细胞生物学实验技术
细胞生物学的实验方法和技术
细胞生物学的实验方法和技术细胞生物学是研究细胞结构、功能和生命活动的学科，可以帮助我们了解生命的起源和本质。
在细胞生物学领域，实验是非常重要的，因为只有通过实验才能获取丰富的数据和信息。
接下来，我们将介绍一些常用的细胞生物学实验方法和技术。
1. 细胞培养细胞培养是一种将细胞放置在含有营养物的培养基上的实验方法。
这种方法可以被应用于很多方面，例如研究基因表达、病理生理学和新药发现等领域。
细胞培养通常要求细胞处于可能生长和分裂的特定生长条件下，培养基的配方和组成要根据细胞类型进行调整。
2. 免疫荧光染色免疫荧光染色是一种将抗体特异性地与待检测蛋白质结合，然后用荧光染色剂标记抗体的实验方法。
这种方法被广泛应用于检测蛋白质的组织学定位、蛋白质相互作用和细胞信号传导等方面的研究。
3. 细胞色素c释放实验细胞色素c释放实验是通过检测细胞色素c的释放来检测细胞凋亡状况的实验方法。
这种实验需要将细胞暴露在合适的刺激条件下，然后收集细胞，用针头机械破碎并分离出线粒体，接着用色素c检测试剂。
此方法可以被应用于癌症治疗、新药研发和基础细胞生物学研究等领域。
4. 网格溶解实验网格溶解实验是一种检测细胞侵袭和扩散能力的实验方法，常用于研究细胞恶性生长、转移和肿瘤治疗等领域。
这种实验需要在培养皿中放置一层含有孔的膜，将预处理好的细胞悬浮在孔上方的区域，然后留置一段时间等待细胞穿过孔隙层次，最后收集并处理细胞样本，通过各种方式检测细胞侵袭和扩散的情况。
5. 蛋白-蛋白相互作用实验蛋白-蛋白相互作用实验是一种检测蛋白质互相作用的实验方法。
这种实验有几种方法，包括酵母对二杂交法、共免疫沉淀法和化学交联法等。
这些方法可以帮助我们了解蛋白质相互作用的机制，为研究信号转导、基因表达和疾病机理等领域提供参考资料。
以上是几种常用的细胞生物学实验方法和技术。
每一种方法都有自己独特的适用范围和步骤，研究者们需要根据具体的实验内容选择合适的方法。
常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍
常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍 (2021-04-23 11:01:29)转载▼标签：分子生物学细胞生物学常用实用技术根本实验室技术生物学实验教育常用的分子生物学根本技术核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性，它已成为分子生物学中最常用的根本技术，被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。
其根本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下〔适宜的温室度及离子强度等〕可按碱基互补原成双链。
杂交的双方是待测核酸序列及探针〔probe〕,待测核酸序列可以是克隆的基因征段，也可以是未克隆化的基因组DNA和细胞总RNA。
核酸探针是指用放射性核素、生物素或其他活性物质标记的，能与特定的核酸序列发生特异性互补的DNA或RNA片段。
根据其来源和性质可分为cDNA探针、基因组探针、寡核苷酸探针、RNA探针等。
固相杂交固相杂交〔solid-phase hybridization〕是将变性的DNA固定于固体基质〔硝酸纤维素膜或尼龙滤膜〕上，再与探针进行杂交，故也称为膜上印迹杂交。
斑步杂交〔dot hybridization〕是道先将被测的DNA或RNA变性后固定在滤膜上然后参加过量的标记好的DNA或RNA探针进行杂交。
该法的特点是操作简单，事先不用限制性内切酶消化或凝胶电永别离核酸样品，可在同一张膜上同时进行多个样品的检测；根据斑点杂并的结果，可以推算出杂交阳性的拷贝数。
该法的缺点是不能鉴定所测基因的相对分子质量，而且特异性较差，有一定比例的假阳性。
印迹杂交〔blotting hybridization〕Southern印迹杂交：凝胶电离经限制性内切酶消化的DNA片段，将凝胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至硝基纤维素膜或其他固相支持物上，经干烤固定，再与相对应结构的已标记的探针进行那时交反响，用放射性自显影或酶反响显色，检测特定大小分子的含量。
细胞生物学实验PPT课件
目录
• 引言 • 细胞生物学基础知识 • 实验操作流程 • 实验结果分析 • 结论
01 引言
实验目的
01
02
03
04
掌握细胞生物学的基本 实验技能
了解细胞的结构和功能
学习细胞培养和细胞转 染技术
探究细胞信号转导的机 制
实验背景
细胞是生命的基本单位，是生物体结 构和功能的基础
能量转换
细胞中的线粒体和叶绿体 可以将光能或化学能转换 为细胞可利用的ATP等能 量形式。
信息传递
细胞通过分泌化学信号和 电信号传递信息，协调各 种生理活动。
细胞的生命活动
细胞分裂
通过有丝分裂和减数分裂，细胞 可以复制自身并产生新的子细胞。
细胞分化
在发育过程中，细胞会逐渐失去其 全能性，并获得特定的功能和形态。
定性分析
根据实验结果，对实验现象进行解释 和推理，探究可能的机制和影响因素 。
结果解读与讨论
结果解读
根据实验结果，结合理论知识，对实验结果进行解释和解读，明确实验目的和 结论。
结果讨论
对实验结果进行深入讨论，探讨实验的局限性和改进方向，提出可能的假设和 研究方向。
05 结论
实验总结
实验目的
通过实验，学生能够掌握细胞生物学的基本实验技能，了 解细胞的结构和功能，以及细胞的生命活动规律。
实验步骤
实验包括细胞培养、显微观察、细胞计数等步骤，每个步 骤都有详细的操作说明和注意事项。
实验原理
实验涉及细胞培养、显微观察、细胞计数等技术，通过这 些技术，学生可以深入了解细胞的结构和功能，以及细胞 分裂、分化等生命活动过程。
实验结果
实验结果清晰，学生能够观察到细胞的形态、结构和功能 ，并得出准确的实验结论。
医学细胞生物学实验
细胞凋亡诱导与检测
细胞凋亡检测
细胞凋亡诱导
自噬诱导
通过饥饿、药物刺激等手段诱导细胞自噬，以研究自噬的生物学意义和作用机制。
自噬检测
采用荧光染色、电镜观察、蛋白质印迹等方法检测自噬体的形成、数量和相关蛋白的表达。
自噬诱导与检测
03
02
01
实验原理
实验设计
根据实验目的和原理，设计具体的实验方案和操作流程。
实验操作
按照实验方案进行实验操作，包括细胞培养、显微观察、分子生物学检测等步骤。
数据收集与分析
收集实验数据，进行统计分析，得出实验结果。
结果汇报与讨论
将实验结果以书面形式汇报，并进行讨论和总结。
实验步骤
02
细胞培养
CHAPTER
利用免疫荧光染色、荧光共振能量转移等技术，可以检测和定位细胞内特定信号分子的分布和动态变化，进而揭示其在信号转导中的作用机制。
详细描述
总结词
信号转导抑制剂的应用
总结词：信号转导抑制剂是一类能够干扰细胞信号转导过程的化合物，具有潜在的治疗作用。
07
细胞凋亡与自噬研究
CHAPTER
通过使用化学物质、射线、病毒等手段诱导细胞凋亡，以研究其发生机制和生物学意义。
电子显微镜
利用电子束代替可见光，观察细胞超微结构。
显微镜观察
通过显微镜或细胞计数板，统计细胞数量。
细胞计数
利用染色剂或荧光染料，检测细胞活性，如MTT法、染色排除法等。
细胞活力检测
细胞计数与活力检测
利用染色剂对细胞进行染色，以便观察细胞形态和结构。
染色技术
细胞生物学复习资料
第二章细胞生物学实验技术一、名词解释1．显微分辨率（microscopic resolution）---在一定条件下利用显微镜所能看到的精细程度。
2．放射自显影技术（autoradiography）---用于整个细胞时，可以确定放射性标记物在细胞内的定位。
用于凝胶或琼脂平板时，能鉴定出放射性的条带或菌落。
3．双向凝胶电泳（two-dimensional electrophoresis）---根据分子质量及等电点的不同将复杂的蛋白质混合物分开。
这种高分辨率的技术能够分离同一混合物中的上千种蛋白质。
4．倒置显微镜（inverted microscope）---一种主要用于观察培养瓶或培养皿中的活细胞生长及分裂状态的特殊显微镜。
与普通光镜相比，其光源、聚光镜和物镜的位置是倒置的，即光源在上，物镜在载物台的下方。
另外，其聚光镜和物镜有较长的工作距离，以方便放置有一定厚度的培养瓶。
二、简答题1．电子显微镜为何不能观察活标本？因为电镜样品的观察室要求高度的真空条件。
2．简述冷冻蚀刻术的原理和方法。
冷冻蚀刻（freeze－etching）技术是在冷冻断裂技术的基础上发展起来的更复杂的复型技术。
如果将冷冻断裂的样品的温度稍微升高，让样品中的冰在真空中升华，而在表面上浮雕出细胞膜的超微结构。
当大量的冰升华之后，对浮雕表面进行铂一碳复型，并在腐蚀性溶液中除去生物材料，复型经重蒸水多次清洗后，捞在载网上作电镜观察。
3．比较投射电子显微镜和扫描电子显微镜。
答：都是用于放大与分辨微小结构，都是通过标本电子束的影响来探测标本结构。
TEM：电子束穿过标本，聚焦成像于屏幕或者显像屏上。
用于研究超薄切片标本，有极高的分辨率，可给出细微的胞内结构。
SEM：电子束在标本表面进行扫描，反射的电子聚焦成像于显像屏上。
可以反映未切片标本的的表面特征。
4．扫描隧道显微镜的工作原理及其优越性是什么？扫描隧道显微镜（scanning tunneling microscope，STM）由Binnig等1981年发明，是根据量子力学原理中的隧道效应而设计制造的。
细胞生物学实验技术
细胞生物学实验技术细胞生物学实验技术是现代生命科学研究中的关键环节，它为研究人员提供了深入了解细胞结构、功能和相互作用的途径。
本文将重点介绍一些常见的细胞生物学实验技术，包括细胞培养、染色技术、分离技术和显微镜观察等。
一、细胞培养技术细胞培养是一项基础性技术，它可以将细胞从体内取出并在适当的培养基中进行增殖和维持。
细胞培养的首要任务是提供适当的培养基，其中含有必需的营养物质、生长因子和适当的温度、湿度和气体条件。
细胞培养技术广泛应用于细胞生物学实验、组织工程、药物研发等领域。
二、染色技术染色技术是细胞生物学实验中常用的方法之一，它使研究者能够对细胞内各种结构和分子进行可视化观察。
常用的染色方法包括荧光染色、酶标染色和核酸染色等。
荧光染色利用荧光标记的抗体或染料，可使特定的细胞结构或分子在显微镜下发出荧光信号，从而观察其位置和表达水平。
酶标染色则通过酶与底物的反应，使细胞或组织显示出颜色等信号。
核酸染色则利用特定染料与细胞核酸结合，以观察DNA或RNA的分布情况。
三、分离技术分离技术在细胞生物学实验中具有重要作用，它可以将不同类型的细胞或细胞组分进行分离和纯化。
常用的分离技术包括细胞离心、流式细胞术和免疫磁珠分离等。
细胞离心是通过离心机将混合细胞悬液分离成上清液和沉淀，从而获得纯化的特定类型细胞。
流式细胞术则通过流式细胞仪测量细胞的大小、形态和表面标记物，从而实现对细胞的高通量分离和分析。
免疫磁珠分离则利用特定抗体结合在磁珠表面，以实现对需要纯化的细胞或细胞组分的选择性捕获。
四、显微镜观察显微镜观察是细胞生物学实验的重要手段，它使研究者能够观察到细胞内不同的结构和过程。
传统光学显微镜可实现对细胞形态和部分细胞器的观察，但其分辨率有限。
近年来，随着超分辨显微镜技术的发展，研究者们能够突破传统光学显微镜的分辨率极限，实现对亚细胞结构和分子过程的观察。
总结细胞生物学实验技术在现代生命科学研究中发挥着至关重要的作用。
分子生物学与细胞生物学实验基本技术
分子生物学与细胞生物学实验基本技术2005-02实验一组织块培养法一、目的学习原代培养方法，从供体取得组织细胞后在体外进行的首次培养。
二、概述组织块培养法是常用的、简便易行和成功率较高的原代培养方法。
可以采用剪切法，即将组织块剪切成小块后，接种于培养瓶，组织小块贴壁24h或更长时间后，细胞就从组织四周游出。
但由于在反复剪切和接种过程中对组织块的损伤，并不是每个小块都能长出细胞。
用于组织块培养的培养瓶可根据不同细胞生长的需要作适当处理，如预先涂以胶原薄层，以利于上皮样细胞等的生长。
（本节以新生牛主动脉平滑肌培养为例）三、材料（一）仪器1.净化工作台2.恒温水浴箱3.冰箱（4℃、-20℃）4.倒臵相差显微镜5.培养箱（二）玻璃器皿1.培养皿（Φ100mm）2.吸管（弯头）3.烧杯（500ml、200ml、10ml）4.广口试剂瓶（500ml）5.玻璃瓶（250ml、100ml）6.培养瓶7.废液缸（三）塑料器皿1.吸头2.枪头3.胶塞4.EP管（四）其他物品1.微量加样枪2.眼科组织剪（直尖、弯）3.眼科组织镊（直、弯）4.12.5cm组织镊（无钩、1×2钩）5.25cm敷料镊（无钩）6.止血钳（18cm直纹式、12.5cm直纹式、弯纹式）7.解剖剪（五）试剂1.D-Hanks液2.小牛血清3.RPMI16404.双抗（青霉素、链霉素）5.1N HCl6.7.4%NaHCO3四、操作步骤1.取材：打开胸腔，无菌操作下取出主动脉胸段，浸到预先配制好的含双抗（500u/ml青、链酶素）的D-Hanks液中漂洗。
2.组织的冲洗、修剪：取出主动脉，用锋利的剪刀修剪除去周围组织，再用D-Hanks冲洗主动脉3次，除去血块及杂组织等。
3.平滑肌组织分离：纵向剖开主动脉，撕下主动脉内层，取主动脉中层的平滑肌组织，无血清RPMI1640漂洗3次。
4.剪切：将平滑肌组织用锋利的眼科剪反复剪切至剪成1mm3小块，在剪切过程中，可以适当向组织中滴加1～2滴培养液，以保持湿润。
细胞生物学的基本实验技术和方法
细胞生物学的基本实验技术和方法细胞生物学是现代生命科学的一个重要分支，研究细胞的结构、功能、遗传和分子机制，对于理解生命的本质、疾病的发生和治疗具有重大意义。
本文将介绍一些细胞生物学的基本实验技术和方法，包括细胞培养、荧光显微镜、免疫染色、蛋白质电泳和PCR等。
一、细胞培养细胞培养是细胞生物学中最基本的实验技术之一，它是将细胞放入含有营养物质、生长因子和抗生素等的培养基中，使其在适当温度、湿度和CO2浓度下生长、增殖、分化或转化的过程。
细胞培养的方法非常丰富，可以根据细胞来源、类型、培养条件等进行分类，常用的有原代培养、细胞系、肿瘤细胞和原生动物等。
细胞培养可以用于研究细胞形态、生长特性、细胞周期、信号转导和基因调控等方面，也是制备疫苗、生产蛋白质和细胞治疗等方面的基础技术。
二、荧光显微镜荧光显微镜是一种利用荧光探针和激光光源来照射样品并检测荧光信号的显微镜，在细胞生物学中起着至关重要的作用。
荧光探针可以有机会或无机盐的形式存在，它们可以与细胞的生物分子如蛋白质、核酸等结合并发生光学反应，发射出荧光信号。
荧光显微镜具有高分辨率、高灵敏度、多重标记和实时成像等优点，可以用于研究细胞形态、结构、功能、互作和代谢等方面，还可以用于细胞追踪、基因表达、蛋白质定位和药物筛选等方面。
三、免疫染色免疫染色是一种利用抗体与特定抗原相结合来检测或定位生物分子的技术，在细胞生物学和免疫学中广泛应用。
抗体是由 B 细胞产生的一类蛋白质，它可以通过特异性与异物（如细胞表面抗原、蛋白质、核酸等）结合，从而实现对它们的检测和定位。
免疫染色有直接和间接两种方法，前者是将荧光染料或酶标记直接连接在一级抗体上，后者是将荧光染料或酶标记连接到二级抗体上，再与一级抗体结合来增强信号。
免疫染色可以用于鉴定细胞类型、检测蛋白质表达、定位细胞器、分析信号通路和检测抗体反应等方面。
四、蛋白质电泳蛋白质电泳是一种利用电场和凝胶电泳技术来分离和检测蛋白质的方法，在细胞生物学和生物化学中起着重要作用。
细胞生物学实验技术的发展趋势
细胞生物学实验技术的发展趋势随着科学技术的不断进步，生物学这一学科不断发展壮大。
其中，细胞生物学作为生物学的分支学科之一，其重要性在近年来越来越得到人们的关注。
在研究细胞的过程中，实验技术的发展也起到了至关重要的作用。
在本文中，我们将探讨细胞生物学实验技术的发展趋势。
一、单细胞分离技术单细胞分离技术是指通过分离单个细胞使其成为可以被研究和操作的独立实体。
目前这种技术已经得到了广泛的应用，比如可以用于单细胞RNA测序，单细胞蛋白质测序等领域。
接下来我们将探讨几种主要的单细胞分离技术。
1. 流式细胞分选术这是一种基于细胞表面分子的特异性性质进行分选的技术。
通过流式细胞仪可使细胞按照其表面特异性标志物进行分类，完成单细胞分选。
这种技术可以处理大量的样本，并具有精细度高、操作灵活的特点。
2. 微流控芯片技术微流控芯片技术是一种利用微型通道和微流体控制技术实现单细胞操作和分选的技术。
在一个微型芯片内的通道中，可以通过诱导力、化学力、电力等手段，完成对单个细胞的分离和培养。
3. 磁珠免疫分选技术这是一种利用磁性珠子将指定表面分子标记的细胞进行筛选的技术。
该技术能够高效地分选出含有指定表面分子的单个细胞，并且比较适合于大规模的实验。
二、生物荧光技术在细胞生物学领域，生物荧光技术也是一个重要的实验技术。
它主要利用细胞内染色体、细胞器等组成部分的特性，进行捕获、探测和成像。
这种技术能够在线性、不侵入和实时的情况下，获取关于生物样本的信息。
在此方面主要有以下几种技术。
1. 荧光融合技术荧光融合技术是一种将荧光蛋白与目标蛋白进行融合的技术。
这种技术可以用于追踪靶分子在细胞中的分布和运动过程。
2. 荧光共振能量转移技术荧光共振能量转移技术是一种利用电子能级的荧光共振，使一条激发态的分子发射能量从一个分子转移到另一个分子的技术。
该技术对于测量蛋白质间的相互作用和距离的关系有着较好的应用价值。
3. 光片层析术光片层析术是一种将小颗粒物分离并进行排序的制备技术。
细胞生物学的实验方法与技巧
细胞生物学的实验方法与技巧细胞生物学是研究细胞结构和功能的科学领域。
在细胞生物学中，实验方法和技巧是非常关键的。
细胞生物学的实验技术涉及到多种技术和方法，包括细胞培养、细胞分离、荧光显微镜、分子生物学等等。
在本文中，我们将会详细讨论细胞生物学中的实验方法和技巧。
一、细胞培养技术细胞培养技术是研究细胞生长、增殖、衰老等生理状态的一种重要的实验技术。
细胞培养技术通常需要使用一个适宜的培养基，该培养基还需要添加适当的营养物质和培养物质。
在培养细胞时，需要注意适宜的温度、湿度、和二氧化碳含量等因素，这些因素可以影响细胞的状态和生命活动。
另外，在细胞培养中，不可避免地会遇到一些问题，例如细胞的寿命、细胞的死亡、菌污染等问题。
为避免这些问题，需要在实验中采取一些必要的预防措施。
例如，可以使用无菌操作技术，采用CDMF等杀菌剂消毒培养器、培养器中的培养物料，这样可以有效防止细胞因菌污染而死亡。
二、细胞分离技术细胞分离技术是研究细胞的单个特性、形态和功能的一种技术。
在实验中需要利用细胞分离技术来获得一定数量的单个细胞。
细胞分离技术有多种方法，包括分离器分离、离心分离、胶体分离和酶消化等，每种方法都有其优缺点。
其中，酶消化是一种比较常见的细胞分离方法，通过加入一定量的酶，将组织内的胶原纤维、纤维素及其他基质物质消化掉，从而获得单个细胞。
在酶消化实验中，需要根据不同细胞类型、不同组织、不同生长状态等因素进行调整，以获得最佳效果。
三、荧光显微镜技术荧光显微镜技术是一种广泛用于生物学和生命科学中的高级显微镜技术。
在细胞生物学研究中，荧光显微镜技术是最常用的技术之一，因为它可以用来标记和检测细胞内的各种生物大分子，如蛋白质、核酸、酶等。
在荧光显微镜实验中，使用的荧光探针要与待检测的细胞相匹配，例如，使用荧光染料DPH来探测细胞内外膜分子的相互作用。
同时，还需注意荧光显微镜的光源选择、荧光图像的采集和分析等问题，以获得高质量的研究数据。
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透射电镜的成像原理
电子束通过标本时，根据标本各部位密度的不同， 部分电子发生散射，只有剩余的电子成像，经物镜 和投射镜放大后投射到照相底片或荧屏上。 由于散射的电子不参加成像，故标本中密度大的部 分成像后形成电子流量减少的暗区；相反密度小的 部分散射电子少而形成明区。
short
基本构造：
λ
long
A 光源 B 二向色镜：反射短波光线，透过长波光线 C 一组滤光片：得到纯的激发光和发射光
发射光光阻断滤片
分光镜 激发光滤片
物镜
(二) 荧光显微镜
特点：光源为短波光；
有两个特殊的滤光片； 照明方式通常为落射式。
用于观察能激发出荧光的结构。用途：免疫荧光 观察、基因定位、疾病诊断。
进行，所以又叫做体外DNA扩增技术。
2. 过程
高温变性 （90~95℃）
多次 重复
低温退火 （55~60℃）
中温延伸 （70~75℃）
3.特点：指数形式扩增
双链DNA是在高温条件下解链为单链DNA的，因此整 个过程不需要解旋酶。
离心技术
差速离心
密度梯度离心
细胞培养与细胞工程
体外培养的3个环节：
细胞中有一些成分具有特定的吸收光谱，核 酸、蛋白质、细胞色素、维生素等都有自己特征 性的吸收曲线。例如，核酸的吸收波长为260nm，
而蛋白质的则为280nm。某些成分经组织化学染
色后，对可见光有特定的吸收光谱。根据细胞成
分所具有的这种特性，可利用显微分光光度计对
某些成分进行定位、定性，甚至定量测定。
Fluorescence image, DNA in blue and Microtubules in green
（三）直视活细胞的相差显微镜
1.特点: 可用以观察活细胞。 2.原理: 波长 振幅 速度
颜色 亮度 相位
⑴普通显微镜: 光通过染色标本时，波长和振幅发生变化，人
眼才能观察到。但光通过活细胞时，波长和振幅几乎无改变，
探针，后来又发明了免疫探针法。
人类染色体端粒DNA的荧光原位杂交照片
2.Southern杂交
是体外分析特异DNA序列的方法，操作时先用限制
性内切酶将核DNA或线粒体DNA切成DNA片段，经凝 胶电泳分离后，转移到醋酸纤维薄膜上，再用探
针杂交，通过放射自显影，即可辨认出与探针互
补的特殊核苷序列。
3.下列哪一项与显微镜的分辨率无关（ D ）
A．光波波长
B．标本和透镜之间的物质的折射率
C．透镜的数值孔径 D．物镜放大倍数 4．普通光学显微镜用油镜观察时镜油应该加在哪个部位? C A．标本上 B．物镜上 C．标本和物镜之间 D．目镜上
生物化学与分子生物学技术
细胞化学技术 免疫细胞化学
显微光谱分析技术
细胞生物学实验技术
METHODS AND TECHNIQUES
细胞生物学研究方法
细胞形态结构的观察方法 显微技术
光学显微镜：以可见光（或紫外线）为光源。
电子显微镜：以电子束为光源。
（一）普通光学显微镜
1. 构成： ①照明系统 ②光学放大系统 ③机械装置 2. 原理：经物镜形成倒立实像，经目镜放大成虚像。
（四）观察物体轮廓的暗视野显微镜
在日常生活中，室内飞扬的微粒尘土是不易
被看见的，但在暗的房间中若有一束从光线从门
缝斜射过来，灰尘便粒粒可见了，这是光学上的
丁达尔现象。
——制造暗视野显微镜的灵感
（四）观察物体轮廓的暗视野显微镜
原理:利用特殊装置 使照射光斜照到样品 上，照射光无法进入 物镜，故呈暗视野。 只有从样品发出的散 射光才能进入物镜被 放大, 在暗的背景中 呈现明亮的像。
几种介质的折射率
介质 折射率 空气 1 水 1.33 香柏油 1.515 α 溴萘 1.66
显微镜的最大分辨率
目前最好的玻璃透镜的镜口角是140°
可见光的波长范围400～700nm，其中蓝色光的波长 最短，为450nm
空气介质：
r＝0.61λ/NA＝0.61×450/0.94＝292nm≈0.3um 油介质： r＝0.61λ/NA＝0.61×450/1.5×0.94＝196nm≈0.2um
（四）分子杂交技术
具有互补核苷酸序列的两条单链核苷酸分子片段，在适当
条件下，通过氢键结合，形成DNA-DNA，DNA-RNA或RNA-RNA 杂交的双链分子。这种技术可用来测定单链分子核苷酸序 列间是否具有互补关系。
1.原位杂交 用于检测染色体上的特殊 DNA 序列。最初是使用放射性 DNA
显微镜的有效放大倍数
肉眼：0.2 mm; 光镜：0.2 um; 电镜：0.2 nm 光镜：0.2mm/0.2um＝1000 X 电镜：0.2mm/0.2nm＝106 X
(二) 荧光显微镜
原理: 荧光分子在受到光照射后，可吸收特定波 长的短波光线，并发射出比原来吸收波长 更长的光。紫外光Fra bibliotek可见光
红外光
2.
Schiff反应：醛基可使 Schiff试剂中的无色品红变为红
色。用于显示糖和脱氧核糖核酸（Feulgen反应）。
3.
联苯胺反应：过氧化酶分解 H202 。产生新生氧，后者再
将无色联苯胺氧化成联苯胺蓝，进而变成棕色化合物。
4. 5.
脂溶染色法：借苏丹染料溶于脂类而使脂类显色。 茚三酮反应：显示蛋白质。
透射电镜及其图像
扫描电子显微镜
工作原理：是用一束极细的电子束扫描样品，在 样品表面激发出二次电子，二次电子的多少与样 品表面结构有关，二次电子由探测器收集，信号 经放大用来调制荧光屏上电子束的强度，显示出 与电子束同步的扫描图像。
为了使标本表面发射出二次电子，标本在固定、 脱水后，要喷涂上一层重金属膜，重金属在电子 束的轰击下发出次级电子信号。
分子杂交技术
PCR技术
（一）细胞化学技术
固定 目的是将细胞的结构和化学物质双重地
保存下来。 1.物理固定：如冷冻切片。
2.化学固定：如甲醇、乙醇、丙酮、甲醛、戊
二醛和锇酸等试剂均能对细胞结构和其中的某 些化学物质加以固定保存。
显示方法 细胞内核酸、蛋白质、酶、糖类
与脂质等的显色方法
1.
金属沉淀法：如磷酸酶分解磷酸酯底物后，反应产物最 终生成CoS或PbS有色沉淀，而显示出酶活性。
样品表面形貌
表面越突出，图像越亮
表面越凹陷，图像越暗
扫描电镜及其图像
1.使用哪种仪器，可以获得三维图象（ A ） A.扫描电子显微镜 C.荧光显微镜 B．透射电子显微镜 D．光学显微镜
2.显微镜是观察动、植物切片和微生物的工具，评价一台显
微镜首选的因素是（ B ）
A.物镜和目镜倍数 Ｃ.有名厂家 B．清晰度 D．零件、功能齐全
将 RNA 转 移 到 薄 膜 上 ， 用 探 针 杂 交 ， 则 称 为
Northern杂交。
（五）PCR技术
1. 原理
PCR是聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）,
它是利用DNA 双链复制的原理，将基因的核苷酸序列不断的
加以复制，使其数量呈指数方式增加。因为整个过程是在体外
（四）观察物体轮廓的暗视野显微镜
聚光镜中央有挡光片，视野背景是黑的，只允许被标本反射
和衍射的光线进入物镜，物体边缘是亮的，反差增大。
可观察 4～200nm的微粒子，分辨率比普通显微镜高50倍。 观察的是物体的轮廓，分不清内部的精细构造，用于观察活
细胞内的细胞核、线粒体、液体介质中的细菌和霉菌等。
营养 生存环境 废物的排除
动物细胞培养
类型：原代培养细胞（1－10代）
传代培养细胞（传10代左右），出现危机， 大部分衰老死亡，少数继续。 细胞株：再传40－50代次，正常二倍体，接触抑制。 细胞系：亚二倍体或非整倍体，接触抑制丧失
植物细胞培养
原生质体培养：体细胞培养，培养脱壁后的细胞，特点：
植物细胞先去壁； 融合方式：仙台病毒或聚乙二醇介导，电融合等 同核融合细胞，异核融合细胞，染色体丢失
单克隆抗体技术
1975年英国科学家Milstein and Kohler, 1984 年获诺贝尔奖
B淋巴细胞 + 小鼠骨髓瘤
这就无法用人眼观察。
细胞内的各结构可因密度不同而产生相位差(即 光程差)，不过人眼无法鉴别这种微小的变化。相差 显微镜能够把这种“相位差”变成“振幅差”，即 图像的明暗差。
通过致密部分(如细胞核),速度慢 通过疏松部位(如细胞质),速度快
相位差 (光程差)
相差显微镜 （相差板）
振幅差 (明暗差)
（六）倒置显微镜
物镜与照明系统颠倒；
用于观察培养的活细胞 ，
有的还具有荧光装置。
电子显微镜 透射电子显微镜 (transmission electron microscope, TEM)
以电子束（波长比光波短 100,000倍）作光源，电
磁场作透镜；
分辨力0.2nm，放大倍数可达百万倍；
光学显微镜技术 显微镜的分辨率
0.61 λ 分辨率 D =
N . sin α / 2
• N：聚光镜和物镜之间介质的折射率，空气为1，油为1.5； • α：样品对物镜的张角（孔径角）；
• λ：照明光源的波长；
• NA＝Nsinα/2（物镜的数值孔径）， •干燥系物镜：0.05～0.95，油镜0.85～1.40。
（二）免疫细胞化学
免疫细胞化学是根据免疫学原理，利用抗体同 特定抗原专一结合，对抗原进行定位测定的技术。 抗原主要为大分子或与大分子相结合的小分子；抗
体则是由浆细胞针对特定的抗原分泌的γ球蛋白。