影响毛细管电泳分析结果精密度的因素及其控制-中国现代应用药学
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毛细管电泳技术及其在药物分析中的应用年级:11级专业：药学学号：11071姓名：廖毛细管电泳技术及其在药物分析中的应用［论文摘要］毛细管电泳（capillary electrophoresis,CE）是近年来发展迅速的一种新型分析技术，具有高效、快速、分离模式多、应用范围广等特点。
本文就CE的发展和工作原理做了有关介绍并对其在药物分析中的应用及相关发展做了综述。
［关键词］毛细管电泳药物分析应用1引言毛细管电泳（capillary electrophoresis，CE）又称高效毛细管电泳(HPCE)或毛细管分离法(CESM)是以高压直流电场为驱动力，内径为25一100娜的弹性石英熔融毛细管柱内荷电粒子按其淌度（mobility)或迁移速度（migrationvelocity）的差异而实现分离的一类液相分离技术。
毛细管电泳实际上包含电泳、色谱及其交叉内容,它使分析化学得以从微升水平进入纳升水平，并使单细胞分析,乃至单分子分析成为可能.它将分离柱效提高到上百万塔板数。
长期困扰我们的生物大分子如蛋白质的分离分析也因此有了新的转机，尤其是多通道集成芯片毛细管电泳技术的出现，极大提高了DNA测序的速度，使人类基因组草图的绘制工作提前三年完成.CE具有分离效能高、分析速度快、样品用量少、分析对象广，多模式化和环保等特点，已成为一种重要的分离分析手段,在生物、医药、化工、环保、食品等领域具有广阔的应用前景。
本文介绍了毛细管电泳法的发展和工作原理及在药物分析中的应用。
包括药物分析的三大部分：一是原药的定量,原药中杂质的测定、药剂的分析以及对它们的稳定性的评价等以药品质量管理为目的的测试方法.这些方法要求有良好的选择性，适当的分析灵敏度和可靠的准确度等。
二是对进入人体内的药物或代谢物的吸收、分布、代谢、排泄等体内动态的研究，即临床药物分析。
三是手性药物的分离分析。
2 毛细管电泳技术2。
1 毛细管电泳的发展历史及发展方向2.1。
毛细管电泳出现问题分析
一、无样品峰出现A、检查电流是否稳定：①没有电流。
可能原因——毛细管堵塞或断裂。
解决方法——用水冲洗毛细管，并观察是否有水流出，若无水流出请拆下卡盒检查毛细管两端和窗口是否断裂；毛细管没有断裂的话可以用水反向高压冲洗以试图解决此问题。
缓冲溶液需要过滤，将样品过滤或者离心去除其中的颗粒。
②电流波动很大，直至几乎消失。
可能原因——缓冲溶液中有气泡产生或者区带中样品析出。
解决方法——将缓冲溶液超声脱气，如果还有此现象发生，则可能是样品区带有析出，可以通过降低样品浓度/延长ramptime来试图解决这一问题；对于在缓冲溶液中溶解度不高的样品则需要在缓冲溶液中加入添加剂以解决此问题。
③电流初始值较小，后逐渐增大。
可能原因——样品进样量过大。
解决方法——减少进样量，通常进样参数设置在0.5psi,5sec 左右。
④电流正常。
可能原因：a样品浓度过低：使用高浓度样品测试，如果无法解决则有可能是以下其他原因。
b检测波长设置不正确：请确认被分析物的特征吸收，检查方法中的检测波长设置。
c分离极性错误：对于蛋白样品，请注意蛋白在分离条件下其PI及所带电荷；对于核酸样品，通常条件下会带负电荷。
d样品在毛细管内壁吸附：对于蛋白及核酸样品应尽量采用涂层毛细管分离，或采用极端pH条件或动态涂层防止样品吸附。
e光学检测器或光纤损坏：进行标准样品的测试，如果没有对应的结果出现，则有可能存在硬件问题，请联系工程师。
B、检查毛细管窗口，是否有透明窗口：可能原因——忘记开毛细管窗口或窗口位置不正。
解决方法——重新开毛细管检测窗口，或将窗口调整到正确位置。
二、样品峰出现拖尾可能原因——样品在毛细管内壁吸附。
解决方法——对于蛋白及核酸样品应尽量采用涂层毛细管分离，或采用极端pH条件或动态涂层防止样品吸附。
三、样品峰形不对称A、检查毛细管入口：可能原因——毛细管入口切口不平齐。
解决方法——重新切割毛细管入口，注意毛细管切割方法，不可以用力过猛或反复刮擦。
药物分析中的毛细管电泳技术
药物分析中的毛细管电泳技术毛细管电泳技术（Capillary Electrophoresis，简称CE）是一种基于电动力的分离技术，被广泛应用于药物分析领域。
本文将介绍毛细管电泳技术在药物分析中的原理、应用和发展前景。
一、原理毛细管电泳技术的基本原理是利用电场作用下的离子迁移和分离。
这种技术借助于毛细管的高表面积和对电荷敏感性，通过调节电压和电流，使样品中的离子在毛细管中迁移，并在离子迁移速度不同的情况下实现分离。
二、应用1. 药物纯度检测毛细管电泳技术在药物纯度检测中具有很大优势。
通过测量样品中成分的峰高和面积，可以确定药物的含量和纯度。
毛细管电泳技术还可以检测含有多个成分的混合物，提高药物的纯度和质量。
2. 药物代谢研究毛细管电泳技术在药物代谢研究中也有广泛应用。
毛细管电泳技术可以快速分离和定量药物代谢产物，并提供与其他分析方法相比更高的分辨率和灵敏度。
这对于研究药物的代谢途径、代谢产物的生成和药物代谢动力学具有重要意义。
3. 药物配伍研究在多种药物联合使用时，毛细管电泳技术可以用于药物之间的相互作用研究。
通过测量药物在毛细管中迁移的速度和峰形，可以揭示药物之间的相互作用机制，为药物配伍的合理应用提供科学依据。
三、发展前景毛细管电泳技术在药物分析领域的应用前景广阔。
随着仪器设备的改进和方法的发展，毛细管电泳技术的分离效率和灵敏度得到提高，对药物分析的应用范围也越来越广泛。
未来，毛细管电泳技术有望在药物分析中发挥更重要的作用，如提高新药的研发效率、分析药物的药动学特性等。
总结：毛细管电泳技术作为一种快速、高效的药物分析方法，已经在药物纯度检测、药物代谢研究和药物配伍研究等方面取得了显著的应用效果。
在未来，随着技术的进一步发展和改进，毛细管电泳技术将在药物分析领域发挥更重要的作用，为药物研发和质量控制提供强有力的支持。
现代分析技术在药物分析和质量控制中的应用
2.2 色谱和飞行时间质谱的多维技术相比较色谱技术方面，采用较为完整的二维色谱方法，能够十分有效的对药物，进行全过程的分析和检测。
同时也能够在一定程度上，实现比较良好的分析方式。
同时，也需要在进行使用的过程中，能够有效的结合二维色谱飞行时间的相关分析工作，使得分析结果具有着较高的科学合理性。
3 现代联用分析技术对于毛细管电泳气而言，由于在使用的过程中，具有样品量少、溶剂消耗少、灵敏度高等显著优势对于样品以及各种溶剂消耗量较少，使之成为一种十分高效的分离技术方式。
对于毛细管电泳以及质谱的技术方式，现阶段已经广泛的应用到了核苷酸的蛋白组成方面，可以很好的对其基本组成以及实际的活性，进行相应的检测。
同时，也能够针对疾病进行相应的分析，充分了解人体代谢方面的情况。
为此，对于这种技术而言，现阶段主要应用在一些胃癌早期的患者检测工作上。
如在应用的过程中，针对尿液中的药物及其代谢物进行相应的鉴定分析，以此能够较为有效的对胃癌患者，进行良好的个性化分析和诊疗。
这样在之后的诊断过程中，便可以针对患者的实际病症，对其制定出较为合理、有效的药物治疗方案，以此来帮助患者进行疾病的治疗，帮助患者实现身体的康复，实现个体化的诊疗方式。
3.1 色谱和质谱的多种联用技术经历了较长时间的实践和分析，色谱和质谱的多种联用技术体现出明显的技术价值。
尤其是在对药物分析处理的过程中，能够准确、有效、便捷地分析易挥发性、热不稳定的药物。
现阶段，在生物仿制药物以及生物标志物的实际生产的过程中，能够较为有效的起到重要的分析效果。
在进行质谱处理的过程中，由于稳定性方面已经表现出关键的影响作用，就更加需要有效的进行药物质量方面的控制，因此能够通过该技术实现质量控制，有效的对其进行初期的分析和诊断。
并且，在采用了质谱法之后，由于可以较为有效的对稳定成分的结构进行分析。
因此就需要在进行药物治疗的过程中，能够针对性的进行处理，并利用药物的实际完整性，采用色谱以及质谱多种联用技术。
毛细管电泳技术在药物分析中的应用研究
毛细管电泳技术在药物分析中的应用研究药物分析是现代药学研究的重要领域之一，其目的是确定药品的成分、质量和纯度等指标。
毛细管电泳技术是一种高效、灵敏、快速和准确的药物分析方法，已广泛应用于各种药物的分离、定量和结构分析等方面。
一、毛细管电泳技术的基本原理毛细管电泳技术是利用毛细管作为分离柱，通过电场效应分离药物及其成分的方法。
它基于分子电荷和大小的差异，将混合物中的成分在电压作用下沿毛细管内移动，并在观察点处被依次检测和记录。
电泳色谱法可以根据不同的物性进行物质分离，如电荷、相对分子质量、极性等。
毛细管电泳技术通过改变样品的分子充电量、外部电场大小和环境介质等因素来实现成分的分离。
二、毛细管电泳技术在药物分析中的应用毛细管电泳技术具有高效、快速、灵敏、准确等优点，已被广泛应用于药物分析领域。
其应用主要涉及药物的分离、定量和结构分析等方面。
1. 分离应用毛细管电泳技术可以有效地分离许多药物，并且分离效果优于传统的色谱法和电泳法。
例如，毛细管电泳技术可以分离抗癌药物、心血管药和皮肤科药品等各种药物。
此外，该技术也可以用于分离混合物中的多种成分。
2. 定量应用毛细管电泳技术可以用于药物的定量分析。
该技术精度高，灵敏度高，检测限低，能够准确地测定药品的含量与质量等参数。
毛细管电泳技术对药品中的极性物质和非极性物质分析均具有良好的应用效果。
3. 结构分析应用毛细管电泳技术可以用于药品的结构分析，例如能够对药品中不同结构的异构体进行分析。
该技术具有高分辨率和高选择性，能够分析药品的结构、组分及其含量等参数。
三、毛细管电泳技术的局限性毛细管电泳技术虽然具有许多优点，但在实际应用中也存在一些局限性。
该技术需要具有高度纯度的药品样本，并且样品的预处理过程比较繁琐，需要使用化学试剂等。
此外，毛细管电泳技术具有一定的操作难度，需要经过专业的操作培训和实验室实践才能掌握。
四、研究方向和展望毛细管电泳技术在药物分析中的应用领域很广泛，但是今后还需要进行进一步的研究和发展。
毛细管粘度计检定误差影响因素分析及探讨
毛细管粘度计检定误差影响因素分析及探讨毛细管粘度计是一种用于测量液体粘度的仪器，精度高、操作简单、可靠性强，被广泛应用于各个领域。
然而，在使用毛细管粘度计时，测量误差是不可避免的，下面就毛细管粘度计检定误差影响因素进行分析及探讨。
1.温度影响液体粘度与温度密切相关，温度对液体粘度的影响是非常明显的，一般情况下，粘度随温度的升高而降低。
在使用毛细管粘度计时，温度的变化会对测量结果产生影响，因此，在测量之前应对温度进行标定。
2.粘度计漂移毛细管粘度计的漂移是指毛细管在使用过程中由于外部环境的因素，导致毛细管荧光标线的位置发生偏移。
这种漂移不仅会影响毛细管粘度计的精度，还会影响其重复性和稳定性。
3.粘度计紊流误差由于流体的流动容易引起紊流，导致计量范围从而对测量精度产生影响。
4.毛细管直径误差毛细管直径的误差是另一个影响毛细管粘度测量误差的因素。
毛细管直径是直接影响流体流动速度的因素之一。
如果毛细管直径不符合标准，那么就会影响其测量精度。
5.时间影响毛细管粘度计的精度也受到时间影响。
流体的粘度随时间的变化，因此，在测量之前应确保流体达到极限粘度，并使流体达到静止状态。
6.操作技巧毛细管粘度计的操作技巧也会影响其测量误差。
操作人员的技巧和经验直接影响着毛细管粘度计的测量精度和可靠性。
操作人员在使用设备时，应当时刻注意操作环境，保证操作环境的干净整洁，避免不必要的污染。
总体来说，毛细管粘度计检定误差的影响因素主要有温度、漂移、紊流误差、毛细管直径误差、时间、操作技巧等。
综合考虑以上因素，我们可以找到减少误差的措施，从而提高毛细管粘度计的测量精度和可靠性。
毛细管电泳在药物分析和食品安全检测中的应用的开题报告
毛细管电泳在药物分析和食品安全检测中的应用的开题报
告
一、选题背景
毛细管电泳技术是一种高效、灵敏、快速、环保和经济的分析方法，逐渐成为药物分析和食品安全检测领域的热门方法之一。
随着社会经济快速发展和人类对生活质量要求的不断提高，对药品质量和食品安全的监控与检测也愈加严格和细致，毛细管电泳技术得到了广泛关注和应用。
二、研究目的
本文旨在深入探讨毛细管电泳技术在药物分析和食品安全检测中的应用，希望能够进一步推动毛细管电泳技术在相关领域的应用和发展，提高药品质量和食品安全检测的水平。
三、主要研究内容
1.毛细管电泳技术原理及其优缺点分析
2.毛细管电泳技术在药物分析中的应用
3.毛细管电泳技术在食品安全检测中的应用
4.毛细管电泳技术在药品和食品检测中存在的问题及其解决方法
5.毛细管电泳技术在相关领域的应用前景展望
四、研究方法
本文将采用文献综述法和实验研究法相结合的方法，对毛细管电泳技术在药物分析和食品安全检测中的应用进行深入分析和探讨。
同时，将借助相关专业实验设备和辅助工具，对毛细管电泳技术的实际应用效果进行验证和评估。
五、预期成果
通过本文的研究，预计可以进一步规范毛细管电泳技术在药物分析和食品安全检测中的应用，为提高药品质量和食品安全水平贡献一份力量。
同时，也可以为相关领域的科研人员提供参考和借鉴。
毛细管电泳分析法在药物分析中的应用
毛细管电泳分析法在药物分析中的应用摘要毛细管电泳技术又称为高效毛细管电泳。
作为一种新的分离分析技术，以其高效，快速，低实验消耗等优点，受到了广泛重视，而其在药物分析中的应用得到迅速的发展。
在原料分析中的中药材鉴别和质量控制，中药有效成分的分离与测定和中成药制剂。
而在西药复方制剂中，广泛用于解热镇痛药、抗组胺药、消炎药和止咳药，降压药和抗生素、合成抗菌剂及生物技术产品等药物和制剂的分离，鉴定和分析及其对手性分子的拆分，基于手性主—客体络合的毛细管电泳手性拆分，基于手性胶束增溶的毛细管电泳手性拆分和基于蛋白质亲和的毛细管电泳手性拆分，还有临床用药中，都显示了其高效，快速的特点。
毛细管电泳技术正广泛用于药物分析的各个相关的部分中，正越来越受到人们的重视。
AbstractCapillary electrophoresis technology called high performance capillary electrophoresis. As a new kind of separation and analysis technology, with its rapid, efficient, low consumption advantages of experiment was Received widely attention, and its application in pharmaceutical analysis is rapid development. The analysis of Chinese herbal medicine in raw material identification and quality control, the TCM separation and determination and proprietary Chinese medicine preparations. But in western medicine compound preparations, widely used in antipyretic analgesics, the antihistamine drugs, expectorant and cough, antihypertensives and antibiotics, synthetic antibacterial agent and biotechnology product such drugs and preparation of separation, appraisal and analysis and the opponent of chiral molecule split, based on chiral Lord - object complexation of capillary electrophoresis chiral resolution, based on chiral dissociation of increase soluble adopted capillary electrophoresis chiral separation and based on protein affinitive capillary electrophoresis chiral resolution, and clinical medicine, shows its high efficiency, fast characteristic. Capillary electrophoresis technology is widely used in pharmaceutical analysis of each relevant sections, are becoming more and more attention by people.关键词：毛细管电泳技术药物分析应用Keywords: Capillary electrophoresis drug analysis application前言毛细管电泳(CE) 又称为高效毛细管电泳(high performance capillary electrophoresis，HPCE)，它以弹性石英毛细血管为分离通道，以高压直流电场为驱动力，依据样品中各组分的淌度和分配行为上的差别进行分离和分析。
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石英毛细管的清洗 毛细管首次使用或长时间不用后重新使用 应清洗毛细
管内壁表面并用稀碱液活化 因为迁移时间的精密度与分析 前或分析中毛细管内表面的预处理有关 ∀ 一般使用浓度为
∗ #
≈
的盐酸 !氢氧化钠溶液和高纯水按一定程序 因为酸液中的 对管壁上吸附的阳离子有很
冲洗即可
6 2
强的置换能力 碱液对去污及活化管壁作用显著 ∀ 石英毛细管的冲洗 石英毛细管内壁具有硅羟基 它是构成氢键吸附并使毛 细管内电解质产生电渗流的重要原因 ∀ 电泳分析过程中的 管壁吸附现象通常不可避免并具有很大的随机性 ∀ 当吸附 发生时 被吸附的分子影响毛细管的表面性质 使电渗流改 变 液流紊乱并影响到组分的峰形 出现谱带展宽 !响应及分 离度下降 !迁移时间改变等现象 ∀ 冲洗程序可以清除记忆效 应 使管壁状态复原 ∀ 具体的冲洗程序应根据实验情况灵活 设计 ∀ ∞ 等 ≈ 系统地研究了不同冲洗技术在多种离子 测定中对迁移时间和校正峰面积精密度的影响 结果表明 冲洗操作可稳定和改善迁移时间的重复性 ∀ 通过选择合适 的冲洗措施 毛细管内表面被恢复 吸附的溶质分子被消除 从而提高了迁移时间的重复性 ∀ 采用 氧化钠溶液 !
4 3
进样的影响
≤ ∞ 的进样方式有流体动力学进样和电迁移进样 前者
值可起到
是最常用的进样方法 它主要是压力进样 当用压力进样时 进样体积是样品缓冲液黏度 !所用压力及进样时间的函数 进样量与淌度无关 所用压力的变化通过调整进样时间自动 补偿 ∀ 文献 ≈ 给出了三种进样时间进样重复性的比较 结 果表明 进样 的重复性优于 及
的吸收低 ≈ 自身的淌度低 即分子大而荷电小 以减少电流 的产生 …为了达到有效的进样和合适的电泳淌度 缓冲液 的 位∀ 值至少必须比被分析物质的等电点高或低 个 单 只要条件允许就尽可能采用酸性缓冲液 因在低 缓冲体系 ∀ 的
采用较低的操作电压
可以使工作电流减小 生成热源减少 因而热效应引起的峰 展宽减少 对提高分离效率有利 ∀ 但是减少电压又会使分离 效率下降 故一般控制在 的物质组成缓冲体系 如 ×
≤ ° ≥ ∂
电渗流速度 通常是使之减少 以及改变选择性 ∀ 在蛋白质 分离时 还将一些盐 如磷酸盐 !盐酸盐和硫酸盐 加到缓冲 液中以影响蛋白质的构型从而影响分离 ∀ 这是因为盐的存 在会占据一定的管壁吸附点 破坏偶电层 减少蛋白质的吸 附 影响电渗 但加盐会使焦耳热上升 也会增加紫外吸收本 底 导致检测灵敏度降低 因此必须有所节制 或者采用低场 强或细管径毛细管柱予以补偿 ∀ 在分离手性化合物时 还要 使用手性添加剂 如环糊精 !冠醚 !胆汁盐等 以改善其分离 度 ∀ 在分析体内药物时 还常加入一些线性亲水聚合物 如 甲基纤维素 !聚丙烯酰胺 !聚乙二醇 °∞ 等 可减少电渗流及减少样品的吸附 ∀
2
并取得了
一定的成果 ∀ 笔者结合在实际工作中的体会和经验 对影响 毛细管电泳分析结果精密度的主要因素及其控制办法探讨 如下 ∀
1
毛细管电泳分析检验的药物品种 ∀ 这是因为 ≤ ∞分析结果的 精密度往往不太理想 用于定性的迁移时间及定量的峰面积 重复性较差 有时误差在 以上
≈
大大限制了其在药品
×
毛细管柱温的影响
2 ∗ Λ ∀
影响较大 ∀ 它表现在以下几方面 ≠ 影响溶质本身的电荷 低于溶质的等电点时 溶质带正电 朝阴极迁移 和电渗同向 因此粒子迁移的总速 高于溶质的等电点时 情况 下 的改变会引起电渗的变化 在高
电渗很大 流出次序依次为阳离子 !中性分子和阴离子 ∀ 这 时中性分子因为其净电荷数为零而无法分离 ∀ 对于淌度的 绝对值小于电渗淌度的阴离子 将朝阴极迁移 而其余的阴 离子将无法流至阴极 ∀ ≈ 在碱性条件下 改变 缓解管壁吸附的作用 ∀ 即如果缓冲液的 而避免吸附 ∀
# ∗ #
标法 ∀ 合适的内标可降低进样体积不一致引入的误差 并大
∀ 但必须注意所加
的氢
内标应与待测组分有相似的淌度 以避免运行中电渗流改变 值 减小积分错误 内标应用高 浓度 此外 还需注意并非内标法就一定能改善分析精密度 根据误差传递规律 不合适的内标引入的误差在某些情况下 甚至使测定结果更
时间控制进样量 而且进样量还与淌度有关 因此在电迁移 进样中 对被迁移的溶质有一种歧视效应 即对淌度较大的 组分进样量会大一些 反之则要小一些 所以在对多组分样 品组定量时 必须使所有样品溶液的离子浓度尽可能地保持 一致 ∀
3 操作电压的影响
缓冲液重复运行的影响 缓冲液的损耗会导致淌度和电渗的变化 从而影响分离
2 2 2
毛细管电泳具有高效 !高选择性 !消耗试剂少 !运行成本 低 !易自动化 等 特 点 已 经 成 为 高 效 液 相 色 谱 的 重 要 补 充 ∀ 中国药典 年版附录中已收录此法 但至今仍未收载用
质量控制中的广泛应用 ∀ 为了提高 ≤ ∞ 的重复性 研究人员 从仪器理论及操作上进行了大量的研究工作 ≈
影响毛细管电泳分析结果精密度的因素及其控制
张慧文 何丽明
广州市药品检验所 广州
摘要 毛细管电泳 ≤ ∞ 由于具有分离效率高 !分析速度快 !实验成本低 !仪器操作简单 !操作模式多等特点 在分析化学 !生命 科学和药学领域都有广泛的应用 特别是在药物分析和分离方面引起了人们的高度重视和极大的兴趣 ∀ 但是 由于 ≤ ∞ 常规 分析的精密度的往往不太好 难以普及应用于日常的药物分析中 ∀ 鉴于 ≤ ∞ 分析结果的重复性依赖于许多因素 如能对这些 因素进行优化和控制 ≤ ∞也能得到比较理想的结果 ∀ 笔者就影响 ≤ ∞分析结果精密度的因素进行了探讨 并提出了相应的控 制措施 ∀ 关键词 毛细管电泳 精密度 定量分析 中图分类号 文献标识码 文章编号
≈
视系统和组分而异 ∀
4
缓冲液的影响 缓冲液种类的影响 电泳过程在缓冲液中进行 缓冲液的选择直接影响粒子
4 1
的迁移和最后的分离 ∀ 缓冲液的选择通常须遵循下述要求
≠ 在所选择的
采用温度控制装置 尽快除 其装置的复杂程度依次加
∗ •
范围内有很好的缓冲容量
在检测波长
去热量 使系统尽可能地保持恒温 ∀ 毛细管的温控方式一般 大 但控温效果也依次提高 但对于 而言 用气体进行控温也足够了 ∀ 功率的条件
中国现代应用药学杂志 年 月第 卷第 期
面活性剂是毛细管电泳中使用最多的一种缓冲液添加剂 如 十二烷基硫酸钠 ≥⁄≥ !十六烷基三甲基季胺溴 ≤ × 氧乙烯基山梨糖醇酐 ו ∞∞
!聚
等 ∀ 它们可用作疏水溶质的 等 ∀ 它们可改变
# #
助溶剂 !离子对试剂或壁表面改性剂 ∀ 有机溶剂也被广泛用 作添加剂 如甲醇 !乙腈 !三氟乙酸酐 ׃
∞2 ¬
作者简介 张慧文 女 硕士 副主任药师
# # ≤ ° ≥ ∂
中国现代应用药学杂志
年
月第
卷第
期
由于作用于毛细管两端的高电压会引起电解质本身自 热 即焦耳热 ∀ 焦 耳 热 在 通 过 管 壁 向 周 围 环 境 散 热 的 过 程 中 在毛细管内形成径向的温度梯度 管中心温度最高 由中 心向管壁温度逐渐下降 ∀ 它能改变缓冲液的黏度 影响电渗 流的线速度 使 峰 展 宽 分 离 效 果 变 差 迁 移 时 间 精 密 度 变 坏 ∀ 为了减少焦耳热 常需 有气体 !液体和固体控温三种
8
其他 除了上述因素外 还需注意以下事项
≠ 石英毛细管端
口状况 毛细管端口应光滑平整 防止电场在人口处扭曲失 真从而导致样品带展宽 ∀ 端口处的聚酰亚胺层应该去除 因 为聚酰亚胺会 在 有 机 溶 剂 中 膨 胀 变 松 并 有 可 能 堵 塞 进 样 口 去除毛细管端口聚酰亚胺层还可减少毛细管外测的样品 残留 避免引起基线漂移 ∀ 采用毛细管专用切割器进行切割 将明显改善端口质量 ∀ 毛细管一端插入样品溶液 宜立即 开始进样操作 并在操作完成后迅速将其从样品槽移至运行 缓冲液中 随即开始运行 否则将会产生毛细作用及虹吸现 象 引起进样 误 差 并 使 谱 带 展 宽 ∀ ≈ 如 果 电 极 和 毛 细 管 接 触 毛细作用可能使某些样品流进间隔 使定量精密度降低 区带展宽 甚至使峰裂分 另外样品储器和缓冲液储器液面 的高度不平衡所产生的虹吸现象也会使精密度下降 ∀ …样 品溶液中的溶剂必须与运行缓冲液互溶 且不会引起后者沉 淀 另外前者的离子强度应低于后者的离子强度 ∀ 样品溶 液和缓冲液都 有 一 个 蒸 发 问 题 蒸 发 会 使 进 样 的 准 确 度 变 低 特别是在大批量样品测定中 因此需合适的封闭装置以 防止蒸发 通常采用带塞的样品槽和缓冲液槽 并采用冷却 自动进样盘装置或引入一个装满水的开口槽 使整个进样盘 保持恒定的高湿度 ∀ 除了蒸发外 离子的电泳也会使缓冲液 从一个槽流到另一个槽造成损失 在这个过程中 由于水不 断电离 储器中缓冲液 改变 采用较大体积缓冲液储器或 最好选用内 频繁更换缓冲液也有利于解决这一问题 ≈ ∀ 大改善定性 !定量的精密度和准确度 ≈ 引起的效应 ∀ 为了增加 ≥
和溶质的迁移时间 宜经常更换缓冲液 其频率可根据实验 确定 ∀ 如每运行
5 ∗ 次 更换一次 ∀
添加剂的影响 添加剂是毛细管电泳中的一个十分重要的控制因素 表
柱长一定时 随着操作电压的增加 迁移时间缩短 在一 定的范围内 柱效随电压增大而增高 但随着操作电压的不 断升高 柱内的焦耳热增加 柱效反而下降 缓冲液的黏度减 小 使操作电压和迁移时间的关系不呈线性 因此常需选择 最佳电压 ∀ 一般说来 偏离线性段的电压 不适宜作为理想 的操作电压 因此时相应的电流偏大 ∀ 最佳操作电压的设置
6 冲洗程序的影响 6 1 !聚乙烯醇 °∂ ≤
代替峰高或峰面积定量也可以提高重复性 ≈ 使用的信号处理软件也有关系 ≈
∀ 重复性与
不同软件的积分差异主
要体现在对信噪比低 迁移时间跨度大的前沿峰 !拖尾峰及 当缓冲液浓度低时可观察到的三角峰等的处理上 ∀ 积分型 软件分段积分得到的峰面积精密度较好 ∀ 确定合适的峰基 线并合理判断峰的起点和终点对提高积分软件性能很重要 ∀