表型为CD13、CD33、HLA－DR、CD14和CD15，CD33可表达强于CD13，CD33（＋）、CD13（－）、CD34（－）很可能为M5，但只出现在少数病人中，部分M5可见CD56（＋）。
M6：M6较少见且特征不明显，一般HLA－DR，CD34、CD13、CD33阳性，CD45－SSC图显示主要为红系成份。
M7：巨核细胞白血病，在AML中少于1％。
一般CD61（GpⅢa）和/或CD41（GpⅡb-Ⅲa）阳性，而注意由于血小板粘附在blasts上造成的假阳性，可以用流式双色分析在EDTA存在下，测GpⅡb/Ⅲa与CD34以减少激活血小板的粘附。
2．ALL：ALL是儿童中最常见的恶性肿瘤，约占全部肿瘤的25％，在成人，ALL约占急性白血病的25％，我们将ALL分为B祖细胞型，CD10＋或CD10－，前B细胞型，B细胞型，T细胞型。
B祖细胞型ALL：在幼儿约占ALL的65％～70％，青少年为55％～60％，成人为50％。
在儿童，约90％病例CD10＋，在幼儿只有少于50％病例CD10＋，blasts一般FSC、SSC很少，是FAB标准的L1或L2，一般TdT(+)HLA-DR(+)，CD19(+)，此型又分为2个亚型，CD10＋和CD10－，前者预后好，多数病例CD24＋，CD34＋，CD20表达随成熟度增加而增加，B祖细胞被定义为sIg-。
前B细胞型ALL：此亚型约占儿童ALL的25％，细胞一般为CD19＋，CD24，HLA－DR＋，胞浆CD22＋，CD10＋，TdT随CD20变化，CD34多为阴性，前B亚型被认为比B祖型预后更差，这与t(1；19)出现相关并由此产生E2A －PBX1融合蛋白，它的表型为CD19＋、CD10＋、CD9＋，不同程度CD20表达，CD34－，确认此表型有助于诊断基因上不确定的病例。
B细胞型ALL：成熟B细胞型ALL约占ALL2％～5％，B细胞型ALL较之B祖细胞型ALL有更大的FSC和SSC，在CD45－SSC图上出现在淋巴和单核细胞区域，即FAB标准的L3，表型为CD19、CD20、CD22、CD24且sIg（多数为IGM）多数病例CD10＋。
但成熟抗原及sIg使之区别于更早的B系ALL，极少数成熟B细胞ALL无FAB－L3形态。
T－ALL：多数病例有大的FSC、SSC，在CD45－SSC图上可能出现在淋系未成熟细胞和髓系未成熟细胞或单核细胞区，多数表现为胸腺亚型，最常见亚型为皮质晚期表达，CD1、CD2、CD5、CD7、CD4/ CD8双阳与极少膜表面CD3、TdT多为阳性。
另一常见亚型为皮质早期表达CD2、CD5、CD7、TdT强表达。
髓质期亚型表达CD2、CD5、CD7、与CD3＋CD4＋/CD3+CD8+,很少见TdT表达。
前T细胞亚型，表达CD7胞浆CD3＋且无其它T细胞抗原，T细胞肿瘤的特征是丧失T细胞抗原而表现出其它异常抗原组合。
杂合型白血病：随着流式技术的广泛应用，我们发现许多病例并不能严格划分为淋系或髓系，真正的双表型病人多为t(9；22)或（11q23），现在杂合型的误诊率很高。
最常导致误诊的原因是在分析中未能排除非白细胞，过度强调弱的非特异性结合，忽略了某些抗体缺乏系特异性，最重要的系特异性抗原在B系、T系、髓系分别为CD22、CD3和MPO。
3．CML：由于慢性期显著的细胞分化，在CD45－SSC图上除了髓系细胞占主导外，只显示一个正常骨髓像，CML 可确诊，CML起病与发展相对缓慢，慢性期的持续1年左右最终发展为加速期和急变期。
流式细胞技术对急变期亚型的诊断具有极高价值。
直接影响到治疗效果。
急变期CML主要表现为髓系，偶为淋系，髓性急变可表现出多种形态包括未分化细胞。
淋性急变具典型形态特征，为CD10＋B祖细胞ALL极少有T细胞型ALL。
4．CLL：CLL细胞主要为较正常淋巴细胞稍大的小淋巴细胞。
免疫分型主要为：SIgM、SIgD弱表达，B系抗原为CD19、CD20、CD43、CD79a与CD5共表达，CD23表达使得CLL区别于帽细胞淋巴癌MU，即（CLL：CD23＋，MCL：CD23－），CD10－、CD23－、CD11c和CD25、CD20常弱表达，尽管CLL起病慢，但CLL 病人的生存率变化很大，有染色体异常的病预后不良，最常见的三联体trisony12、14q、13q、11q，免疫表型上没有特异的变化而免疫表型的变化并不是提示染色体异常。
最近，有研究表明，三联体trisony12与SIg、CD20表达量高度相关，与CD23－相关与FMC7相关。
B型前淋巴细胞白血病（B－DLL）较CLL更为严重，流式细胞技术在区分B－DLL和CLL上发挥很大作用，B－DLL多为CD5－，CD22＋，表达更强的sig。
MU病人平均生存率不超过5年，与CLL在形态上很难区分，与CLL相似有CD5＋B祖细胞，但Sig表达强于CLL，且CD22－。
另一与CLL难于区分的是FCC，细胞为强Sig、CD5－、CD10＋、CD23＋，具B系表型：对于诊断为CLL，CD5、FMC7、CD22与SIg，CD20异常强表表达的病例我们要考虑是否为DLL、MCC或CLL的亚型（trisomy12）因为它们危险性更大。
四、流式细胞仪免疫分型实验1．样本采集、运输、保存和操作⑴样本类型：适用于多种临床标本，如外周血、骨髓穿刺液、骨髓活检物、淋巴样组织活检物、浆液、脑脊液、皮肤、黏膜（内窥镜活检物）、细针穿刺物等等。
⑵抗凝剂的选择：外周血标本可采用EDTA、ACD或肝素抗凝。
如果用同一份血标本做白细胞计数和流式分析，则应用EDTA抗凝。
骨髓穿刺可用肝素。
其他体液用EDTA、ACD或肝素均可，但保存的样本活性可能会降低，EDTA的优点是成熟髓性细胞贴壁造成的损失及血小板聚集较小，但细胞散射光特征丢失较肝素标本快；由于相对大量的ACD会通过改变pH而影响骨髓细胞活性问题，通常不推荐用ACD做骨髓穿刺抗凝剂。