第二章(中药制剂的鉴别)
中药制剂的鉴别
• 中药制剂的定性方法主要有性状定 性鉴别、显微定性鉴别和理化定性 鉴别
• 理化定性鉴别包括一般化学反应法、 升华法、光谱法、色谱法等。
第一节 性状鉴别
• 一、性状鉴别的内容 • 颜色、形态、形状、气、味、其他 • 二、各种剂型的性状描述
• 三、物理常数测定 • 相对密度、旋光度
第二节、显微鉴别
• 1. 显色方式 • 2. 显色剂的种类 •
二、中药制剂薄层定性鉴别
• 3、对照品的选择 （包括对照品和阴阳对照溶 液）
• （1）对照品
•
化学成分单体
• （2）阴阳对照溶液 • （3）对照药材和对照品同时对照
• 阳性对照溶液的制备： • 取制剂处方中欲鉴定的某单味原药材，按
制剂的制法处理后，再以与制备样品供试 液相同的比例、方法、条件制成溶液。
（三）上样方式
（四）展开
• 1.展开剂的基本要求
• 1）能使待测组分很好的溶解
• 2）使待测组分与杂质分开，而待测各组分之间能达到
• 基线分离，R>1.5
• 3）使展开后的组分斑点圆而集中，不应有拖尾现象
• 4）使待测组分的Rf值最好在0.4 ~ 0.6；组分多，也可
•
在0.2 ~ 0.8之间
• 5）混合溶剂应临时新配，一般只能使用一次
• 阴性对照溶液的制备： • 将制剂处方中减去欲鉴定药味后的其它所
有各味药材，按制剂方法处理后，再以制 备样品供试液相同的比例、方法、条件制 成溶液。
• （一）吸附剂的选择
•
• 在薄层色谱中吸附剂与展开剂的选择，是色谱分 离能否获得成功的关键。
• 1.硅胶略带酸性，适用于分离酸性和中性物质，商 品硅胶分为两类：硅胶H（不加石膏），硅胶G （加石膏）；
中药制剂的鉴别重点习题
第二章中药制剂的鉴别一、选择题（一）A型题（每题的5个备选答案中，只有一个最佳答案）1．中药制剂的显微鉴别最适用于A．用药材提取物制成制剂的鉴别B．用水煎法制成制剂的鉴别C．用制取挥发油方法制成制剂的鉴别D．用蒸馏法制成制剂的鉴别E．含有原生药粉的制剂的鉴别2．在牛黄解毒片显微鉴别中，草酸钙簇晶大，直径约60～140µm，为哪味药的特征。
A.牛黄B.大黄C.雄黄D.冰片E.朱砂3．在中药制剂的理化鉴别中，最常用的方法为A.UV法B.VIS法C.TLC法D.HPLC法E.GC 法4．在薄层定性鉴别中，最常用的吸附剂是A.硅胶GB.微晶纤维束C.硅藻土D.氧化铝E.聚酰胺5．气相色谱法最适宜测定下列哪种成分A.含有挥发性成分B.不含有挥发性成分C.不能制成衍生物D.含有大分子又不能分解E.只含有无机成分6．影响薄层色谱分析主要因素之一为A.相对湿度B.对照品数量C.原药材来源D.供试品数量E.薄层板大小7．在薄层色谱鉴别中，硅胶薄层板需在什么条件下活化A.410℃烘30minB.310℃烘30minC.210℃烘30minD.110℃烘30minE.50℃烘30min8．纸色谱法是以下列哪种物质为固定相A.纸B.水C.乙醇D.酸E.硅胶9．在薄层色谱鉴别中，如制剂中同时含有黄连黄柏原药材，宜采用A.阳性对照B.阴性对照C.化学对照品对照D.阳阴对照E.对照药材和化学对照品同时对照（二）X型题（每题的备选答案中有2个或2个以上正确答案，少选或多选均不得分）1．中药制剂的鉴别包括A.性状鉴别B.显微鉴别C.理化鉴别D.杂质检查E.生物鉴别2．中药制剂蜜丸的显微鉴别中，可以采用下面哪些方法使粘结组织解离。
A.气相色谱法B.氢氧化钾法C.升华法D.硝铬酸法E.氯酸钾法3．影响薄层色谱分析的主要因素有A.样品预处理及供试液制备B.薄层色谱的点样技术C.吸附剂的活性与相对湿度的影响D.温度的影响E.样品的光谱数据4．在薄层色谱的鉴别中，样品供试液净化萃取方法，一般有A.单一溶剂萃取法 B.分段萃取法 C.液-液萃取法D.升华法E.固-液萃取法二、简答题1．在薄层色谱中最常用的吸附剂通常是哪些？2．薄层色谱鉴别对照物选择有哪几种？3．薄层色谱鉴别法中为何有时采用对照药材和对照品同时对照？参考答案与解析一、选择题（一）、A型题1.E解答：A、B、C、D答案,因为药材组织结构本身消失，故一般不用显微鉴别法。
2-中药制剂分析 鉴别
色谱法
纸色谱法
斑点的位置（Rf）、颜色（或荧光），与对照品 相比较 样品供试液的制备（提取、分离纯化）
薄层色谱法
利用极性、酸碱性等性质的不同，用萃取、过柱等方 法将欲测组分提取，减少其他成分和杂质的干扰 薄层板及吸附剂、涂布器、点样器材、层析缸、显色 与检测仪器
薄层色谱法使用的材料
升华法
鉴定具有升华性质的化学成分 （如冰片，大黄蒽醌类等） 观察升华物的形状、颜色、荧光等
光谱法
荧光法
光谱法
可见-紫外分光光度法
最大吸收波长法 （规定吸收波长法） 对照品对比法 规定吸收波长和吸收度法 规定吸收波长和吸收度比值法 多溶剂光谱法
复方丹参滴丸中丹参的鉴别 “取本品15丸，加少量水，搅拌使溶解后用水稀释至100ml， 摇匀，取2ml，加水至25ml，摇匀，照分光光度法测定， 在283nm的波长处有最大吸收。”
C.理化鉴别
D.杂质检查
中药制剂中可测定的物理常数有 A.折光率 B.相对密度 C.比旋度 度
D.熔点
E.吸收
中药制剂蜜丸的显微鉴别中，可以采用下面哪些方法 使粘结组织解离。 A.气相色谱法 B.氢氧化钾法 C.升华法 D.硝铬酸 法 E.氯酸钾法
中药制剂的理化鉴别有 A.化学反应法 B.升华法 C.光谱法 D.色谱法 E.砷盐检查法
薄荷油 “折光率 应为1.456-1.466（附录VII F ）
物理常数测定 旋光度和比旋度 20℃，用钠光谱的D线(589.3nm)测定旋光 度，除另有规定外，测定管长度为1dm。 比旋度 α 为测得的旋光度 [ ] ld l 为测定管长度dm d 为液体的相对密度 区分或检查药品的纯杂程度，或测定含量
中药制剂的鉴别技术 理化鉴别法 薄层色谱鉴别法
硅 胶 G( 含 粘 合 剂 煅 石 膏 ) ， GF254( 含 254nm 荧 光 剂 ) ， 硅 胶 H(不含粘合剂)，硅胶HF254
硅胶：常用极性吸附剂，具表面活性中心，略带酸性；
氧化铝：常用极性吸附剂，具表面活性中心，略带碱性；
•硅藻土：中性吸附剂；
•纤维素：液-液分配色谱担体（水为固定液），具一定粘性；
（四）薄层色谱鉴别法
2.仪器与材料
（1） 薄层板 具有一定机械强度、化学惰性、耐一定温度、表面平整、厚
度均匀，价格合理，常用为玻璃板。 玻璃板的常用规格：5cm ×20cm、10cm×20cm、20cm×20cm，
要求光滑、平整、洗净后不附水珠、干燥。
（四）薄层色谱鉴别法 2.仪器与材料 （2） 固定相
荧光淬灭法的GF254薄层板
荧光淬 灭斑点
日光检视
紫外光365nm或254nm下检视
（四）薄层色谱鉴别法
4.注意事项 制备薄层板应清洁干燥后制板； 预制薄层板选择符合要求的产品； 使用新鲜溶剂配制展开剂； 配制多元展开剂时，各种溶剂应分别量取后再混合。
（四）薄层色谱鉴别法
例：首乌丸的薄层色谱鉴别 提取方法：甲醇提取 固定相：硅胶G+0.5%NaOH 展开剂：甲苯-乙酸乙酯-甲酸 （15:2:1）
首乌丸的薄层色谱
1 大黄素 2 大黄素甲醚 3-4 何首乌对照药材 5 首乌丸
第二章 中药制剂的 鉴别技术
3
理化鉴别
（四）薄层色谱鉴别法 1.概述 薄层色谱法是将适宜的吸附剂或载体涂布于玻璃板、塑料或 铝基片上，成一均匀薄层，在同一块薄层板上点加供试品和对照 品，在相同条件下展开，显色剂显色，检出色谱斑点，对比供试 品与对照品的色谱图进行定性鉴别。
中药制剂的鉴别技术 显微鉴别法 显微鉴别法
案例分析——
• 【处方】大黄300g 盐酸小檗碱5g 黄芩浸膏21g
• 【制法】以上三味，黄芩浸膏系取黄芩，加水煎煮三次，第一次 1.5小时，第二次1小时，第三次40分钟，合并煎液，滤过，滤液 用盐酸调PH1-2，静置1小时，取沉淀，用水洗涤使PH值至5-7 ，烘干，粉碎成细粉。取大黄150g，粉碎成细粉；剩余大黄粉 末成粗粉，用30%乙醇回流提取三次，滤过，合并滤液，回收乙 醇，并减压浓缩成稠膏，加入大黄细粉，盐酸小檗碱细粉，黄芩 浸膏细粉及适量辅料，混匀，制成颗粒，干燥，压制成1000片 ，包糖衣或薄膜衣；或压制成500片，包薄膜衣即得。
鉴别指标的选择
选用该药材在本制剂中易查见、专属性强的显微特征作为 鉴别指标
处方中每一味药多用一个最主要特征作为鉴别指标 排除相互干扰或因加工而消失的特征
供试品预处理
内容物为颗 粒状，应研 细，直接取 粉末制片
取2-3片研 细，混匀， 直接取粉末 制片
包衣者除去包 衣，取数丸或 1-2锭，置研 钵中研成粉末 ，取适量粉末 制片
取蜜丸切开， 从切面由外至 中央挑取适量 样品或用水脱 蜜后，吸取沉
淀物少量
散剂、胶囊剂
片剂
水丸、水蜜 丸、锭剂等
蜜丸
显微制片方法
➢ 一般与观察原药材粉末的该显微特征 方法相同
➢ 用甘油醋酸试液直接装片观察淀粉粒 ➢ 用水合氯醛试液直接装片观察菊糖 ➢ 用水合氯醛加热透化后观察细胞组织
特征
水合氯醛透化法
第二章 中药制剂的 鉴别技术
中药制剂的鉴别
第20页
2.展开剂：
☂ 用量: 展开剂浸没薄板下端约5mm
☂ 临用前配制
3.展距：8~15cm
Rf ：0.2~0.8
中药制剂的鉴别
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展距:
中药制剂的鉴别
过犹不及。
《论语》先进
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展开
4.预防拖尾：加入少许酸碱 常见酸: 甲酸、冰醋酸 常见碱: 浓氨水、乙二胺
中药制剂的鉴别
苯-EtOAc-Me-异丙醇-浓氨水
薄层色谱操作方法
（一）制板 （二）点样 （三）展开 （四）检视
中药制剂的鉴别
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（二）点样
（1）器具: 毛细管、微量注射器 （2）点样量: 1~10μl （3）点样方法: 垂直方向，斑点直径≤2mm （4）点样后溶剂须挥干后再展开
中药制剂的鉴别
1cm
1cm
1cm
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（三）展 开
1.展开槽（层析缸） 要求：密封性好
（6:3:1.5:1.5:0.5）
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展开
5.边缘效应 原因: 低极性低沸点溶剂在薄层板边缘易挥发
克服方法: a “预饱和” 15~20min b 层析缸内壁贴浸湿滤纸条 c 点样时不要太靠边缘
中药制剂的鉴别
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（四）检 测
1.定位方法：日光检视 紫外光365nm下检视 紫外光254nm下检视
中药制剂的鉴别
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气相色谱法
中药制剂的鉴别
Relative Abundance
RT: 0.00 - 30.00 SM: 15B 5.47
100
90
80
70
60
50
40
30 0.94
3.46
中药制剂的鉴别技术 理化鉴别法 理化鉴别法
（一）化学鉴别法
4.实例——抗骨增生丸的鉴别
第二章 中药制剂的 鉴别技术
3
理化鉴别
理化 鉴别法
A 化学反应鉴别法 B 微量升华法 C 荧光鉴别法 D 薄层色谱法（TLC） E 分光光度法 F 高效液相色谱法、气相色
谱法等仪器分析法
（一）化学鉴别法 1.定义
是利用化学试剂与制剂中的指标成分发生化学反应，根据所 产生的颜色、沉淀或气体等现象，来判断某些药味或成分的有无， 并以此鉴别制剂真伪的方法。
（一）化学鉴别法 2.操作方法
（1）供试液的制备 固体制剂：适当的溶剂提取； 液体制剂：直接取样检识或经有机溶剂萃取分离后再行检测。
（2）操作方法 试管反应：取供试液于试管中，加入试剂或试药进行反应； 蒸发皿或坩埚：供试液置蒸发皿或坩埚中，挥去溶剂，滴加
试剂于残留物进行检识。
（一）化学鉴别法 3.注意事项
【处方】由熟地黄、肉苁蓉(蒸)、狗脊(盐制)、女贞子(盐 制)、淫羊藿、鸡血藤、莱菔子(炒)、骨碎补、牛膝。
【鉴别方法】（1）鉴别肉苁蓉中的生物碱碘化铋钾
红棕色沉淀
样品
酸
（2）鉴别淫羊藿中的黄酮类成分：
碘化汞钾 硅钨酸
白色沉淀 白色沉淀
样品
甲醇浸提
滤液1ml
盐酸3～4滴 镁粉
红棕色
第二章中药材及其制剂分析的一般步骤
第二章中药材及其制剂分析的一般步骤中药材及其制剂的化学成分是相当复杂的，包括各种类型的无机物和有机物。
其中某些成分有生理活性，有些无活性，亦有的有毒副作用，这些成分共存于同一体系中，特别是复方制剂，各成分之间存在着相互间的作用和变化，这就使中药药物分析面临着十分艰巨的任务，所以对复杂混合体系的分析是共特点一般例行分析中，中药药物分析中，中药分析的一般步骤为：取样→样品制备→鉴别→检查→含量测定→第一节分析样品的制备一、取样及处理中药药物在分析测试之前，首先是取样和样品备，供试样品必须具有代表性、真实性、均匀合理。
一般的应从每个包装的四角及中央五处取样。
深度达1/3~2/3处，取得的样品装入清洁、干燥、具有磨口的容器中或塑料袋中，并标上品名、批次、取样日期、取样人等。
取样人员应熟悉各类中药及其制剂的理化性质，对外观性状已发生变化者，应分别取样，装入不同的容器中。
各类分析样品取样大致如下：1中药材：中药材样品要自然干燥，粉碎，、过筛、粒度在80-100目，按四分法混合均匀。
根据Q=kd2的经验公式取出三份样品，即供试样品，送检样品，保存样品各100g,取样量原则上至少应满足三次分析实验用。
贵重药材可酌情取样Q=kd2式中：Q——应取试样的最低量（kg）k——实验因, 随物质而定，其数值介于0.1-0.5之间d——样品最大颗粒的直径（mm）例 1 有一试样，其为k为0.2，最大颗粒直径为1mm，则取样量为：Q=kd2=0.2×12=0.2kg=200g.若研细至d=0.14mm，则Q=0.2×0.142=3.9g此式反映了最低取样量与物料颗粒细度有关。
即颗粒愈粗，应取样量愈大。
根据我国1985年由中国医药工业公司从实际生产出发，制定的《药品生产管理规范实施指南》规定的“质量管理”为第二项规定抽样办法：凡原辅料总件数（桶、箱等）n≤3时，每件分别抽样；n≤300时，抽样量为n+1；n>300时，抽样量为 n +1。
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产生的紫外吸收特征。
木香槟榔丸 处方：木香、槟榔、枳壳、陈皮、青皮（醋炒）、香附
（醋制 ）、三棱（醋制）、莪术（醋制） 取本品粉末4g，置蒸馏瓶中，加水10ml，使供试品湿
润后，水蒸汽蒸馏，收集馏液约100ml，照紫外分光光度 法（中国药典附录V A）测定，在253nm波长处有最大吸 收。
特点
一般选取制成剂型后可以重现各味药的主要特征作 为制剂的鉴别特征。如以原粉入药的药材。
选择制剂的显微鉴别指标时，用能相互区别，互不 干扰，能表明该药味存在的显微特征作为鉴别依据。 如“六味地黄丸”中川贝的淀粉粒。
第三节 理化鉴别
定义：针对所含药材的主要化学成分，采用物理的、 化学的或物理化学的方法进行检定，以确定该药材是 否在制剂中真的存在，从而判别真伪。
大家好
第二章 中药制剂的鉴别
中药制剂的鉴别：利用一定的方法来确定中 药制剂中原料药的组成，从而判断该制剂的 真伪。
性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别
第一节 性状鉴别
中药制剂的性状：指除去包装后的性状。 制剂的性状指成品的颜色、形状、气味等。 片剂、丸剂如有包衣的还应描述出去包衣后的片 心、丸心的颜色及气味；硬胶囊剂应写明出去胶 囊后内容物的性状。
2 荧光鉴别法
利用制剂中某些成分在可见光或紫外光照射下能产生一定 颜色荧光的性质，对中药制剂进行鉴别。有的成分本身不 具荧光性，但加酸、碱处理后，或经其它化学方法处理后 也可产生荧光供鉴别用。
3 红外光谱法
分子的官能团信息和谱中的指纹区信息。
四 色谱法
（一） 薄层色谱法 （二） 气相色谱法 （三） 高效液相色谱法
（一） 薄层色谱鉴别法
1 原理 相同物质在同一的色谱条件下，表现出相同的色谱行为。 在同一块薄层板上点供试品和对照物，在相同条件下展开，
显色检出色谱斑点后，计算各斑点的比移值（Rf）并将所得 供试品与对照物的色谱图进行对比分析，从而对药品进行定 性鉴别。限度检查时要求供试品中的待检斑点颜色或荧光强 度不得更深。含量测定采用薄层色谱扫描法。
药材的选择： 1 力争全部进行鉴别 2 首选选择君药 3 其次选择臣药 4 毒剧药、贵细
目前中国药典收载的理化鉴别方法有：化学 反应法、微量升华法、光谱法和色谱法。
其中色谱法尤其是薄层色谱法得到广泛的应 用，这主要是由于色谱法具有分离分析双重功 能，从而大大提高了鉴别工作的灵敏度和专属 性，并成为今后中药制剂鉴别的发展方向。
二 微量升华法
1原理： 利用某些成分的升华性，在一定温度下将其从制剂中升华分 离出来，并以升华物所具有的某些理化性质作为制剂鉴别的 中药化学成分所具有且升 华物纯度较高，故专属性较好。
3 操作方法： 微量升华法常用，少数使用坩埚法或蒸发皿法。
三 光谱法
性状的内容
包括：颜色、形态、形状、气、味、其他（如含 滑石的制剂，手捻有滑腻感）。
物理常数：折光率、旋光度、比旋度、凝点、熔 点、相对密度
第二节 显微鉴别
中药制剂的显微鉴别：利用显微镜来观察中药制 剂中原药材的组织碎片、细胞或内含物等特征， 从而鉴别制剂的处方组成。
《中药药典》常用鉴别中药制剂的方法
（3）易发生假阳性或假阴性反应 解决方法如下： ①对样品进行预处理，除去干扰性成分，富集被检成分。 ②选用专属性较强的检测试剂。 ③必要时做阳性或阴性对照试验加以验证，保证其专属性 和灵敏度。
3 提取操作： （1）酸性乙醇回流：酚类、有机酸、生物碱等。 （2）水冷浸：氨基酸、蛋白质。 （3）水温浸：单糖、多糖、鞣质、皂苷等。 （4）乙醚等低极性有机试剂：苷元。 （5）挥去乙醚的药渣用甲醇超声：苷。 （6）水蒸气蒸馏：挥发油。
（5）香豆素、内酯类和酚类 ① 氯亚氨基-2，6-二氯醌-四硼酸钠反应（Gibbs反应）， 呈现蓝色。 ② 异羟肟酸铁反应 呈红色。 应用品种有：养阴清肺膏（牡丹皮）、前列舒丸（牡丹皮） 等。
（6）挥发性成分 主要使用香草醛-浓硫酸反应检识此类成分，正反应呈红、 红紫色。 应用品种主要有：万应锭（冰片）、牛黄解毒片（冰片）、 养心定悸膏（桂枝、生姜）等。
（2）黄酮类化合物 最多使用的检识反应为盐酸-镁粉反应，呈紫红色。大 山楂丸（山楂）、抗骨增生丸（淫羊藿）、参茸保胎丸（黄 芩）等。此外，黄芩提取物采用二氯氧锆-盐酸显色反应进 行检识。 （3）蒽醌类化合物 主要应用碱液反应（Borntrager反应），阳性反应呈红 色，加酸红色褪去呈黄色。例如大黄流浸膏。
（4）皂苷 常用的定性鉴别反应有：
① 泡沫反应 样品水溶液振摇后，产生持久性泡沫。 ② 醋酐-浓硫酸反应 甾体皂苷呈现污绿色，三萜皂 苷呈现红、红紫色。 ③ 浓硫酸反应 呈现红、红紫色。 ④ 三氯化锑或五氯化锑反应 氯仿液呈紫兰色。 ⑤ 氯仿-浓硫酸反应 氯仿层出现红色或兰色，并具 绿色荧光。 地奥心血康胶囊（黄山药和穿山龙薯蓣的提取物）、养心 定悸膏（甘草、红参、麦冬）。
一 化学反应法 二 微量升华法 三 光谱法 四 色谱法
一 化学反应法
1 原理：利用检测试剂与制剂中的指标性成分发生化学反应， 根据所产生的颜色、沉淀或气体等现象，来判断某些成分 或某些药味的有无。
2 特点： （1）操作简便，适用性较强 （2）其否定功能往往强于肯定功能,专属性较差。 逐渐被专属性较强的薄层鉴别法取代。2005年版《药典》 在鉴别制剂中的大黄、决明子、何首乌等药味时，已不再 采用蒽醌的颜色反应，而收载了薄层鉴别法。
2 特点 简便、快速、易普及、具有分离和分析双重功能，且采用 供试品与标准对照物同板对比分析法，专属性亦较强。
4 常用的一般化学反应 主要用于制剂中生物碱、黄酮类、蒽醌类、皂苷、香豆
素、萜类以及各种矿物类成分的鉴别 （1）生物碱 碘化铋钾反应 产生红棕色沉淀 碘化汞钾反应 产生类白色沉淀 硅钨酸反应 产生白色沉淀 苦味酸反应 产生黄色结晶性沉淀 需在酸性条件下进行。注意事先排除其它成分的干扰。
少数生物碱不与上述通用沉淀试剂反应，而具有专属性较强 的其它反应。