口蹄疫免疫

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提高生猪口蹄疫群体免疫效果的建议

提高生猪口蹄疫群体免疫效果的建议

提高生猪口蹄疫群体免疫效果的建议口蹄疫是一种让养殖业受到严重威胁的病毒性疾病,能够影响到猪的生长和健康。

为了预防口蹄疫的发生,需要在全国范围内进行口蹄疫群体免疫。

然而,在实施免疫时,为了有效提高免疫效果,必须采取一些有效的措施。

以下是提高生猪口蹄疫群体免疫效果的建议:1. 建立完善的监测系统在免疫之前需要建立完善的口蹄疫监测系统,通过对疾病的监测,及时发现疫情,为下一步的免疫提供有力支持。

2. 选择合适的疫苗选择合适和优质的口蹄疫疫苗是预防口蹄疫的重点。

在选择疫苗时,要根据疫苗可靠性和疫苗效果进行评估。

3. 严格的疫苗冷链管理疫苗的安全性和有效性与其储存和运输条件有关。

疫苗必须通过严格的冷链管理来保证疫苗的有效性。

4. 合理的免疫程序在制定免疫程序时,需要考虑疫苗接种的时间、方法以及次数等因素。

要定期对猪群进行免疫,并在猪群中做好免疫工作的记录。

5. 加强养殖管理科学的养殖管理可在一定程度上预防疾病的发生。

在日常养猪过程中,应加强环境卫生和卫生防疫工作,合理安排饲喂和运动,并加强疫情监测和报告工作。

同时,要防止猪群囤积过多,以减少疾病传播的风险,提高免疫效果。

6. 提供科学的饮食和保健产品提供健康的饮食和保健产品,对于增强猪群的抵抗力和提高疾病免疫效果非常重要。

注意给猪提供足够的饮用水和清洁水,以及足量的蛋白质、维生素和矿物质等营养物质。

总之,对于口蹄疫的预防,需要采取综合性措施,从疫苗选择、冷链管理、免疫程序、猪群养殖管理以及科学饮食和保健产品等方面进行全面考虑,以提高口蹄疫免疫的效果。

猪口蹄疫免疫注意事项

猪口蹄疫免疫注意事项
关键词:猪;口蹄疫;注意事项
1 疫苗选择
口蹄疫病毒是一个容易发生变异 的病毒,虽然可以使用疫苗提前进行免 疫防控,但是也不是什么时候都可以保 证不会发病的。因为只有免疫相同毒 株的疫苗,才对相应口蹄疫病毒有效, 例如只免疫 O 型疫苗对 A 型口蹄疫是 没有保护效果的。同时选用疫苗时,不 仅要求血清型一致,还要保证疫苗的毒 株必须与流行毒株相匹配。如果我们 按照科学的程序免疫接种后,猪群仍然 发生口蹄疫疾病,就有可能存在流行毒 株发生变异或变化的情况。
3 正确使用疫苗
首先需要选用经国家批准生产和 注册、由各级动物卫生监督机构逐级 供应的口蹄疫灭活疫苗。严格按照疫 苗运输和保存说明进行妥善保管,以 免发生疫苗失效情况。在使用疫苗前 认真检查疫苗瓶口的胶盖是否封闭严 实,记录好疫苗的生产厂家、生产日 期、生产批号、包装规格和失效日期等。 在使用过程中应按说明书要求的方法 和用量来进行。对所使用的器具要进 行彻底消毒,否则会污染疫苗,引起继 发感染。最好应注射一头猪更换一个 针头 [3]。
应选用与流行毒株最为匹配的疫 苗来进行免疫。虽然猪口蹄疫疫苗有 20 多种,但是随着病毒毒株变异,猪群 发生口蹄疫后仍然存在使用疫苗与流 行毒株不匹配的情况,引起免疫失败或 临床保护效果不良的情况,致使常有猪 群发病,给养殖业造成很大损失。因此 在实际养猪生产中,应及时检测并掌握 病毒特性及当地流行口蹄疫病毒毒株, 选用相应的疫苗免疫接种,才能获取理 想的保护效果,保证猪群的健康状况。 例如果发生的口蹄疫属于 A/Sea-97/G2 毒株 A 型的,就要选用猪口蹄疫 O 型、 A 型二价灭活疫苗,这是才是最匹配的 口蹄疫疫苗 [1]。
参考文献:
[1] 甘一波, 李汝, 张红云. 玉林市口蹄疫 免疫水平监测与免疫效果分析 [J]. 广西畜牧兽 医, 2011(6): 33.

奶牛场口蹄疫免疫程序

奶牛场口蹄疫免疫程序

奶牛场口蹄疫免疫程序
奶牛场的口蹄疫免疫程序通常包括以下步骤:
1. 每年5月或10月全牛群进行一次无毒炭疽芽孢菌的免疫注射。

2. 全牛群每年进行2~3次口蹄疫疫苗的免疫注射。

3. 犊牛到成年奶牛的免疫程序:口蹄疫疫苗一年注射两次,分春、秋两季各一次或按免疫时间注射。

成年牛3-5ml/次,犊牛2ml/只,肌肉注射,瘦弱、病牛、临产前1.5个月、怀孕初期(3个月内)、4月龄以下牛禁用。

近两年发生过口蹄疫的地区实行每年四次免疫,每次免疫一个月后再注射一次加强免疫,推广使用浓缩的口蹄疫疫苗。

口蹄疫免疫接种工作中经常出现的问题及改进措施

口蹄疫免疫接种工作中经常出现的问题及改进措施
1 在 实 际 免 疫 接 种 中 经 常 出 现 的
问 题
给 牛 注 射 疫 苗 时 . 最 好 选 择 早 晨 注 苗 , 以便 有 足 够 时 间 观 察 ,若 出 现
过 敏 反 应 .要 立 即 处 理 。可 皮 下 注 射
针 头 消 毒 不 严 格 .或 针 头 大 小 型
11 对 口蹄 疫 防控 工作 认 识 不到 位 . 由 于 农 牧 团 场 的 特 殊 性 .每 一 次
1 . 过 敏 反 应 .4 2
首 先 , 利 用 各 种 方 式 大 力 宣 传
《 物防 疫法 》 动 ,同 时 要 做 好 与 基 层 主
要 领 导 的 沟 通 协 调 作 .多 了 解 养 殖
户 的 想 法 ,努 力 做 到 “ 防 群 控 ” 群 ;其
次 对 于 那 些 拒 绝 免 疫 的 “ 防 户 ”.可 拒
号选择不对 ,导致注射部位 出现脓肿 ,
肾 上 腺 素 ,2 %葡 萄糖 、安 钠 咖 、维 生 5 素 C、青 霉 素 进 行 静 脉 注 射 。
23 正 确 使 用 口蹄 疫 疫 苗 .
注 射 深 度 不 够 , 疫 苗 从 皮 肤 溢 出 使 注
射 剂量 不 足 等 。 注 射 部 位 不 准 确 ,为 了 操 作 方 便 . 防 疫 人 员 经 常 会 在 肩 胛 、后 腿 等 非 最
者 ,全 身 抽 搐 、粪 尿 失 禁 ,腹 下 、 四 肢 、 肛 门 、 阴 户 、 可 视 粘 膜 等 部 位 发
采 取 上 级 动 物 防 疫 监 督 机 构 ( 团 场 本 没 有 此 机 构 ) 和 本 团 的 综 合 治 理 部 门
联 合 执 法 . 为 防 疫 T 作 创 造 良 好 的 社 会 环 境 :再 则 ,与 防 疫 人 员 签 订 重 大

口蹄疫免疫接种注意事项及综合防控

口蹄疫免疫接种注意事项及综合防控
提 速 ,动 物 数 量 膨 胀 性 的 发 展 ,针 对 动 物 疫 病 的 防 控 ,我 们 人 类 所 能 采 取 的消 灭 传 染源 ,切断 传 播途 径 ,
措 施 。但 口蹄疫 病毒 型 多易变 , 主 宿 广 泛 ,致 病 性 强 ,而 免 疫 原 性 又 相 对 较 弱 ,该 病 传播 方 式 和 传 播 途 径 多而 复 杂 ,康 复 动 物 可 长 期 带 毒 排
毒 ,致 使 口蹄 疫 的 防 控 工 作 十 分 困 难 ,免 疫 接 种 尤 为 重 要 。 另 外 , 口 蹄 疫 疫 苗 在 免 疫 接 种 过 程 中有 免 疫 不 良反 应 ,严 重 的可 造 成牲 畜死 亡 ,
提 高 动 物 抵 抗 力 的 三 大措 施 都 遇 到
了前所未 有 的挑战 。 因此 , 口蹄 疫 的 防 控 和 免 疫 接 种 工 作 ,不 能 只 靠 兽 医界 的 力 量 就 能 完成 ,必 须依 法 防 治 ,群 防群 控 ,
放 弃 本 能 的 抵 抗 ,总 是 与 人 类 的 发
周 边 接 壤 的 国 家 一 直 都 有 口蹄 疫 暴 有 偶 然性 。世 界 各 国 对 该 病 非 常 重
展 相 抗 衡 。 以 口蹄 疫 为 例 ,尽 管 早 发 的报 道,所 以 口蹄疫的发生不具
在 14 5 6年就 有 了关于 口蹄 疫的描 述 ,
口蹄疫 的发 生 。
0~ 1 0k 以 外 ,这 在 F 0 m MD 2 .口蹄 疫 危 害 大 。 E蹄 疫 一 旦 移 动 5 l
另外临床康复动物的持续带毒根据vanbekkam1959年描述牛羊等反刍动物感染fmd病毒后28或更长时间仍可由咽喉部检出病毒称为持续感染其动物称健康带毒者带毒时间因动物种类品种而有差异水牛5年黄牛3绵羊9月山羊4个月野生反刍动物时间较短自然界群体带毒可达20年以上病毒的主要存在部位为反刍动物咽喉部fmdv传播途径难以切断

口蹄疫免疫程序及注意事项 - 猪病防冶

口蹄疫免疫程序及注意事项 - 猪病防冶

口蹄疫免疫程序及注意事项-猪病防冶口蹄疫被认为是强制免疫病的一种,易感染猪、羊等偶蹄类动物,由于其致死率高、传染性强、发病急促等原因,一直是我业内人士关心和讨论的主题之一。

本文就口蹄疫的免疫程序和相关的注意事项加以探讨分析,旨在更好的预防口蹄疫的发生。

我国为预防、控制严重危害人体健康和养殖生产的大型动物疫病的发生和发展,实施动物强制免疫这一管理措施。

为了更好的保护人体健康,促进我国养殖畜牧业的发展,因此加大对动物疫病的免疫工作力度显得非常重要,特别是在动物疫病与人之间互相传染和病毒快速变异的时候,做好动物疫病的免疫工作,与社会的安定团结及人类的生存发展是密不可分的。

在我国,动物疫病主要有四种,分别是口蹄疫、猪瘟、高致病性的猪蓝耳病和禽流感,现笔者针对口蹄疫病的免疫程序和相学习意事项加以阐述,内容如下。

一、口蹄疫的免疫1.疫苗的选择综合分析我国引发口蹄疫病[1]的病原体的流行特点,结果发现,易感染口蹄疫的动物如猪、羊、牛等在春季和秋季两季易感染口蹄疫,因此每年的春、秋两季是防控的重要时期。

依据中国农业部颁发的《口蹄疫防治技术规定》中规定,对易感口蹄疫病的动物选择O 型灭活疫苗进行集中的强制免疫,所有的疫苗应选择已被农业部批准的产品,且是由动物的防疫监督机构进行统一组织、统一供应分配的。

一年两次免疫。

保证在两次免疫之间,对新生、补检或者漏检的动物进行补充免疫。

2.免疫程序2.1新生家畜的免疫对于羔羊和猪仔,在其出生的30-45天内,对其进行初次免疫,注射剂量为1ml/只(头)。

所有的新生家畜得到初次免疫以后,时隔一个月以后进行再次的强化免疫,在这之后,每隔4个月就要免疫一次,剂量等要求与初次免疫一样。

具体情况具体分析,可以根据动物的抗体的监测结果对免疫程序进行稍许的改变。

2.2母畜的免疫对于不同时期的母畜,免疫时间不同。

配种之前,母畜应予以一个月一次的强制免疫;处于孕期的母畜应注意,在配种后的一个月以及产前的两个月以内,严禁免疫,这样做的目的是减少因免疫接种而造成的一些不良的应激反应。

简述口蹄疫免疫抗体监测的方法及意义

简述口蹄疫免疫抗体监测的方法及意义

一、检测方法特异性抗体检测在疫病诊断、传染病流行病学调查及评价疫苗免疫效果评价具有重要的参考意义。

现阶段,抗体检测的方法较多,除传统的沉淀反应,凝集试验,补体结合试验外,标记免疫测定已成为主要的免疫抗体测定技术(如酶联免疫测定、放射免疫测定、荧光免疫测定、发光免疫测定等),而酶联免疫测定是目前应用最为广泛的方法之一。

1.中和抗体中和抗体是当病原微生物侵入机体时产生的相应的抗体。

病原微生物入侵细胞时需要依赖病原体自身表达的特定分子与细胞上的受体结合,才能感染细胞,并进一步扩增。

中和抗体是B淋巴细胞产生的某些抗体,中和抗体的作用机制是改变病毒表面构型,阻止病毒吸附于易感细胞,使病毒不能穿入胞内进行增殖;病毒与中和抗体形成的免疫复合物,易被巨噬细胞吞噬清除;有包膜的病毒表面抗原与中和抗体结合后,激活补体,可导致病毒的溶解。

病毒中和试验是世界动物卫生组织推荐的标准方法,抗体与口蹄疫病毒特异性中和作用使病毒失丧失感染力,需要培养病毒敏感细胞;所需的病毒必须为活病毒,具有感染性。

2、结构蛋白抗体在原则上来说,只要是异己蛋白质进入机体,就会被免疫系统识别,然后产生相应抗体。

灭活疫苗的本质是一种抗原,只不过它通过改造已经没有了病毒的毒性。

当疫苗注入到机体之后,由于病毒抗原含有多种不同的蛋白,因此机体会产生不同的抗体。

然而,并非所有的结构抗体都有抗病毒的作用。

中华人民共和国农业农村部规定的口蹄疫免疫抗体评价的方法分别为液相阻断E L I S A抗体检测试验、正向间接血凝试验、V P1结构蛋白抗体检测试验。

2.1液相阻断ELISA抗体检测试验(国际贸易指定法)我国目前采取以免疫为主的综合防控措施进行口蹄疫防控,免疫抗体检测是衡量疫苗免疫效果的重要指标。

目前,国际粮农组织(FAO)和世界动物卫生组织推荐液相阻断ELISA来对口蹄疫免疫效果进行评价。

硏究表明口蹄疫液相阻断ELISA抗体检测技术具有良好的敏感性、快速诊断性和可重复性,与攻毒保护有很好的相关性,现被广泛应用于口蹄疫免疫抗体水平的监测。

猪口蹄疫疫苗免疫时间,什么时候打,怎么打

猪口蹄疫疫苗免疫时间,什么时候打,怎么打

猪口蹄疫疫苗免疫时间,什么时候打,怎么打注射完口蹄疫疫苗后,需要14-15天左右的时间才能生效,免疫持续期6个月。

育肥猪:一般在出生后30-40天内进行注射。

种公猪:在每年的9月和12月份时进行接种。

种母猪:在分娩前1.5个月左右接种。

乳猪:断奶后首免,50-60日龄二免,70-80日龄三免。

一、猪口蹄疫疫苗免疫时间,什么时候打1、一般情况下,注射完口蹄疫疫苗后,需要14-15天左右的时间,猪才会产生抗体发挥作用,在注射后,免疫持续期6个月。

2、如果是育肥猪,一般在出生后30-40天的时候进行首免,注射方法为肌肉注射,后海穴注射;出生后60-70天左右进行二免,注射方法为肌肉注射,后海穴注射。

3、如果是种公猪,每年接种2次,分别在每年的9月和12月份时进行接种。

4、如果是种母猪,一般在分娩前1.5个月左右接种,需注意母猪临产前半个月和怀孕前一个月不能注射。

5、如果是乳猪,断奶后,进行猪瘟和口蹄疫的首次接种;50-60日龄,进行猪瘟和口蹄疫的二免;70-80日龄,进行口蹄疫三免。

二、猪口蹄疫怎么打1、对于体重在10-25kg的猪,每头猪在耳根后肌肉注射1ml的猪O型口蹄疫灭活疫苗。

2、对于体重在25-50kg的猪,每头猪在耳根后肌肉注射2ml的猪O型口蹄疫灭活疫苗。

3、对于体重在50kg以上的猪,每头猪在耳根后肌肉注射3ml 的猪O型口蹄疫灭活疫苗。

4、如果是2-4周龄的猪应使用2.5cm长的16号针头,4周龄以上的猪使用4cm长的18号针头。

5、在注射前,对于针头和注射器,需要使用湿热方法高压灭菌或用洁净水加热煮沸消毒法消毒至少15分钟。

接种时,一个针头接种一头猪,不可以一个针头接种多头猪。

6、注射时,注射部位需要剪毛,剪毛后使用70-75%的酒精棉或碘酊擦净消毒,然后用挤干的酒精棉擦干消毒部位,注射时疫苗必须注入肌肉内,不能过浅。

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1.概述口蹄疫(Foot and mouth disease, FMD)是由口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus, FMDV)引起的牛羊猪等家畜严重的急性传染病,由于其传播快,给畜牧业造成了巨大的经济损失,而且严重影响国际贸易,世界动物卫生组织将其列为必须上报的疫病之一。

FMD 血清型众多,包括O、A、Asia1、SAT1、SAT2和SAT3型共7个血清型,血清型间无交叉保护,造成疫病控制难度较大。

截至到2010年12月,全球FMD流行国家达60个,大多集中在亚非拉等发展中国家,给这些国家的畜牧业发展带来消极的影响,而因FMD贸易壁垒造成的畜产品出口损失远远大于疫病本身所带来的动物死亡的损失。

世界各国都通过种种努力实现OIE认定的“无FMD疫区国”地位,发达国家通过扑杀等措施几乎没有FMD的流行,而南美洲一些国家通过免疫接种等措施实现了无FMD疫区或部分地区无疫区。

欧洲上世纪90年代开始实行不免疫策略,在疫情暴发时采用扑杀的手段控制FMD,但英国2001年FMD的爆发给当地经济社会造成巨大的损失,促使相关机构开始修订FMD防控策略,2003年欧盟修订了FMD防控策略,肯定了疫苗免疫在FMD爆发时的作用,随后欧盟多个国家将疫苗免疫作为补充手段用于FMD的控制。

灭活疫苗在欧美等地的FMD防制和根除中发挥了重要的作用,直到今天,灭活疫苗仍然是成功防控FMD的重要措施,经过几十年的发展,FMD灭活疫苗在抗原生产、灭活、浓缩纯化、乳化等方面不断丰富和发展,在动物疫苗生产中已形成具有示范性的工业化生产体系。

目前,世界上FMD灭活疫苗生产和应用的主要有BEI灭活油佐剂疫苗和甲醛灭活铝胶皂素疫苗,对于灭活疫苗的质量控制上,更注重于疫苗的生物安全和免疫效力两个方面,因此,近些年来,FMD研究机构和生产厂家将力量集中到抗原生产工艺、灭活剂选择、浓缩纯化、佐剂以及生产过程疫苗效力的替代检验等关键技术的研究。

2.FMD灭活疫苗历史纵观FMD疫苗的研究和应用历史,FMD疫苗经历了灭活疫苗、活疫苗、灭活疫苗、新型疫苗这一历史进程和发展趋势。

而灭活疫苗从最初的舌皮组织毒经甲醛灭活制成的疫苗到后来的细胞培养病毒经BEI灭活制成疫苗,经历了20年的时间。

FMD病毒抗原生产方式也主要有三种方式: 牛舌皮组织生产的Frenkel培养方法;转瓶BHK21细胞单层培养法;BHK21细胞悬浮培养方法,转瓶单层培养方法是劳动密集型生产方式,生产过程生物安全较难控制,容易散毒,而悬浮培养法属于技术密集型生产方式,制备病毒抗原快速便捷,能很好的保持生产过程生物安全,是目前疫苗的主要生产方式。

截止2011年年初,我国已有两个国家指定口蹄疫疫苗企业采用了悬浮工艺生产口蹄疫疫苗。

该工艺的推行势必会给口蹄疫疫苗的生产甚至动物疫苗的生产的工艺带来巨大革新,也势必会促进我国兽用疫苗质量的巨大提升。

有报道称目前我国的口蹄疫疫苗质量及检验技术已达到世界水准。

2.1组织舌皮毒该方法制造的FMD灭活疫苗最早可追溯到上世纪20年代。

1926年,法国科学家Vallee等发现FMD病毒经甲醛灭活后,仍具有免疫原性,但工艺不好控制,灭活的病毒要么留有残毒,要么失去了免疫原性。

1939年,丹麦科学家Schmidt发现氢氧化铝胶体具有无毒性和免疫刺激的功能。

1937年,德国科学家Waldmann首次将病毒的灭活与乳化引入到FMD疫苗生产中来,获得了符合实际应用的FMD疫苗-铝胶甲醛灭活疫苗。

1947年,Frenkel等首次采用牛舌上皮细胞培养FMDV获得成功,为抗原的大量生产提供了经济、稳定的途径,该疫苗在欧洲FMD防控中发挥了巨大的作用。

但这种疫苗制苗材料来源不易,生产和应用受到限制。

2.2 单层细胞培养毒Frenkel等培养系统建立以后,组织培养学快速发展,原代细胞培养体系也迅速建立起来,1960年,利用转瓶培养体系建立的牛肾细胞原代培养建立起来,紧接着,BHK21传代细胞系得到了应用,传代细胞比原代细胞具有较多的优点。

上个世纪60年代,人们就开始采用转瓶生产病毒,该工艺成熟度高,占地面积小,投资成本小等优点,因此许多国家建立了规模化生产工厂,截至到目前,我国仍然以该工艺为FMD疫苗主要生产方式。

然而,该系统劳动量大,生产过程难以保证生物安全和疫苗质量批次不稳定等因素,几乎在发达国家停止应用。

1967年,人们利用微载体系统建立起了BHK21细胞悬浮培养体系,在实验室的体系得到了批量化的生产。

尽管如此,微载体由于其成本和系统的复杂性在FMD疫苗的应用上没有得到工业化应用。

2.3悬浮细胞培养毒1962年,人们发现BHK21细胞能全悬浮培养,细胞在此体系中增值速度很快,在较短的时间便可以达到工业化量。

1985年,这种体系被广泛的用在FMD疫苗生产中。

至今,世界上已经有5000L的发酵罐在应用。

细胞在一定浓度的小牛血清和MEM培养基中,密度在2~3d 即可增加到5×106个/ml或更高。

悬浮培养在FMD疫苗生产中处于核心地位。

1965年,生物反应器悬浮培养最早用于口蹄疫疫苗生产,当时的生物反应器容积是30L。

1983年,英国Wellcome公司就已能够利用5000L的细胞罐大规模生产口蹄疫疫苗。

目前,商品化的生物反应器已经可以达到20000L,大大提高了疫苗的生产效率和疫苗的质量,降低生产成本。

悬浮系统的应用,使无血清悬浮培养成为疫苗生产过程的主要工艺之一。

通过用已知人源或动物来源的蛋白或激素代替动物血清进行细胞悬浮培养,能减少后期纯化工作,提高产品质量,在实际生产不仅能够减少生产中污染几率,而且还能避免血清中潜在的一些病原微生物影响细胞培养或者对疫苗使用者造成威胁,也便于在生物反应器中进行代谢流分析,实施在线过程监控,精确投料。

无血清产品更加符合国际GMP要求,对我国FMD疫苗走向国际市场具有重要的现实和长远意义。

3.FMD疫苗生产和使用中的关键要素3.1病毒种子一般来说,一个好的疫苗毒株应该选择流行株,但是流行株不一定能够作为疫苗毒株来使用,首先疫苗毒株必须适应细胞,保持其毒力、抗原性稳定,而且其抗原谱必须广,能够保护大多数流行野毒的攻击。

因此,必须满足上述条件的流行毒株才可以作为疫苗候选毒株。

随着现代分子生物学的发展,基因序列分析在病毒流行病学研究上的具有重要的作用,序列测定在评价疫苗株与流行毒株亲缘关系方面具有重要的参考价值,然而这种方法对筛选疫苗候选毒株作用不大,在疫苗毒株的筛选中,应更多的采用血清中和试验和阻断ELISA方法,r值是评价疫苗株与流行毒株抗原关系的主要指标。

由于FMD容易发生变异,相关机构应定期分析本国或本地区疫苗株与流行毒株的抗原关系,以期选择适合的疫苗去防控FMD。

选定的毒株必须在单层细胞或悬浮细胞上连续传代,以期达到稳定的生长状态,病毒在不同种类和生长状态的细胞适应力是不同的,一般来说,病毒在单层细胞上生长的状态要明显的好于悬浮细胞,这种结果可能与细胞的生长状态有直接的关系,这就要求病毒在制作种子批的时候,应事先在单层上传代,待病毒表现出良好的生长状态时再用传代细胞生长。

然而,在疫苗制造过程中,因传代会导致毒株的变异,因此,应尽量减少病毒的传代次数,在研究和工业化生产中,应建立规范的种子批制度,我国病毒的种子批分为原始种子批、基础种子批和生产用种子批,基础种子批毒种必须经过严格的检验,由基础种子批到疫苗成品的毒种代次应不超过5代。

3.2细胞及用于细胞培养的培养基适应于FMDV生长的细胞除常用的BHK21细胞,还有IBRS细胞。

一般来说,尽管BHK细胞来源于同一种组织,但是根据其传代历史,不同的细胞株对病毒的适应能力是不同的,有的细胞对病毒敏感,有的细胞不敏感。

根据世界疫苗制造工艺的发展趋势,能较好适应悬浮培养,短时间内大量增殖和支持病毒良好生长的悬浮细胞系是FMD工业化生产所必需的。

在细胞培养中培养基的选择优化尤其是血清的类别对细胞的生长和对病毒的敏感性尤为重要,需要具体技术人员不断摸索、不断选择和优化。

4.疫苗生产关键过程控制4.1细胞及病毒培养能够很好的支持病毒生产和稳定传代的细胞是疫苗生产的关键步骤之一,在现代FMD疫苗生产过程中,一般采用BHK21细胞悬浮培养工艺生产FMD疫苗。

通常MOI为0.01即可在20h内使90%的细胞发生细胞病变。

(MOI:感染比即1个感染单位/100个细胞使用)4.2灭活及灭活检验病毒灭活及灭活检验在FMD疫苗生产中是最关键的步骤之一,历史上一些疫病的暴发与FMDV灭活不彻底有直接的关系。

最早,人们采用甲醛灭活FMDV,甲醛通过病毒蛋白交联而灭活病毒,对病毒核酸没有改变,其灭活动力曲线难以确定,难以确定病毒何时灭活完全。

随后,氮丙啶类如AEI被用于病毒灭活,该类灭活剂作用于病毒核酸,抗原蛋白不受破坏,能很好的保持病毒的免疫原性,但毒性较大。

目前,BEI是FMD疫苗生产的主要灭活剂,这种化学试剂灭活病毒能绘制出清晰的病毒灭活曲线,符合一级灭活动力曲线,对病毒安全,能保证病毒的抗原性,而且灭活彻底。

对于不稳定的疫苗株而言,采用甲醛和BEI共同灭活工艺能够显著降低灭活的时间,可由原来的40h 降低到8h左右,而且更加安全。

2008年出版的《OIE陆生动物卫生法典》中建议,FMDV灭活采用0.3mM BEI浓度2次灭活,一般来说,为了彻底的灭活病毒,不使病毒逃逸,在工业生产中,一般要将一个灭活罐倒到另一个灭活罐。

灭活抗原的安全性通过敏感单层细胞或乳鼠传代试验证实。

将灭活的抗原液接种到单层细胞,连续传代2-3代,无CPE;样品接种乳鼠后,连续观察7日,应全部健活。

10000L病毒悬液中的活病毒粒子应少于1个。

4.3抗原浓缩和纯化灭活疫苗刺激有效的免疫应答需要大量的抗原量,而且病毒增殖过程中的副产品如血清蛋白和病毒的非结构蛋白都会造成免疫动物的过敏反应。

因此,通过离心或沉淀等方法去除细胞碎片或者在接种病毒前将含血清培养基换成无血清培养基培养病毒。

4.4乳化乳化是为了提高疫苗的免疫原性,将灭活好的抗原与佐剂以一定比例混合。

一般常用的免疫佐剂有氢氧化铝胶、皂甙和油佐剂。

最早采用的佐剂是氢氧化铝胶佐剂,在抗原中加入氢氧化铝佐剂,氢氧化铝佐剂和皂甙用于FMD疫苗,该类疫苗能显著的保护牛免受FMDV的攻击,但对猪的免疫保护力相对较低,这种疫苗在中东和亚洲部分地区仍在使用。

1945年,油佐剂开始应用于FMD疫苗,油佐剂疫苗对牛和猪均能产生良好的保护力,疫苗的免疫持续期长,并且在其中加入Tween-80,降低疫苗的黏度,黏度小、稳定性好和乳化简便的油佐剂一直在不断的发展和改进,如ISA206以及近些年来发展起来的“即用型”(Ready-to-use)油佐剂,将逐渐取代铝胶和皂甙等传统佐剂。

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