抗体制药课件第三章ppt课件

（二）免疫动物品系的选择
①多采用与骨髓瘤细胞供体相同品系的动物做为免疫动物。因种系距离越远， 产生的杂交瘤越不稳定。
常采用Bal B/C小鼠和Lou大鼠。
②应考虑所选动物对所用抗原能否产生良好的免疫应答，若不能，应改用其 他品系的小鼠或大鼠。
（三）动物免疫 1、体内免疫法
适用于抗原量多，免疫原性强的情况，常用8~12周龄的雌性鼠。
（2）鼠类骨髓瘤细胞系主要来自于Bal B/C小鼠，少数来自于Lou大鼠。 这些细胞系能够在D-15或其他培养基中保存，在用于融合前应保持其活力 较高，目前这类细胞系有商品供应。
常用的鼠类骨髓瘤细胞系有NS-1、X45、X63 、P3.653和SP2/O等。其
最适培养的细胞密度为2~5×10 5细胞/ml，细胞密度过高易引起细胞死亡。
单克隆抗体是将能产生抗体的B淋巴细胞与具有无限增殖能力的骨髓细胞进 行原生质体融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆 细胞系而产生的。
一、McAb制备的一般程序
B淋巴细胞 × 骨髓瘤细胞
↓融合
杂交瘤细胞
↓有限稀释 ↓克隆化
纯一的单克隆细胞系 ↓
McAb
抗原
矿物油
↓
↓
注射活鼠
注射BalB/c小鼠
③在5%CO2，37℃下培养4~5天。
④分离脾细胞，进行细胞融合。
3、其它免疫方法 近年来，其它免疫方法研究的较多，有脾内免疫、腹贮植入、淋巴结注射、
足垫注射等方法。 其目的主要是减少抗原用量和注射次数，缩短免疫周期。
（四）骨髓瘤细胞的来源和特性
1、来源
（1）骨髓瘤细胞的来源应同免疫动物的种属一致，一般不选择产生自身免 疫球蛋白的细胞系。
特点：
a、具有高度的特异性，均一性。
b、来源稳定，可大量生产，为抗体制备 a、利用单克隆抗体检测与某些疾病相关的抗原，辅助临床诊断。 b、用放射性标记的单克隆抗体进行肿瘤显像，做免疫定位诊断。
2、McAb制剂用于疾病的治疗
a、针对分化抗原CD3的单克隆抗体对器官移植排斥反应有显著的抑制效果。
可用培养基内酚红指示剂监测，开始生长时呈橙色，由于细胞生长，PH降 低，当变为纯黄色时需补加新鲜培养基降低细胞密度，正常培养基颜色维持 在黄橙色之间。
1、化学合成法制备高纯度的单一抗原 在已知抗原的化学组成和结构的情况下进行。
2、由病原菌、病毒或肿瘤细胞制备 只能得到部分纯化，甚至是极不纯的抗原混合物。
3、用整个细胞或病毒为免疫原刺激动物细胞产生免疫反应
动物产生免疫反应后取其B淋巴细胞，B淋巴细胞融合杂交后，再经筛选、 克隆化，鉴别筛选出纯一的单克隆杂交瘤细胞系。
因免疫后第3天B淋巴细胞的增殖率最高，是处于迅速分裂期的细胞，有 利于融合后增殖。
福氏完全佐剂是由矿物油、乳化剂和杀死的分枝杆菌组成的油包水型的乳化 佐剂，对于刺激细胞免疫和某些实验性免疫尤其有效。
为促进B淋巴细胞转化，提高脾细胞分泌抗体的能力，可在注射抗原的同时 加入细菌脂多糖。
2、体外免疫 （1）特点
所有的抗体均是Ig，但并非所有的Ig都是抗体。Ig是化学结构的概念，抗 体是生物学功能的概念。
3、多克隆抗体：针对多种抗原决定簇的抗体。
由于病原菌含有多种抗原决定簇的抗原物质，由此刺激而产生的抗体制 剂是多种抗体的混合物（其产量低，难以满足临床需要）。
4、单克隆抗体（Monoclonal Antibody，McAb）：采用B淋巴细胞杂交 瘤技术，由纯一的单克隆细胞系产生的，针对一个抗原决定簇的，结构和特 异性完全相同的高纯度抗体称单克隆抗体。
刺激产生免疫反应
诱发产生骨髓瘤细胞
↓
↓制备
取鼠脾脏→ B淋巴细胞 × 骨髓瘤细胞(HGPR缺陷
↓
↓融合（PEG）
制取B淋巴细胞
分装多孔板选择性培（HAT）
↓
↓亲株死亡
B淋巴细胞培养
杂交瘤细胞生长繁殖
↓
↓有限稀释、克隆化
制取多克隆抗体 分离出单克隆细胞系 → McAb
二、McAb制备的基本技术
（一）抗原的制备 制备针对特定抗原的单克隆抗体，首先要制备用于免疫的适当抗原。
a、所用抗原量少（只需几µg），免疫期短，仅4~5天，干扰因素少。 b、融合后产生的杂交瘤细胞不够稳定。
适用于不能采用体内免疫法的情况，如制备人源性McAb；或者抗原的 免疫原性极弱且能引起免疫抑制时使用。
（2）基本方法 ①采用4~8周龄BaL B/C小鼠的脾脏制成单细胞悬液。 ②加入抗原使其浓度达到0.5~5µg/ml。
第三章 抗体制药
第一节 概述
一、抗体的概念 最早应用的预防和治疗传染病的抗体药物为抗毒素血清（1890，
Behring）。 1937年Tiselius等人用电泳法将血清蛋白分为白蛋白、α-球蛋白、β-球
蛋白、γ-球蛋白（丙种球蛋白），并证明抗体活性主要存在于丙种球蛋白组 分。因此，在相当一段时间内，丙种球蛋白成为抗体的同义词。
b、以McAb作为载体的导向药物可对肿瘤进行定向治疗。
近年来通过对McAb的改造，消除其鼠源性（免疫原性）并降低其分子量， 只保留其同抗原特异性结合的活性，再用其制备导向药物用于肿瘤治疗，进 而提高了免疫导向疗法的效果，使该领域得以迅速发展，目前成为抗体应用 研究的热点。
第二节 单克隆抗体的制备
（1）颗粒性抗原（细胞抗原） 免疫原性强，可不加佐剂，直接注入腹腔刺激动物免疫。
①初次免疫，腹腔注射107个细胞。 ②3周后，追加免疫1~2次，腹腔注射1~5×106个在缓冲盐溶液中洗过的细
胞。 ③融合前4~5天，静脉注射1~5×106个细胞。
（2）可溶性抗原 ①按每只小鼠10~100µg抗原与福氏完全佐剂等量混合皮下注射。 ②3~4周后，100µg抗原在福氏完全佐剂中追加一次。 ③采集脾细胞前3天由静脉注射最后一次100µg抗原。
1、抗体（Antibody，Ab）：指能与相应抗原特异性结合的具有免疫功能的 球蛋白。
抗体产生的原因：机体免疫系统因病原菌、病毒感染，受抗原物质刺激 后产生B淋巴细胞，被活化的B淋巴细胞经增殖、分化产生浆细胞，浆细胞 合成和分泌抗体。
2、免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）：具有抗体活性及化学结构与抗 体相似的球蛋白统称为免疫球蛋白。