皮肤变态反应试验操规
皮肤光变态反应试验SkinPhotoallergyTest-中国食品药品检定研究院
皮肤光变态反应试验Skin Photoallergy Test1范围本方法规定动物皮肤光变态反应试验的基本原则、要求与方法本方法适用于化妆品原料和产品的安全性毒理学检测2规范性引用文件●光感作性。
化粧品の安全性評価に関する指針2015（日本化粧品工業連合会編，2015年11月27日出版，薬事日報社）●Photoallegy Testing. Dermototoxicity (US EPA, 1982)●化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则。
【H】GPT4-1。
国家食品药品监管总局。
2015年5月13日●THE SCCS NOTES OF GUIDANCE FOR THE TESTING OF COSMETICINGREDIENTS AND THEIR SAFETY EV ALUATION( 9 th revision, September 29th, 2015)●ICH Guidance S10 on Photosafety Evaluation of Pharmaceuticals Step5. ICH, January 2015 ●中药、天然药物免疫毒性（过敏性、光过敏反应）研究的技术指导原则。
【Z】GPT5-1。
国家食品药品监管总局。
2005年3月。
●Guidance for Industry -Photosafety Testing. (CDER FDA US DHHS, 2003)对欧盟而言，目前皮肤光过敏反应检测并无有效体外方法可供采用。
尽管如此，理论预期上，具有光变态特性的化学物可能在3T3 NRU PT试验中出现阳性结果。
目前有文献报道的体外光过敏检测方法包括：人外周血单核细胞衍生树突状细胞（PBMDC）表面CD86分子表达试验、人单核细胞株THP-1表面巯基/胺类光化试验、人角质朊细胞株NCTC 2544 细胞内IL-18含量测定等。
光变态反应动物试验现状：目前在欧洲，用于化妆品目的的动物测试已被禁止。
药物过敏试验技术操作流程
药物过敏试验技术操作流程主要包括患者信息收集、临床评估、皮肤试验、血清学试验、治疗及监测等步骤。
下面详细介绍药物过敏试验技术操作流程。
1. 患者信息收集在进行药物过敏试验之前，首先需要收集患者基本信息，包括姓名、年龄、性别、过敏史、病史、现症状等。
同时还需要了解患者使用过的药物种类及反应情况，对于存在过敏症状的药物需要注意记录。
2. 临床评估在对患者进行药物过敏试验之前，需要进行临床评估，包括病史询问、体格检查等。
根据患者的病史和临床表现，可以初步判断可能的过敏原，从而有针对性地进行后续的试验。
3. 皮肤试验皮肤试验是目前常用的一种药物过敏试验方法，包括皮肤划痕试验、皮肤注射试验和皮内试验等。
在进行皮肤试验之前，需要选择合适的药物过敏原和相应的控制物，遵循规范操作步骤进行试验。
通过观察皮肤的反应情况，可以初步判断出患者是否存在对该药物的过敏反应。
4. 血清学试验血清学试验包括皮下注射试验和血清特异IgE测定等。
在血清学试验中，可以检测出患者体内药物特异的IgE抗体水平，从而判断患者对该药物的过敏程度和敏感性。
血清学试验方法简单、准确，通常用于排除或确认药物过敏反应。
5. 治疗及监测在进行药物过敏试验之后，需要根据检测结果制定相应的治疗方案，并进行密切监测。
对于有过敏反应的患者，需要给予相应的药物治疗，同时密切观察患者的症状变化和血液生化指标。
如果出现严重的过敏反应，需要立即采取相应的急救措施。
总之，药物过敏试验技术操作流程包括患者信息收集、临床评估、皮肤试验、血清学试验、治疗及监测等步骤。
通过对患者进行综合评估和相应的试验检测，可以有效地判断患者对药物的过敏情况，从而制定出合理的治疗方案，保障患者的健康和安全。
染发剂二羟吲哚毒理学验证实验与分析
二羟吲哚合成应用在国外已有30多年历史。
国内外多年研究发现，二羟吲哚有天然黑色染发作用，还具有抗菌、清除自由基和抗紫外辐射等功效。
SCCP 早在18年前就公布了二羟吲哚的染发剂安全性评价结果和使用推荐浓度。
本文通过对国产二羟吲哚进行相关毒理学项目的重复验证，将实验结果同国际实验室相应项目的结果进行比较，为中国化妆品新原料的批准提供科学依据。
根据中国《化妆品新原料申报与审评指南》规定，本实验采用《化妆品技术规范2015版》中动物急性经口和经皮毒性、皮肤和眼刺激性/腐蚀性、皮肤变态反应性、皮肤光毒性、皮肤光变态反应性、基因突变、染色体畸变和90天经皮染毒实验方法，进行相关毒理学实验，对结果进行比较评价。
实验结果显示，小鼠经口急性毒性，雄性LD50＞3.690g/kg BW，雌性LD50＞3.160g/kg BW，毒性分级为低毒。
急性经皮毒性试验LD50>2.180g/kg BW，毒性分级为微毒性。
急性眼刺激性/腐蚀性试验反应分级为微刺激性。
皮肤变态反应试验致敏强度为轻致敏性。
皮肤刺激性/腐蚀性试验反应分级为轻刺激性。
基因突变和染色体畸变试验均为阴性。
皮肤光毒性和皮肤光变态反应均为阴性。
亚慢性经皮毒性最大无作用剂量为20 mg/kg bw/day。
所验项目同国际组织SCCP 公布的结果比较基本一致，大部分项目的结果优于国外。
实验结果显示，本土相关产品二羟吲哚在染发剂中以0.5%浓度添加使用是安全的。
染发剂二羟吲哚毒理学验证实验与分析文｜李忠军 徐建人 李镇军 胡烨敏 樊丽妃 李 奇 焦 红*Hair dye ingredient氧化性染发剂”[2]。
欧盟委员会健康和消费者保护总局公共卫生及风险评估委员会（以下简称：“SCCP”）0952/05 《关于对二羟基吲哚的意见》报道了多个国际实验室依据GLP 程序和OECD 方法指南，对物质代码为P36和P39的二羟吲哚样品开展毒理学实验，据此做出安全性评估意见和推荐使用浓度[3]。
消毒产品检验技术规范
消毒产品检验技术规范Technical Standard for Testing Disinfection Products 1 消毒产品消毒效果检验技术规范1.1 消毒剂杀微生物试验1.1.1 适用范围主要适用于消毒剂鉴定和日常检测，用来评价各种用途的消毒剂对微生物的杀灭效果。
按此方法进行的试验，只是对消毒剂的杀菌能力的重要方面进行验证，侧重反映消毒剂的实用剂量与杀菌能力。
不能反映消毒剂的全面特性。
1.1.2 菌悬液与菌片的制备1.1.3 活菌培养计数技术1.1.4 残留消毒剂的去除方法1.1.5 中和剂鉴定试验1.1.6 物理法去除残留消毒剂试验1.1.7 细菌定量杀灭试验1.1.8 杀灭分枝杆菌试验1.1.9 真菌杀灭试验1.1.10 病毒灭活试验1.1.11 能量试验1.1.12 各种因素对消毒剂杀菌作用影响的测定1.2 消毒剂模拟现场和现场消毒鉴定试验1.2.1 消毒剂对食（饮）具消毒效果的模拟现场鉴定试验1.2.2 消毒剂对医疗器械的消毒模拟现场试验1.2.3消毒剂对医疗器械的模拟现场灭菌试验1.2.4 连续使用稳定性试验1.2.5消毒剂对手消毒的模拟现场试验1.2.6消毒剂对手消毒现场试验1.2.7 消毒剂对皮肤消毒的模拟现场试验1.2.8消毒剂对皮肤消毒现场试验1.2.9消毒剂对其他表面消毒模拟现场鉴定试验1.2.10消毒剂对其他表面消毒现场鉴定试验1.3 空气消毒效果鉴定试验1.3.1 目的检测消毒器械或消毒剂对空气中细菌的杀灭和清除作用，以验证其对空气的消毒效果。
其他方法对空气的消毒效果，亦可参照本试验的有关原则进行。
1.3.2 试验设备和器材1.3.3 试验阶段1.3.4 实验室试验与模拟现场试验操作程序1.3.5 现场试验1.4 水的消毒效果鉴定试验1.4.1生活饮用水消毒效果鉴定1.4.1.1 目的检测生活饮用水消毒剂与消毒器械的杀菌效果，以验证其对生活饮用水消毒能否达到卫生合格标准。
结核菌素皮肤试验方法
结核菌素皮肤试验方法结核菌素皮肤试验的方法为皮内注射法，这是国际通用的标准结核菌素皮肤试验方法，该方法反应比较敏感，注射剂量准确（一）操作前准备1. 物品准备（1）测量卡尺（或小塑料尺）；（2）标记硬结边缘的圆珠笔；（3）1ml一次性蓝芯注射器；4～5号针头；（4）75%消毒酒精及消毒棉签；（5）结核菌素试剂；（6）便携式冰桶或冰包；（7）健康教育材料；（8）结核菌素测试记录表等；（9）应急处理器材及药品等。
2. 操作者准备（1）核对结核菌素试剂品名、剂量及有效期，如有沉淀、安瓿破损及过期者不得使用，用时应记录批号；（2）结素的保存应冷藏，不可直接放在冰上或泡在冰水中；（3）操作者洗手并戴上手套；（4）应在室内进行注射，避免日光直接照射；（5）确认受试者信息，向受试者解释进行结核菌素皮肤试验的目的；（6）告知受试者注射后不要在注射部位洗、擦，并保持局部干燥、清洁；（7）告知受试者局部出现瘙痒、红肿、水疱时的处理方法，在注射后48～72小时返回看结果；（8）安瓿打开30分钟未用完应该废弃；（9）应严格执行无菌造作；（10）注射前注意儿童健康状况，禁忌与卡介苗和其他生物制品同时注射。
（二）皮内注射操作步骤1.注射部位选择：位于左前臂掌侧中下1/3交界处，避开瘢痕，血管和皱褶。
如近期（2周内）已做过结核菌素皮肤试验，则选择在第一次注射部位斜上方3-4cm处，或取右前臂；2.局部消毒：用75%酒精消毒皮肤；3.皮内注射：待酒精蒸发干燥后，用1ml注射器吸取0.1mlPPD，刻度和针孔斜面一致向上；托住被试验者的前臂并绷紧皮肤；将针尖平放在绷紧皮肤上，稍向下压，呈5°～10°角刺入皮内，不见针孔即可；一手固定针头，一手推药，缓慢准确地注射0.1ml （含5IUPPD或2IUPPD），以局部出现7～8mm大小的圆形橘皮样皮丘为宜，不要揉摩，将针稍转后退出；4. 每注射一人一针一管，需要更换注射器和针头；5. 注射后观察：注射后嘱受试者原地休息，观察30分钟后，如无不适方可离开。
变态反应试验的护理查房
04
提高患者对护理服务的满意度和认 可度
汇报人：_
支气管哮喘的护理
01
保持室内环境清洁，避免过敏原
03
监测患者呼吸状况，及时发现病情变化
02
指导患者正确使用吸入器，确保药物有效 到达肺部
04
鼓励患者进行适当的运动，增强体质，提 高免疫力
过敏性鼻炎的护理
01
避免接触过敏原：避免 接触花粉、尘螨、宠物 毛发等过敏原
02
药物治疗：使用抗组胺 药、鼻用糖皮质激素等 药物进行治疗
穿着宽松衣物：穿 着宽松、透气的衣 物，避免皮肤摩擦。
避免高温：避免高 温环境，以免加重 病情。
饮食调理：注意饮 食调理，避免食用 可能引起过敏的食 物。
保持良好的生活习 惯：保持良好的生 活习惯，避免熬夜、 过度劳累等。
过敏性休克的护理
保持呼吸道通畅，必要时进 行气管插管
及时补充液体，纠正电解质 紊乱
变态反应发生后的护理措施
及时给予抗过敏药物，如肾 上腺素、抗组胺药等
保持环境清洁，避免接触过 敏原
指导患者正确使用药物，避 免滥用药物
保持呼吸道通畅，防止 窒息
密切观察生命体征，如 血压、心率、呼吸等
加强心理护理，减轻患 者焦虑和恐惧
定期随访，监测病情变 化，及时调整治疗方案
患者教育：避免过敏原
06
神经系统症状：如头痛、头晕、失眠等
眼部症状：如眼痒、流泪、结膜充血等
预防变态反应的方法
01
02
03
04
避免接触过敏原： 保持良好的生活 避免接触已知的 习惯：保持良好 过敏原，如食物、 的作息，避免过 药物、花粉等。 度劳累，保持良
好的心态。
什么是变应原检测？
什么是变应原检测？江油市厚坝镇卫生院检验科四川江油 621715伴随着我国医学技术的不断提高，大部分的传统的疑难杂症都得到了有效解决，以往的不治之症也有新的攻破方向与治疗思路。
但变态反应性疾病依旧是我国发病率极高的临床疾病，在皮肤科接诊当中，有相对一大部分的疾病都属于过敏性疾病的范畴，为此本文将对临床变应原检测的四种操作方法进行解释，并从临床检验方面说明什么是变应原检测。
1、什么变应原？变应原又称为过敏原，凡是能够引起人体产生超敏反应的抗原类物质都可称为变应原。
而超敏反应又称为变态反应，是一种有害的、异常的、病理性的免疫反应，目前我国的医学研究水平尚未达到能够对变应原的发生原因与表现进行分析的水平，医学领域对此说法各执一词，不同的医学分科都拥有不同的看法与观点。
但按照变应原的病理机制进行分类划分的话，可以大致分为速发型、细胞毒型、免疫复合型、迟发型四种类型。
按照抗原种类进行划分，变应原可大致分为两类。
一种是完全抗原体，例如微生物、螨虫、寄生虫、植物花粉、变异种类动物血清等等。
而另一种是半抗原体，例如医用药物或者一些化学制剂等等。
除此之外，当自身成分发生变异时，也有可能引起超敏反应的产生。
关于变应原的划分种类各式各样，根据不同的划分标准所划分出来的变应原种类也是大相径庭。
在医学临床研究当中，通过变应原检测可以明确过敏反应患者所过敏的主要物质，并及时将患者与该类物质进行隔离，有利于患者病情的恢复治疗。
如果，不对患者进行变应原检测的话，当患者再次接触此类物质时，有很大的概率会引起过敏反应的复发，严重者甚至会加重患者病情，所以一旦当患者确诊为过敏反应，就应该及时就医，配合医院的变应原检测并接受治疗。
2、临床变应原检测的操作方法。
所谓的变应原检测，就是对能够引起患者超敏反应的抗原体进行检测，对患者的过敏物质进行明确。
常用的变应原检测方法主要包括四种，分别是：斑贴试验、划破试验、皮内试验和变应原检测体外试验。
青霉素皮肤试验临床操作专家共识(2022)
青霉素皮肤试验临床操作专家共识（2022）青霉素类药物抗菌活性强、抗菌谱广、毒性低，是具有重要临床价值且广泛应用的抗菌药物。
变态反应为青霉素类最常见的不良反应，I、II和In 型变态反应总发生率为3%~10%,最严重的是I型速发型过敏反应，即过敏性休克，发生率占用药人数的0.4In.5瓦病死率为0.Ik《中国药典临床用药须知（2015年版）》规定：使用青霉素类药物前需做青霉素皮肤敏感试验，阳性反应者禁用。
国内一项针对45家综合公立医院青霉素类药物皮肤试验执行情况调查中显示，34家（占75.6%）医院采用青霉素类药物原药皮试，6家（占13.3%）医院采用普通青霉素皮试和原药皮试双皮试，仅有5家（占11.1%）医院采用普通青霉素皮试。
一、青霉素皮试适用情况及要求1.青霉素皮试适用情况青霉素皮试适用于青霉素及其他半合成青霉素类药物使用前，如节星青霉素、阿莫西林、氨苇西林、哌拉西林及青霉素类复方制剂。
青霉素皮试禁用于：近4周内发生过速发型过敏反应者；过敏性休克高危人群,如哮喘控制不佳、小剂量过敏原导致严重过敏反应病史等；有肥大细胞增多症、急慢性尊麻疹等皮肤疾病。
2.进行青霉素皮试的要求青霉素类药物在使用过程中停药72h以上者，需重新做皮试。
既往青霉素皮试阳性或有过敏史者需充分了解过敏反应类型及发生时间,临床医师进行综合评估后方能确定患者是否可以再次试验，并提前备好抢救药品及设备。
二、青霉素皮试操作流程1.青霉素皮试前准备1.1操作人员准备操作人员服装整洁、洗手、戴口罩，必要时戴手套。
1.2患者评估评估患者既往史、过敏史、用药史。
皮试前需详细询问患者是否有青霉素类、头袍菌素类或其他B-内酰胺类抗生素过敏史，有无个人或家族变态反应性疾病史，并详细询问过敏反应症状，如胸闷、瘙痒、面部发麻、发热等。
1.3抢救用药及用物准备①消毒剂：对乙醇不过敏的成人患者采用75%乙醇消毒皮肤，儿童及乙醇过敏者采用0.9%氯化钠注射液清洁皮肤，不建议使用碘伏消毒。
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五、皮肤变态反应试验操规
目的
确定重复接触化妆品及其原料对哺乳动物就是否可引起变态反应及其程度。
范围
本操规用于动物皮肤变态反应试验的基本方法。
本操规适用于化妆品原料及其产品安全性毒理学检测。
1 依据
中华人民共与国卫生部《化妆品卫生规范第二部分第6章:皮肤变态反应试验》
中华人民共与国国家标准《GB/T16886、10-2005医疗器械生物学评价第10部分:刺激
与迟发型超敏反应试验》。
2 设备与耗材
2,4-二硝基氯代苯,肉桂醛,2-巯基苯并噻唑或对氨基苯酸乙酯,弗氏完全佐剂、无
菌水、80%乙醇、丙酮、刮毛器、脱毛膏、EP管外科手套、口罩、手术服、不同规格无
菌注射器、一次性无菌纱布等。
3 受试动物
3、1 来源:西安交通大学实验动物中心
3、2 动物种类:白化豚鼠20只:300～500 g,2~3月龄,雌雄兼半,雌鼠无孕。
3、3 饲养条件:全价营养颗粒饲料喂食,自由采食,自由饮水,室温21±2℃,相对湿度40~70% 。
4试验步骤
4、1材料制备
受试物浓度为不能引起皮肤刺激反应的最高浓度。
水溶性受试物可用水或用无刺激
性表面活性剂作为赋形剂,其它受试物可用 80%乙醇 (诱导接触)或丙酮(激发接触)作
赋形剂。
4、2试验方法
4、2、1 试验准备
a、取白化豚鼠20只,随机分成2组,对照组(10只),试验组(10只)、。
适应环境一周后,
正式试验前一天,每只豚鼠背前区备皮4cm×6cm。
b、无论在诱导阶段或激发阶段均应对动物进行全面观察包括全身反应与局部反应,并作完整记录。
c、试验方法可靠性的检查:实验开始前选两只备用豚鼠,使用4、2、1的局部诱导阶段方法进行预实验确定实验的可行性。
4、2、1 试验过程
(1)试验前约 24h,将豚鼠背部左侧去毛,去毛范围为 4cm2~6cm2。
(2)局部诱导阶段
对去毛区域采用75%酒精消毒,覆盖5层约8cm2的滴加适量样品浸提液的擦镜纸,使其贴敷在肩胛骨内侧皮肤上,再依次覆盖3*3cm大小的塑料薄膜、纱布,再用医用无刺激胶带固定使其不脱落封闭固定 6h。
观察记录敷贴后动物异常情况,第 7d 与第 14d 以同样方法重复一次。
(对照组按照同样方法进行)
(3 )激发阶段
末次诱导后 14d~28d, 将约 0、2mL 的受试物涂于豚鼠背部右侧 2cm×2cm去毛区(接触前 24h 脱毛) ,然后用二层纱布与一层玻璃纸覆盖,再以无刺激胶布固定 6h。
(对照组按照同样方法进行)
(4)动物观察
激发接触后 24h与 48h 观察皮肤反应,按照表1给出的分级标准对每一激发部位与每一观察时间皮肤红斑与水肿反应进行描述与分级,将观察结果填写至表2、
表1变态反应实验皮肤反应评级
表2试验结果
5结果判定
当受试物组动物出现皮肤反应积分≥2 时,判为该动物出现皮肤变态反应阳性,按表 3 判定受试物的致敏强度。
按表 3 判定受试物的致敏强度。
如激发接触所得结果仍不能确定,应于第一次激发后一周,给予第二次激发,对照组作同步处理
表3致敏
强度
注:当致敏率为0时,可判断为未见皮肤变态反应
6、豚鼠最大值试验
6、1采用完全福氏佐剂(FCA)皮内注射方法检测致敏的可能性。
6、2实验方法
6、2、1 试验过程
(1)动物数
试验组至少用10只,对照组至少5只。
如果试验结果难以确定受试物的致敏性,应增加动物数,试验组20只,对照组10只。
(2)剂量水平
诱导接触受试物浓度为能引起皮肤轻度刺激反应的最高浓度, 激发接触受试物浓度为不能
(3)皮内诱导阶段
按下图所示(A、B、C),在每只动物去毛的肩胛骨内侧从头向尾成对皮内注射0、1mL,共注射6个点。
三个对称点, 每点皮内注射0、1mL下述溶液。
试验组:
A点 1:1(v/v)FCA/水或生理盐水的混合物。
B点耐受浓度的受试物。
C点用1:1(v/v)FCA/水或生理盐水配制的受试物,浓度与第2点相同。
对照组:注射部位同实验组。
A点 1:1(v/v)FCA/水或生理盐水的混合物。
B点未稀释的溶剂。
C点用1:1(v/v)FCA/水或生理盐水配制的浓度为 50%(w/v)的溶剂。
(4)局部诱导阶段
将涂有0、5g(mL)受试物的2cm×4cm滤纸敷贴在上述再次去毛的注射部位,然后用两层纱布,一层玻璃纸覆盖,无刺激胶布封闭固定48h。
对照组仅用溶剂作诱导处理。
(5)激发阶段
将豚鼠躯干部去毛,用涂有0、5g(mL)受试物的2cm×2cm滤纸片敷贴在去毛区,然后再用两层纱布,一层玻璃纸覆盖,无刺激胶布封闭固定24h。
对照组动物作同样处理。
如激发接触所得结果不能确定,可在第一次激发接触一周后进行第二次激发接触。
对照组作同步处理。
(6)动物观察
激发接触后24h与48h观察皮肤反应,按照表1给出的分级标准对每一激发部位与每一观察时间皮肤红斑与水肿反应进行描述与分级,将观察结果填写至表4, 当试验组动物皮肤反应积分≥1时,应判为变态反应阳性。
应判为变态反应阳性,按表3对受试物进行致敏强度分级。
表3致敏
强度
注:当致敏率为0时,可判断为未见皮肤变态反应
表4试验结果。