急性白血病免疫分型
白血病免疫分型的诊断标准

9.白血病免疫分型的诊断标准9.1 急性淋巴系白血病(ALL)9.1.1急性B淋巴系白血病(B-ALL)9.1.1.1MIC 标准:B 祖细胞ALL: CD19+,TdT+,CD10-,CIg-.sIg-Common ALL: CD19+,TdT+,CD10+,cIg-,sIg-Pre-B- ALL: CD19+,TdT+,CD10+,cIg+,sIg-B-ALL : CD19+,TdT-,CD10-,cIg-,sIg+9.1.1.2 欧洲白血免疫学特征研究组标准:Pro-B-ALL: (BⅠ型):CD19+,CD22+Common ALL:(BⅡ型):CD19+,CD22+,CD10+Pre-B-ALL: (BⅢ型):CD19+,CD22+,CyIgM+,成熟B-ALL:(BⅣ型):CD19+,CD22+,Kappa/Lambda+9.1.2急性T淋巴系白血病(T-ALL)9.1.2.1MIC 标准:T祖细胞型: CD2-T成熟细胞型: CD2+9.1.2.2 Reinheiz 标准:早期胸腺细胞Ⅰ期:CD2+,CD5+,CD7+,CD38+,CD71+普通胸腺细胞Ⅱ期:CD2+,CD5+,CD7+,CD38+,CD71-,CD4+,CD8+,CD1+ 胸腺髓质细胞Ⅲ期:CD2+,CD5+,CD7+,CD38+,CD3+,CD4+,CD8+,CD1- 9.1.2.3欧洲白血免疫学特征研究组标准:Pro-ALL:(TⅠ型):CD3+,CD7+Pre-T-ALL(TⅡ型):CD3+,CD2+,CD5+,CD8+皮质-T-ALL(TⅢ型):CD3+,CD1a+成熟-T-ALL(TⅣ型):CD3+,CD1a+,anti-TCRα/β+ 或γ/δ+9.3.急性髓性白血病(AML)能亚型常表达抗原M0 CD11b,CD13或CD33M1 CD13 CD15 CD33 CD34 HLA-DRM2 CD11b CD13 CD15 CD33 •CD34 •HLA-•DR •CD56 CD19M3 CD11b CD13 CD15 CD33 CD34M4 CD4 CD11b CD13 CD14 CD15 CD33 CD34M5 CD4 CD11b CD13 CD14 CD15 CD33 CD34M6 血型糖蛋白A CD13 CD33 CD34M7 CD41 CD61 CD13 CD33 CD34 因子Ⅷ相关抗原10.各型白血病及淋巴瘤免疫分型特点10.1 急性髓系白血病(Acute myeloid leukemia,AML)10.1.1 M0:有低的(Side scatter ,SSC)和Forward scatter(FSC)。
急性白血病免疫学分型

(一)急性淋巴细胞白血病按免疫标志分为非T细胞型和T细胞型。
前者又可分为无标志性急淋(Null-ALL)普通型急淋(Common-ALL)、前B细胞型急淋(Pre-B-ALL)和B细胞型急淋(B-ALL)4个亚型;T细胞型又分为不成熟胸腺细胞型(immature T-ALL),普通的胸腺细胞型(eommon T-ALL)和成熟胸腺细胞型(mature T-ALL)。
见表5-3-1 和表5-3-2. 表5-3-1 急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞表型组别免疫亚型表型特征CD7CD5CD2CD1CyCD3SmCD3CD4CD8Ⅰ幼稚胸腺细胞型immature T-ALL+-/+-/+--/+---Ⅱ普通胸腺细胞型common T-ALL+++++-/+++Ⅲ成熟胸腺细胞型 mature T-ALL+++-+/-++/--/+表5-3-2 急性非T淋巴细胞白血病(non-T-ALL)细胞表型组别免疫亚型表型特征HLA-DRCD19CD10CD22CD20CyIgMSmIgⅠ无标志型急淋Null-ALL+-/+-----Ⅱ普通型急淋common-ALL+++-/+-/+--Ⅲ前B细胞型急淋pre-B-ALL++++++-ⅣB细胞型急淋B-ALL+++/-++-+ (二)急性非淋巴细胞白血病应用免疫学标志进行分型尚正在探索中,髓细胞系的免疫膜标志;粒细胞系为过氧化物酶+、CD34+、CD13+;单核细胞系为α-萘酚醋酸酯酶+,可被氟化钠抑制,CD34+、CD13+、CD14+;红细胞系为血型糖蛋白(Gl ycophorin)及红细胞膜收缩蛋白(Spectrin)+;巨核细胞系为血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa+、Ⅰb/Ⅲa+。
急非淋膜标志与FAB分型的关系见表5-3-3. 表5-3-3 急性非淋巴细胞白血病FAB 分型与膜标志抗体M1M2M3M4M5M6M7 HLA-DR++-+++/-+/-CD34++/--+/-+/--+/-CD33+++ +++/-+/-CD13+/-++ + +- CD14-+/--++- CD15-++/-+++/- 血型糖蛋白-----+-Ⅱb/Ⅲa/Ⅰb------+。
流式细胞术系列之-白血病免疫分型

CD13和/或CD33阳性 HLA-DR阳性 CD34阳性 CD11B,CD15等(+/-) >3%的幼稚细胞表达
MPO。
AML-M2(急性粒细胞白血病部分成熟型)
• 此类型白血病细胞除了占优势的幼稚细胞外还存在已 明显分化的细胞群体,至少已分化至早幼粒细胞或粒 细胞水平。
(immunology, I ) ( cytogenetics,C )
WHO分型(2001)
(MICM)
(morphology,M ) (immunology, I ) ( cytogenetics,C)
(molecular biology, M)
L1型
急淋
急
性
(ALL)
白
L2型 L3型
细 胞
M0: 微分化型髓系白血病;
标本来源
(1)外周血 (2)骨髓穿刺液, (3)骨髓活检标本 (4)淋巴组织穿刺
样本保存
要 求: •室温条件(16℃ -28℃ )存放; • 如非液态标本,则要在标本中加入足量的等渗液 体(如 生理盐水或组织培养液)。
保存时间
1. 肝素抗凝的外周血和骨髓标本,存放时限为48~72小时; 2. EDTA抗凝标本,存放时限只有12 ~ 24小时,因为髓细胞
胞内染色 CD3\CD79a\MPO
可以确定白血病分CD7
B系:CD10、CD19、CD20 表面染色 髓系:CD11b、CD13、CD14、CD15、CD33
非系列特异的抗体:CD34、HLA-DR 泛白细胞标志:CD45
进一步 细分
其它 CD4、CD8、CD61、CD56、CD38 必要时可以加用
132例急性白血病免疫分型结果分析

An l s s o m m u e t p ng o c t e k m i a y i f i n y i fa u e l u e a
H UANG ng q n, Xi - i CH EN i- ng, Je pi ZHANG ng, tal Yo e
( p rme t f He t lg De a t n ma oo y,S u h s Hop tl h id Mi tr d c lU i e s y,C o g i g 4 0 3 ) o o t wet s i ,T e a Th r l a y Me i n v ri i a t h n qn 0 0 8
[ src] Obe t e To e au t h mmu e t pn fa ue lu e i. M eh d Ab ta t jci v v lae t e i n y ig o c t e k m a to
I mmu o it c e sr n n hso h mity a d
和 骨 髓 免 疫 组 织 化 学染 色检 查 方 法 。结 果
合 ( 4 3 % ) 其 中 1 7例 AL 1.9 , 1 L不符 合 的 1 例 , 5例 AML 不符 合 的 7例 。 结 论 白血 病 免 疫 学 分 型是 诊 断 急性 白血 病 2 1 不 可缺 少的检 查 手段 , 对 急 性 白血 病 形 态 学 分型 的补 充和修 正 。对 P X 3 的急 性 白血 病 的诊 断 , 疫 分型 不 可 缺 少 。 是 O < 免 【 键 词 】 P ) 3 的 急性 白血 病 ; 免 疫 学 分 型 ; 形 态 学 分 型 关 ( X<
我国急性白血病免疫分型的四色方案

我国急性⽩⾎病免疫分型的四⾊⽅案中国流式细胞术急性⽩⾎病免疫分型四⾊⽅案由于多参数流式细胞术(MFC)免疫分型具有客观、敏感、准确等特点,免疫表型已成为诊断急性⽩⾎病的重要依据之⼀。
因准确的诊断需要选择⼀定数量的抗体,涉及多个造⾎系列的抗原。
但⽬前国内甚⾄国际上没有规范化的⽅案可以借鉴。
⽽国内不同的医疗单位所⽤的抗体数量和种类均有较⼤的异质性,有些单位由于应⽤的抗体数量较少或抗体选择不当,影响对疾病的诊断、分期和预后的判断。
鉴于国内的实际情况,中国免疫学会⾎液免疫分会临床流式细胞术学组经过多次的讨论,提出以CD45/SSC为基础的中国流式细胞术急性⽩⾎病免疫分型四⾊⽅案,供参考。
本⽅案不包括标本的采集、保存、制备、试剂和仪器的调整及急性⽩⾎病的诊断标准,这些对免疫分型同样重要,可参考相应的指南。
1.适应范围:1.1急性淋巴细胞⽩⾎病(ALL):z B系:早B前体-ALL(Pro-B), 普通-B-ALL(Common-B),前体B-ALL(Pre-B),及与Burkitt淋巴瘤进⾏鉴别z T系:早T前体-ALL (Pro-T), 前体T-ALL(Pre-T),⽪质-T-ALL和髓质-T-ALL.1.2急性早幼粒细胞⽩⾎病(APL)1.3急性髓细胞⽩⾎病(AML)z AML微分化型(AML-M0)z AML伴粒系和单核细胞分化型(AML-M1/2和AML-M4/5)z急性红⽩⾎病(AML-M6)z急性巨核细胞⽩⾎病(AML-M7)1.4前体树突细胞肿瘤1.5急性嗜碱性粒细胞和肥⼤细胞⽩⾎病1.6 混合表型⽩⾎病1.7 对上诉急性⽩⾎病治疗后检测MRD的标志进⾏筛查2.抗体的选择:根据检测的⽬的,需要检测不同的抗体:2.1 鉴别急性、慢性⽩⾎病:对于急性髓细胞⽩⾎病,可以根据CD45/SSC图型进⾏初步判断。
髓系⽩⾎病细胞CD45的表达较弱,往往位于正常淋巴细胞下⽅,且多数⽩⾎病细胞SSC较低(除去⼤颗粒APL 患者)。
急性白血病免疫分型课件

11
ALL免疫分型 --五分法:
• 五分法: Common型 型 B细胞型
未分化型 T细胞型 前B细胞
• 表型
SmIg+
DR/CD9/CD10+ 复杂
CD2/CD5+ CyIg
23
与AML预后有的抗原
6。Ly+AML: CR率低
占AML43%, CR46%,合并 CD34+38%,PgP+15%, (其中 CD2+AML7.7%,CD7+AML22%, CD19+13%), Ly-AML:CR73%
7。CD7+AML: CR率低,
占AML22%, 合并CD34+75%, PgP+55%,( M1:42%,M2:18%, M4:28%,M5:9%,M3:0%) CR35%
5
T细胞系抗原
T 细胞进入胸腺后:
(早) CD7+、CD2-、CD3-、CD4-、CD8-、TCR-
(中)CD7+、CD2+、CD3+、CD4-、CD8-、TCR-
(晚)CD7+、CD2+、CD3+、CD4+、CD8+、TCR+,
CD7+CD2+CD3+CD4-CD8+TCR+ CD7+CD2+CD3+CD4+CD8-TCR+
24
与AML预后有的抗原
8。CD19+AML: CR率较低,
占AML13%,合并CD34+67%,PgP+33%, (M2:16%,M5:25%),CR50%。
我国急性白血病免疫分型的四色方案

中国流式细胞术急性白血病免疫分型四色方案由于多参数流式细胞术(MFC)免疫分型具有客观、敏感、准确等特点,免疫表型已成为诊断急性白血病的重要依据之一。
因准确的诊断需要选择一定数量的抗体,涉及多个造血系列的抗原。
但目前国内甚至国际上没有规范化的方案可以借鉴。
而国内不同的医疗单位所用的抗体数量和种类均有较大的异质性,有些单位由于应用的抗体数量较少或抗体选择不当,影响对疾病的诊断、分期和预后的判断。
鉴于国内的实际情况,中国免疫学会血液免疫分会临床流式细胞术学组经过多次的讨论,提出以CD45/SSC为基础的中国流式细胞术急性白血病免疫分型四色方案,供参考。
本方案不包括标本的采集、保存、制备、试剂和仪器的调整及急性白血病的诊断标准,这些对免疫分型同样重要,可参考相应的指南。
1.适应范围:1.1急性淋巴细胞白血病(ALL):z B系:早B前体-ALL(Pro-B), 普通-B-ALL(Common-B),前体B-ALL(Pre-B),及与Burkitt淋巴瘤进行鉴别z T系:早T前体-ALL (Pro-T), 前体T-ALL(Pre-T),皮质-T-ALL和髓质-T-ALL.1.2急性早幼粒细胞白血病(APL)1.3急性髓细胞白血病(AML)z AML微分化型(AML-M0)z AML伴粒系和单核细胞分化型(AML-M1/2和AML-M4/5)z急性红白血病(AML-M6)z急性巨核细胞白血病(AML-M7)1.4前体树突细胞肿瘤1.5急性嗜碱性粒细胞和肥大细胞白血病1.6 混合表型白血病1.7 对上诉急性白血病治疗后检测MRD的标志进行筛查2.抗体的选择:根据检测的目的,需要检测不同的抗体:2.1 鉴别急性、慢性白血病:对于急性髓细胞白血病,可以根据CD45/SSC图型进行初步判断。
髓系白血病细胞CD45的表达较弱,往往位于正常淋巴细胞下方,且多数白血病细胞SSC较低(除去大颗粒APL患者)。
再根据CD34、CD117、CD38、HLA-DR、CD123的表达进行判断。
急性白血病MICM分型

急性白血病MICM分型:白血病MICM分型,是指形态学(morphology)、免疫学(immunology)、细胞遗传学(cytogenetics)、分子特征(molecular)分型形态学分型(FAB)分型1.急性非淋巴细胞性白血病(ANLL)或急性髓系白血病(AML):M1型:急性原粒细胞性白血病未分化型,骨髓中原粒细胞≥90%,POX染色阳性率>3%。
M2型:急性原粒细胞性白血病部分分化型,以原幼粒细胞为主,早幼粒细胞>3%,中、晚幼及成熟粒细胞>10%为M2a型。
M3型:急怀多颗粒早幼粒细胞性白血病,以颗粒增多的异常早幼粒细胞为主,>30%。
其又分为粗颗粒型(M3a)和细颗粒型(M3b)。
M4型:急性粒-单核细胞性白病,粒系及单核细胞均增生。
M5型:急性单核细胞性白血病,M5a为原单核细胞型,原单核>80%;M5b为部分分化型,以幼单核细胞为主,原单核<80%。
M6型:急性红白血病,原幼红细胞≥50%,非红系细胞中原始细胞>30%。
M7型:急性巨核细胞性白血病,原巨核细胞>30%,并经电镜、血小板过氧化物酶检查、血小板免疫标志物或血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa检查等证实。
M0型:近年确定,为髓系最早阶段的白血病,形态学上极少髓系分化,不能鉴别,必须用免疫标志物确定。
2.急性淋巴细胞性白血病(ALL):L1:以小原淋巴细胞为主,大小较一致。
L2:以大原淋巴细胞为主,大小不一致。
L3:以大原淋巴细胞为主,胞质内含大量空泡。
3.急性白血病的主要化学染色特点:免疫学分型-基本免疫表型1.急性非淋巴细胞白血病(ANLL)FAB分型与免疫标志:2.急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)FAB分型与免疫学标志:3.急性非T淋巴细胞白血病(non-T-ALL)FAB分型与免疫学标志:4. 混合细胞性白血病:有极少部分病人白血病细胞为淋巴系和髓系细胞双克隆或同一细胞系免疫标志双表型,即混合细胞性白血病。
此型白血病用形态方法极难诊断,必须结合多参数流式细胞术分析才能确诊。
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天然T细胞 记忆T细胞
活化T细胞
表型 CD4 CD8 CD45RA CD45RO
CD25 CD54 CD58
天然T细胞 记忆T细胞 活化T细胞 + + -/+ + + +/++ + + +++
髓系抗原
根据髓系抗原表达大致分为7类: 1.粒细胞和单核细胞上都有较强表达的抗原: CD13、CDw17、CD32、CD87、 CD88、CD89、CDw92、CD93、 CD156、CD157、CD163。 2.以粒细胞为主,也存在于单核细胞上的抗原: CD15、CD65。 3. 以单核细胞为主,也表达在粒细胞上的抗原: CD14、CD33。
T细胞系抗原 ---CD4+T细胞亚群
1.根据产生淋巴因子的差异分为: TH1—产生 IL-2、IFN-γ 、TNF-β TH2—产生 IL-4、IL-5、IL-6、IL-10 2.根据功能分为: TSI(suppressor inducer T-cell) —诱导TS功能,CD31+、CD45RA+ THI(helper inducer T-cell) —辅助B细胞产生抗体,CD31-、CD45RO+ 3.分为记忆T细胞、天然T细胞、活化T细胞
髓系抗原
3.基本只表达在单核细胞上的抗原: CD16、CD64、CD68、CD91、CDw136、CD155。 基本只表达在粒细胞上的抗原:CD16b、CD66。 4.造血干、祖细胞抗原:CD34、CD90。 5.其他髓系相关抗原:主要存在于其他系细胞上, 髓系细胞上也有表达:CD4、CD7、CD9、CD10、 CD11b、CD11c、CD31、CD36、CD38 6.血小板相关抗原:CD36、CD41、CD42、CD61、CD62。 7.. 红细胞抗原: CD36、GPA
T细胞型
CD2/CD5+ 15-25% 20% 再次 最好
前B细胞型
CyIg 2--3% 0.5% 最次 最次
B细胞型
SmIg+ 2--3% 1.5% 最次 最次
预后:
儿童 成人
ALL免疫分型 --两类九型法:
非T亚型 I II III IV V VI HLA-DR + + + + + + CD9 + + + + + CD10 + + +/CD20 + +/+ μ链 + SmIg + 发生率% 5 15 30 50 <5 <2
ALL免疫分型
从70年代开始试图进行免疫学分型:
1986年前五分法 1986年后两大类九分法
1994年四型21类法
ALL免疫分型 --五分法:
五分法:
表型 发生率:国外 国内
Common型
DR/CD9/CD10+ 60-70% 50% 最好 次之
未分化型
复杂 30% 30% 次之 再次
与AML预后有的抗原
6。Ly+AML: CR率低 占AML43%, CR46%,合并CD34+38%, PgP+15%, (其中CD2+AML7.7%, CD7+AML22%,CD19+13%), Ly-AML: CR73%
7。CD7+AML: CR率低, 占AML22%, 合并CD34+75%,PgP+55%, ( M1:42%,M2:18%,M4:28%,M5: 9%,M3:0%)CR35%
进入血液及淋巴结
T细胞系抗原 ---外周血T细胞
血液中T细胞主要有以下亚型: 1.CD3+、CD4+、CD8—辅助性T细胞/诱导性T细胞,TH/TI 占T细胞总数的60-70% 2.CD3+、CD4-、CD8+ —抑制性T细胞/细胞毒性T细胞,TS/TC, 占T细胞总数的20-30% 3.CD3+、CD4+、CD8+ — 占T细胞总数的1-3% 4.CD3+、CD4-、CD8- — 占T细胞总数的1-10%
细胞系列抗原的表达 ---T细胞系抗原
T细胞发育的路径为: 骨髓(骨髓祖细胞→前胸腺细胞,亦称T祖细胞) --→胸腺(早→中→晚) --→外周血(成熟) 骨髓T祖细胞CD34+、TdT+、CD10+、CD7+ CD7出现最早并贯穿于T细胞发育全程
T细胞系抗原
T 细胞进入胸腺后: (早) CD7+、CD2-、CD3-、CD4-、CD8-、TCR (中)CD7+、CD2+、CD3+、CD4-、CD8-、TCR (晚)CD7+、CD2+、CD3+、CD4+、CD8+、TCR+, CD7+CD2+CD3+CD4-CD8+TCR+ CD7+CD2+CD3+CD4+CD8-TCR+
细胞系列抗原的表达 ---B细胞系抗原
HLA-DR意义 在白血病分型中,HLA-DR特异性较差, 除B系外,HLA-DR在急非淋、成人T细胞白 血病亦表达, 但如DR+,加上CD5-、CD7-则99%为B系。
90%B系ALL表达CD10。
与AL预后有的抗原
1。CD34:
强表达者预后差,特别是复发时 CD34增强是最有意义的免疫学表型 改变,CD34常与一些预后差的因素 共存时有相加的作用,与CD34与Pgp 或DR共存的患者,比单表达其中一 个抗原的患者完全缓解率明显降低。
急性白血病免疫学 系列分型的积分方案
分数 2 B系 M/cCD22 T系 M/cCD3 粒单系 MPO 巨核系 CD41 CD42 红系 血型蛋白A
RhD HbF CD36 ABH
cCD79a M/cTCRα /β Ccd13 CD61 cμ sIg M/cTCRγ /δ FVIII 1 CD19 CD20 CD2 CD5 Mcd13 CD33 CD36 ABH CD36 CDw65 cCd68 0.5 CD10 CD24 CD7 CD1a CD11a/c CD14 TdT CD4 CD15 CD65 CD117
讲座
急性白血病
免 疫 学 分 型
急性白血病的免疫分型
MICM分型:
细胞形态学(包括细胞组化)为基础, 细胞免疫学(免疫表型)为主体, 细胞遗传学为辅助, 分子生物学为补充的原则。 免疫学分型对ALL更重要。 免疫学与FAB分型可不一致。
白血病免疫分型原理
白血病细胞表面有大量的抗原,这些抗原的 性质与正常白细胞的抗原性质相同,目前尚未发 现特异的白血病抗原。 但白血病细胞可能具有: 1.特异性的联合抗原; 2.某些抗原表达于某个特定系列的发育阶段上,而 正常造血细胞不存在这种现象或极为罕见。 ——这些抗原称为白细胞分化抗原或分化群CD (cluster designations).
与AML预后有的抗原
8。CD19+AML: CR率较低, 占AML13%,合并CD34+67%,PgP+33%, (M2:16%,M5:25%),CR50%。 9。CD2+AML: CR率较高, 占AML18%,合并CD34+57%,PgP+14%, (M3:36%,M5:13%),CR71%。
与AML预后有的抗原
ALL免疫分型 --FAB的MIC分型
B-ALL CD19 TdT
+
DR
+
CD10
-
CyIg
-
SmIg
-
FAB亚型
L1,L2
早期前B + t(4;11) t(9;22) 普通-ALL + 6q近单倍体 t/del(12p) t(9;22) 前B-ALL + t(1;19) t(9;22) B-ALL + t(8;14) t(2;8) t(8;22) 6q-
免疫学分型 与FAB AML分型的相关性
M1:CD34+、MPO+、DR+、TdT+、CD33+、CD13+、CD15-、CD11b-、 无 淋、红、巨核系抗原 M2:CD34+、CD33+、CD13+、DR+、CD15+ M3:CD33+、CD13+、DR-、CD34M4:CD34+ 、CD33+、CD13+、CD14+、CD15+ M5:CD34+ CD33+、CD13+、CD14+、CD15+ M6:血型糖蛋白+、CD34-,DR-、CD33-、CD13-、CD15M7:CD34+、CD33+、DR+、CD41+、CD42+、CD61+ M0:FAB:形态学为L2型,MPO、SBB组化阴性,淋系抗原阴性, CD33、CD11、CD15 及antiMPO单抗阳性。
ALL免疫分型 --两类九型法
T亚型 CD7
I II III + + +
CD5
+ + +
CD2 CD3
+ + + +25% +
CD4
+90% + #
CD8
+90% + #
CD1a
+ -
发生率
55 25 20
#:二者之一阳性
ALL免疫分型 --四型21类法