生物分离工程实验-实验一
生物分离工程实验
生物分离工程实验实验一茶多酚标准曲线的测定仪器：紫外分光光度计，比色皿，天平，容量瓶，移液管，pH计、试管药品：没食子酸丙酯或茶多酚，酒石酸钾钠，硫酸亚铁，磷酸氢二钠，磷酸二氢钾。
方法：A溶液配制没食子酸丙酯标准溶液配制准确称取25mg没食子酸丙酯，蒸馏水溶液，移入25mL容量瓶并稀释至刻度，摇匀，配制成1mg/mL的标准溶液酒石酸亚铁溶液配制准确称取0.1g硫酸亚铁，和0.5g酒石酸钾钠，混合，蒸馏水溶解后移入100mL容量瓶，稀释至刻度，摇匀。
pH7.5磷酸盐缓冲液配制磷酸氢二钠：准确称取分析纯磷酸氢二钠2.969g，蒸馏水稀释溶解，移入250mL容量瓶，加水稀释至刻度，摇匀，为a液磷酸二氢钾：准确称取分析纯磷酸二氢钾，、2.2695g，蒸馏水溶解，移入250mL容量瓶，定容，B。
取A液体85mL，B液体15mL混合均匀，即成。
B．标准曲线绘制分别吸取0、0.25、0.50、0.75、1.0、1.25mL的没食子酸丙酯标准液于25mL容量瓶中，加入蒸馏水4mL，再加入酒石酸亚铁溶液5mL，用pH7.5的磷酸盐缓冲溶液稀释至刻度，摇匀，分光光度计在540nm处，1cm比色皿，分别测定吸光度。
空白参比操作同上，不加没食子酸丙酯。
以容量瓶中没食子酸丙酯的绝对含量mg为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，做线性回归。
C 样品测定取适量样品加入容量瓶，操作同上，没食子酸丙酯含量乘以换算系数1.5，求得茶多酚。
实验二超声法和回流法提取茶多酚的比较实验仪器：超声提取器、布氏漏斗、抽滤瓶、真空泵、烧瓶、量筒、分光光度计、比色皿、容量瓶等、实验试剂茶叶、纯净水、茶多酚（没食子酸丙酯）、硫酸亚铁、酒石酸钾钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾等操作方法1、材料准备称取一定量的茶叶，研钵粉碎。
备用2、提取A、超声提取法称取5g粉碎后茶叶末，放入烧瓶（塑料袋密封），加入100mL水，于超声提取器，50℃提取20min，抽滤，定容至100mL，待测。
生物分离工程实验
实验一絮凝技术预处理发酵液及其滤饼的质量比阻测定（见教材）实验三PEG/（NH4）2SO4 两水相系统的相图（见教材）实验二利用盐析和等电点沉淀法从牛奶中制备酪蛋白1 实验目的掌握盐析和等电点沉淀法的原理和基本操作。
2 实验原理乳蛋白广泛存在于乳制品中，牛奶中主要含有酪蛋白，酪蛋白在pH 4.8是沉淀，乳蛋白素则在pH=3左右才会沉淀。
利用这一性质可以先将降至4.8，或者是在加热至40℃的牛奶中加人硫酸钠，将酪蛋白沉淀出来。
酪蛋白不溶于乙醇，利用乙醇可以除去杂质。
将除掉酪蛋白的溶液pH调至3左右，使乳蛋白素沉淀析出。
可以得到乳蛋白素。
3实验器材烧杯；玻璃试管；离心管；磁力搅拌器；pH计；离心机等。
4试剂和材料⑴试剂与材料脱脂牛乳；无水硫酸钠；HCL；氢氧化钠；滤纸；pH试纸；浓盐酸；乙醇；0.2mol/L pH 4.8醋酸-醋酸钠缓冲液。
⑵缓冲溶液的配制0.2mol/L pH 4.8醋酸-醋酸钠缓冲液（先配A液与B液）：A液：0.2mol/L醋酸钠溶液称NaAC·3H2O 54.44g，定容至2000mL。
B液：0.2mol/L醋酸溶液，取醋酸（含量大于99.8%）12 mL定容至1000mL。
取A液1770mL，B液1230mL混合即得pH4.8的醋酸—醋酸钠缓冲液3000mL。
5操作步骤1）盐析法制备酪蛋白①将50mL牛乳倒至烧杯中，40℃搅拌；②方法一：在烧杯中缓缓加入10g无水硫酸钠，之后再继续搅拌10min；方法二：在搅拌下慢慢加入预热至40℃、pH 4.8的醋酸缓冲液100mL.用精密pH试纸或酸度计调pH至4.8。
③用细布过滤分别收集沉淀和滤液。
将沉淀放于30mL乙醇中倾倒于布氏漏斗中过滤除去乙醇溶液，抽干。
将沉淀从布氏漏斗中移出，在表面皿中展开除去乙醇，干燥后得到酪蛋白。
准确称量。
2）等电点沉淀法制备乳蛋白素将操作1）所得到的滤液置于烧杯中，一边搅拌，一边利用pH计测量酸度，并用盐酸调整pH至3。
生物物质分离工程实验(10级版本)
生物物质分离工程实验实验须知：1、认真预习理解每个实验的目的、原理、操作关键步骤和注意事项。
2、按时上课，迟到20分钟以上者建议重做实验；上实验课时须带实验指导、记录本和笔等。
3、分组后应固定，不能随意更换，不大声喧闹，遵守实验室规则。
4、实验前由教师讲解实验原理、实验具体操作方法以及如何写实验报告。
5、每次实验结束，每组的实验用具要清洗，并却待老师检查实验结果后，方能离开实验室6、学生每次实验要写出规范实验报告，报告数据必须如实记录。
7、教师根据实验操作情况、打扫卫生情况、实验报告及最后考核给出成绩（总分100份）。
（说明：生物工程专业本课程实验总学时为32个，因此安排11个实验生物技术专业本课程实验总学时为16个，因此安排6个实验，做前6个实验）2012年2月实验一有机溶剂萃取法中pH对表观分配系数的影响（第一次实验）一、实验目的和要求1.通过实验，加深对表观分配系数的理解并掌握其测定方法。
22.以红霉素为实验对象，了解pH在萃取工艺中的重要性。
二、实验原理1•红霉素为大环内酯类抗生素，呈弱碱性，在不同pH条件下，在水溶液和有机溶液中溶解度不同，故能达到不同程度的分配。
表观分配系数是指在一定温度和压力下，当分配达到平衡时溶质在萃取相和萃余相中总浓度之比，可通过实验方法测定。
对于弱电解质，溶液的pH对表观分配系数影响很大。
一元弱碱性物质溶液pH对表观分配系数K的关系式见式（1-6-4）1+10pK-pH式中：K0――热力学分配系数，在一定的温度和压力下是常数pk——化合物电离平衡常数的负对数由上式可知，随溶液pH升高，K值增大，有利于红霉素萃取到有机溶剂中。
反之，K 值减小，可将红霉素从有机相反萃取到水相。
2.利用红霉素在冰醋酸中被浓盐酸水解后，与对二甲氨基苯甲醛形成有色物质，并在486nm波长处有最大吸收值的特性，可测定其化学效价，从而计算出表现分配系数。
三、实验器材与试剂（一）器材精密电子天平，60ml分液漏斗，分光光度计，恒温水浴锅，pH酸度计，移液管，烧杯，量筒，试管，50ml容量瓶，称量瓶和温度计等。
生物分离工程实验教案
山西大同大学
生命科学学院教案
课程名称：生物分离工程实验
教材名称：生物分离工程实验
授课对象：11级生工1班
授课学期：2013-2014第二学期
讲课学时：32
授课教师：张睿、张弘弛
技术职务：讲师
工作单位：生科院生工系
编写时间：2014年4月
审阅意见：
温度t = ℃
编号
H2O
加量/g
(NH4)2SO4
溶液加量纯(NH
4
)2SO4
累计量/g
溶液累
计总量/g
PEG400
质量分
数/%
(NH4)2SO4
质量分数/% /ml/g
1 0.5
2 0.3
3 0.3
4 0.3
5 0.5
6 0.5
7 0.5
注：如果实验室的电子台秤（精确至0.01g)能做到每组一台，也可采用在电子台秤上称取质量的方式来加(NH4)2SO4溶液，这样就不需要通过密度转换，更直观。
五、思考题
（一）预习
1.简述两水相萃取中成相的原因。
2.说明实验数据的每步计算方法。
（二）实验结果和讨论
1.将实验结果列入表格，并作出相图。
2.实验操作中应注意哪些问题？分析试验误差。
生物分离工程实验
生物分离工程实验强调一下：下周一、二下午（3月31日、4月1日）一点半在生物楼411上实验，预习实验一、带讲义、不许迟到。
共5次课，缺席一次就没有成绩。
生物分离工程实验吴国峰郑春英二零一四年三月实验一凝胶色谱法分离蛋白质一、实验目的1. 掌握凝胶色谱的基本原理；2. 掌握凝胶色谱的基本操作；3. 了解物质在色谱柱中的洗脱行为与分配系数的关系。
二、实验原理本实验将蓝葡聚糖2000（分子质量2000kD ）、细胞色素c （分子质量17kD ）和DNFP-甘氨酸（分子质量0.5kD ）的混合物通过交联葡聚糖凝胶G-50（Sephadex G-50）的色谱柱，以蒸馏水为洗脱溶剂进行洗脱。
蓝葡聚糖2000分子量最大，全部被排阻在凝胶颗粒的间隙中，而未进入凝胶颗粒内部，因而洗脱速度最快，最先流出柱，其V e =V o 即K d =0。
DNFP-甘氨酸分子量最小，不被排阻而可完全进入凝胶颗粒内部，洗脱速度最慢，最后流出柱，其V e =V i +V o 即K d =1。
细胞色素c 分子量在上述二者之间，其洗脱速度居中。
可以从蓝、红、黄三种不同颜色直接观察到三种物质分离的情况，并通过洗脱体积计算V i 、V o 和各自的K d 。
d K 与e V 、0V 和i V 的关系见下式：d K 0e iV V V -= 式中 K d ——分配系数，表示其被排阻的程度，只与被分离物质分子的大小和凝胶颗粒孔隙的大小分布有关；V t ——柱体积，从柱的底板到凝胶沉积表面的体积，在色谱柱中充满凝胶的部分称为凝胶床；V 0——外水体积，色谱柱内凝胶颗粒间隙，这部分体积称外水体积，亦称间隙体积；V i ——内水体积，因为凝胶为三维网状结构，颗粒内部仍有空间，液体可进入颗粒内部，即分间隙的总和为内水体积，又称定相体积（不包括固体支持物的体积g V ）；V e ——峰洗脱体积，指被分离物质通过凝胶柱所需洗脱液的体积。
通常情况下，0＜K d ＜1，当K d ＞1时，说明凝胶对组分有吸附作用。
天津工业大学制药专业生物分离工程实验讲义
生物分离工程实验——超声波提取植物总黄酮分离提取及鉴定一、实验目的为充分利用天然植物资源，避免资源的浪费，探讨植物总黄酮的提取及鉴别方法。
二、实验原理采用超声波乙醇浸提法从植物材料（银杏叶或菊花）中提取黄酮类物质，对所提取的黄酮类物质进行验证，并用分光光度法测定含量。
利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，可加速植物材料中的有效成分进入溶剂，从而增加有效成分的提取率，缩短提取时间，并且还可避免高温对提取成分的影响。
三、实验材料原料：银杏叶、菊花或其它含黄酮化合物的植物材料，如新鲜芹菜买自市农贸市场。
试剂：95%乙醇AR；亚硝酸钠AR；硝酸铝AR；氢氧化钠AR；三氯化铝AR；盐酸AR；氨水AR；冰醋酸AR；醋酸乙酯AR；芦丁标准品（中国药品生物制品检定所）四、实验仪器KQ5200DB型数控超声波清洗器（超声工作频率40kHz、宁波新芝超声仪器有限公司）；UV 755B紫外可见分光光度计（上海分析仪器总厂）；ZF-I型三用紫外分析仪(上海顾村光电仪器厂)；SHB III循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）。
五、实验步骤（一）总黄酮成分提取取新鲜芹菜叶或干燥植物材料，烘干后粉碎。
称取粉末约6 g，加80 ml 95%乙醇，超声波提取0.5 h或不同时间，抽滤。
滤渣再加80 ml 95 %乙醇，再次超声波提取0.5 h，抽滤，合并两次滤液，减压回收乙醇至滤液仅剩5～7 ml为止，放置100 ml容量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，得样品液。
（二）定量实验-总黄酮的含量测定以芦丁为对照品测定植物材料中总黄酮的含量，加入铝离子试剂，同时控制适宜pH值，使黄酮化合物与铝盐形成络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。
1. 波长的选择取样品液适量，在0.30 ml 5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在420～700 nm波长范围测定络合物的吸光度，络合物于510 nm波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。
生化分离技术实验
实验一植物可溶性糖的测定一、实验目的加深对单糖、二糖、多糖化学性质的认识，进一步体会糖类化合物的分子结构与其化学性质的关系。
二、实验原理糖是多羟基醛、多羟基酮或它们的缩合物。
单糖及分子中含有半缩醛（酮）羟基的二糖都具有还原性，能将班氏试剂还原成砖红色的Cu2O沉淀。
蔗糖等不含有半缩醛（酮）羟基的糖则无还原性。
但蔗糖经水解生成了葡萄糖和果糖，因而水解液具有还原性。
多糖是由许多单糖缩合而成的高分子化合物，无还原性。
但多糖在酸存在下加热水解，可生成单糖，随之具有还原性。
淀粉为一多糖，经水解先生成糊精，再水解成麦芽糖，最终水解产物是葡萄糖，因此水解液也具有还原性，能与班氏试剂发生反应。
淀粉遇碘显蓝色，此反应很灵敏，常用于检验淀粉或碘。
糖在浓酸存在下，可与酚类化合物产生颜色反应。
糖在浓硫酸的作用下与α-萘酚反应显紫色，常用于糖类化合物的检出。
己酮糖与间-苯二酚- 盐酸试剂反应很快出现鲜红色，而己醛糖显色缓慢，两分钟后可出现微弱的红色，因此常用于区别酮糖（果糖）和醛糖（葡萄糖）。
三、实验仪器、试剂试剂的配制（1）班氏试剂的配制：称取柠檬酸钠20g，无水碳酸钠11.5g，溶于100ml热水中，在不断搅拌下把含2g硫酸铜晶体的20ml 水溶液慢慢加入。
溶液应澄清，否则需过滤。
（2）2淀粉溶液：将2g可溶性淀粉用10ml 蒸馏水调成糊状，加入90ml沸水中煮沸后冷却。
（3）0.1碘液：在1g碘和5g碘化钾中，加入尽可能少的蒸馏水使其溶解，然后用蒸馏水稀释为1000ml。
（4）α-萘酚试剂的配制：将10gα-萘酚溶于95乙醇中，再用同样的乙醇稀释至100ml，贮于棕色瓶中，一般用前才配制。
（5）间-苯二酚-盐酸试剂的配制：将0.05g间-苯二酚溶于50ml浓盐酸中，再用蒸馏水稀释至100ml。
四、实验方法和步骤（一）糖的还原性：取5支大试管，编号后各加入1ml班氏试剂，再分别加入2葡萄糖、2果糖、2麦芽糖、2蔗糖和2淀粉溶液各10滴。
新编生物分离实验讲义
10. 0.5N HCl 100ml 11. 0.02 mol/L pH 7.3 Tris-HCl 缓冲液 250ml 12. 0.02 mol/L pH 7.3 （含 0.2 mol 浓度 NaCl）Tris-HCl 缓冲液 250ml ㈡ 仪器 1. 研钵 1 个 2. 离心管 3 个 3. 滴管 3 个 4. 量筒 50ml 1 个 5. 水浴锅 1 个 6. 恒温水浴 7. 烧杯 100ml2 个，50ml 小烧杯 2 个 8. 高速冷冻离心机 9. 层析柱 10. 部分收集器 11. 磁力搅拌器及搅拌子 12. 玻璃砂漏斗 13. 真空泵与抽滤瓶 14. 三通管 15. 止水夹 16. 吸耳球 17. 塑料紫外比色杯 18. 电导率仪 19. 尿糖试纸 20. 广泛 pH 试纸，精密 pH 试纸或 pH 计 21. 点滴板 22. 紫外分光光度计
A--------膜的有效面积（cm2）。
2. 截留率的测定
在超滤过程中，比膜孔径大的溶质分子被截留，小的分子被透过。超滤膜对某些溶质
的截留能力用截留率来表征，可按下式进行计材与试剂
1．膜实验装置一套 2. SPT-V-1000-100、SPT-V-100-500 膜各一张 3. 秒表或手表 4. 10ml 量筒、50ml 量筒 5. 温度计 6. 试管架 1 个及试管 8 支 7. 考马斯亮蓝 G-250 染料试剂 8. 95% 乙醇 9. 85%磷酸 10. 去离子水
蛋白质在两相中的分配在25ml刻度试管中用电子秤称取nh42so4固体195gpeg400液体300g用吸管加入酶液300ml然后加水直到总量为1200g用塞子塞紧试管口用力振摇数分钟使nh42so4完全溶解并使两相充分混合以便酶在两相中的分配达到平衡然后静置510分钟分别读出上下相的体积求相比r并用考马斯亮蓝比色法测定两相中的蛋白质浓度求出分配系数
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六、注意事项
5、实验过程中一定要记得测定A、B两管的下层水相的体积！ 6、测定吸光值时，注意一定要将溶液装到比色皿高度的2/3左右，不得低
2）原液B （1mg/ml）分别取0.5、1、2、3、4、5ml，用 0.1MKCl的水溶液（pH 7.2）稀释至5ml，配成0.1、 0.2、 0.4、 0.6、 0.8,、1.0mg/ml的溶液，以稀释液为空白对照， 其他操作同上。
பைடு நூலகம்
五 结果与计算
1、原液A和原液B分别以吸光度值A为纵坐标，牛血清蛋白 量（ mg/ml ）为横坐标作标准曲线图，线性回归，求直线 方程和R2。
2、测吸光度值时，若要进行稀释，则需用相应A原液所用的缓冲液稀释A原 液的水相，用B原液缓冲液稀释B原液的水相。
3、紫外分光光度计：必须使用石英比色皿
4.1、原液A操作中，离心完成后，会形成一种上相油层、中间白色乳浊液层、 下层水相的状态，而且下层水相体积很小，测定该下层溶液光度值时，可以 采用医用针筒抽取出来，并记下其总体积，若针筒长度不够，可以剪去针筒 外端两个突起再吸；然后吸出其水相到干净试管中（注意不要吸入乳浊 液！），并确定其吸出体积， 用0.1MKCl的乙酸-乙酸钠缓冲液稀释到5ml （计算其稀释倍数），在280nm下测吸光值。
3）KCl ：防止水相乳化，影响萃取物与亲水头部的作用力， 离子浓度越大，萃取率越小。同时影响反胶束的大小。
四、 实验操作
1、萃取：在两只50mL离心管中分别加入10ml原液A和原液B，再分别加 入10ml反胶束相溶液，在旋涡混合器上充分混合5min，达到萃取平衡。
2、离心：离心平衡时，可在离心管中加入少量（根据平衡需要来加） 正辛烷：正己醇溶液调节平衡，然后将乳浊液于4000r/min，离心10min （并使用垂直转子离心机—到一楼和4楼借用，不用角式或水平转子， 否则无法形成完整的萃取层），离心完成后，记下A管和B管下层水相 的体积，注意，涡旋后应立即去离心，不能等待，以免影响萃取结果。
方法 3、以牛血清蛋白为实验对象，了解pH在
反胶束萃取中的重要性。
二、实验原理
1. 反胶束萃取法 利用表面活性剂在有机溶剂中自发形成的纳米尺度的反胶
束相来萃取水溶液中的蛋白质等生物大分子 。 相对于有机溶剂萃取法，反胶束内部存在水溶液，蛋白质
可以稳定存在，避免与有机溶剂的接触，不易变性失活 注意：反胶束萃取后，蛋白质是被萃取到上相（有机相）
3）注意保护电极，防止损坏或污染。电极不使用时应浸没在饱和氯化钾 溶液中。
8、标准曲线测定吸光值与相应的萃取后下相（水相）吸光值测定一定要 用同一台光度计测定，以消除光度计系统误差。
9、测定下相（水相）吸光值时，一定要取萃取后的清澈的水相，不要混 入浑浊溶液（乳浊液）去测定，负责会导致吸光值偏大而使结果出现负值
（2）但A管（液）下相吸光值测定操作比较特殊，具体见注意事项。
（3） 同时可以测定萃取完毕后，A管和B管中上相的体积和吸光值。， 利于进一步推断萃取效果。
四、 实验操作
4、标准曲线制作
1）原液A（1mg/ml）分别取0.5、1、2、3、4、5ml，用 0.1MKCl的乙酸-乙酸钠缓冲液（pH 4.0）稀释至5ml，配成 0.1、 0.2、 0.4、 0.6、 0.8,、1.0mg/ml的溶液，以稀释液为 空白对照，使用石英比色皿和紫外分光光度计
2、实验报告 实验预习报告包括如下内容： ①实验项目
名称；②详细实验目的、原理；③实验操 作步骤； ④注意事项。 实验报告包括如下内容：①实验项目名称 ；②简写实验目的、原理；③实验结果； ④ 分析与讨论；⑤注意事项等。
实验一 反胶束萃取法 pH对萃取率的影响
一、实验目的
1、加深对反胶束萃取基本原理的理解 2、通过实验，了解反胶束萃取的基本操作
10、一定要记得填写仪器使用记录！
附注：酸度计的使用
1、预热：插入电源，预热30分钟 2、标定:“斜率”旋钮调至100%位置，将电极洗干净，并用滤
纸吸干后将插入中性混合磷酸盐标准缓冲溶液（ 如 pH 6.86/25℃）中，调节“定位”旋钮使指示值为该pH值 3、校正：电极用蒸馏水洗干净，并用滤纸吸干后，放入四硼 酸钠标准缓冲溶液（ 如 pH 9.18/25℃）中，调节“斜率”旋 钮使指示值为该pH值。为保证两点校正的准确性，可以重复 以上步骤。
4、测量pH值：电极蒸馏水洗干净，并用滤纸吸干后，插入 待测溶液中，搅拌使溶液均匀，指示值即是该溶液的pH值。
作业
1、原液A和原液B分别以吸光度值A为纵坐标，牛血清蛋 白量（ mg/ml ）为横坐标作标准曲线图，线性回归，求 直线方程和R2。
2、分别计算不同pH的萃取率，并从理论上分析pH影响 萃取率的原因。
2、将萃取后的两管下相液的吸光度值分别代入原液A和原 液B的标准曲线计算含量
3、蛋白质的萃取率 E=（C0*V0-Cw*Vw）/C0*V0 C0:原液中蛋白质的浓度,V0原液体积，为10mL Cw:萃取平衡后下相液中蛋白质的浓度 Vw:萃取平衡后下相液的体积
六、注意事项
1、每个班前10组同学先做前面的反胶束萃取实验，后面几组同学先做原液A 和原液B的标准曲线。标曲线每4人合做1个。但每组的反胶束萃取A液、B液 都要做。
于此高度，否则会因为光能量漏出，导致实验结果偏小。
7、酸度计（本实验采用精密试纸测定萃取后溶液的pH值）： 1）仪器标定好后，不能再动定位和斜率旋钮，否则必须重新标定。温度
电极与电极应同时插入溶液，自动进行温度补偿。
2）电极插入溶液后要充分搅拌均匀（2~3min），待溶液静止后（2~3min） 再读数。
中去了。 反胶束制备方法：相转移法、注射法、溶解法
2、pH对萃取率的影响
对于蛋白质这种两性物质，当溶液中 pH > pI 时，蛋白质带负电 pH < pI 时,蛋白质带正电 pH = pI 时蛋白质净电荷为0 pH不仅决定蛋白质所带电性，还决定蛋白质净电荷的多少，
pH偏离pI越多，蛋白质净电荷越多 萃取时，必须使蛋白质所带电性与表面活性剂极性基团的电性
3、测定：
1）使用酸度计（或pH试纸）分别测定两管下层水相的pH值
2）使用石英比色皿和紫外分光光度计，测定两管下层水相在280nm波 长下的吸光度值，具体如下：（1）将B液萃取后的上相溶液完全吸出， 并继续吸去上相与下相交融的液体层，然后取清澈的下相0.5ml到干净 试管中，并用0.1MKCl的水溶液稀释到5ml（稀释倍数为10倍），在 280nm下测其吸光值。
3、20mmol/L CTAB(溴代十六烷基三甲铵,阳离子型表面活 性剂，带正电荷。)
4、正辛烷：正己醇（4:1，V/V），与CTAB形成：
CTAB/正辛烷：正己醇反胶束溶液
5、附注：各试剂的作用
1）正辛烷：有机溶剂，种类和极性会影响反胶束的大小
2）正己醇：作为助溶剂，可以使表面活性剂极性分子间的 静电斥力降低，促进反胶束的形成，还增加表面活性剂在有 机相中的溶解度
生物分离工程实验
Bioseparation engineering experiment
王桃云
1、 实验记录 实验前写好实验预习报告(钢笔和园珠笔)。 实验中应及时准确地记录所观察到的现象
和测量的数据。(直接填写到实验报告册的 原始数据栏） 杜绝一切抄袭和弄虚作假现象，一旦发现 后果自负。 做好实验后，一定要填写使用记录。
相反，产生静电引力作用，才能使蛋白质萃取进入反胶束内， 否则不能被萃取。 利用这个原理来测试不同pH条件对蛋白质反胶束萃取的影响。
三、实验试剂
1、原液A（含1mg/ml牛血清蛋白的0.1MKCl的乙酸-乙酸钠 缓冲液）, pH 4.0 （pH < pI=4.9）
2、原液B （含1mg/ml牛血清蛋白的0.1MKCl的水溶液）, pH 7.2 （pH > pI=4.9）
3、分别说明CTAB、正己醇、正辛烷和氯化钾在反胶束 萃取中的作用。