抗坏血酸过氧化物酶(AsA-POD)检测试剂盒(AsA比色法)
各种酶活性测定方法
抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性的测定过氧化氢酶（CAT）活性测定过氧化物酶（POD）测定方法超氧化物歧化酶（SOD）活性测定小组第一次讨论结果：一、抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性的测定1.原理APX 是植物体内重要的抗氧化酶, 主要功能是分解H2O2, 此过程通过抗坏血酸- 谷胱甘肽循环来完成。
此外, 它还直接参与抗坏血酸的氧化还原代谢, 而抗坏血酸能有效地清除多种活性氧自由基。
因此，APX被认为与果实的抗热性直接相关。
2.所用方法（1）采用碘液滴定法:称取新鲜材料1 g，剪碎置研钵中，加少量石英砂及pH值6.0 的磷酸盐缓冲液，迅速研磨成浆，20 ℃下浸提30 min，中间摇动数次，3000 r /min 离心后保留上清液即为酶液。
反应底物为抗坏血酸，加入酶液2 mL，20 ℃下反应10 min 后，立即加入偏磷酸1 mL，终止酶的活动，抗坏血酸被消耗的量，可用碘液滴定剩余的抗坏血酸来进行测定，加淀粉溶液几滴作指示剂，以碘液滴定出现浅蓝色为止，记录滴定值，用底物被消耗的量来表示APX 的活性。
每个处理设3 个重复。
（2）紫外吸收法：称取1g芥蓝叶片组织，加入1.6 mL预冷的磷酸缓冲液（PBS-K）（pH 7.8）提取液（含1 mmol·L-1 AsA，3 mmol·L-1β-巯基乙醇，0.5 mmol·L-1PMSF，2% PVP，1 mM EDTA）。
用液氮研磨，提取液于4℃，12000×g离心20 min，上清液用于酶活性的测定。
取0.10 ml 酶液（可视情况调整），加入1.70 ml 含0.1 mM EDTA-Na的PBS（0.05 mol/L，pH7.0），再加入0.10 ml 5 mM的AsA，最后加入0.10 ml 220mM H2O2，立即在20℃下测定D290（紫外）值在一定时间内的变化，计算单位时间内AsA减少量，并求酶活性（室温下测定，缓冲液调零）。
南京建成 产品目录及价格表 17-3-22
抗坏血酸过氧化物酶（APX）测试盒（紫外 比色法） 抗坏血酸氧化酶（AAO）活性测试盒（比色 抗坏血酸（AsA）含量测试盒（紫外比色 γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶（GCL）测试盒 （比色法） 硫氧还蛋白氧化还原酶（TrxR）测试盒（比 色法） 硫氧还蛋白过氧化物酶（TPX）测试盒（紫 外比色法） NAD激酶（NADK）测试盒（比色法） NADH氧化酶（NOX）测试盒（比色法） 辅酶ⅡNADP（H）含量测试盒（比色法） 辅酶ⅠNAD（H）含量测试盒（比色法） 腺苷脱氨酶（ADA）测试盒（酶比色法） （微板法） 游离脂肪酸（NEFA）测试盒（酶法，双试 剂）（微板法） 5’－核苷酸酶（5’-NT）测试盒（酶比色法） （微板法） 糖化血清蛋白（GSP）试剂盒（NBT法） （微板法） 胆碱酯酶（CHE）测试盒（速率法）(微板 白蛋白（ALB）测定试剂盒（带标准：溴甲 酚绿法） 柠檬酸合成酶（CS）测定试剂盒（微板法） 柠檬酸合成酶（CS）测定试剂盒（微板法） 植物提取液 蔗糖测定试剂盒（国标法） 蔗糖测定试剂盒（紫外比色法） γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）测定试剂 盒（速率法） 糜蛋白酶测定试剂盒 谷氨酸测定试剂盒（紫外比色法） 超微量ATP酶测试盒（Na+K+、Ca2+Mg2+、 T－ATP酶） 超微量ATP酶测试盒（Na+K+、Ca2+Mg2+、 T－ATP酶） 超微量ATP酶测试盒（Na+K+、Ca2+Mg2+、 T－ATP酶） 超微量ATP酶测试盒（Na+K+、Ca2+Mg2+、 T－ATP酶） 超微量ATP酶测试盒（Na+K+、Ca2+Mg2+－ ATP酶） 超微量ATP酶测试盒（Na+K+、Ca2+Mg2+－ ATP酶）
植物生理学中各项生理指标的测定方法
一.实验内容实验1 MDA(丙二醛)含量测定所需试剂：10%三氯乙酸（TCA）（纯） 0.25%硫代巴妥酸 (纯)实验2：可溶性蛋白含量测定所需试剂：考马斯亮蓝G-250 95%乙醇 85%磷酸实验3：SOD(超氧化物歧化酶)酶活性测定所需试剂：dl-甲硫氨酸（Met） NBT EDTA-Na2 核黄素实验4：CAT(过氧化氢酶)活性（过氧化氢酶）测定所需试剂：PBS（PH=7.0） 30% H2O2实验五：Apx(抗坏血酸过氧化物酶)活性（即ASA—POD活性）测定所需试剂：ASA（分子量167.12） (乙=胺四乙酸=钠)EDTA—Na2 PBS (pH7.0) 30%H2O实验6： ASA(维生素C)含量测定偏磷酸 95%乙醇磷酸 4% 2,2-二联吡啶 FeCl3（或FeCl3·6H2O）实验7：GSH(谷胱甘肽, 媚力肽GSH GSH是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸结合而成的三肽化合物)含量测定所需试剂：NaH2PO4·2H2O DTNB（二硫代硝基苯甲酸） PBS (PH6.8)实验8：脯氨酸测定所需试剂：磺基水杨酸甲苯茚三酮冰乙酸 85%磷酸试验9：叶绿素含量测定。
80%丙酮试验9：GR活性测定试验10：过氧化氢含量测定。
三氯乙酸试验11：超氧阴离子含量测定二．酶液和母液提取1. 酶液提取所需试剂：50mmol/L磷酸缓冲液（PH=7.8）(内含1% (m/v) 聚乙烯吡哆烷酮PVP），0.1mmol/L EDTANa2或EDTA)，也可为（内含2% (m/v)PVP），0.2mmol/L EDTA Na2或EDTA）（先配制后用缓冲液定容）2. ASA . GSH母液提取所需试剂：5%偏磷酸1．抗氧化酶酶液提取（SOD.POD.CAT）：1g（根据样品的量,少的可以适当减少）叶片加入预冷5ml. 50mmol/L磷酸缓冲液（PH=7.8）↓4℃冷冻15000g离心20分钟↓上清液即为酶液（5℃下保存一两天内备用，中短期用-20℃保存）2．ASA . GSH母液提取：0.1g叶片加入3ml预冷5%偏磷酸溶液↓4℃冷冻14000g离心10分钟↓上清液即为母液（5℃下保存备用）（偏磷酸可显著沉淀蛋白质和保护ASA）酶液提取所需试剂：PVP（聚乙烯吡哆烷酮）：1%（1g溶于100ml水），1000ml需称取10g，此处用PBSEDTA-Na 2 : 0.1mmol/L (37.2mg EDTA-Na2溶于1000ml蒸馏水)，此处用PBSPBS（缓冲液）配制方法：① Na2HPO4·12H2O ② NaH2PO4·2H2O取① 71.64g，蒸馏水定容至1L，取② 31.21g定容至1L，放置4℃冰箱备用PH=7.8 取① 91.5ml+② 8.5ml=100ml (浓度0.2mol/L)需要0.05mol/L→将上述溶液烯释至400ml （0.2mol/L*0.1=0.05mol/L*V）母液提取所需试剂：5%偏磷酸：称5g纯偏磷酸，定容至100 ml蒸馏水（需加热溶解，温度在50-60℃）偏磷酸有剧毒（偏磷酸难溶解，先得用研钵提前研碎，后用磁力搅拌器溶解一到两天后再定容）（现所用为38%HPO3，所以需称65.7895g，定容至500ml）三．实验步骤实验1：MDA含量测定1.1所需试剂：10%三氯乙酸（TCA）（纯）称10g定容至100ml0.25%硫代巴妥酸 (纯) 称0.25g用10%TCA定容至100ml（配制时，可一次完成，先配TCA，不要定容，再加入硫代巴比妥酸，然后定容，若难溶解，可以在磁力搅拌器上微热）1.2步骤：取0.3g叶片，加4ml磷酸缓冲液研磨，加入 4ml 0.25%的硫代巴比妥酸（溶于10%的三氯乙酸）溶液↓摇匀95℃加热15分钟↓快速冷却3000g离心15分钟↓取上清测定 OD532，OD600，OD450值↓按公式求 MDA浓度=6.45×（OD532-OD600）-0.56OD450 (μmol/L)可溶性糖浓度=11.71×OD450 (mmol/L)最后计算 MDA含量（μmol/g FW）= [4×（MDA浓度x）×10-3/0.1]同时，可测得可溶性糖含量（m mol/g FW）= 4×（可溶性糖浓度χ）×10-3/0.1（用多波长测定，在测定之前一定要矫正基线，公式中的参数可以直接在分光光度计上输入）注意：以0.25%的硫代巴妥酸溶液作空白调零MDA含量测定的改进1.可以用做酶活性时提取的酶液来直接测定MDA含量，用量可以定为1.0、1.5或2.0（较好）ml。
抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法
抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法一、超氧化物歧化酶（SOD）活性测定（氮蓝四唑光化还原法）1、试剂的配制（1）0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS，pH7.8)：A母液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O（分子量358.14）71.7g；B母液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液：取NaH2PO4·2H2O（分子量156.01）31.2g。
分别用蒸馏水定容到1000ml。
0.05mol/L PBS（pH7.8）的配制：分别取A母液(Na2HPO4) 228.75ml，B母液(NaH2PO4) 21.25ml，用蒸馏水定容至1000ml。
参考文献：李合生主编：植物生理生化实验原理和技术.高等教育出版社，2000：267～268。
（2）14.5mM甲硫氨酸溶液：取2.1637g Met用磷酸缓冲液（pH7.8）定容至1000ml。
（3）30μM EDTA-Na2溶液：取0.001gEDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至100ml。
（4）60μM核黄素溶液：取0.0023g核黄素用磷酸缓冲液定容至100ml，避光保存。
（5）2.25mM 氮蓝四唑(NBT)溶液：取0.1840g NBT用PBS定容至100ml，避光保存。
酶液制备：取0.2g（可视情况调整）样品（新鲜叶片或根系）洗净后置于预冷的研钵中，加入1.6ml 50mmol/L预冷的磷酸缓冲液（pH7.8）在冰浴上研磨成匀浆，转入离心管中在4℃、12000g下离心20min，上清液即为酶液。
2、酶活性测定（1）反应混合液配制(以60个样为准)：分别取Met溶液162ml，EDTA-Na2溶液0.6ml，磷酸缓冲液5.4ml，NBT溶液6ml，核黄素溶液6ml,混合后摇匀；（2）分别取3ml反应混合液和30μl酶液于试管中（3）将试管置于光照培养箱中在4000 lux光照下反应20min；同时做两支对照管，其中1支试管取3ml反应混合液加入30μl PBS（不加酶液）照光后测定作为最大光还原管，另1支只加缓冲液置于暗中测定时用于调零。
过氧化物酶(Peroxidase,POD)试剂盒使用说明
3、细菌或细胞 POD 活性
（1）按样本蛋 反应体系中每分钟 A470 变化 0.01 定义为一个酶活 力单位。
POD（U/mg prot）＝245μL（反应体系）÷1000μL×提取酶液总体积（1000μL）÷样 本体积（5μL）÷0.01×ΔA÷蛋白质浓度（mg/mL）=4900×ΔA÷蛋白质浓度（mg/mL）
2、组织 POD 活性
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每 mg 组织蛋白在每 ml 反应体系中每分钟 A470 变化 0.005 定义为一个酶 活力单位。
POD（U/mg prot）＝245μL（反应体系）÷1000μL×提取酶液总体积（1000μL）÷样 本体积（5μL）÷0.005×ΔA 测定÷蛋白质浓度（mg/mL）=9800×ΔA÷蛋白质浓度（mg/mL）
用 96 孔板测定的计算公式如下
1、血清（浆）POD 活性
单位的定义：每 mL 血清（浆）在每 ml 反应体系中每分钟 A470 变化 0.005 定义为一个 酶活力单位。
POD（U/mL）＝245μL（反应体系）÷1000μL×血清（浆）总体积（1000μL）÷样本 体积（5μL）÷0.005×ΔA =9800×ΔA
（2）按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞在每 ml 反应体系中每分钟 A470 变化 0.01 定义为一 个酶活力单位。
POD（U/104 cell）＝245μL（反应体系）÷1000μL×提取酶液总体积（1000μL）÷样 本体积（5μL）÷0.01×ΔA÷细菌或细胞密度（104 cell /mL）=4900×ΔA÷细菌或细胞密 度（104 cell /mL）
（2）按样本鲜重计算
单位的定义：每 g 组织在每 ml 反应体系中每分钟 A470 变化 0.01 定义为一个酶活力单 位。
植物生理学中各项生理指标的测定方法
一.实验内容实验1 MDA(丙二醛)含量测定所需试剂：10%三氯乙酸（TCA）（纯） 0.25%硫代巴妥酸 (纯)实验2：可溶性蛋白含量测定所需试剂：考马斯亮蓝G-250 95%乙醇 85%磷酸实验3：SOD(超氧化物歧化酶)酶活性测定所需试剂：dl-甲硫氨酸（Met） NBT EDTA-Na2 核黄素实验4：CAT(过氧化氢酶)活性（过氧化氢酶）测定所需试剂：PBS（PH=7.0） 30% H2O2实验五：Apx(抗坏血酸过氧化物酶)活性（即ASA—POD活性）测定所需试剂：ASA（分子量167.12） (乙=胺四乙酸=钠)EDTA—Na2 PBS (pH7.0) 30%H2O实验6： ASA(维生素C)含量测定偏磷酸 95%乙醇磷酸 4% 2,2-二联吡啶 FeCl3（或FeCl3·6H2O）实验7：GSH(谷胱甘肽, 媚力肽GSH GSH是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸结合而成的三肽化合物)含量测定所需试剂：NaH2PO4·2H2O DTNB（二硫代硝基苯甲酸） PBS (PH6.8)实验8：脯氨酸测定所需试剂：磺基水杨酸甲苯茚三酮冰乙酸 85%磷酸试验9：叶绿素含量测定。
80%丙酮试验9：GR活性测定试验10：过氧化氢含量测定。
三氯乙酸试验11：超氧阴离子含量测定二．酶液和母液提取1. 酶液提取所需试剂：50mmol/L磷酸缓冲液（PH=7.8）(内含1% (m/v) 聚乙烯吡哆烷酮PVP），0.1mmol/L EDTANa2或EDTA)，也可为（内含2% (m/v)PVP），0.2mmol/L EDTA Na2或EDTA）（先配制后用缓冲液定容）2. ASA . GSH母液提取所需试剂：5%偏磷酸1．抗氧化酶酶液提取（SOD.POD.CAT）：1g（根据样品的量,少的可以适当减少）叶片加入预冷5ml. 50mmol/L磷酸缓冲液（PH=7.8）↓4℃冷冻15000g离心20分钟↓上清液即为酶液（5℃下保存一两天内备用，中短期用-20℃保存）2．ASA . GSH母液提取：0.1g叶片加入3ml预冷5%偏磷酸溶液↓4℃冷冻14000g离心10分钟↓上清液即为母液（5℃下保存备用）（偏磷酸可显著沉淀蛋白质和保护ASA）酶液提取所需试剂：PVP（聚乙烯吡哆烷酮）：1%（1g溶于100ml水），1000ml需称取10g，此处用PBSEDTA-Na 2 : 0.1mmol/L (37.2mg EDTA-Na2溶于1000ml蒸馏水)，此处用PBSPBS（缓冲液）配制方法：① Na2HPO4·12H2O ② NaH2PO4·2H2O取① 71.64g，蒸馏水定容至1L，取② 31.21g定容至1L，放置4℃冰箱备用PH=7.8 取① 91.5ml+② 8.5ml=100ml (浓度0.2mol/L)需要0.05mol/L→将上述溶液烯释至400ml （0.2mol/L*0.1=0.05mol/L*V）母液提取所需试剂：5%偏磷酸：称5g纯偏磷酸，定容至100 ml蒸馏水（需加热溶解，温度在50-60℃）偏磷酸有剧毒（偏磷酸难溶解，先得用研钵提前研碎，后用磁力搅拌器溶解一到两天后再定容）（现所用为38%HPO3，所以需称65.7895g，定容至500ml）三．实验步骤实验1：MDA含量测定1.1所需试剂：10%三氯乙酸（TCA）（纯）称10g定容至100ml0.25%硫代巴妥酸 (纯) 称0.25g用10%TCA定容至100ml（配制时，可一次完成，先配TCA，不要定容，再加入硫代巴比妥酸，然后定容，若难溶解，可以在磁力搅拌器上微热）1.2步骤：取0.3g叶片，加4ml磷酸缓冲液研磨，加入 4ml 0.25%的硫代巴比妥酸（溶于10%的三氯乙酸）溶液↓摇匀95℃加热15分钟↓快速冷却3000g离心15分钟↓取上清测定 OD532，OD600，OD450值↓按公式求 MDA浓度=6.45×（OD532-OD600）-0.56OD450 (μmol/L)可溶性糖浓度=11.71×OD450 (mmol/L)最后计算 MDA含量（μmol/g FW）= [4×（MDA浓度x）×10-3/0.1]同时，可测得可溶性糖含量（m mol/g FW）= 4×（可溶性糖浓度χ）×10-3/0.1（用多波长测定，在测定之前一定要矫正基线，公式中的参数可以直接在分光光度计上输入）注意：以0.25%的硫代巴妥酸溶液作空白调零MDA含量测定的改进1.可以用做酶活性时提取的酶液来直接测定MDA含量，用量可以定为1.0、1.5或2.0（较好）ml。
抗坏血酸_总抗坏血酸含量检测试剂盒(比色法)说明书__微量法UPLC-MS-6014
抗坏血酸/总抗坏血酸（AsA/T-AsA）含量检测试剂盒（比色法）说明书微量法货号：UPLC-MS-6014规格：100T/48S产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体70mL×1瓶4℃保存试剂一粉剂×1瓶-20℃保存试剂二液体10mL×1瓶4℃保存试剂三液体2mL×1瓶4℃保存试剂四液体20mL×1瓶4℃保存试剂五液体15mL×1瓶4℃保存试剂六粉剂×1瓶4℃保存试剂七液体10mL×1瓶4℃保存标准品粉剂×1支4℃保存溶液的配制：1、试剂一：临用前加入2mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂-20℃分装避光保存；2、试剂六：临用前加入10mL70%乙醇溶液（V/V）溶解；3、标准品：临用前配制，加入1.136mL提取液充分溶解；吸取0.02mL上述溶液，加入0.98mL提取液，混匀，即1000nmol/mL AsA标准溶液。
产品说明:抗坏血酸（AsA）是辅酶、自由基清除剂、电子共体/受体和草酸盐与酒石酸盐生物合成的底物等。
作为植物细胞中最重要的抗氧化剂，AsA在保护叶绿体免于氧化损伤起着举足轻重的作用，也是衡量农作物产品品质的重要指标之一。
脱氢抗坏血酸（DHA）是AsA的可逆的氧化型，在生物体内，与抗坏血酸共同组成氧化还原系统，具有电子受体作用。
AsA具有还原性，能将Fe3+还原成Fe2+，Fe2+与2,2’-联吡啶形成粉红色络合物，在525nm处有特征性吸收峰。
DTT可还原DHA生成AsA，可用于检测样本总抗坏血酸（AsA+DHA）含量。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：研钵/匀浆器、冰、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液器、乙醇和蒸馏水。
抗氧化酶活性等测定方法
叶绿体的提取一、试剂配置1、PBS提取液：每L水依次加入MES(195.2×0.05=9.76g)、山梨糖醇(0.33×182.2=60.126g)、NaCl （0.010×58.5=0.585g）、MgCl（0.002×95=0.19g）、EDTA（292.25×0.002=0.5845g）、KH2PO4（200×0.0005=0.1g）；使用时加入ASA-Na（198.1×0.002=0.3962g）;2、悬浮液：将PBS提取液中的MES换为238.3×0.05=11.915g的HEPES（238.3×0.05=11.915g）；3、80%Percol：80ml原液+20ml水；40%Percol：40ml原液+60ml水；实际配制：PBS提取液2000ml(3个处理*2个品种*3个重复*20ml*3次=1080ml),悬浮液100ml（3个处理*2个品种*3个重复*1ml*3次=54ml）;80%Percol 200ml; 40%Percol 200ml.（3个处理*2个品种*3个重复*3ml*3次=162ml）二、提取步骤1、10g鲜样加20ml提取PBS（50mM MES PH6.1，含0.33M山梨糖醇，10mM NaCl，2mM MgCl2，2mM EDTA，0.5 mMKH2PO4，2mM ASA-Na，ASA-Na使用前现配现加）2、快速研磨，使叶片碎成绿豆粒大小，4层纱布过滤，去除残渣（注意过滤时不可用力挤压，以免叶绿体膜破碎）3、滤液2000g 3min，小心倒出上清液，将离心管放入离心机后，使离心机的加速很快上升到预定值(水平转头，加速度调到9)，约经30s后很快使其下降停止，整个离心持续大约2-3min左右完成；4、沉淀用1ml提取液漂洗表面悬浮物；5、用1ml悬浮液（50mM HEPES pH 7.6，含0.33 mM山梨糖醇，10mM NaCl，2mM MgCl2，2mM EDTA，0.5 mMKH2PO4，2mM ASA-Na，ASA-Na使用前现配现加）将沉淀悬浮，在分散叶绿体时宜用毛笔轻轻刷，或者用手握住离心管在冰块之间搅动，使叶绿体由于震动分散开来，不要用棉球吸滤，以防被膜压破。
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抗坏血酸过氧化物酶(AsA-POD)检测试剂盒(AsA 比色法)
产品：
过氧化物酶(peroxisome ，POD)是以过氧化氢为电子受体催化底物氧化的酶，主要存在于细胞的过氧化物酶体中，以铁卟啉为辅基，可催化过氧化氢，氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。
抗坏血酸过氧化物酶(AsA-POD)是叶绿体中的专一性清除过氧化氢的酶，能够催化抗坏血酸(又称维生素C ，Vitamin C 或AsA)与过氧化氢反应。
Leagene 抗坏血酸过氧化物酶(AsA-POD)检测试剂盒(AsA 比色法)检测原理是以AsA-POD 催化AsA 与H 2O 2的反应，使前者被氧化成单脱氢抗坏血酸(MDAsA)，随着AsA 被氧化，吸光度不断下降，处测定吸光度，以吸光度变化所需酶量进行计算。
该试剂盒主要用于植物组织的裂解液或匀浆液、血清等样品中过抗坏血酸过氧化物酶活性，尤其适用于测定植物中AsA-POD 活性。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
自备材料：
1、 蒸馏水
2、 研钵或匀浆器
3、 离心管或试管
4、 低温离心机
操作步骤(仅供参考)：
1、 准备样品：
①植物样品：取0.5g 水稻、小麦叶片，加入预冷的AsA-POD Lysis Buffer 研磨或匀浆， 离心，留取上清液，即为AsA-POD 粗提液，-20℃冻存，用于抗坏血酸过氧化物酶的测定。
编号 名称
TE1123 50T Storage
试剂(A): AsA-POD Lysis Buffer 250ml 4℃ 试剂(B): AsA-POD Assay Buffer 100ml 4℃ 试剂(C): AsA 氧化剂 2×1ml RT 试剂(D): AsA Buffer 5ml 4℃ 试剂(F): 蛋白标准(BSA) 20mg RT 试剂(G): G250染色液 100ml
RT 使用说明书
1份
②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃冻存，用于抗坏血酸过氧化物酶的测定。
③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用AsA-POD Lysis Buffer进行适当匀浆，离心，留取上清液，即为AsA-POD粗提液，-20℃冻存，用于抗坏血酸过氧化物酶的测定。
④高活性样品：如果样品中含有较高活性的过氧化物酶，可以使用POD Lysis buffer进行恰当的稀释。
2、配制AsA氧化工作液：取适量AsA-POD Assay Buffer和AsA氧化剂，按AsA-POD
Assay Buffer：AsA氧化剂=混合，即为AsA氧化储存液，该液可密闭保存1-2周；
取适量AsA-POD Assay Buffer和AsA氧化储存液，按AsA-POD Assay Buffer：AsA 氧化储存液=混合，即为AsA氧化工作液，即配即用，不宜久置。
3、AsA-POD加样：按照下表设置对照管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避
免产生气泡。
如果样品中的AsA-POD活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
样品的检测最好能设置2平行管，求平均值。
加入物(ml) 对照管测定管
AsA-POD Assay Buffer 2.7 2.7
AsA氧化工作液0.1 0.1
AsA Buffer 0.1 0.1
AsA-POD Lysis Buffer 0.1 －
4、AsA-POD测定：在测定管加入AsA-POD粗提液，立即以分光光度计，比色杯光径
1.0cm，以对照管为对照，测定处测定管的吸光度(A测定0)。
反应60s时立即处测定管
的吸光度(A测定1)。
注意：测定时，时间控制恰当至关重要，因其是计算1min内吸光度变化。
5、AsA-POD蛋白测定：
①配制蛋白标准：取1ml AsA-POD Lysis Buffer完全加入到含有20mg的蛋白标准(BSA)中，充分溶解，配制成20mg/ml的蛋白标准溶液，配制后可立即使用，配制的蛋白标准溶液应-20℃保存。
取适量的20mg/ml蛋白标准溶液稀释至终浓度为1000μg/ml，如取20mg/ml蛋白标准溶液，加入AsA-POD Lysis Buffer，充分混匀，即配制成1000μg/ml 蛋白标准溶液，-20℃长期保存。
②配制标准曲线：将1000μg/ml蛋白标准溶液，加至离心管中，对于不足35μl的，加入AsA-POD Lysis Buffer补足至35μl。
③G250测定：准确吸取待测AsA-POD粗提液，向各标准管、待测管加入G250染色液，室温放置，分光光度计或酶标仪(分别取200μl加入至96孔板)测定595nm波长处的吸光度，以蛋白标准浓度μg/ml为横坐标、以对应的吸光度为纵坐标，根据标准曲线计算出待
测样品中的蛋白浓度。
计算：
AsA-POD活性单位的定义：在该实验条件下，每1min吸光度变化0.01所需酶量为一个活性单位。
组织样本POD(U/mg)={(A测定0-A测定1)×V T}/(W×V S×0.01×t×P)
液体样本POD(U)=(A测定0-A测定1)/(0.01×t×P)
注意事项：
1、待测样品中不能含有酶抑制剂，同时需避免反复冻融。
2、即为AsA-POD粗提液提取时，注意低温操作，防止酶活性。
3、AsA氧化剂具有一定腐蚀性，请小心操作。
4、AsA氧化剂易挥发，请密闭保存，否则检测效率下降。
5、如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定，每次检测指标不宜过多，否则
操作时间不一，有可能导致样本间的差异。
6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6个月有效。
相关：
编号名称
CC0007 磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)
DC0032 Masson三色染色液
DF0135 多聚甲醛溶液(4% PFA)
NR0001 DEPC处理水(0.1%)
PS0013 RIPA裂解液(强)
TC1167 尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)。