白血病免疫分型5[1].11
白血病免疫分型的诊断标准
9．白血病免疫分型的诊断标准9．1 急性淋巴系白血病（ALL）9．1．1急性B淋巴系白血病（B-ALL）9．1．1．1MIC 标准:B 祖细胞ALL: CD19+,TdT+,CD10-,CIg-.sIg-Common ALL: CD19+,TdT+,CD10+,cIg-,sIg-Pre-B- ALL: CD19+,TdT+,CD10+,cIg+,sIg-B-ALL : CD19+,TdT-,CD10-,cIg-,sIg+9．1．1．2 欧洲白血免疫学特征研究组标准:Pro-B-ALL: (BⅠ型):CD19+,CD22+Common ALL:(BⅡ型):CD19+,CD22+,CD10+Pre-B-ALL: (BⅢ型):CD19+,CD22+,CyIgM+，成熟B-ALL:(BⅣ型)：CD19+，CD22+，Kappa/Lambda+9．1．2急性T淋巴系白血病（T-ALL）9．1．2．1MIC 标准:T祖细胞型: CD2-T成熟细胞型: CD2+9．1．2．2 Reinheiz 标准:早期胸腺细胞Ⅰ期:CD2+,CD5+,CD7+,CD38+,CD71+普通胸腺细胞Ⅱ期:CD2+,CD5+,CD7+,CD38+,CD71-,CD4+,CD8+,CD1+ 胸腺髓质细胞Ⅲ期:CD2+,CD5+,CD7+,CD38+,CD3+,CD4+,CD8+,CD1- 9．1．2．3欧洲白血免疫学特征研究组标准:Pro-ALL:(TⅠ型):CD3+,CD7+Pre-T-ALL(TⅡ型):CD3+,CD2+,CD5+,CD8+皮质-T-ALL(TⅢ型):CD3+,CD1a+成熟-T-ALL(TⅣ型):CD3+,CD1a+,anti-TCRα/β+ 或γ/δ+9．3．急性髓性白血病(AML)能亚型常表达抗原M0 CD11b,CD13或CD33M1 CD13 CD15 CD33 CD34 HLA-DRM2 CD11b CD13 CD15 CD33 •CD34 •HLA-•DR •CD56 CD19M3 CD11b CD13 CD15 CD33 CD34M4 CD4 CD11b CD13 CD14 CD15 CD33 CD34M5 CD4 CD11b CD13 CD14 CD15 CD33 CD34M6 血型糖蛋白A CD13 CD33 CD34M7 CD41 CD61 CD13 CD33 CD34 因子Ⅷ相关抗原10．各型白血病及淋巴瘤免疫分型特点10．1 急性髓系白血病（Acute myeloid leukemia,AML）10．1．1 M0：有低的(Side scatter ,SSC)和Forward scatter（FSC)。
急性白血病免疫学分型
（一）急性淋巴细胞白血病按免疫标志分为非T细胞型和T细胞型。
前者又可分为无标志性急淋（Null-ALL）普通型急淋（Common-ALL）、前B细胞型急淋（Pre-B-ALL）和B细胞型急淋（B－ALL）4个亚型；T细胞型又分为不成熟胸腺细胞型（immature T-ALL），普通的胸腺细胞型（eommon T-ALL）和成熟胸腺细胞型（mature T-ALL）。
见表5－3－1 和表5－3－2. 表5－3－1 急性T淋巴细胞白血病（T－ALL）细胞表型组别免疫亚型表型特征CD7CD5CD2CD1CyCD3SmCD3CD4CD8Ⅰ幼稚胸腺细胞型immature T-ALL+-/+-/+--/+---Ⅱ普通胸腺细胞型common T-ALL+++++-/+++Ⅲ成熟胸腺细胞型 mature T-ALL+++-+/-++/--/+表5－3－2 急性非T淋巴细胞白血病（non-T-ALL）细胞表型组别免疫亚型表型特征HLA-DRCD19CD10CD22CD20CyIgMSmIgⅠ无标志型急淋Null-ALL+-/+-----Ⅱ普通型急淋common-ALL+++-/+-/+--Ⅲ前B细胞型急淋pre-B-ALL++++++-ⅣB细胞型急淋B－ALL＋＋+/-++-+ （二）急性非淋巴细胞白血病应用免疫学标志进行分型尚正在探索中，髓细胞系的免疫膜标志；粒细胞系为过氧化物酶＋、CD34＋、CD13＋；单核细胞系为α－萘酚醋酸酯酶＋，可被氟化钠抑制，CD34＋、CD13＋、CD14＋；红细胞系为血型糖蛋白（Gl ycophorin）及红细胞膜收缩蛋白（Spectrin）＋；巨核细胞系为血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa+、Ⅰb/Ⅲa＋。
急非淋膜标志与FAB分型的关系见表5－3－3. 表5－3－3 急性非淋巴细胞白血病FAB 分型与膜标志抗体M1M2M3M4M5M6M7 HLA－DR++-+++/-+/-CD34++/--+/-+/--+/-CD33+++ +++/-+/-CD13+/-++ + +- CD14-+/--++- CD15-++/-+++/- 血型糖蛋白-----+-Ⅱb/Ⅲa/Ⅰb------+。
WHO关于白血病分型
髓常正常，生存期长 隐袭型：无特征性症状，WBC正常且异常T细胞少，
用适当的HTLV-I探针方法可证实T细胞克隆性增生
精品课件
ATLL早期无Hb和血小板降低或稍低，随疾病发展 WBC升高，淋巴细胞增多，出现大小不一（大者＞14μm） 多少不等（10%-80%）多形性多核叶细胞
WHO关于白血病的分类
精品课件
精品课件
血液病的诊断标准
FAB诊断？？
MICM诊断（WHO标准）
M：Morphology （histochemistry ） I：Immunology C：Cytogenetics M：Molecular biology
（敏感性，特异性？）
精品课件
精品课件
精品课件
除典型CGL外，aCML、Ch-CML、CNL和CMML均为Ph-/bcr-， 故也称这4型为P h染色体或bcr基因阴性疾病。
WHO 将CGL和CNL归属MPD，将CMML、aCML、Ch-CML归属 骨髓增生异常/MID。最近WHO认为：将CMML外周血WBC＞ 13×109/L者列为MPD（CGL）。
②前T细胞ALL。 ③Burkitt细胞白血病/淋巴瘤：有t（8；14）（q244； q32）异常和变异，c-myc。此外99%可检出Ki-67片断。
精品课件
成人T细胞白血病/淋巴瘤（ATLL）
一般以淋巴结肿大伴外周血淋巴细胞异常、高 钙血症、骨质破坏、皮肤损害和骨髓受累为特征。 HTLV-I抗体阳性是诊断的必要条件。
幼单 HLA-DR CD11b、13 14、33、64 115
CFU-E
WHO关于白血病分型
AML各亚型免疫标志
亚型 常表达抗原 不常表达抗原
其它粒系或淋巴系抗原
M0 CD11b、13、33
M1 CD13、15、33、HLA-DR
CD11、14
M2 CD11b、13、15、33、34、56、19、HLA-DR
M3 CD11b、13、15、33、34
M4 CD4、11b、13、14、15、33、34 M5 CD4、11b、13、14、15、33、34 M6 血型糖蛋白A、CD13、33、34 M7 CD41、61、因子VII相关抗原
表面分 化抗原
前T细胞
胸腺皮质T细胞
髓质T细胞
末梢T细胞
表面分 化抗原
FAB 分类
单核细胞 前单核细胞 CFU-C 骨髓母细胞 幼稚细胞 M3 M4 M0 M1
M5b M5a M2
粒细胞
CD14
CD13 CD33 CD34
CD11b
HLA-DR
CD38 CD71
Cancer Cytogenetics
CFU-E
CD36、117 EpoR
红细胞
CD33、34 117、EpoR
CD35、 44 59
血小板 CD9、14、 36、41、 42、49 61、126
CFU-MEG CD33、34 116、126 W123、IL-11R
巨核细胞 CD9、14、36 41、42、61 W116、W123 126
我国将CML分为5型： ①典型慢粒（CGL或CGL-CP）； ②不典型慢粒（aCML或a-CML）； ③幼儿型慢粒（Ch-CML）；
④慢性中性粒细胞白血病（CNL）；
⑤慢性粒单核细胞白血病 （CMML）。 除典型CGL外，aCML、Ch-CML、CNL和CMML均为 Ph-/bcr-，故也称这4型为P h染色体或bcr基因阴性疾病。 WHO 将CGL和CNL归属MPD，将CMML、aCML、Ch-
白血病免疫分型测定
b.使用COULTERQ—PREP制备系统
开机---显示READY灯亮---选择35SEC灯亮---开门---放入试管关门---自动进行溶血---显示READY灯亮---开门---取出试管---再进行下一个样品测定。
（*溶血前确认A/B/C管路充满并能打出液体）
操作-样本制备：
细胞膜表面抗原
1．首先准备所需的管，并在管上标记上欲加入的抗体。
2．首先每管中加入5ulCD45-PC5抗体。
3．然后，按管上的标记，加入相应抗体各10ul(注意：必须是FITC和PE标记的抗体搭配)
4．各管中加入标本(骨髓或外周血)30～100u1(根据细胞的多少决定)，振荡混匀，室温避光20～30分钟。
6．各管中加入透膜剂100ul，轻轻混匀，室温避光5分钟。
7．加抗体，阴性对照管中加入10ul，其余各管加入相应抗体各10ul，室温避光15分钟。
8．各管中加入4mlPBS，振荡混匀。
9．300g离心5分钟后，弃去上清液。
10．各管中加入PBS500ul，振荡混匀。11 Nhomakorabea上机测样
报告结果
报告百分数
操作性能
标本采集与处理
受检者的准备检查对象生活饮食处于日常状态，腰穿采骨髓。
采集部位腰穿采骨髓
抗凝剂肝素抗凝
要求1．样本量至少3ml。
2．样本应在采集后6小时内处理，冷冻的标本或已固定的标本不能用。
3．样本白细胞计数应在4.0-10.0×109/L之间。若>10.0×109/L，样本需要稀释，用PBS稀释；若<4.0×109/L，应分离单个核细胞。
4：鞘液液体20L室温
5：清洗液液体5L室温
白血病免疫分型初筛方案
白血病免疫分型初筛方案白血病免疫分型初筛方案白血病是一种由于造血干细胞异常增殖引起的恶性血液病，其临床表现及预后差异较大。
对于白血病患者的治疗和预后判断，准确的分型至关重要。
近年来，随着免疫学研究的进展，白血病的免疫分型成为了一个重要且具有指导意义的方面。
本文将介绍白血病免疫分型的初筛方案，以及其对临床的意义和应用。
一、什么是白血病免疫分型？白血病免疫分型是通过检测白血病患者的免疫表型，即细胞上表达的抗原和细胞表面标记物，来确定白血病的类型和亚型。
目前，常见的白血病免疫分型方法主要包括流式细胞术、免疫组化、免疫电镜等。
二、为什么需要白血病免疫分型？白血病患者的治疗和预后与其分型紧密相关。
不同类型的白血病具有不同的临床表现、生物学特点和预后，准确的分型对于指导个体化治疗非常重要。
免疫分型不仅可以帮助医生确定病情严重程度、制定个体化治疗方案，还可以对患者的预后做出评估。
对于一些疑难病例，免疫分型还有助于确定病理诊断和鉴别诊断，减少误诊和漏诊的发生。
三、白血病免疫分型的初筛方案目前，国际上广泛应用的白血病免疫分型初筛方案主要是基于流式细胞术。
这一方法具有快速、准确、多参数检测的特点，使得它成为了白血病免疫分型的首选工具。
白血病免疫分型的初筛方案通常包括以下几个方面的内容：1. 纵向免疫分型纵向免疫分型主要是通过检测白血病细胞表面的免疫表型，确定白血病的类型和亚型。
对于怀疑白血病的患者，医生通常会进行一系列免疫标记物的检测，如CD45、CD34、CD13、CD33、CD14、CD15等。
这些标记物可以帮助医生确定白血病患者的分型，指导后续的治疗和预后评估。
2. 横向免疫分型横向免疫分型则是通过比较不同类型的白血病细胞表面的免疫表型，辅助鉴别白血病的类型和亚型。
在横向免疫分型中，医生通常会检测同一类别不同亚型的白血病患者的共同抗原和独特抗原，以确定其具体的亚型。
3. 免疫细胞化学分析免疫细胞化学分析是一种通过检测白血病细胞内特定抗原的染色反应，来确定白血病的类型和亚型的方法。
白血病分型及诊断标准
白血病分型及诊断标准白血病是一种由于骨髓中某些白细胞异常增生而导致的恶性血液疾病。
它是一种高度复杂的疾病，分为多种不同的类型和亚型。
对于正确诊断和治疗白血病，准确分型是非常重要的。
本文将深入探讨白血病的分型及其诊断标准，并提供相关观点和理解。
为了更好地了解白血病的分型和诊断标准，我们首先需要了解白血病的基本概念。
白血病是一种造血系统的恶性疾病，主要表现为骨髓中异常增生的白细胞，这些白细胞数量过多，发育不成熟或功能异常。
根据白细胞的分化程度和特征，白血病可以分为急性白血病和慢性白血病两大类。
急性白血病是一类进展迅速的白血病，骨髓中存在大量未成熟的白细胞，这些白细胞无法正常发挥其功能，并且会抑制正常造血细胞的产生。
急性白血病通常分为急性淋巴细胞白血病（ALL）和急性髓系白血病（AML）两大类。
急性淋巴细胞白血病（ALL）是一种由淋巴细胞前体异常增生导致的白血病。
它可发生在儿童和成人身上，儿童ALL占所有儿童肿瘤的25％，成人ALL则较为罕见。
ALL的诊断标准主要基于骨髓和外周血液中异常淋巴细胞比例的检测及免疫分型。
根据世界卫生组织（WHO）的分类标准，ALL通常被分为B细胞型和T细胞型。
B细胞型ALL占所有ALL患者的大部分，而T细胞型ALL较为罕见。
急性髓系白血病（AML）是一种由骨髓中异常增生的髓系细胞引起的白血病。
与ALL不同的是，AML主要发生在成年人身上，尤其是中老年人。
AML的诊断主要依据骨髓中异常细胞的形态学特征和免疫分型。
根据WHO的分类标准，AML根据细胞学分类、分子遗传学和临床表现可分为多个亚型。
慢性白血病是一类进展缓慢的白血病，相对于急性白血病而言，慢性白血病的白细胞增生相对成熟，功能也相对正常。
慢性白血病一般分为慢性淋巴细胞白血病（CLL）和慢性髓细胞白血病（CML）两大类。
慢性淋巴细胞白血病（CLL）是一种由成熟淋巴细胞异常增生导致的白血病。
CLL通常发生在中老年人身上，很少影响年轻人和儿童。
急性白血病免疫分型
T-ALL旳免疫表型特点：
T-ALL分类
免疫表记
TdT+ 、CyCD3+ 、CD7+
Pro/Pre-T-ALL
CD2-、sCD3- 、CD1a-
T-ALL
CD2+、 sCD3+ 、 CD5+/- 、CD8+/- 、CD4+/- 、 CD1a+/-
-
+
+
-
T-ALL
+
-
-
+
-
-
+
AML
-
+/-
+
-
-
-/+
-/+
R1 门为成熟淋巴细胞 R2 门为正常单核细胞位置 R3 门正常粒细胞位置 R4 门为幼稚淋巴细胞出现位置 R5 门为有核红细胞或细胞碎片位置 R6 门为幼稚髓细胞出现位置 白血病细胞一般会在R4 R6 两门位置处出现
正常骨髓经CD45/SSC射门旳散点图
CD45/SSC 图中可见 CD45 强阳性SSC 低信号旳细胞群为淋巴细胞褐色细胞群体 中档强度旳CD45 体现SSC 信号最强旳细胞群体为粒细胞蓝色及红色细胞群体 CD45 体现与SSC 信号介于淋巴细胞与粒细胞之间旳是单核细胞群体绿色细胞群体 CD45 阴性SSC 信号最低旳有核红细胞和细胞碎片
ANLL旳免疫分型特点
FAB-M1/M2旳免疫表型特点：CDl3+、CD15+、CD33+、 HLA-DR+、CD34+，其中CD34在M1中旳体现强于M2，而CD15在M2旳体现较强。
ANLL旳免疫分型特点
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四.正常血细胞分化发育过程中免疫标志变化特点及 白血病细胞免疫标志特点 (一）. 正常B细胞标志：
CD19 TdT CD34 CD10 CD20 FMC7 CD22 CD23 I期 ： + + + II期： + + -/+ III期： + + + + Ⅳ期： + + + + + 泛B标志：CD19，HLA-DR，cCD79a/cCD22 幼稚B标志：CD34，TdT， CD10， 成熟B标志：CD22，CD23，FMC7
+ + -
+ +/-
+ +/-
泛T：CD2，CD5，CD7， cCD3 幼稚T：CD34，TdT，CD1a, CD4/8， 成熟T：CD3，CD4，CD8
T-ALL的分型
分型 急性早期T前体细胞白血病 early T precursor ALL CD7 + CD2 TdT CD3c/m + +
急性T细胞白血病 T-ALL
B-ALL的分型
亚型 CD19 CD34 TdT CD10 CyIg SmIg
急性早期B前体细胞白血病 + early B-precursor ALL 普通型B 细胞白血病 + Common B-ALL 急性前B细胞白血病 + Pre B-ALL 急性B细胞白血病 + B-ALL
+
+/-
+
+
+
-
-
CD19 CD19
CD11b CD11b
CD7
Side scatter Side scatter
CD117 CD5 CD5
CD45 CD45
CD13 CD13
CD34 CD34
CD64 CD64
CD64
CD19
CD11b CD11b
CD117 CD117
Side scatter
Side scatter
CD13
CD117
cCD13
CD34
HLA-DR
CD11b CD11b
CD117 CD117
Side scatter scatter
HlA-DR HLA-DR
CD5 CD5
CD45 CD45
CD64
CD34
CD64
CD19 CD19
CD11b
CD117 CD117
Side scatter
CD11b
三.免疫分型的作用：
1.区分ALL、AML：形态、组化难以诊断的病例（不典型、 治疗后） 2.将ALL分为B、T细胞及根据细胞发育阶段分为几种亚型 3.对M0、M6 、M7具有诊断意义： M0：形态似ALL、组化（-), MPO(+), 髓标志+, T,BM6：GlyA+，CD71+ M7：CD41+，CD61+（Iib/IIIa）
AML M0 M1 M2 M3 M4 M5 M5a M5b M6 M7
二.急性白血病的MIC分型：1985-1986提出
MIC：Morphology Immunology Cytogenitics 80年代免疫学研究的进展，单克隆抗体的大量涌现， 利用特异的单抗可以明确区分ALL、AML及进一步 鉴定亚型，对研究白血病的生物学特性，指导临床 治疗及判断预后起着重要的作用
-/+
-
+
-
+
-
+
-/+
+
意义：Common B-ALL 预后相对较好，CD34+B-ALL比CD34预后好，但CD34+患者伴Ph1+预后差。B-ALL预后相对 差，但随化疗方案改进，预后有所改善。
(二）.正常T细胞标志：根据在胸腺内发育阶段分4期
CD7 CD2 CD5 CD34 CD1a CD3c/m CD4 CD8 I期 ： II期： III期： Ⅳ期： + + + + + + + + + + + + + -/+ -/+ +/+ +/+
CD117 CD11 7
CD45
CD64 CD64
CD34 CD34
CD64 CD64
CD34 CD34
CD79a
cMPO
CD11b CD11b
CD117 CD117
Side scatter Side scatter
HlA-DR HLA-DR
CD5 CD5
CD45 CD45
CD64
CD34
CD64
正常BM各系细胞比率： 淋巴：20-30%：T：70%，B：20%，NK：10%； 单核：2-6%±；粒细胞：40-60%；有核红：<50%
FCM的主要测定指标：FSC，SSC，FL1，FL2，FL3（FL4） FSC：反应细胞的大小。SSC：反应细胞内颗粒的多少。 FCM设门法： FSC/SSC： 缺点： 不能将淋巴、单核及幼稚细胞区分开 CD45/SSC：CD45是WBC抗原，RBC、Plt为阴性。 CD45在成熟细胞表达强，幼稚细胞表达弱， 在淋巴、单核及粒细胞表达强度不同。 优点：能将淋巴、单核及幼稚细胞区分开。特异分析 白血病细胞免疫表型 FCM标记方法： 单标：一种单抗/tube: FL1,FSC,SSC(三参数） 双标：(两种单抗/tube/)：FL1,FL1,FSC.SSC（四参数） 三/四标：(三种单抗/tube)(四种单抗/tube)：FL1-FL3/4,FSC,SSC
+
+
-
+
T-ALL特点： 1. 幼稚T细胞数量增多：CD34+，TdT+ 2. 泛T标志丢失 3. CD4/8双+或CD4/CD8单阳
意义：儿童：ALL发病率占肿瘤的25%， B-ALL 预后比T-ALL相对好 成人：ALL 发病率20% T-ALL 预后比B-ALL 好。
(三).正常粒细胞标志
白血病免疫分型
北京大学血液病研究所
一.急性白血病FAB分型：1976年提出,以形态为基础。
ALL L1 以小细胞为主，大小一致 L2 以大细胞为主，大小不一 L3 以大细胞为主，大小一致 微小分化型急性髓细胞白血病, 原始细胞>30% 急性髓细胞白血病未分化型, 原始细胞》90% 急性髓细胞白血病部分分化型，原始细胞30-89% 急性早幼粒细胞白血病，异常早幼粒细胞>30% 急性粒单核细胞白血病，原始细胞>30%，单核20-80% 急性单核细胞白血病，原单+幼单>30% 未分化型，原单细胞》80% 部分分化型，原单细胞<80% 急性红白血病，原始细胞>30%，有核红细胞>50% 急性巨核细胞白血病，原巨核细胞>30%
cMPO CD13 CD34 CD117 HLA-DR CD33 CD11b CD15 CD64 CD10
幼稚粒 成熟粒
+ +
+ +
+ -
+ -
+ -
+ -
+
+
+
+
全粒细胞标志：CD13， cMPO 幼稚粒细胞：CD34，CD117，HLA-DR，CD33 成熟粒细胞：CD15，CD11b，CD10，CD64
CD11b CD11b
CD5 CD5
CD45 CD45
CD64
CD34
CD64 CD64
CD19 CD19
GlyA GlyA
CD11b
CD117
CD45
CD11b
CD5
CD64
CD34
GlyA
CD64
CD19
CD41
干祖细胞标志：T祖细胞 CD34 + TdT + CD117 -/+ HLA-DR +/CD38 +
CD11b
CD117
CD45
CD11b
CD5
Side scatter
CD64
CD34
CD64
CD19
CD11b
CD7
Side scatter
HLA-DR
CD5
CD45
CD117
CD34
CD117
CD19
CD11b
CD7
CD45
CD11b CD10-,CD34CD117
CD7
Side scatter
B祖细胞 + + + +/-
髓祖细胞 + + + +
诊断白血病主要标志： B-ALL：CD34，HLA-DR，CD19，CD10+/-，cCD79 T-ALL： CD34，CD38, CD7,CD2+/-,CD5+/-,cCD3 AML： CD34，CD117，CD33，CD13，cMPO M3：CD34 -，HLA-DRM2：CD19+：t（8，21） M4/M5：CD14+ M6：GlyA+,CD71+ M7：IIb/IIIa(CD41,CD61)+
(四).正常单核细胞标志：
HLA-DR CD33 CD13 CD34 CD117 CD14 CD64
幼稚单 成熟单
+ +
+ +
+ +
+ -
+ -
+
+
全单核细胞标志：CD33，CD13，HLA-DR 幼稚单核细胞标志：CD34，CD117， 成熟单核细胞标志：CD14，CD64 (五).成熟粒、单核细胞主要区别： 成熟粒细胞：CD33- HLA-DR- CD14- CD64+dim 成熟单核细胞：CD33+ HLA-DR+ CD14+ CD64+st