白血病免疫分型
急性白血病免疫学分型
（一）急性淋巴细胞白血病按免疫标志分为非T细胞型和T细胞型。
前者又可分为无标志性急淋（Null-ALL）普通型急淋（Common-ALL）、前B细胞型急淋（Pre-B-ALL）和B细胞型急淋（B－ALL）4个亚型；T细胞型又分为不成熟胸腺细胞型（immature T-ALL），普通的胸腺细胞型（eommon T-ALL）和成熟胸腺细胞型（mature T-ALL）。
见表5－3－1 和表5－3－2. 表5－3－1 急性T淋巴细胞白血病（T－ALL）细胞表型组别免疫亚型表型特征CD7CD5CD2CD1CyCD3SmCD3CD4CD8Ⅰ幼稚胸腺细胞型immature T-ALL+-/+-/+--/+---Ⅱ普通胸腺细胞型common T-ALL+++++-/+++Ⅲ成熟胸腺细胞型 mature T-ALL+++-+/-++/--/+表5－3－2 急性非T淋巴细胞白血病（non-T-ALL）细胞表型组别免疫亚型表型特征HLA-DRCD19CD10CD22CD20CyIgMSmIgⅠ无标志型急淋Null-ALL+-/+-----Ⅱ普通型急淋common-ALL+++-/+-/+--Ⅲ前B细胞型急淋pre-B-ALL++++++-ⅣB细胞型急淋B－ALL＋＋+/-++-+ （二）急性非淋巴细胞白血病应用免疫学标志进行分型尚正在探索中，髓细胞系的免疫膜标志；粒细胞系为过氧化物酶＋、CD34＋、CD13＋；单核细胞系为α－萘酚醋酸酯酶＋，可被氟化钠抑制，CD34＋、CD13＋、CD14＋；红细胞系为血型糖蛋白（Gl ycophorin）及红细胞膜收缩蛋白（Spectrin）＋；巨核细胞系为血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa+、Ⅰb/Ⅲa＋。
急非淋膜标志与FAB分型的关系见表5－3－3. 表5－3－3 急性非淋巴细胞白血病FAB 分型与膜标志抗体M1M2M3M4M5M6M7 HLA－DR++-+++/-+/-CD34++/--+/-+/--+/-CD33+++ +++/-+/-CD13+/-++ + +- CD14-+/--++- CD15-++/-+++/- 血型糖蛋白-----+-Ⅱb/Ⅲa/Ⅰb------+。
流式细胞术系列之-白血病免疫分型
CD13和/或CD33阳性 HLA-DR阳性 CD34阳性 CD11B，CD15等(+/-) >3%的幼稚细胞表达
MPO。
AML-M2（急性粒细胞白血病部分成熟型）
• 此类型白血病细胞除了占优势的幼稚细胞外还存在已 明显分化的细胞群体，至少已分化至早幼粒细胞或粒 细胞水平。
(immunology， I ) ( cytogenetics，C )
WHO分型(2001)
（MICM）
(morphology，M ) (immunology， I ) ( cytogenetics，C)
(molecular biology, M)
L1型
急淋
急
性
（ALL）
白
L2型 L3型
细 胞
M0: 微分化型髓系白血病；
标本来源
（1）外周血 （2）骨髓穿刺液， （3）骨髓活检标本 （4）淋巴组织穿刺
样本保存
要 求： •室温条件(16℃ -28℃ )存放； • 如非液态标本，则要在标本中加入足量的等渗液 体（如 生理盐水或组织培养液）。
保存时间
1. 肝素抗凝的外周血和骨髓标本，存放时限为48～72小时； 2. EDTA抗凝标本，存放时限只有12 ～ 24小时，因为髓细胞
胞内染色 CD3\CD79a\MPO
可以确定白血病分CD7
B系：CD10、CD19、CD20 表面染色 髓系：CD11b、CD13、CD14、CD15、CD33
非系列特异的抗体：CD34、HLA-DR 泛白细胞标志：CD45
进一步 细分
其它 CD4、CD8、CD61、CD56、CD38 必要时可以加用
血液病免疫分型
血液病免疫分型血液病的免疫分型主要根据免疫表型和免疫遗传学特征进行分类。
以下是一些常见的血液病免疫分型：1. 急性淋巴细胞性白血病（Acute Lymphoblastic Leukemia，ALL）的免疫分型：- B-ALL：由B淋巴细胞系发展而来。
- T-ALL：由T淋巴细胞系发展而来。
2. 慢性淋巴细胞性白血病/小淋巴细胞淋巴瘤（Chronic Lymphocytic Leukemia/Small Lymphocytic Lymphoma，CLL/SLL）的免疫分型：- CD5+/CD23+/CD20+：典型的B淋巴细胞来源。
- CD5-/CD23+/CD20+：非典型的B淋巴细胞来源。
- CD5+/CD23-/CD20+：突变的B淋巴细胞来源。
3. 急性髓系白血病（Acute Myeloid Leukemia，AML）的免疫分型：- 标准化治疗亚组（NCCN标准化治疗亚组）：包括核准的AML-M0至AML-M7亚型。
- 非标准化治疗亚组：包括AML-M0、AML-M6和AML-M7亚型以外的亚型。
4. 慢性髓性白血病（Chronic Myeloid Leukemia，CML）的免疫分型：- Ph染色体阳性（Ph+）：含有Ph染色体（Philadelphia染色体）。
5. 骨髓增殖性肿瘤（Myeloproliferative Neoplasm，MPN）的免疫分型：- 慢性骨髓性白血病（Chronic Myeloid Leukemia，CML）：Ph染色体阳性。
- 原发性骨髓纤维化（Primary Myelofibrosis，PMF）：包括JAK2V617F突变和CALR基因突变。
- 骨髓增殖性肿瘤不分类型（Myeloproliferative Neoplasm，NOS）：不符合上述分类的其他骨髓增殖性肿瘤。
这些免疫分型对于血液病的诊断、预后评估和治疗选择具有重要意义。
注意，具体的免疫分型细节可能因研究、疾病进展和新兴的治疗手段而不断改变。
白血病免疫分型
正常人血液白细胞CD45-SSC设门散点图
R1：淋巴细胞 R2：单核细胞 R3：中性粒细胞 R4：嗜酸性粒细胞 R5：原始细胞
正常人骨髓有核细胞CD45-SSC设门散点图
R1：淋巴细胞 R2：粒系细胞 R3：单核细胞 R4：原始细胞 R5：幼红细胞
白血病细胞的特性
白血病细胞的异常表现在： 抗原系列异常和时间异常
CD15
CD1a
CD64
2008年WHO细胞系别确定标准
髓系：MPO（流式细胞术、免疫组化或者细胞化 学） 或单核系分化（非特异性酯酶弥漫性阳性， 或者CD11c、CD14、CD36、CD64、溶酶体， 两个及以上阳性） T系：胞浆CD3（流式使用抗CD3ε链的抗体；免 疫组化使用的多克隆抗体会检测到非T细胞特异性 的CD3ζ链） 或胞膜CD3（MPAL中比较罕见） B系：CD19强表达加下述标志中至少一个强表达： CD79a、胞浆CD22、CD10 或CD19弱表达加下述标志中至少两个强表达： CD79a、胞浆CD22、CD10
髓片
POX染色
AML-M0
AML-M1
AML-M2
AML-M3
AML-M3v
AML-M4EO
AML-M4b
AML-M5b
AML-M6
AML-M7
AML免疫分型总结
192例AML病例中免疫分型结果示髓系抗原CD13、CD33、 MPO最常见，其次CD117也是髓系比较敏感的指标，在 原始细胞百分比高的AML亚型中有较高的阳性率。
白血病免疫分型---CD45-SSC设门
CD45是白细胞的共同抗原成分,所有人类白细胞均表达CD45，包括 淋巴细胞、单核细胞、多形核细胞、嗜酸、嗜碱性细胞、胸腺细胞、 脾细胞、扁桃腺细胞以及骨髓前体细胞。 造血系统细胞CD45表达量与细胞分化程度的高低紧密相关，即分化 程 度 高 的 细 胞 CD45 表 达 量 高 ， 分 化 程 度 低 的 细 胞 CD45 表 达 量 低 （淋 巴细胞>单核细胞>成熟粒细胞>原幼细胞，在红细胞中不表 达。 SSC是侧向角参数，反应细胞的颗粒度（成熟粒细胞>单核细胞>原 幼 细 胞 > 淋 巴 细 胞 ） 。 目 前 ， 国 际 上 采 用 CD45—SSC 设 门 （Gating），可将白血病细胞与正常细胞分开，增加白血病免疫分 型的准确性。
急性白血病免疫分型
T-ALL旳免疫表型特点：
T-ALL分类
免疫表记
TdT+ 、CyCD3+ 、CD7+
Pro/Pre-T-ALL
CD2-、sCD3- 、CD1a-
T-ALL
CD2+、 sCD3+ 、 CD5+/- 、CD8+/- 、CD4+/- 、 CD1a+/-
-
+
+
-
T-ALL
+
-
-
+
-
-
+
AML
-
+/-
+
-
-
-/+
-/+
R1 门为成熟淋巴细胞 R2 门为正常单核细胞位置 R3 门正常粒细胞位置 R4 门为幼稚淋巴细胞出现位置 R5 门为有核红细胞或细胞碎片位置 R6 门为幼稚髓细胞出现位置 白血病细胞一般会在R4 R6 两门位置处出现
正常骨髓经CD45/SSC射门旳散点图
CD45/SSC 图中可见 CD45 强阳性SSC 低信号旳细胞群为淋巴细胞褐色细胞群体 中档强度旳CD45 体现SSC 信号最强旳细胞群体为粒细胞蓝色及红色细胞群体 CD45 体现与SSC 信号介于淋巴细胞与粒细胞之间旳是单核细胞群体绿色细胞群体 CD45 阴性SSC 信号最低旳有核红细胞和细胞碎片
ANLL旳免疫分型特点
FAB-M1/M2旳免疫表型特点：CDl3+、CD15+、CD33+、 HLA-DR+、CD34+，其中CD34在M1中旳体现强于M2，而CD15在M2旳体现较强。
ANLL旳免疫分型特点
我国急性白血病免疫分型的四色方案
我国急性⽩⾎病免疫分型的四⾊⽅案中国流式细胞术急性⽩⾎病免疫分型四⾊⽅案由于多参数流式细胞术(MFC)免疫分型具有客观、敏感、准确等特点，免疫表型已成为诊断急性⽩⾎病的重要依据之⼀。
因准确的诊断需要选择⼀定数量的抗体，涉及多个造⾎系列的抗原。
但⽬前国内甚⾄国际上没有规范化的⽅案可以借鉴。
⽽国内不同的医疗单位所⽤的抗体数量和种类均有较⼤的异质性，有些单位由于应⽤的抗体数量较少或抗体选择不当，影响对疾病的诊断、分期和预后的判断。
鉴于国内的实际情况，中国免疫学会⾎液免疫分会临床流式细胞术学组经过多次的讨论，提出以CD45/SSC为基础的中国流式细胞术急性⽩⾎病免疫分型四⾊⽅案，供参考。
本⽅案不包括标本的采集、保存、制备、试剂和仪器的调整及急性⽩⾎病的诊断标准，这些对免疫分型同样重要，可参考相应的指南。
1．适应范围：1.1急性淋巴细胞⽩⾎病(ALL):z B系：早B前体-ALL(Pro-B), 普通-B-ALL(Common-B),前体B-ALL(Pre-B),及与Burkitt淋巴瘤进⾏鉴别z T系：早T前体-ALL (Pro-T), 前体T-ALL(Pre-T),⽪质-T-ALL和髓质-T-ALL.1.2急性早幼粒细胞⽩⾎病（APL）1.3急性髓细胞⽩⾎病（AML）z AML微分化型（AML-M0）z AML伴粒系和单核细胞分化型（AML-M1/2和AML-M4/5）z急性红⽩⾎病（AML-M6）z急性巨核细胞⽩⾎病（AML-M7）1.4前体树突细胞肿瘤1.5急性嗜碱性粒细胞和肥⼤细胞⽩⾎病1.6 混合表型⽩⾎病1.7 对上诉急性⽩⾎病治疗后检测MRD的标志进⾏筛查2.抗体的选择：根据检测的⽬的，需要检测不同的抗体：2.1 鉴别急性、慢性⽩⾎病:对于急性髓细胞⽩⾎病，可以根据CD45/SSC图型进⾏初步判断。
髓系⽩⾎病细胞CD45的表达较弱，往往位于正常淋巴细胞下⽅，且多数⽩⾎病细胞SSC较低（除去⼤颗粒APL 患者）。
白血病免疫分型
CD11b
CD117
CD45
CD11b
CD5
Side scatter
+
Common B-ALL
急性前B细胞白血病
+
Pre B-ALL
急性B细胞白血病
+
B-ALL
++ +/- + -/+ + --
- -+ -+ +- -/+ +
意义：Common B-ALL 预后相对较好，CD34+B-ALL比CD34预后好，但CD34+患者伴Ph1+预后差。B-ALL预后相对 差，但随化疗方案改进，预后有所改善。
(二）.正常T细胞标志：根据在胸腺内发育阶段分4期
CD7 CD2 CD5 CD34 CD1a CD3c/m CD4 CD8
I期 ： + + + +
-/+
II期： + + + - + -/+
III期： + + + - + +/+ + +
Ⅳ期： + + + - -
+/+ +/- +/-
泛T：CD2，CD5，CD7， cCD3 幼稚T：CD34，TdT，CD1a, CD4/8， 成熟T：CD3，CD4，CD8
白血病细胞的免疫分型
白血病细胞的免疫分型正常血细胞从多能干细胞分化、发育、成熟为功能细胞的过程中，细胞膜、细胞浆或胞核抗原的出现、表达增多与减少甚至消失与血细胞的分化发育阶段密切相关，而且表现出与细胞系列及其分化程度相关的特异性。
因此，这些抗原的表达与否可作为鉴别和分类血细胞的基础。
白血病是造血系统的恶性肿瘤，在形态上变化虽相当大，但仍能表达正常血细胞所具有的抗原，因而仍可依据其抗原的表达谱对白血病进行免疫分型。
由于白血病细胞具有肿瘤细胞的特征，其抗原表达又不完全同于正常血细胞，常可出现某些抗原缺乏、过度表达、系列交叉表达某一系列或阶段不应有的抗原，这又增加了白血病免疫分型的复杂性。
近年来白血病的免疫分型已成为诊断血液恶性肿瘤不可缺少的重要标准之一。
国际上公认的通用的方法是流式细胞术（FCM），此外还有免疫组化法，电镜和荧光显微镜也可以帮助诊断。
其中流式细胞术（FCM）和免疫组化法较为常用。
流式细胞术中，白血病免疫分型是利用荧光素标记的单克隆抗体（McAb）作分子探针，多参数分析白血病细胞的细胞膜和细胞浆或细胞核的免疫表型，由此了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。
因为FCM能快速，多参数，客观的定性又定量测定细胞膜，浆，核的抗原表达。
另一个重要理由是至今尚未发现白血病的特异抗原。
所以能用正常血细胞的单抗来进行免疫分型是基于白血病形成的分化阻断学说即白血病细胞基因异常，分化受阻于某阶段形成不同亚型的白血病。
这群细胞充盈于骨髓。
抗原表达与其相应系列/阶段的血细胞无明显差异。
与形态学检查相似仅能根据数量的差异来判断病变细胞的属性。
单参数免疫标志测定易将正常细胞包括在内。
因此，近年来主张用设门（gating）方法。
即用CD45与侧向角（side scatter,SSC），对数取样后可将骨髓细胞清晰地分出淋巴细胞，单核细胞，成熟粒细胞，幼稚细胞和红细胞群，其理论依据是CD45是所有白细胞的抗原。
其表达量在淋巴细胞最高，单核细胞，成熟粒细胞，早期造血细胞（blasts）依次减弱。
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T-ALL
R4 R2 File: yangxingxin.003 Acq ui sition Date: 23-Nov - 05 Gate: G1 Reg ion % Gated R1 100.00 R2 42.38 R3 46.54 R4 8.67 X Mean 35.17 31.17 32.76 52.23 Y Mean 297.72 324.59 151.63 893.72 R3
二、骨髓细胞在流式细胞参数 图中的定位
三、Abnomal cell
四、正常血细胞发育过程中抗 原的表达
五、白血病具
体类型分析
AML-M1
R2 R3 R4
AML-M1
R2 R4 R3 Reg ion % Gated R1 100.00 R2 0.99 R3 94.63 R4 0.25 File: wang qi ng ming .007 Acq ui sition Date: 22- Nov- 04
B-ALL
R2 R5 R4 File: sunhongwei .001 Acq ui sition Date: 08- Dec- 05 Gate: G1 Reg ion % Gated R1 100.00 R2 6.53 R3 78.14 R4 9.64 R5 1.67 X Mean 130.88 68.18 86.40 376.60 208.22 Y Mean 118.47 492.38 88.92 90.53 393.93 R3
撓 崳 湹 碧 栒埃 R3 捄78.14%, 碧 ピ CD34,CD22,CD19,CD10,cCD79a,CD20 婙 忳 湊佫 碧 ピ CD13. 姫 碧 ピ CD33,CD117,cCD3,MP O, 寵 撓 崳 B湊 佫 （ 鬟 嶗 罕枒 B 湊 佫 伋棛 姲 ． A LL-B ） 捲 帨 埃
免疫学标志分析在 白血病中的应用
血液免疫科 葛繁梅
一、免疫学分析的优点及局限性
提高恶性血液病诊断与分型的准确性,检测残留病灶， 判断预后 区分淋巴细胞与髓性， 区分T细胞与B细胞 确定白血病细胞的阶段 覆盖率高于基因及染色体，尤其对淋巴系统 敏感性高于形态及染色体 比染色体及基因分析快捷，但特异性比之差 解释结果的医师要有丰富的知识 对M4、M5、M6、M7的鉴别不太敏感
AML-M4
R2 R4 R3 R6 R5
AML-M4E0
R2 R3 R4 R5 R7 R6 File: wang yushu.001 Acq ui si tion Date: 13- Dec- 04 Reg ion % Gated R1 100.00 R2 14.67 R3 10.11 R4 17.55 R5 36.03 R6 4.20 R7 3.24
撓 崳 湹 碧 栒埃
HAL
AML-M2
R2 R4 R3 R6 R5 Region % Gated R1 100.00 R2 32.40 R3 24.90 R4 23.91 R5 13.59 R6 1.86 File: baixiurong.001 Acquisition Date: 22-Apr-05
AML-M3
R2 R4 R3 File: wangxing.001 Acquisition Date: 05-Jan-05 Region % Gated R1 100.00 R2 8.91 R3 76.38 R4 1.06 R5 12.67 R5
（ 佌
T-ALL
R2
R5 File: gaoyanlai.001 Acquisition Date: 15-Jul-05 Gate: G1 R4 Region % Gated X Mean R1 100.00 378.54 R2 3.90 74.38 R3 26.93 71.22 R4 64.34 532.80 R5 1.82 254.28 R6 1.52 57.10 R7 9.41 78.04 R8 1.64 59.98 R3 R6
R3
B-ALL
R2 R5 File: chenjianhui.001 Acquisition Date: 17-Feb-05 Region % Gated R1 100.00 R2 17.81 R3 28.50 R4 36.75 R5 3.08 R6 7.66 R3 R4
R6
B-ALL
R2 File: baiyanyu.001 Acquisition Date: 03-Mar-05 R4 Region % Gated R1 100.00 R2 7.02 R3 75.60 R4 11.13 R3
AML-M5
R2 R3 R5 File: huguangqing.001 Acquisition Date: 16-Jun-05 Regi8 R3 65.72 R4 17.70 R5 5.36 R6 3.47
R6 R4
AML-M6
R2 R5 R4 R6 File: fangchang hua.004 Acq ui sition Date: 08-Nov- 05 Gate: G1 Reg ion % Gated R1 100.00 R2 9.92 R3 70.08 R4 7.20 R5 3.20 R6 5.49 X Mean 74.55 43.53 45.89 55.59 236.75 329.41 Y Mean 93.45 621.59 6.55 69.99 268.43 83.33