一、项目名称

一、项目名称

弓形虫多价和多表位核酸疫苗的实验研究

二、申报奖种

山东省科技进步奖

三、申报单位

山东大学

四、推荐单位意见

我单位认真审阅了该项目推荐书及其附件材料，确认全部材料真实有效，相关栏目均符合山东省科学技术奖励委员会办公室的填写要求。

按照要求，我单位和项目完成单位都已对该项目的拟推荐情况进行了公示，公示期间无异议。

该项目弓形虫多价和多表位核酸疫苗的实验研究科技创新性强；获得2项国家发明专利，应用情况良好，具有很高的社会效益，对照山东省科学技术奖授奖条件，推荐该项目申报2016年度山东省科技进步奖二等奖。

五、项目简介

弓形虫感染可以导致多脏器损害，破坏大脑、心脏、眼底，可使全球人口的30-50％慢性感染，引起精神，神经症状和行为的改变。孕妇感染还可导致畸胎、死胎，存活者也常有畸形及智力发育不全等严重后遗症。因此，研究能够用于人类的弓形虫疫苗十分迫切。

本课题从弓形虫各期保护性抗原中筛选出能具有HLA或H-2限制性T，B细胞表位肽，选用不同的佐剂和载体携带，成功构建了具有MHC限制性的弓形虫表位组成的多价核酸和多表位疫苗。筛选获得21个具有HLA的表位肽：HLA-A*0201限制性的CD8+ T cell表位肽13个；HLA-A*1101限制性的CD8+ T cell表位肽6个；HLA-B*0702限制性的CD8+ T cell 表位肽2个；HLA限制性CD8+ T细胞表位肽与CD4+ T细胞通用表位PADRE和佐剂GLA-SE及Pam2Cys联合应用免疫

HLA-A*0201, HLA-A*1101，HLA-B*0702转基因鼠比对照组转基因鼠腹腔中的速殖子数量明显减少，生存时间延长；编码缓殖子特异性抗原SAG2C，-2D，-2X 的基因疫苗单独或者混合均可以有效的诱导小鼠产生有效的体液和细胞免疫应答。该核酸疫苗可作为控制弓形虫慢性感染过程中脑组织包囊形成的有效的候选疫苗。CD8+ T细胞优势抗原表位：VPNSSLVEN和SQFLSLSLL在体外可刺激记忆性淋巴细胞明显增殖，是表位疫苗的候选表位；弓形虫速殖子SAG1/SAG3-CTXA2/B 复合基因疫苗，免疫鼠抗I型弓形虫攻击获得了40%的生存率；以泛素为佐剂的弓形虫多表位重组腺病毒疫苗不仅增强了多表位疫苗的免疫原性，而且通过DNA 疫苗初免-重组腺病毒疫苗加强免疫策略获得更好的抵抗弓形虫感染的保护力；通过乳化交联法获得壳聚糖微球颗粒，使之吸附结合GRA10复合表位肽，获得装载GRA10复合表位肽的壳聚糖微球疫苗，小鼠脑包囊形成率降低50%。

本研究的意义在于探索一种关于疫苗研究的新思路，选取具有MHC限制的，能够被弓形虫阳性病人识别弓形虫T，B细胞抗原肽，可以直接被提呈给T,B 淋巴细胞，从而产生激活T、B淋巴细胞的信号，启动免疫应答。从弓形虫病患者体内筛选出具有MHC限制性的表位，构建具有MHC限制性的表位疫苗和核酸疫苗，不仅对人类弓形虫疫苗的研究，也必将对人类其它寄生虫及感染性疾病的疫苗研究指出了一个新的方向。

六、客观评价

1. 针对生活史复杂的寄生原虫——弓形虫疫苗研究发展多种抗原组合、针对不同生活史发育阶段(如速殖子、缓殖子）的复合多价疫苗研究。

2. 表位是组成蛋白质的抗原决定簇，是抗原分子表面被抗体或T、B淋巴细胞特异性结和的部位。选取某些强保护性抗原中具有MHC限制性的T淋巴细胞和(或)B淋巴细胞表位构成的多表位疫苗，是弓形虫疫苗开发的新思路。

3. 在疫苗研究中，考虑到主要组织相容性复合体MHC 分子的限制性。只

有符合人类HLA限制性的表位构建的疫苗，才能有效的用于人类疾病的预防

七、推广应用情况

1.在畜牧养殖户和企业的猪、牛、羊中进行了应用，产生了很好的免疫效果和高度弓形虫抗体

2.在宠物猫狗中进行了应用，产生了很好的免疫效果和弓形虫保护性。

八、主要知识产权证明目录

1．国家发明专利授权：用于预防人或动物慢性弓形虫病的DNA疫苗专利号：ZL201310201888.0

发明人：丛华，张敏，袁泉，丛海滋，赵玲潇

专利申请日：2013年8月21日专利授权日：2014年8月13日

2. 国家发明专利授权：基于弓形虫缓殖子抗原的CD8+T细胞抗原的优势表位

专利号：ZL201410204200.4 ；发明人：丛华，袁泉，张敏，丛海滋，赵玲潇专利申请日：2013年9月4日；专利授权日：2014年12月14日

九、主要完成人情况表

1、姓名：丛华排名：1/5 技术职称：副教授

工作单位：山东大学

对本项目技术创造性贡献：课题设计，表位筛选，疫苗构建

曾获省级以上科技奖励情况：无

2、姓名：何深一排名：2/5 技术职称：教授

工作单位：山东大学

对本项目技术创造性贡献：核酸疫苗构建

曾获省级以上科技奖励情况：无

3.姓名：周怀瑜排名：3/5 技术职称：副教授

工作单位：山东大学

对本项目技术创造性贡献：弓形虫速殖子抗原核酸疫苗构建及免疫

曾获省级以上科技奖励情况：无

4.姓名：张敏排名：4/5 技术职称：初级

工作单位：莱芜市人民医院

对本项目技术创造性贡献：弓形虫缓殖子抗原核酸疫苗构建及免疫

曾获省级以上科技奖励情况：无

5.姓名：赵玲潇排名：5/5 技术职称：初级

工作单位：山东协和学院

对本项目技术创造性贡献：弓形虫多阶段抗原核酸疫苗构建及免疫

曾获省级以上科技奖励情况：无

十、主要完成单位及创新推广贡献

1、山东大学（单位名称）排名：1

完成单位对本项目科学研究提供了有力的科研条件和支持,保证了该项目的顺利完成及推广。

十一、完成人合作关系