临床医学 肿瘤学 白血病细胞免疫表型流式细胞分型技术及意义
免疫细胞类型的鉴定和免疫表型的医学意义
免疫细胞类型的鉴定和免疫表型的医学意义免疫系统是人体的重要组成部分，它有着非常复杂的功能机制，包括免疫细胞的鉴定和免疫表型的医学意义。
在本文中，我们将探讨这些内容，帮助读者更好地了解免疫学的基础知识。
一、免疫细胞类型的鉴定免疫细胞是指在免疫系统中发挥重要作用的细胞，包括淋巴细胞、单核细胞、粒细胞等。
它们在感染、炎症和肿瘤等疾病过程中发挥重要作用，是免疫系统中最重要的细胞类型之一。
免疫细胞的鉴定是一项十分重要的工作，这需要我们从自然环境中分离出这些细胞，并用一系列的方法来鉴定它们的种类和数量。
常用的方法包括流式细胞术、免疫组织化学、原位杂交等。
流式细胞术是其中最为常用的方法之一，它可以用来对免疫细胞进行高通量的分析和鉴定。
这种方法可以通过荧光标记来检测特定的抗原和表面分子，并利用计算机分析和分类细胞。
因此，在免疫监测、肿瘤治疗、移植排斥等领域，流式细胞术都具有非常广泛的应用前景。
二、免疫表型的医学意义免疫表型是指免疫细胞的表面分子和受体分子的表达模式。
这些分子在免疫系统中发挥着重要的作用，能够调节细胞的生长、分化和活性等过程。
对于癌细胞的治疗，免疫表型的识别和鉴定也非常重要。
科学家们通过识别肿瘤细胞上表达的抗原和受体，设计出了许多高度特异性的免疫治疗方案，这些方案在对抗癌症中发挥了非常重要的作用。
除此之外，在医学诊断中，免疫表型也有非常广泛的应用。
例如，在炎症和感染等疾病的诊断过程中，医生可以通过识别免疫细胞表面上的不同受体和分子，来确定疾病的类型和病情严重程度，从而更好地进行治疗。
三、总结免疫细胞类型的鉴定和免疫表型的医学意义是免疫学的重要分支，这些工作对于诊断和治疗各种免疫相关疾病都有着非常重要的作用。
在未来的发展中，随着技术的不断进步，相信我们会有更多的方法和工具来鉴定免疫细胞类型和免疫表型，为医疗科技的进步提供更好的支持。
流式细胞术(FCM)在急性白血病免疫分型中的临床意义研究
流式细胞术（FCM）在急性白血病免疫分型中的临床意义研究发表时间：2016-11-22T17:22:49.410Z 来源：《航空军医》2016年第21期作者：王红艳1 许兴路2 [导读] 白血病是严重威胁人类生命健康的恶性疾病之一，是造血干细胞的恶性克隆性疾病。
1哈尔滨市红十字中心医院黑龙江哈尔滨 150000；2黑龙江省医院黑龙江哈尔滨 150000 【摘要】目的：分析流式细胞术在急性白血病免疫分型中的临床意义。
方法：采用流式细胞术对急性白血病细胞进行免疫分型结合传统细胞形态学检查，对2种检测结果进行分析。
结果：1、临床初诊52例白血病患者中，FAB分型AML27例，ALL25例。
流式细胞术检出单纯型AML19例，伴淋系6例；单纯型ALL14例，伴髓系10例；双表型2例，未分化型1例。
2、AML 形态学分型与免疫分型完全符合率66.7%、部分符合率22.2 %；ALL 形态学分型与免疫分型完全符合率56 %，部分符合率40%。
结论：利用流式细胞术，识别白血病细胞分化抗原（CD）系列的特异性荧光素标记的McAb鉴别膜、浆与核的抗原，对白血病的诊断及分型具有重要作用，是FAB分型的重要补充，两者结合可提高诊断准确率。
【关键词】流式细胞术（FCM）；急性白血病；免疫分型Reserch on the clinical significance of flow sytometry in the classification of acute leukemia 1Wang Hongyan，2Xu Xinglu（1Ha Erbinred cross center hospital，Hei Longjiang，Ha Erbin150000；2Hei Longjiang Provincial Hospital，Hei Longjiang，Ha Erbin150000）【Abstract】 Objective：Analyze the clinical significance of flow cytometry in the classification of acute leukemia.Methods：2 kinds of detection results were analyzed by using flow cytometry to detect the expression of ALL cells in combination with traditional cell morphology.Results：1、52 cases diagnosed leukemia patients，among these，FAB typing AML27 cases，ALL25cases，detect by flow cytometry，AML19 cases，Ly +AML6 cases；ALL14 cases，My +ALL10 cases；HAL2 cases，UAL1 cases. 2、In AML the accordance rate and part accordance rate of the two phenotypes was 66 .7% and 22 .2%.In ALL the accordance rate was and part accordance rate was 56% and 40%.Conclusion：Using flow cytometry，identification of a series of leukemia cell differentiation antigen （CD）- specific fluorescein labeled McAb to identify the membrane，cytoplasm and nuclear antigen，plays an important role in leukemia diagnosis and typing，and also is an important supplement of FAB typing，the combination can improve the accuracy of diagnosis.Key words：flow cytometry；acte leukemia；immunophenotype白血病是严重威胁人类生命健康的恶性疾病之一，是造血干细胞的恶性克隆性疾病，因白血病细胞自我更新增强、增殖失控、分化障碍、凋亡受阻，而停滞在细胞发育不同阶段，白血病细胞大量增殖积聚，致使造血功能不能正常进行[ 1]。
流式细胞术系列之-白血病免疫分型
M1：未分化的原粒细胞白血病；
FAB
分
M2：部分分化的原粒细胞白血病；
型
急非淋
M3：急性早幼粒细胞白血病；
（ANLL） M4：急性粒、单核细胞白血病；
急性髓细胞白 血病(AML)
M5：急性单核细胞白血病； M6：急性红血病或红白血病；
M7：急性巨核细胞白血病。
MIC分型
形态学
(morphology， M ) ：传统的骨髓片检查
B-ALL
在CD45/SS点图中，幼稚细胞群体低SSC信号，与成熟淋 巴细胞比较CD45弱表达
du p eng .0 01
R3
R5 100
R4
101
R1
R2
102
103
CD4 5 PerCP-Cy5.5
104
CD19、CD20、 CD10、cCD72、 CD34、HLA-DR 阳性
AML-M0
AML-M6 （急性红白血病）
• 髓细胞白血病红细胞分化型对应于FAB的M6，在形态学上 幼稚红细胞计数大于髓系细胞的50%且髓系幼稚细胞占非 红细胞的30%以上。然而因为幼红会因标本处理中溶血步 骤而被破坏，当流式细胞仪分析时有核红细胞占总细胞数 的50%以下时，红细胞白血病很难与MDS（骨髓增生异常 综合症）和早期白血病区分开来。
故难圈出独立成群的肿瘤细胞。 • 对于M4病例一般都设多个门对异常细胞进行分析，且每个异常细胞群根据
其成熟度的不同，表型也可能互不相同。 • 本例为M4EO，增多的嗜酸细胞SSC信号与早幼粒相似;CD45信号与单核细
胞相似。
• CD13和/或 CD33阳性， CD33>CD13， HLA-DR、 CD14（+/-）、 CD15与CD11B 阳性。CD34阳 性/阴性，MPO 阳性。
临床流式细胞术在白血病诊断中的应用
临床流式细胞术在白血病诊断中的应用白血病是一种危害人类健康的恶性肿瘤疾病，而临床流式细胞术作为一种高度敏感和特异的检测手段，在白血病的诊断与疾病监测中发挥着重要作用。
本文将探讨临床流式细胞术在白血病诊断中的应用，为临床医生提供更准确、更快速的白血病诊断方法。
一、渗透溶解细胞检测临床流式细胞术在白血病诊断中的首要步骤是对患者样本进行渗透溶解细胞处理，使得白细胞膜溶解并释放细胞内内容物。
这一步骤的重要性在于有效提取细胞，并将它们分散至测试管中。
二、特异性标记在渗透溶解细胞处理后，接下来的关键步骤是对白细胞进行特异性标记。
临床医生可以将荧光抗体添加到细胞中，这些荧光抗体能够与特定蛋白质结合，从而将不同类型的白细胞区分开来。
通过这种方式，临床流式细胞术可以提供全面且准确的白血病亚型识别。
三、流式细胞术仪器操作临床流式细胞术采用了先进的仪器，如流式细胞仪，有助于实现高通量的细胞检测与数据分析。
流式细胞仪通过激光束照射细胞，然后测量细胞散射和荧光信号。
这种技术使得临床医生能够快速、高效地分析数以万计的细胞，并获得准确的白血病细胞计数。
四、数据分析与结果解读得益于流式细胞术仪器的高度灵敏性，临床医生可以对获得的数据进行详细的分析与解读。
通过比较患者样本与正常对照品的差异，医生能够确定是否存在白血病细胞的存在。
此外，还可以进一步识别出不同的白血病亚型，以指导后续治疗决策。
五、临床应用与前景展望临床流式细胞术在白血病诊断中已取得显著的成果，尤其在慢性淋巴细胞性白血病 (CLL) 的诊断与监测上应用广泛。
同时，该技术在急性白血病、骨髓瘤等其他白血病亚型的诊断中也表现出了良好的应用前景。
未来，临床流式细胞术在白血病诊断领域的应用还会得到进一步的发展。
随着技术的不断更新和改进，该检测方法将变得更加高效、更加精确。
此外，流式细胞术与其他检测手段的结合也为白血病诊断提供了新的思路和方法。
结论临床流式细胞术作为一种敏感、特异的检测手段，为白血病的诊断与疾病监测提供了重要的工具。
应用流式细胞仪对176例急性白血病进行免疫表型分析
应用流式细胞仪对176例急性白血病进行免疫表型分析急性白血病是一种由于造血干细胞发生异常增殖或分化障碍而引起的血液系统恶性肿瘤疾病。
精准的免疫表型分析可以为临床诊断、疾病分型和治疗选型提供准确的基础数据，流式细胞仪作为一种先进的免疫学检测技术，能够敏锐的分辨各种细胞的表型特征，因此成为研究、诊断急性白血病的重要方法之一。
本文通过分析176例患者的免疫表型，探讨了流式细胞仪在急性白血病诊断中的应用。
在分析过程中，我们首先采用流式细胞仪检测患者血液中的白细胞、粒细胞、单核细胞、淋巴细胞的表型特征，发现不同类型的急性白血病白细胞的表型特征差异显著。
以AML-M1型急性髓系白血病为例，该型白血病细胞通常表现为CD33、CD13、CD14、CD15等多种粒细胞系标记阳性，而CD34、CD41等为幼稚血细胞标志物阳性。
而ALL-T2型急性淋巴系白血病的淋巴母细胞往往表现为CD10、CD19、CD34、CD45、CD123等标记阳性。
通过这些特征的分析，我们可以对不同类型的急性白血病进行准确的诊断、分类。
同时，我们还应用流式细胞仪检测了患者白细胞的CD34+和CD117+细胞数量，发现在急性髓系白血病中，CD34+和CD117+细胞较高，而在急性淋巴系白血病中，这两种细胞的数量明显降低。
基于这些数据，我们可以更精确地评估患者的病情严重程度和预后。
此外，我们还对患者骨髓中的淋巴细胞进行了CD45RA和CD45RO的表型分析，发现在某些淋巴系急性白血病中，CD45RA+淋巴细胞数量降低，而CD45RO+淋巴细胞数量增多。
这一结果提示了CD45RA和CD45RO在急性白血病中具有重要的临床应用价值，可以用于病情的评估和疾病类型的判断。
综上所述，流式细胞仪具有高灵敏度、高分辨率，能够对患者血液中各种细胞的表型特征进行快速、准确的检测，对急性白血病的诊断、分类、评估病情严重程度和预后等方面具有重要的应用价值。
随着流式细胞仪技术的不断发展，相信在未来，它将在临床急性白血病诊断、治疗中发挥着越来越重要的作用。
白血病流式报告解读
白血病流式报告解读白血病是一种由于造血系统恶性克隆增生导致的恶性疾病，其发病率逐年上升。
流式细胞术是一项常用的检测手段，能够对白血病患者的血液样本进行细胞分析，并提供重要的诊断和治疗指导信息。
根据白血病流式报告，我们可以看到以下几个关键指标。
1. 免疫表型分析免疫表型分析是流式细胞术最重要的应用之一。
通过检测细胞膜上的特定免疫标记物，可以确定细胞的类型和分布。
在白血病患者中，免疫表型分析可以帮助鉴别不同的细胞系，如淋巴细胞白血病和骨髓细胞白血病。
2. 异常细胞群分析通过流式细胞术，我们可以分析样本中的异常细胞群。
在白血病患者中，异常细胞群的存在可以提供重要的诊断线索。
例如，在急性淋巴细胞白血病中，常见的异常细胞群为早幼B细胞和早幼T细胞。
而在急性髓细胞白血病中，异常细胞群则包括早幼髓细胞和原始髓细胞。
3. 异常免疫表型分析流式细胞术还可以通过检测细胞的免疫表型异常来帮助白血病的诊断和分类。
例如，在B淋巴细胞慢性淋巴细胞白血病中，CD5和CD23的共表达异常是其诊断的关键特征之一。
而在骨髓异常增生综合征中，CD34和CD117的共表达异常则是其诊断的重要标志。
4. 异常细胞比例分析流式细胞术可以通过测定样本中异常细胞的比例来评估疾病的严重程度。
在白血病患者中，异常细胞比例的增加通常与疾病进展和预后不良相关。
因此，通过流式细胞术的异常细胞比例分析，可以提供白血病患者的预后评估和治疗指导。
5. 微小残留病灶检测流式细胞术还可以用于微小残留病灶的检测。
在白血病患者接受治疗后，流式细胞术可以检测微小残留病灶的存在，从而评估治疗的疗效和预后。
通过流式细胞术的微小残留病灶检测，可以及早发现复发风险，采取相应的治疗措施。
白血病流式报告的解读可以通过免疫表型分析、异常细胞群分析、异常免疫表型分析、异常细胞比例分析和微小残留病灶检测等指标来进行。
这些指标不仅可以帮助白血病的诊断和分类，还可以评估疾病的严重程度、预后和治疗效果。
白血病细胞免疫表型流式细胞分型技术及意义(FlowCytometer)
点图(dot plot)
二维等高图
用等高线来表示细胞数，在一条等高线上细胞数相同， 不同的等高线上细胞数不同。
假三维等高图
纵轴与横轴分别代表被测细胞的两个测量参 数,Z轴为细胞数。
３.多参数数据的显示
Multiple-Parameter Data Displays
在单一图上同时显示多参数是不可能的。 实际工作中是用若干个单参数直方图和各种 不同组合的双参数数据显示来反映各种信息 的。多参数测量另一重要意义是通过有关参 数进行“设门”分析 ( gating analysis )可
DNA分析比较
双参数数据的设门分区分析
纵轴与横轴分别代表被测细胞的两个测量 参数,在图中每一个点代表一个细胞
双参数数据的设门分区分析
FCM白血病细胞免疫表型诊断
正常造血细胞分化成熟的抗原表达
正常造血细胞不同阶段的抗原表达是受一系列 基因严密控制的,在一定的分化阶段哪些抗原表达 上调、哪些抗原表达下调及抗原表达量多少存在 着明显的规律性.一部分白血病细胞反映了这种分 化模式,但白血病细胞经常出现异常的抗原表达模 式.这些异常的抗原表达模式可以作为诊断白血病 的有用指标,也可以作为检测残存白血病的重要指 标.
在激发光的照射下可测到有微弱的荧 光信号.
细胞荧光 经过各种特异染色的细胞在激
发光的照射下可测到较强的荧光信号.
自发荧光信号与特异染色的荧光信号分析图 自 发 荧 光 信 号
特 异 染 色 的 荧 光 信 号
细胞荧光信号
荧光信号的测量：
经过PMT将光学信号转变为电脉冲信号，并增加PMT 的电压及增益，可将脉冲信号进行放大。放大方式有两种 ：
分选出: I为原粒细胞 II早幼粒细胞 III中幼粒细胞 IV晚幼粒细胞 V中性分叶核 粒细胞
白血病免疫学积分系统意义
白血病免疫学积分系统意义白血病是一种恶性肿瘤，由于白血球数量过多，常导致免疫系统功能受损、贫血和感染等问题。
白血病免疫学积分系统（Leukemia Immunophenotyping Scoring System，LISS）是一种流式细胞术用于白血病分类和治疗评估的指南。
本文将重点讨论该系统的意义。
一、白血病分类LISS是根据不同免疫分型信号分子的表达情况诊断血液病的一种方法，通过分析血液细胞表面分子的表达情况，判断其类型和亚型。
白血病在免疫系统内的分化和发展是复杂的，因此需要结合多种免疫学参数来做出准确的分型判断。
LISS包括采用不同的物质特征进行临床分型，如T细胞、B细胞、浆细胞、中性粒细胞等。
由于不同的蛋白质在不同的白血病细胞中表达的量和类型不同，LISS使得这些白血病类型的分析更为准确。
二、白血病治疗LISS对白血病的治疗有着重要的指导意义。
在识别白血病类型后，LISS可以帮助医生鉴别白血病类型和是否有遗传异常，在治疗方案制定和完善中发挥重要作用。
针对广泛应用的治疗方案，如化疗和干细胞移植，LISS也可以提高其疗效，预测疗效和潜在的不良反应。
LISS不仅可以用于血液恶性肿瘤的分型，也可以用于其他类似的疾病分类和治疗评估。
三、临床应用随着科技的创新和发展，LISS已经逐渐应用到诊断实践中。
流式细胞术是目前白血病诊断和分类中最为常用的方法之一，它主要依靠光学原理和荧光染色来测量细胞的物理和生化特性，从而实现白血病的分类和监测。
LISS最初是在1998年被引入到临床中，经过多年的探索和改进，现在已经成为现代医学中的一个基本流程，有望广泛应用于临床诊断和研究领域。
综上所述，LISS是一种基于流式细胞术的免疫学指南，可以辅助诊断、治疗和预测白血病的疗效，对于提高白血病治疗的可行性和可靠性有重要的作用。
随着人类对细胞学和遗传学的认识不断深入，LISS未来还有望在更多的领域和方法中得到应用，成为医学发展前沿的重要一环。
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Laser
液流驱动系统（示意图）
流速与压力的关系服从Bernoulli方程，即 P=(1/2) V2 (忽略高度的变化)。改变气压,就可获得不同的流速。
FACSVantage Fluid System
激发光源与光束 成形系统
激光（Laser ,
Light amplification by stimulated emission of r a dia tion )是一种相干光 源。单谱线，高强度. 细 胞在1-2u s内就可以收集 到足够强的荧光信号.一 般采用Ar +激光器,有多 条可调谱线,与多种荧光 染料激发谱匹配.
白血病细胞免疫表型流 式细胞分型技术及意义
（FlowCytometer）
SSMU
Shi Gui Ying
分析细胞学
细胞的形态学参数 定量 细胞化学成分及含量
生物学特征
细胞的功能
Laser
FAL S Sensor
分析细胞学 年青的交叉学科
激光技术 数字计算机技术 电子物理技术 电子摄像技术 光电测量技术 荧光细胞化学技术 单克隆抗体技术等
什么是流式细胞术(FCM)？
FCM是以流式细胞仪为检测手段的一项 能快速、精确的对单个细胞理化特性进行
多参数定量分析和分选的技术。
Laser
FAL S Sensor
特点: 流动的 可以是活细胞的 定量的 多参数的 高统计学精度的 分选细胞
FCM的一般结构和原理
速度 轨迹 检测
散射光 荧光
流动室
90 Degree Light Scatter (SSC)
Laser
FALS Sens or
90LS Sen sor
细胞对光的散色现象与细胞样品制备无关.
FSC
FSC信号的强弱与细胞的大小和活力相关
SSC
SSC信号的强弱与细胞内颗粒多少相关
细胞散色光信号
细胞荧光测量
细胞的自发荧光 未经染色的样品细胞
在激发光的照射下可测到有微弱的荧 光信号.
细胞荧光 经过各种特异染色的细胞在激
发光的照射下可测到较强的荧光信号.
自发荧光信号与特异染色的荧光信号分析图
自 发 荧 光 信 号
特 异 染 色 的 荧 光 信 号
488 nm l aser
液滴冲电: 脉冲幅度,荷电多少,宽 度大小同时带电液滴数多少.
- Charg ed Plates
静电高压偏转板: 几千伏电压 分选细胞的收集装置: 96孔板,载玻片或试管
FSC Sensor Fluoresc enc e det ect or
+
Single cells so rted into t est tubes
Lo ng pass
460 500 540
S h ortp ass
460 500 540
B an dp ass
460 500 540
LP 500
SP 500
B P 500/50
信号转换系统:光 电 数字信号.
FCM细胞分选装置
超声振荡器: 20-40K C
液流断离点: 离喷口5-8m m
f=v/4.5d
FCM History 1934 Moldavanl first try（从固定式细胞分析-流动式） 1953 Crosland-Taylor:laminar flow（解决难题） 1956 Coulter（初次应用 ） 1965 Kamentsky: spectrometer principle(Ortho（开拓 1967 Vandilla and LosAlamos group: Feulgen,
球透镜和柱面透镜 ：
光 20×200 m 椭圆形光，短轴和细胞流平行，长 束 轴与细胞流垂直。 成 形 与 细 胞 受 照 方 式
光
束
这种椭圆形光斑的
成
检测区保证每个细
形
胞分别受到光照
与 细
且受检时受到一致
激发光焦斑
胞
的光照 F CM的
受
单细胞照明技术.
照
方
式
低速
高速
不同样本速率形成的样本流
光收集系统：滤光片
BD公司不同型号流式细胞仪
FACSCalibur
FACSCanto
FACSCount
LSRII
FACSAria
FACSVantage&DiVa
Coulter 公司不同型号流式细胞仪
EPICS XL/XLMCL
台式机
CytomicsTM FC 500系列 最新型
EPICS Altra细胞分选仪 大型科研型
1979年 国家科委重点项目： 研制国内第一台激光流式细胞仪
1982年 国内第一台三参数激光流式细胞仪诞生 1984年国家科委组织科研成果的鉴定验收
1985年 获国家卫生部科技成果乙等奖 1985年--1990年 灵敏度、信噪比、更多参数
流式分选仪研制开发 计算机四参数软件 样品制备、医学生物学应用
Fi lters
PMT
1
PMT
2
Ban dpass Fi lters
光电管
Laser
PMT可将散色光及荧光信号转换成电脉冲信号,电 脉冲信号通过模数转换器(ADC)量化为数字信号.
细胞散色光信号
Forward Angle Light Scatter (FSC)
Laser
FAL S Sensor
细胞对光的散色现象与细胞样品制备无关.
利用单克隆抗体分离细胞亚群
珠性
性
分选
选
离
择
择
细胞分选系统
通道式分选
电荷式分选
细胞信号检测与分析处理系统
细胞散色光的波长是与激发光波长一致的. PM4 T 前向散色光信号:光电二极管
侧向及荧光信号用光电倍增管
PMT
Dichroic
3
Fl ow cell
2-3m m方形石英 内径直200-300 m 流速慢,细胞信号大, 小型化。
荧光信号
激光束
Injector Tip
Sheath fl uid
通过流动室后细 胞一个一个排列 成单行,依次通过 检测区.把流动室
称为单细胞流 发生器.
流动室
Flow Cell
孔径50-200 m 检测区离喷口200 m 有分选功能