大肠埃希菌生物危害评估报告
检验科实验活动生物危害评估报告
检验科实验活动生物危害评估报告一、引言实验室中的实验活动，尤其是涉及到生物领域的实验活动，可能会存在一定的生物危害性。
为确保实验室和实验人员的安全，进行实验活动前，有必要对实验所涉及的生物危害进行评估，并提前采取相应的防护措施。
本报告就实验活动的生物危害进行评估，并提出相应的防护建议。
二、实验背景本次实验活动旨在研究细菌的增殖过程，通过培养细菌并观察其生长情况和形态变化，分析细菌的增殖速率以及环境对细菌生长的影响。
三、生物危害评估根据实验活动的性质和目的，本次实验涉及到的生物危害主要包括以下几个方面：1.感染风险：实验活动中使用的细菌可能具有一定的致病性，存在感染风险。
误操作、实验器材的不当处理或细菌暴露可能导致感染事件的发生。
2.毒性物质：实验中所使用的细菌培养基、酶切剂等物质可能具有毒性，误接触或吸入可能对实验人员的健康造成危害。
3.遗传物质：实验中使用的细菌包含遗传物质，若遗传物质泄漏或误操作可能对环境和实验人员的健康构成潜在威胁。
根据以上评估，本次实验活动涉及到的生物危害较为明显，需要采取一系列的防护措施以确保实验室和实验人员的安全。
四、防护建议基于生物危害评估结果，下面提出相应的防护建议：1.实验操作人员应经过必要的生物安全培训，熟悉实验室安全操作规程，了解细菌的危害性和应急处理措施。
2.实验操作人员应佩戴个人防护装备，包括实验服、手套、口罩和护目镜，以防止细菌直接接触皮肤、吸入或飞溅进入眼睛和口鼻。
3.实验室应配备安全实验台和生物安全柜，确保实验台面的材质易于清洁，防止细菌滋生和繁殖。
4.细菌实验过程中需要进行严格的无菌操作，避免细菌外泄和污染环境。
5.严格控制细菌培养基的使用和处理，避免误吞食或皮肤接触。
6.在实验过程中避免纯化细菌时的气溶胶产生，可采用安全离心机或其他无菌操作方式。
7.实验后，将实验器材、废弃物进行正确处理，避免细菌污染的扩散。
五、结论本次实验活动涉及到的生物危害较为明显，但通过采取相应的防护措施，可以有效地降低生物危害对实验室和实验人员的危害。
大肠埃希菌的生物危害评估综合报告
大肠埃希菌生物危害评定汇报一、大肠埃希菌传输和致病埃希菌属包含多个细菌，临床上以大肠埃希菌最为常见。
大肠埃希菌（E.coli）通称大肠杆菌，是全部哺乳动物大肠中正常寄生菌，首先能合成维生素B及K供机体吸收利用。
其次能抑制腐败菌及病原菌和真菌过分增殖。
但当它们离开肠道寄生部位，进入到机体其它部位时，能引发感染发病。
有些菌型有致病性，引发肠道或尿路感染性疾患。
大肠埃希菌所引发食源性疾病关键由动物性食品引发，常见中毒食品为：各类熟肉制品、蛋及蛋制品、生牛奶及奶制品、汉堡包、乳酪，其次为蔬菜、水果、鲜榨果汁、饮料等。
中毒原因关键是食品未经根本加热，或加工过程中造成交叉污染，老人及婴幼儿为易感人群。
大肠埃希菌能够引发肠道外感染如泌尿系感染、菌血症、胆囊炎、肺炎及新生儿脑膜炎等，也会造成从轻微腹泻到霍乱样严重腹泻乃至引发致死性并发症如溶血性尿毒综合征（HUS），依据其不一样血清型别、毒力和所致临床症状不一样，能够将造成腹泻大肠埃希菌分为5类：（1）产肠毒性大肠杆菌（enterotoxigenic E.coli,ETEC）：是很多发展中国家儿童及旅游者腹泻常见病原菌，热带尤为常见。
由食入污染食物和水而致病。
本菌可产生大量耐热和非耐热肠毒素，患者腹泻呈水样便，伴有恶心、腹痛、发烧等症。
（2）肠致病性大肠杆菌（enteropathogenic E.coli,EPEC）：可引发婴儿肠炎，夏季腹泻及婴儿霍乱。
本菌含有很强传染性，可引发院内暴发流行，也可引发成人腹泻。
传染源来自食品操作人员或粪便污染供水设施。
（3）肠侵袭性大肠杆菌（enteroinvasive E.coli,EIEC）：由人－人传染而致病（推测为粪－口路径）。
因含有侵袭性，侵入人体肠粘膜上皮细胞后可快速繁殖，破坏肠粘膜及其基底膜，出现粘膜溃疡，发病多呈散在性。
和痢疾杆菌相同，引发痢疾样腹泻。
（4）肠出血性大肠杆菌（enterohemorrhagic E.coli,EHEC）：可引发暴发或散在性出血性结肠炎。
重要病原微生物风险评估报告(检验科).doc
重要病原微生物风险评估报告危害实验活动所序传播病原微生是否可以预病原菌名称程度需生物安全致病性稳定性暴露后的潜在后果有效的预防和治疗措施号途径物的宿主防和治疗分类实验室级别1 大肠埃希菌第三二致病菌呼吸、对理化因素人腹泻 , 肠外化脓性炎可以预防和预防 : 疫苗。
治疗：喹诺酮类血液、抵抗力不强症 , 败血症 , 脑膜炎。
治疗类, 头孢类等抗生素。
泌尿2 沙门菌属第三二致病菌粪口环境中生存人伤寒可以预防和预防 : 疫苗。
治疗：喹诺酮类能力较强治疗类 , 氯霉素，磺胺类，头孢类等抗生素。
3 甲、乙、丙型副第三二致病菌粪口环境中稳定人肠道感染。
可以预防和预防 : 疫苗。
治疗：喹诺酮伤寒沙门菌类存在较长时治疗类 , 氯霉素，磺胺类，头孢间类等抗生素。
4 鼠伤寒沙门菌第三二致病菌肠道、环境中稳定人肠道感染。
可以预防和治疗：喹诺酮类 , 氯霉素，类粪口存在较长时治疗磺胺类，头孢类等抗生素间（须做药敏）。
5 亚利桑那沙门菌第三二致病菌粪口环境中稳定人和动物肠道感染。
可以预防和治疗 : 环丙沙星等多种抗生类存在较长时治疗素（须做药敏）间6 志贺菌属第三二致病菌粪口环境中可存人细菌性痢疾可以预防和预防 : 疫苗。
治疗：喹诺酮类在 10-20 天治疗类, 头孢类等抗生素。
危害实验活动所序传播病原微生是否可以预病原菌名称程度需生物安全致病性稳定性暴露后的潜在后果有效的预防和治疗措施号途径物的宿主防和治疗分类实验室级别7 迟钝爱德华菌第三二条件致泌尿、冷血动物体人和动物呼吸道，泌尿道，伤可以预防和治疗 : 抗生素敏感性不可预类病菌生殖内稳定存在口感染，脑膜炎，败治疗测（须做药敏）血症8 变形菌属第三二条件致泌尿、环境中稳定人呼吸道，泌尿道，伤可以预防和治疗 : 抗生素敏感性不可预类病菌伤口、存在口感染，脑膜炎，败治疗测（须做药敏）血液血症。
9 其他肠杆菌第三二条件致泌尿、环境中稳定人呼吸道，泌尿道，伤可以预防和治疗 : 抗生素敏感性不可预类病菌伤口、存在口感染，脑膜炎，败治疗测（须做药敏）血液血症。
大肠埃希氏菌生化鉴定结果
大肠埃希氏菌生化鉴定结果大肠埃希氏菌（Escherichia coli）是一种常见的细菌，可以引起多种感染性疾病，包括腹泻、尿路感染和食物中毒等。
鉴定大肠埃希氏菌的生化特征可以帮助确定病原菌的身份以及其潜在的耐药性和毒力因子。
本次实验目的是对一株致病性大肠埃希氏菌样本进行生化鉴定，以确认其菌株的性质和特征。
首先，我们进行了气体产生实验。
在Triple Sugar Iron Agar（TSI）培养基中，观察到菌落周围发生了气体产生，此结果表明该菌株具有产气性。
产气性通常意味着大肠杆菌等需要葡萄糖产生酸，进而分解产生气体的细菌。
其次，我们进行了甲烷发酵试验。
在Methyl Red（MR）试剂中，当菌液发酵产酸时，溶液颜色由黄色变成红色。
然而，该菌株在MR试剂中没有产生红色反应，这表明它无法通过甲烷发酵产酸。
这一结果与典型的大肠杆菌不同，因为大肠杆菌通常可以通过此途径产酸。
进一步，我们进行了亮氨酸脱氨酶试验。
使用亮氨酸脱氨酶（LDC）培养基，如果菌株具有亮氨酸脱氨酶活性，菌液会变色。
然而，我们观察到该菌株在培养基中没有出现任何颜色变化，这表明它不具备亮氨酸脱氨酶活性。
亮氨酸脱氨酶活性通常是大肠杆菌的典型特征之一。
此外，我们还进行了尿素酶试验。
使用尿素平板培养基，如果菌株具有尿素酶活性，培养基颜色将由黄色变为粉红色。
然而，我们观察到该菌株在培养基上未显示出任何颜色变化。
这暗示着该菌株可能缺乏尿素酶活性，与大肠杆菌的典型特征不同。
最后，我们进行了青霉素酶试验。
使用青霉素酶试纸进行反应检测，在试纸上出现蓝色点状斑点表示菌株具有青霉素酶活性。
而对于这个菌株，我们观察到在试纸上没有出现蓝色斑点。
这意味着该菌株可能对青霉素类药物敏感，这对于抗生素选择治疗提供了重要信息。
综上所述，通过对致病性大肠埃希氏菌样本进行生化鉴定，我们发现该菌株具有产气性，但与典型的大肠杆菌不同，它不表现出甲烷发酵、亮氨酸脱氨酶和尿素酶活性。
大肠埃希氏菌危害评估报告
宁城县中蒙医院SOP文件大肠埃希氏菌危害评估报告一．危害程度分类大肠埃希氏菌俗称大肠杆菌，大肠埃希氏菌是人类和动物的肠道正常寄生菌，随粪便排出后，广泛分布于自然界，是食品和水源卫生监督的指示菌。
在卫生部公布的《人间传染的病原微生物名录》中将其列为第二类病原微生物（危害程度为Ⅰ级）属条件致病性微生物、是人类腹泻、肠炎、感染等疾病的致病菌之一，临床样本的大肠埃希氏菌分离培养，药物敏感性实验，生化鉴定、涂片镜检等活动均在本实验室进行，对工作人员有一定危害。
要做好防护。
二．背景资料大肠埃希氏菌为革兰氏阴性杆菌，菌体短小、有鞭毛、有菌毛，部分菌株有荚膜。
本菌为兼性厌氧菌，最适生长温度37度，最适PH7.4-7.6，在营养琼脂生形成中等大小，半透明的光滑型菌落，在自然条件下，大肠埃希氏菌广泛存在，尤其不干净的、变质的食物，人食用后易引起腹泻，大肠埃希氏菌对理化的抵抗力较其他肠杆菌科细菌低,1%碳酸15-30分钟和加热56-60度，5分钟既能被杀死，对酸较敏感。
大肠埃希氏菌的致病作用主要是侵袭力、内毒素、肠毒素。
所致疾病为腹泻，肠外感染。
细菌性痢疾主要为食入被大肠埃希氏菌污染的食物所引起，要求在实验室内不得进食、饮水、吸烟、化妆和储存食品和饮料，严禁将实验材料置于口内、严禁添标签，按要求洗手。
大肠埃希氏菌的天然宿主主要为人和其他动物，人和动物的粪便是主要传染源，。
一般市县医院均能治疗大肠埃希氏菌所致疾病。
三．实验室实验活动及其危险性与预防措施用显微镜观察培养物，粪便等样品时，避免用手直接接触、在大肠埃希氏菌的传代药物敏感实验、生化分型等操作时，严格操作规程，避免感染性物质的扩散。
拟手取的防护措施有，标本的操作在生物安全柜内进行。
拟采取的防护措施有：1在工作台面应当放置一块浸有消毒液的布或吸有消毒液的纸，使用后将其高压灭菌或按感染性废物处理。
避免感染性物质的扩散。
2 为了避免转移物质洒落，微生物接种环的直径应为2-3mm并完全封闭，手柄的长度应小于6cm以减小振动，或者采用一次性灭菌棉签。
大肠埃希菌的风险评估
大肠埃希菌的生物危害评估报告一、细菌的传播与致病大肠埃希氏菌通常被称为大肠杆菌，一直被当作正常肠道菌群的组成部分，根据不同的生物学特性将致病性大肠杆菌分为6类:肠致病性大肠杆菌(EPEC)、肠产毒性大肠杆菌(ETEC)、肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)、肠出血性大肠杆菌(EHEC)、肠黏附性大肠杆菌(EAEC)和弥散粘附性大肠杆菌(DAEC). 大肠埃希菌也是医院感染和社区感染的常见病原菌，可引起人体各部位感染，以尿路感染为主(尿路感染中大肠埃希菌其比例可达90 % ) 。
还可引起菌血症、败血症、新生儿脑膜炎、胆囊炎、手术后腹腔感染及灼伤创面感染等疾病。
致病物质1、定居因子：也称粘附素，即大肠杆菌的菌毛。
2、黏附素3、外毒素4、肠毒素5、其他：胞壁脂多糖的类脂A具有毒性，O特异多糖有抵抗宿主防御屏障的作用。
大肠杆菌的K抗原有吞噬作用。
传播途径：1．通过食物传播2通过水传播3．密切接触传播人与人之间的密切接触也可引起O157H7大肠杆菌的传播。
肠出血性大肠杆菌感染是一种人畜共患病。
凡是体内有肠出血性大肠杆菌感染的病人、带菌者和家畜、家禽等都可传播本病。
二、细菌的生物学特性革兰阴性杆菌，粗短，大小为(1.1~1.5)μm X(2. 0 ~ 6.0)μm，多数有周鞭毛。
在血琼脂平板上35℃培养18~24h ，呈圆形、直径为2~3mm 、稍凸、边缘整齐、灰白色、不透明的菌落，少数菌株产生R 溶血环。
在麦康凯琼脂平板上形成不透明、粉红色菌落，部分不发酵乳糖的菌株呈无色菌落，少数呈黠稠状菌落。
在伊红亚甲蓝琼脂平板上菌落呈紫黑色，并有金属光泽。
在中国蓝琼脂平板上菌落呈蓝色。
在XLD 琼脂平板上菌落呈不透明黄色。
在H -E 琼脂平板上菌落呈黄色。
在大肠埃希菌显色培养基上呈蓝色菌落。
在尿道菌定位培养基上菌落呈红色。
三、细菌的实验室检查及其它检查1.标本采集采自不同感染部位的各种标本如粪便、血液、尿液等；2.染色镜检为革兰氏阴性粗短杆菌3.分离培养粪便标本直接接种肠道杆菌选择性培养基。
XXX生物安全风险评估报告
XXX生物安全风险评估报告报告：XXX生物安全风险评估依据《病原微生物实验室生物安全管理条例》、《实验室生物安全通用要求》、《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》、《医疗废物管理条例》，我们按照检验科制定的《实验室生物安全管理制度》，由医院生物安全委员会主持，生物安全委员会成员参与，对检验科生物安全进行了风险评估，形成报告如下：一、科室基本情况1.专业组：根据检验科的实际情况，按照生物安全二级防护实验室的要求划分实验室区域：临床血液学实验室、临床体液学实验室、临床化学实验室、临床免疫学实验室、临床PCR实验室、微生物实验室、采血室、标本接收室。
2.实验室的环境布局及平面图（见环境分布图）清洁区：包括会议室、办公室、休息室、浴室2个、男女更衣室、管理室、库房。
半污染区：洗刷室、试剂库、中间通道。
污染区：临床血液学实验室、临床体液学实验室、临床化学实验室、临床免疫学实验室、临床PCR实验室、微生物实验室、采血室、标本接收室、洗涤室。
3.任务：承担临床检验、教学及科研。
二、实验室生物安全风险评估一）对生物源危害风险评估临床实验室生物源危害主要是由微生物，尤其是病原微生物引起的。
包括细菌、病毒、寄生虫等。
在实验室内做试验、研究等操作时，实验人员需要处理大量的病源微生物，很容易引起污染。
根据生物污染的对象，为空气污染、水污染、人体污染、物体表面污染等种类。
1．对空气的污染：根据污染空间，可分为实验室内环境空气污染、实验室外环境空气污染。
许多操作可产生气溶胶，是悬浮于气体介质中粒子一般为0.001-100um的固体，液体微子粒子形成胶溶状态分散体系。
当气溶胶不能安全有效地限定在一定范围内，便导致实验室内空气污染。
下述操作可能产生气溶胶：使用涡旋震荡器、用力拍干反应板超声波处理、试液开封、开启冰箱和离心机及舍弃离心后的上清液时、另外动物接种从动物体内采血、清洗注射器、调整液量也可产生。
2．对水的污染：实验中会产生大量污水，医院污水尤其是传染病医院，综合医院传染病房的污水，有大量的有机悬浮物和固体残渣，还不同程度的含有多种细菌、病毒和寄生虫虫卵。
肠致泻性大肠埃希氏菌实验活动风险评估报告
肠致泻性大肠埃希氏菌实验活动风险评估报告肠致泻性大肠埃希氏菌（Enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC）是一种常见的食源性致病菌，可引起腹泻疾病，包括婴幼儿腹泻和旅行者腹泻等。
为了评估ETEC实验活动的风险，以下是一份1200字以上的报告。
一、实验目的本实验旨在了解ETEC的生物学特性，研究其感染机制和毒力因子，进一步为控制和预防ETEC引起的腹泻疾病提供参考和依据。
二、实验设备和试剂1.培养细菌的培养基和试剂：如LB培养基、大肠杆菌专用试剂盒等；2. 分离和鉴定ETEC的培养基和试剂：如MacConkey琼脂培养基、乳糖和肌醇培养基、血琼脂培养基等；3.测定毒力因子的试剂：如耐酸素和耐胆盐试剂盒、PCR试剂盒等；4.实验设备：如恒温培养箱、PCR仪等；5.操作用具：如培养皿、管嘴、移液器等；6.个人防护用具：如实验室外套、手套、护目镜等。
三、实验操作流程1.分离和纯化ETEC2.培养细菌3.鉴定并筛选ETEC4.检测ETEC的毒力因子5.分析实验结果四、潜在风险和安全措施1.细菌培养和操作过程中存在生物安全风险，可能导致实验室感染。
应严格遵守实验操作规范，佩戴个人防护用具，避免直接接触细菌培养物和废棄物。
2.试剂的使用应遵循使用说明，避免接触皮肤和吸入。
如有意外接触，应立即用清水冲洗，并向医生求助。
3.实验室内应保持清洁整洁，并进行定期消毒，以防止细菌污染和交叉感染。
4.实验室应设置生物安全柜，保证实验操作的无菌环境。
5.实验室工作人员应进行相关安全培训，了解应急处置措施和实验室紧急撤离计划。
五、应急处置措施1.如实验过程中发现细菌培养物泄漏或感染，应立即采取隔离措施，通知实验室负责人，并进行相应的消毒和清理。
2.如有人员接触细菌培养物或试剂导致皮肤或黏膜受伤，应立即用清水冲洗，并及时向医生求助。
3.如实验过程中发生火灾、泄露气体等紧急情况，应立即采取逃生措施，按照实验室紧急撤离计划进行撤离，并向实验室负责人报告。
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大肠埃希菌生物危害评估报告一、大肠埃希菌的传播与致病埃希菌属包括多种细菌，临床上以大肠埃希菌最为常见。
大肠埃希菌（E.coli）通称大肠杆菌，是所有哺乳动物大肠中的正常寄生菌，一方面能合成维生素B及K供机体吸收利用。
另一方面能抑制腐败菌及病原菌和真菌的过度增殖。
但当它们离开肠道的寄生部位，进入到机体其他部位时，能引起感染发病。
有些菌型有致病性，引起肠道或尿路感染性疾患。
大肠埃希菌所引起的食源性疾病主要由动物性食品引起，常见中毒食品为：各类熟肉制品、蛋及蛋制品、生牛奶及奶制品、汉堡包、乳酪，其次为蔬菜、水果、鲜榨果汁、饮料等。
中毒原因主要是食品未经彻底加热，或加工过程中造成的交叉污染，老人及婴幼儿为易感人群。
大肠埃希菌可以引起肠道外感染如泌尿系感染、菌血症、胆囊炎、肺炎及新生儿脑膜炎等，也会造成从轻微腹泻到霍乱样严重腹泻乃至引起致死性的并发症如溶血性尿毒综合征（HUS），根据其不同的血清型别、毒力和所致临床症状的不同，可以将导致腹泻的大肠埃希菌分为5类：（1）产肠毒性大肠杆菌（enterotoxigenic E.coli,ETEC）：是许多发展中国家儿童及旅游者腹泻常见病原菌，热带尤为常见。
由食入污染食物和水而致病。
本菌可产生大量耐热和非耐热肠毒素，患者腹泻呈水样便，伴有恶心、腹痛、发热等症。
（2）肠致病性大肠杆菌（enteropathogenic E.coli,EPEC）：可引起婴儿肠炎，夏季腹泻及婴儿霍乱。
本菌具有很强传染性，可引起院内暴发流行，也可引起成人腹泻。
传染源来自食品操作人员或粪便污染供水设施。
（3）肠侵袭性大肠杆菌（enteroinvasive E.coli,EIEC）：由人－人传染而致病（推测为粪－口途径）。
因具有侵袭性，侵入人体肠粘膜上皮细胞后可迅速繁殖，破坏肠粘膜及其基底膜，出现粘膜溃疡，发病多呈散在性。
与痢疾杆菌相似，引起痢疾样腹泻。
（4）肠出血性大肠杆菌（enterohemorrhagic E.coli,EHEC）：可引起暴发或散在性出血性结肠炎。
患者常出现中度高热、恶心、呕吐，痉挛性腹痛、腹泻，早期为水样便，患者出现贫血、血小板减少，少数出现急性肾功能衰竭，溶血性尿毒综合征。
（5）肠粘附性大肠杆菌（enteroadherent E.coli,EAEC）：是儿童持续性腹泻的病因之一。
二、大肠埃希菌的生物学特性埃希菌属属于肠杆菌科1、形态染色：为革兰氏阴性杆菌，有鞭毛，周身有菌毛。
2、培养特性需氧或兼性厌氧。
在普通培养基上生长良好，形成中等大小的光滑型菌落；在鉴别培养基上因分解乳糖产酸，使指示剂变色，菌落被着色；在SS、中国蓝及伊红美蓝平板上分别呈红色、蓝色及紫黑色，借此可与沙门菌及志贺菌相鉴别，但应注意少数菌株分解乳糖缓慢。
3、生化反应：本菌生化反应活泼，能分解葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇等多种糖类，（即IMViC反应++--）。
4、胆盐、煌绿染料等对大肠杆菌有明显的抑菌作用。
5、抗原构造：大肠杆菌的抗原构造较为复杂，主要有（1）菌体抗原（O抗原），为细菌细胞壁的成分，化学成分属脂多糖，脂多糖的重复寡糖单位在核心多糖外侧，是脂多糖分子的最外层，决定O抗原的特异性。
O抗原耐热，加热100℃不能灭活，目前已知O抗原有171种，是血清学分型的基础。
（2）鞭毛抗原（H抗原），成分为鞭毛蛋白，不耐热，已知有56种，均为单相菌株。
（3）荚膜或包膜（K）抗原，成分以多糖类为主，对热稳定。
K抗原的存在时能阻止O凝集，已知有100种，但不是每个菌株都有K抗原。
大肠埃希菌的血清型按O：K：H的顺序，以数字表示，如肠出血性大肠杆菌的血清型O157:H7。
6、致病因子：除内毒素、荚膜肠杆菌科共有的毒力因子外，大肠埃希菌具有独特的毒力因子有：黏附素——具有高度特异性，引起吸附-定植-致病；外毒素（由ETEC产生的肠毒素），包括（1）不耐热肠毒素（LT），分LT-I和LT-Ⅱ两型，本质为蛋白质，对热不稳定，与霍乱肠毒素相似；2）耐热肠毒素（ST），分STa、STb两型，为低分子多肽，对热稳定，致病机制为激活细胞鸟苷酸环化酶，使cGMP↑导致腹泻，当LT和ST同时存在，致病性更强。
三、大肠埃希菌的实验室检查及诊断1、样本采集采集来自临床的各种标本，如血液、尿液、体液、脓汁、痰和分泌物等2、分离培养将血液标本接种于肉汤，生长后再移种于血琼脂平板上，脓汁、痰和分泌物标本与体液（取离心后的沉淀物）标本直接接种于血平板上。
尿液标本应同时做菌落计数。
于36±1℃培养18～24h，观察菌落。
3、鉴定培养可将菌液进一步接种于乳糖胆盐培养基或麦康凯、伊红美蓝琼脂平板于36±1℃培养18～24h，观察菌落。
不但要注意乳糖发酵的菌落，同时也要注意乳糖不发酵和迟缓发酵的菌落。
4、生化试验（1）自（鉴定）平板上直接挑取数个菌落分别接种三糖铁琼脂(TSI)或克氏双糖铁琼脂(KIA)。
同时将这些培养物分别接种蛋白胨水、半固体、pH7.2尿素琼脂、KCN肉汤和赖氨酸脱羧酶试验培养基。
以上培养物均在36℃培养过夜。
（2）结果：在TSI斜面产酸或不产酸，底层产酸，H2S阴性，KCN阴性和尿素阴性的培养物为大肠埃希氏菌。
TSI底层不产酸，或H2S、KCN、尿素有任一项为阳性的培养物，均非大肠埃希氏菌。
必要时做氧化酶试验和革兰氏染色。
5、血清学试验（1）假定试验：挑取经生化试验证实为大肠埃希氏菌的琼脂培养物，用致病性大肠埃希氏菌、侵袭性大肠埃希氏菌和产肠毒素大肠埃希氏菌多价O血清和出血性大肠埃希氏菌O157血清做玻片凝集试验。
当与某一种多价O血清凝集时，再与该多价血清所包含的单价O血清做试验。
如与某一个单价O血清呈现强凝集反应，即为假定试验阳性。
（2）证实试验：制备O抗原悬液，稀释至与Mac Farland3号比浊管相当的浓度。
原效价为1：160～1：320的O血清，用0.5%盐水稀释至1：40。
稀释血清与抗原悬液在10mm×75mm 试管内等量混合，做单管凝集试验。
混匀后放于50℃水浴箱内，经16h后观察结果。
如出现凝集，可证实为该O抗原。
6、肠毒素试验：用酶联免疫吸附试验检测LT和ST。
（1）产毒培养：将试验菌株和阳性及阴性对照菌株分别接种于0.6mLCAYE培养基内，37℃振荡培养过夜。
加入20000IU/mL的多粘菌素B0.05mL，于37℃1h，离心4000r/min 15min，分离上清液，加入0.1%硫柳汞0.05mL，于4℃保存待用。
（2）LT检测方法(双抗体夹心法) ：具体过程参见LT和ST酶标诊断试剂盒，结果判定：以酶标仪在波长492nm下测定吸光度OD值，待测标本OD值大于阴性对照3倍以上为阳性，目测颜色为桔黄色或明显高于阴性对照为阳性。
（3）ST检测方法(抗原竞争法)：具体过程参见LT和ST酶标诊断试剂盒，结果判定：以酶标仪在波长492nm下测定吸光度(OD)值：目测无色或明显淡于阴性对照为阳性。
综合以上生化试验、血清学试验、肠毒素试验作出报告。
四、大肠埃希菌的防治及生物安全防护一、细菌的防治首先应正确地处理感染者的粪便,良好的卫生以及用肥皂仔细洗手,有助于限制感染的传播。
由于儿童和老人是易感人群，所以一旦出现感染，对其他人的预防措施将是必需的：应将已知感染大肠埃希菌的患者集中看护；采用巴氏法消毒食品,可防止食物源性传播。
治疗则主要依靠支持疗法.虽然大肠埃希菌对绝大多数常用抗生素敏感,但是抗生素并不能减轻症状,减少带菌或防止HUS发生。
在感染后的一周内,对发生HUS高危患者(如不满5岁儿童,年老者),应该观察其早期症状.发生并发症的患者需要精心照料,包括透析和其他特殊的治疗,这些可以在三级医疗护理中心进行。
二、细菌的生物安全防护根据《病原微生物生物实验室生物安全管理条例》中的有关规定，人间传播的微生物名录（待颁布）霍乱弧菌属于三类，BSL-2。
相关的防护事宜包括：（1）操作要求1、实验时，未经实验室主任同意，限制或禁止进入实验室。
2、不许在工作区域饮食、吸烟、清洗隐型眼镜和化妆。
食物应存放在工作区域以外专用橱柜或冰箱中。
3、所有的操作过程应尽量细心，避免产生和溅出气溶胶。
4、打碎的器皿不能直接用手处理，必须用其它工具处理，如刷子和簸箕、夹子或镊子。
盛污染的针头、锐器、碎玻璃的容器在倒掉前，应按照相关的规定进行消毒。
5、所有的培养物、储存物及其它规定的废物在释放前，均应使用可行的消毒方法进行消毒，如高压灭菌。
转移到就近实验室消毒的物料应置于耐用、防漏容器内，密封运出实验室。
离开该系统进行消毒的物料，在转移前应包装，其包装应符合有关的法规。
6、溅出或偶然事件中，明显暴露于传染源时，要立即向实验室主任报告。
进行适当的医学评估、观察、治疗，保留书面记录。
7、按日常程序、在有关传染源的工作结束后、尤其是传染源溅出或洒出后、或受到其他传染源污染后，实验室设备和工作台面应当使用有效的消毒剂消毒。
污染的设备在送去修理、维护前，要按照相关的规定消毒；在离开设施转移前，要按照相关的规定打包运输。
（2）安全设备1、正确使用和保养生物安全柜、最好是二级生物安全柜、或其他合适的人员防护设施、或物理遏制装置。
2、确定可能形成传染性气溶胶或溅出物的实验过程，包括离心、研磨、匀浆、剧烈震荡或混匀、超声波破裂、开启装有传染源的容器、采集感染标本等。
3、涉及高浓度或大体积的传染源时，若选用密封转头或带安全罩的离心机，若转头或安全罩仅在生物安全柜中打开，则可在开放实验室内离心。
4、当必须在生物安全柜外处理标本时，需采取面部保护措施（跟镜、口罩、面罩、或其他防溅装置），以免传染源或其他有害物溅或洒到面上。
5、在实验室内，必须使用专用的防护性外衣、大褂、罩衫或制服。
人员到非实验室区域时，防护服必须留在实验室内。
防护服可以在实验室内处理，也可以在洗衣房中洗涤，但不能带回家中。
6、可能接触潜在传染源、被污染的表面或设备时，要戴手套。
一次性手套不用清洗、不能重复使用，不能用于接触“洁净”的表面（键盘、电话等），也不应当戴着到实验室外。
要备有带滑石粉的乳胶手套。
脱掉手套后，要洗手。