96孔细胞培养板
培养皿规格细胞计数
/item.htm?id=131********&ad_id=&am_id=&cm_id=&pm_id=培养器皿面积（cm2）培养液量（ml）细胞量96 孔培养板0.32 0.1 10524孔培养板 2 1.0 5×10512孔培养板 4.5 2.0 1066孔培养板9.6 2.5 2.5×1063.5 cm 培养皿8 3.0 2×1066 cm 培养皿21 5.0 5.2×10610 cm 培养皿55 10.0 13.7×10625cm2 培养瓶25 5.0 5×10675cm2 培养瓶75 15～30 2×107细胞计数（转载）来源：苌生科的日志实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。
具体操作：一、准备工作：取一瓶传代的细胞，待长成单层后以备使用。
二、细胞悬液制备：细胞悬液的制备方法是用0.25％的胰蛋白酶液消化、PBS液洗涤后，加入培养液（或Hanks液或PBS等平衡盐溶液），吹打制成待测细胞悬液。
三、细胞计数：1.盖好盖玻片：取一套血球计数板，将特制的盖玻片盖在血球计数槽上。
2.制备计数用的细胞悬液：用吸管吸5滴细胞悬液到一离心管中，加入5滴台盼蓝染液（0.4％）或苯胺黑，活细胞不会被染色，加入染液后就可以在显微镜下区别活细胞和死细胞。
3.将细胞悬液滴入计数板：将待测细胞悬液吹均匀，然后吸取少量悬液沿盖片边缘缓缓滴入，要保证盖片下充满悬液，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。
4.统计四个大格的细胞数：将血球计数板放于显微镜的低倍镜下观察，并移动计数板，当看到镜中出现计数方格后，数出四角的四个大格（每个大格含有16个中格）中没有被染液染上色的细胞数目。
5.计算原细胞悬液的细胞数L：按照下面公式计算细胞密度：（细胞悬液的细胞数）/ml＝（四个大格子细胞数/4)×2×104说明：公式中除以4因为计数了4个大格的细胞数。
细胞活力测试实验报告
通过本实验，了解细胞活力测试的基本原理和方法，掌握MTT法（MTT比色法）测定细胞活力的操作步骤，并分析细胞在不同条件下的活力变化。
实验时间：2023年4月10日实验地点：细胞生物学实验室实验材料：1. 细胞系：人肺上皮细胞（A549）2. MTT试剂：3-（4，5-二甲基噻唑-2-yl）-2，5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）3. DMSO（二甲基亚砜）4. 细胞培养试剂：DMEM培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素5. 细胞培养瓶、细胞培养板、移液器、吸管、试管、离心机、酶标仪等实验方法：1. 细胞培养：将人肺上皮细胞（A549）接种于培养瓶中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
2. 细胞传代：待细胞生长至约80%融合时，用0.25%胰蛋白酶消化细胞，传代至新的培养瓶中。
3. 实验分组：将传代后的细胞分为实验组和对照组，实验组细胞在特定条件下培养，对照组细胞在正常培养条件下培养。
4. 细胞接种：将实验组和对照组细胞分别接种于96孔细胞培养板中，每孔接种细胞数量为5×104个。
5. 细胞培养：将细胞培养板置于37℃、5%CO2的培养箱中培养24小时。
6. MTT实验：向每孔细胞中加入20μl MTT试剂，继续培养4小时。
7. 终止培养：弃去孔内液体，向每孔加入150μl DMSO，振荡混匀。
8. 比色：用酶标仪在490nm波长下测定各孔的吸光度（OD）值。
9. 数据分析：计算实验组和对照组的细胞活力，并比较两组间的差异。
1. 实验组细胞活力较对照组显著降低，说明特定条件下细胞活力受到抑制。
2. 不同浓度药物处理的实验组细胞活力呈剂量依赖性下降，说明药物浓度越高，细胞活力抑制越明显。
实验结论：通过MTT法测定细胞活力，可以有效地评估细胞在不同条件下的生长状态。
本实验结果表明，特定条件下细胞活力受到抑制，且药物浓度越高，细胞活力抑制越明显。
实验讨论：1. MTT法是一种简单、快速、灵敏的细胞活力测定方法，适用于多种细胞系和药物筛选实验。
病毒感染力的滴定(TCID50的测定)
实验四病毒感染力的滴定（TCID50的测定）一、实验目的了解病毒感染力测定的几种常用方法，掌握半数细胞培养物感染量TCID50的操作步骤、计算方法及含义。
二、测定病毒感染力的方法( 50% lethal dose)：用动物或鸡胚来检测半数致死量LD50半数鸡胚感染量EID(egg 50% infective dose)：用鸡胚来检测50（50% tissue culture infective dose)：用细胞半数细胞培养物感染量TCID50来检测蚀斑形成单位（plaque forming unit，PFU）：用细胞来检测三、材料1、长满单层的细胞1瓶2、胰酶、吸球、吸管、生长液3、96孔细胞培养板4、加样器、枪头5、病毒液（PRV）四、TCID50的操作步骤1、在青霉素瓶或离心管中将病毒液作连续10倍的稀释，从10-1-10-10。
2、将稀释好的病毒接种到96孔微量培养板中，每一稀释度接种一纵排共8 孔，每孔接种100µl。
3、在每孔加入细胞悬液100µl，使细胞量达到2~3×105个/ml。
4、设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排。
（100µl生长液+100µl细胞悬液）5、逐日观察并记录结果，一般需要观察5-7天。
6、结果的计算，按Reed-Muench两氏法或Karber法五、TCID50的计算方法1、Reed-Muench两氏法CPE：Cytopathic effect距离比例＝（高于50%病变率的百分数-50%）/（高于50%病变率的百分数-低于50%病变率的百分数）＝（91.6-50）/（91.6-40）＝ 0.8=距离比例×稀释度对数之间的差+高于50%病变率的稀释度的对数lgTCID50=0.8×(-1)+(-3)=-3.8TCID=10-3.8/0.1ml50含义：将该病毒稀释103.8接种100µl可使50%的细胞发生病变。
MTT试验的一些细节问题
MTT试验的一些细节问题MTT试验的一些细节问题细胞：细胞：1.选择适当的细胞接种浓度。
一般情况下，96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。
但由于不同细胞贴壁后面积差异很大，因此，在进行MTT试验前，要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止致细胞过满。
这样，才能保证MTT结晶形成酌量与细胞数呈的线性关系。
否则细胞数太多敏感性降低，太少观察不到差异。
2.药物浓度的设定。
一定要多看文献，参考别人的结果再定个比较大的范围先初筛。
根据自己初筛的结果缩小浓度和时间范围再细筛。
切记！否则，可能你用的时间和浓度根本不是药物的有效浓度和时间。
3. 时间点的设定。
在不同时间点的测定OD值，输入excel表，最后得到不同时间点的抑制率变化情况，画出变化的曲线，曲线什么时候变得平坦了（到了平台期）那个时间点应该就是最好的时间点（因为这个时候的细胞增殖抑制表现的最明显）。
4.培养时间。
200ul的培养液对于10的4～5次方的增殖期细胞来说，很难维持68h，如果营养不够的话，细胞会由增殖期渐渐趋向G0期而趋于静止，影响结果，我们是在48h换液的。
5.MTT法只能测定细胞相对数和相对活力，不能测定细胞绝对数。
做MTT时，尽量无菌操作，因为细菌也可以导致MTT比色OD值的升高。
6.理论未必都是对的。
要根据自己的实际情况调整。
7.实验时应设置调零孔，对照孔，加药孔。
调零孔加培养基、MTT、二甲基亚砜。
对照孔和加药孔都要加细胞、培养液、MTT、二甲基亚砜，不同的是对照孔加溶解药物的介质，而加药组加入不同浓度的药物。
8.避免血清干扰。
用含15％胎牛血清培养液培养细胞时，高的血清物质会影响试验孔的光吸收值。
由于试验本底增加，会试验敏感性。
因此，一般选小于10％胎牛血清的培养液进行。
在呈色后，尽量吸净培养孔内残余培养液。
实验步骤贴壁细胞：1.收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至1000-10000孔，（边缘孔用无菌PBS填充）。
平板细胞克隆实验报告
实验目的：本研究旨在通过平板细胞克隆实验检测细胞的增殖能力，评估不同处理条件下细胞的生长状态和克隆形成率。
实验材料：1. 细胞样品：人胚胎肾上皮细胞（HEK293）2. 培养基：DMEM（高糖）3. 胎牛血清（FBS）4. 胰蛋白酶5. PBS缓冲液6. 多聚甲醛7. Giemsa染液8. 培养皿9. 培养箱10. 显微镜实验方法：1. 取对数生长期的HEK293细胞，用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞。
2. 将细胞悬液以每孔1000个细胞接种于96孔培养板中，每组设置3个复孔。
3. 分别在实验组和对照组中加入不同浓度的处理试剂（如药物、基因沉默等）。
4. 将培养板置于37℃、5%CO2的培养箱中培养2-3周。
5. 观察细胞生长状态，当培养皿中出现肉眼可见的克隆时，终止培养。
6. 弃去上清液，用PBS小心浸洗2次。
7. 加入适量多聚甲醛固定细胞15分钟。
8. 去固定液，加入适量Giemsa染液染色10-30分钟。
9. 用流水缓慢洗去染色液，晾干。
10. 在显微镜下观察并计数克隆数。
实验结果：1. 实验组与对照组相比，克隆数量显著减少，表明处理试剂对细胞增殖具有抑制作用。
2. 不同浓度的处理试剂对细胞增殖的抑制作用存在差异，其中低浓度处理试剂对细胞增殖的影响较小，而高浓度处理试剂对细胞增殖的抑制作用明显增强。
3. 克隆形成率随处理试剂浓度的增加而降低，表明细胞增殖能力受到抑制。
实验讨论：平板细胞克隆实验是一种常用的细胞增殖检测方法，可以有效地评估细胞的生长状态和克隆形成能力。
本研究结果表明，处理试剂对HEK293细胞的增殖具有抑制作用，且抑制作用与处理试剂的浓度呈正相关。
这表明，通过平板细胞克隆实验可以初步筛选出对细胞增殖具有抑制作用的化合物或基因。
实验结论：本研究通过平板细胞克隆实验检测了HEK293细胞的增殖能力，并评估了不同处理条件下细胞的生长状态和克隆形成率。
实验结果表明，处理试剂对细胞增殖具有抑制作用，且抑制作用与处理试剂的浓度呈正相关。
细胞毒性试验总结
（一）实验前应明确的问题1.选择适当的细胞接种浓度。
一般情况下，96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。
但由于不同细胞贴壁后面积差异很大，因此，在进行MTT试验前，要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止致细胞过满。
这样，才能保证MTT结晶形成酌量与细胞数呈的线性关系。
否则细胞数太多敏感性降低，太少观察不到差异。
2.药物浓度的设定。
一定要多看文献，参考别人的结果再定个比较大的范围先初筛。
根据自己初筛的结果缩小浓度和时间范围再细筛。
切记！否则，可能你用的时间和浓度根本不是药物的有效浓度和时间。
3. 时间点的设定。
在不同时间点的测定OD值，输入excel表，最后得到不同时间点的抑制率变化情况，画出变化的曲线，曲线什么时候变得平坦了（到了平台期）那个时间点应该就是最好的时间点（因为这个时候的细胞增殖抑制表现的最明显）。
4.培养时间。
200ul的培养液对于10的4～5次方的增殖期细胞来说，很难维持68h，如果营养不够的话，细胞会由增殖期渐渐趋向G0期而趋于静止，影响结果，我们是在48h换液的。
5.MTT法只能测定细胞相对数和相对活力，不能测定细胞绝对数。
做MTT时，尽量无菌操作，因为细菌也可以导致MTT比色OD值的升高。
6.理论未必都是对的。
要根据自己的实际情况调整。
7.实验时应设置调零孔，对照孔，加药孔。
调零孔加培养基、MTT、二甲基亚砜。
对照孔和加药孔都要加细胞、培养液、MTT、二甲基亚砜，不同的是对照孔加溶解药物的介质，而加药组加入不同浓度的药物。
8.避免血清干扰。
用含15％胎牛血清培养液培养细胞时，高的血清物质会影响试验孔的光吸收值。
由于试验本底增加，会试验敏感性。
因此，一般选小于10％胎牛血清的培养液进行。
在呈色后，尽量吸净培养孔内残余培养液。
（二）实验步骤贴壁细胞：1.收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至1000-10000孔，（边缘孔用无菌PBS填充）。
MTT法检测细胞相对数和相对活力
MTT法检测细胞相对数和相对活力
MTT法检测细胞相对数和相对活力
一、实验原理
MTT比色法是一种检测细胞存活率和增殖率的方法，活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶的蓝紫色结晶物并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲亚砜(DMSO)能溶解细胞中的蓝紫色结晶物，其颜色深浅与酶活力成正比，所以测定570nm 波长的O.D值可以反映琥珀酸脱氢酶活力高低，间接反映活细胞数量多少。
二、实验目的
了解并掌握MTT法的基本原理及基本过程。
三、实验器具
96孔细胞培养板、微量加样器、吸头、吸头盒、酶联免疫检测仪、显微镜、细胞计数板等。
四、实验方法
1.细胞接种: 将处于对数生长期的细胞用培养基制成2×105细胞/ml的悬液，用微量加样器接种于96孔板中,每孔100ul, 边缘孔中不加细胞，仅加培养基作为无细胞空白。
37℃培养箱中培养，使细胞贴壁。
2.加药: 弃去培养掖，于相应实验孔中加不同浓度的药物，每孔100ul，留数孔不加药，而加入等体积培养液作空白对照，继续培养24h。
3.加MTT: 弃培养液，每孔中加入200ul D-Hanks洗一次，每孔再加入100ul MTT(1mg/ml)，37o C继续培养4小时。
4.洗板:吸去MTT，每孔中加入200ul D-Hanks洗一次,最后吸干孔内液体。
5.溶解: 每孔中加入二甲亚砜(DMSO)200ul，溶解细胞内MTT，室温下放30min, 并不时摇动。
6.测定: 在酶联免疫仪上于570nm波长处测定O.D值。
以无细胞空白孔为零点，作好记录。
单克隆培养实验报告
一、实验目的1. 掌握单克隆抗体制备的基本原理和实验技术。
2. 熟悉杂交瘤细胞培养、筛选和克隆的实验操作。
3. 提高实验技能和数据分析能力。
二、实验原理单克隆抗体是由单个B淋巴细胞产生的特异性抗体，具有高度特异性和亲和力。
本实验采用杂交瘤技术制备单克隆抗体，具体步骤如下：1. 免疫动物：选择合适的抗原免疫小鼠，使其产生特异性抗体。
2. 融合：将免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合，形成杂交瘤细胞。
3. 筛选：通过ELISA等方法筛选出能分泌特异性抗体的杂交瘤细胞。
4. 克隆：将筛选出的杂交瘤细胞进行克隆化培养，确保抗体特异性。
5. 扩增：扩大培养克隆化的杂交瘤细胞，收集抗体。
三、实验材料1. 兔抗小鼠IgG抗体2. 兔抗小鼠IgG-HRP3. 酶联免疫吸附剂（ELISA）板4. 小鼠骨髓瘤细胞系（如SP2/0）5. 免疫小鼠脾细胞6. 96孔细胞培养板7. 24孔细胞培养板8. 50ml细胞培养瓶9. RPMI-1640培养基10. 10%胎牛血清11. 0.25%胰酶-EDTA12. 1%双抗13. 0.2%聚乙二醇（PEG）14. 离心机15. 酶标仪16. 紫外线照射灯17. 生物安全柜四、实验步骤1. 免疫动物：用兔抗小鼠IgG抗体免疫小鼠，待抗体产生后，取脾细胞。
2. 融合：将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞按照1:1比例混合，加入0.2% PEG，在室温下孵育30分钟，然后加入RPMI-1640培养基，置于37℃、5% CO2培养箱中培养。
3. 筛选：采用ELISA法筛选能分泌抗体的杂交瘤细胞。
首先包被ELISA板，加入兔抗小鼠IgG抗体，洗涤后加入杂交瘤细胞培养上清，再加入兔抗小鼠IgG-HRP，最后加入底物显色，读取OD值。
4. 克隆：将筛选出的阳性杂交瘤细胞进行克隆化培养。
将细胞铺板于96孔细胞培养板，每孔加入100μl细胞悬液，置于37℃、5% CO2培养箱中培养。
5. 扩增：将克隆化的杂交瘤细胞进行扩大培养。
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细胞培养板
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产品描述：
细胞培养板、皿系列产品选用进口光学透明纯聚苯乙稀制造。
本产品采用特殊工艺而成，使细胞达到最佳吸附状态，所有产品均以伽玛射线灭菌处理。
“博阳”细胞培养系列产品，能促进原生代细胞：如神经细胞传代细胞、如肿瘤细胞等动物与人体细胞生长和繁殖，产品已在国内外众多高校和科研机构、生物工程公司广泛使用。
技术参数：
货号品名规格数量块/箱BYA-1 细胞培养板6孔100
BYA-2 细菌培养板12孔100
BYA-3 细菌培养板24孔100
BYA-4 细菌培养板96孔100
货号品名规格数量块/箱BYA2 细胞培养板12孔
100
货号品名规格数量块/箱BYA32 细胞培养板24孔100。