水产品中孔雀石绿检测方法研究进展
水产品中孔雀石绿的检测方法研究进展
水产品中孔雀石绿的检测方法研究进展
肖业承;贺阳;尹婵
【期刊名称】《广东化工》
【年(卷),期】2014(41)11
【摘要】水产品中的孔雀石绿(MG)因其致癌、致畸、致突变等毒副作用对人类健康产生严重危害,近年来违规使用MG的事件引起广泛关注.因此对水产品中MG及其代谢物隐性孔雀石绿(LMG)的检测日益重要.文章对现有的MG样品预处理和主要检测方法进行概述并比较其优缺点,对MG检测方法今后的发展方向进行展望,以期为MG残留的检测及相关研究提供参考.
【总页数】3页(P137-138,151)
【作者】肖业承;贺阳;尹婵
【作者单位】深圳市龙岗区水产品质量监督检测中心,广东深圳518100;深圳市龙岗区水产品质量监督检测中心,广东深圳518100;深圳市光明新区动植物检验检测中心,广东深圳518107
【正文语种】中文
【中图分类】TS254.7
【相关文献】
1.水产品中孔雀石绿及其代谢物残留量检测方法研究进展 [J], 赵全东;戴欣
2.水产品中孔雀石绿检测方法研究进展 [J], 刘海新;张农;钱卓真
3.水产品中孔雀石绿与隐色孔雀石绿检测方法研究进展 [J], 赵俊;吕志林;曲克明;
张旭志
4.水产品中孔雀石绿的常规检测方法 [J], 倪佳
5.水产品中孔雀石绿检测方法分析 [J], 王雪;潘发林;赵莹
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水产品中孔雀石绿药物残留检测技术研究进展
水产品中孔雀石绿药物残留检测技术研究进展孔雀石绿是一种广泛应用于水产品中的药物残留检测技术。
它是一种有机物，常被用于治疗和控制水中的细菌和寄生虫。
然而，孔雀石绿的使用可能会对人体造成危害，因为它可以影响人体对细菌和寄生虫的免疫系统。
因此，许多国家对水产品中孔雀石绿的使用提出了限制。
然而，由于水产品野生和养殖的差异以及孔雀石绿对不同物种的不同响应，使得孔雀石绿药物残留检测变得相当困难。
本文将介绍当前孔雀石绿药物残留检测技术的研究进展。
常用的孔雀石绿药物残留检测技术包括高效液相色谱法、荧光光谱法、气相色谱法和液相串联质谱法等。
这些技术具有高灵敏度和高选择性，但也存在一些缺点。
例如，这些技术需要昂贵的仪器设备、高技术人员操作，并且需要花费大量时间进行样品制备。
此外，它们还需要处理大量的样品，这使得这些技术的成本和时间都非常高。
随着科技的发展，出现了一些新型的孔雀石绿药物残留检测技术。
这些技术以其快速、精确和经济的特点受到研究人员的青睐。
1、表面增强拉曼光谱法表面增强拉曼光谱法是一种新型的孔雀石绿药物残留检测技术。
它利用纳米颗粒表面的等离子共振增强拉曼散射，可以增强样品中分子振动的强度，从而提高信号强度和灵敏度。
与传统的检测技术不同，这种技术无需对样品进行复杂的前处理步骤，样品可以直接进行检测。
此外，这种技术还具有快速、稳定和经济的特点。
三、结论随着科技的发展，越来越多的新型孔雀石绿药物残留检测技术已经被开发出来。
这些新技术不仅具有高灵敏度，而且速度和经济性也得到了显著的提高。
这些新型技术的出现为水产品中孔雀石绿药物残留的检测提供了更加快速、准确和可靠的手段。
我们相信，在不久的将来，这些新技术将成为孔雀石绿药物残留检测的主要方式，帮助确保水产品的质量和安全。
水产品中残留孔雀石绿的毒性与检测方法
I he『esea rch『eviewed水产品中残留孔雀石绿的毒性与检测方法王邦国(靖远县农产品质量安全检验检测管理站730699)摘要：作为一种带有金属光泽绿色结晶体的孔雀石绿,在化学界中被称为四甲基代二氨基三苯甲烷,其在戊醇、乙醇、甲醇以及水中易于溶解,水溶液呈现蓝绿色,抗菌效力在药物染料中较强，可作为驱虫剂或杀菌剂，属于三苯甲烷类染料。
下面本文章将对水产品残留孔雀石绿的研究进展加以分析。
关键词:水产品;残留物质；孔雀石绿；研究进展在养殖过程中，我国曾以孔雀石绿作为清塘杀菌剂，同时，也常将孔雀石绿使用在存放池内和运输过程中，它们在鱼体内可分别代谢为无色结晶紫与无色孔雀石绿，因为其母体化合物与代谢物质存在较大的副作用，极易致突变、致畸、致癌，至此多数国家已经在20世纪90年代将孔雀石绿列为水产养殖禁用药用。
但是现阶段仍有一些渔民在违规使用,主要是因为孔雀石绿价格便宜,抗菌效果较好,所以有效监测孔雀石绿残留物质是至关重要的遥1孔雀石绿的分布与代谢情况进入机体后的孔雀石绿通常会经过生物转化，变成无色孔雀石绿，属于脂溶性的衍生物,极易残留在组织中。
一些业界人士发现，在鱼体内残留的孔雀石绿物质比水体中孔雀石绿的浓度明显要高,主要分布在内脏器官、皮肤、肌肉、肝脏、肾脏以及血浆中,同时体内也会蓄积孔雀石绿，特别是含有较多脂肪的组织中浓度水平更高。
在清除体内的孔雀石绿过程中，除脂肪含量影响与自身解毒能力外，还会受到环境因素的影响，如PH值和温度等。
在体内孔雀石绿的代谢方式有两条:首先，在还原酶的催化作用下,孔雀石绿可降解成无色孔雀石绿;其次，经N-脫甲基作用,在细胞色素催化下,生成次级或初级代谢产物芳香胺。
另外,无色孔雀石绿也有两条代谢方式:首先,基于氧化酶作用下,无色孔雀石绿会被重新氧化成孔雀石绿;其次,无色孔雀石绿经N-脫甲基作用，在催化作用下，酯化后与DNA形成DNA加合物。
2孔雀石绿的毒性与致毒机制据大量研究证实,在水产品中，孔雀石绿对动物的毒性较强,导致鱼皮肤和鳃上皮细胞轻度炎症,扩大肾小管壁细胞的胞核,使肾管腔有轻度扩张，甚至会影响鱼的生长与摄食,减少鱼肠中酶的分泌量。
水产品中孔雀石绿污染及检测技术研究进展
水产品中孔雀石绿污染及检测技术研究进展樊晓博1,2，高红芳1,2（1.渭南职业技术学院，陕西渭南 714000；2.渭南市农产品食品检验检测研究中心，陕西渭南 714000）摘 要：孔雀石绿是水产品禁用兽药。
通过对各个地区市售水产品中孔雀石绿污染情况进行综合调查研究发现，虽然膳食暴露水平评估风险较低，但是污染情况不容乐观，特别是珠三角地区淡水鱼中孔雀石绿的污染率较高，仍需持续加强监管，提升检测手段。
针对此种情况，本文综述了水产品中孔雀石绿检测的各种新技术，包括仪器分析法、表面增强拉曼光谱、分子印迹技术、分子识别技术及电化学传感器等检测技术的基本原理及应用进展。
其中，量子点技术、分子印迹技术、纳米金技术及核酸适配体技术等联合使用，可显著提升检测方法的特异性和准确度。
在未来的检测中，操作简单、便于携带、检测快速及结果直观准确是今后技术的发展方向。
关键词：孔雀石绿；水产品；污染；检测技术Research Progress of Contamination and Detection Technique of Malachite Green in Aquatic ProductsFAN Xiaobo1,2, GAO Hongfang1,2(1.Weinan V ocational &Technical College, Weinan 714000, China; 2.Weinan Testing & Inspection andResearch Center of Agricultural Products and Food, Weinan 714000, China)Abstract: Malachite green is a illegal drug in aquatic products. Through the comprehensive investigation of malachite green pollution in aquatic products sold in various regions, it is found that although the risk assessed from dietary exposure level is low, the situation of malachite green pollution in aquatic products is not optimistic，in particular，the pollution rate of malachite green in Pearl River Delta freshwater fish is relatively high, it is still necessary to continue to strengthen supervision and improve testing methods. In view of this situation, This paper reviews the basic principles and application progress of various new technologies for the detection of malachite green in aquatic products, including instrumental analysis, surface enhanced Raman spectroscopy, molecular imprinting, molecular recognition and electrochemical sensors. Among them, the combination of quantum dot technology, molecular imprinting technology, nano gold technology and nucleic acid aptamer technology can significantly improve the specificity and accuracy of the detection method. In the future, the technology development will be much more simpler, faster and higher accurate.Keywords: malachite green; aquatic product; contamination; detection technology孔雀石绿（Malachite Green，MG）是一种三苯甲烷类有机物，在皮革、纺织、制陶等领域可作为工业染料[1-2]。
水产品有机有害物的检测—孔雀石绿的测定
定量方法
四
内标法：
① 实验过程采用同位素内标法。 ② 内标物为：同位素内标氘代孔雀石绿(D5-MG)、
同位素内标氘代隐色孔雀石绿(D6-LMG)，纯度 大于98%。
检测原理
二
提取原理
试样中的孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶 紫、隐色结晶紫残留用乙腈提取，中性氧 化铝和阳离子交换固相萃取柱净化。
定量方法
1.液相色谱串联质谱测定 2.内标法定量。
三
1.提取过程：
提取步骤
称取5g样品于50 mL塑料离心管中； 加入20 μL内标标准工作液,加人10 mL乙腈； 匀浆2 min(l0000 r/min)； 超声提取10 min,离心3 min(3000 r/min)； 取上清液再加人10 mL乙腈,重复提取一次；
提取步骤
三
2.净化过程：
活化：5 mL乙腈。 上样：准确吸取5mL过固相萃取柱。 洗脱：用4 mL乙腈淋洗收集。 浓缩：洗脱液氮吹至0.5mL(≤45℃)。 复容：1.0 mL乙腈溶解，再加入1mL 乙酸铵溶液，过0.45 μm滤膜测定。
检测范围
四
种类及项目参数：
① 鱼、虾、蟹、贝、鱼粉、植物源性饲 料、浓缩饲料、配合饲料、饲料添加 剂、精料补充料。
检测原理 提取步骤 检测范围
孔雀石绿 简介
一
孔雀石绿室一种带有金属光泽的绿色结晶体，易 溶于水，水溶液呈蓝绿色。曾经作为杀菌剂，杀虫剂， 消毒剂 广泛应用于养殖业中，预防水产品水霉病、 鳃霉病和寄生虫病等，也用于水产品的运输和存放过 程中消毒并延长鱼类的生存时间，经研究表明孔雀石 绿进入人体或动物体后，代谢产物有高毒性、高残留 具有致畸 致癌 致突变风险严重危害人体或水产品安 全，因此我国已将孔雀石绿列为水产养殖禁用药物。
水产品中孔雀石绿及其代谢物残留量检测方法研究进展
子对 ， 增加 提 取效 率 ； 氢化 钾 溶液 是 为 了把 孔 雀 硼
石绿还原为 隐性孔雀石绿。②净化浓缩 ： 用乙腈提 取后 。 经二氯 甲烷液液萃取待测物 。 同时除去水 并
溶 性 杂质 ； 取 液用 氮 吹 仪或旋 转 蒸 发 仪浓 缩 ， 萃 再
经 提前 活 化好 的 中性 （ 或酸 性 ） 氧化 铝柱 和 Ｐ Ｓ阳 Ｒ
２ 检 测 样 品 的前 处 理 过 程
检测 样 品需 先去 磷 、 去皮 沿 背 脊取 可 食 肌 肉
部 分 ． 经 提取 和 净化 浓缩 两 大 步骤 。 可 根 据 实 再 也
高毒 性 、 高残 留和致 畸 、 癌 、 突变 等 特 点 ［， 致 致 １ 当 】
生 物 体 浸染 这 种染 料后 会 迅 速 吸收 并在 体 内代 谢 为具 有更 强危 害 的隐性孔 雀石 绿ａ Ｇ 。鉴 于孔 雀 ） 石 绿 及 其 隐性 孔雀 石绿 的危 害性 ．包 括 我 国在 内
法 的 优缺 点进 行 了 比较研 究 。
的几种检测方
［ 键词 】 雀石绿 ； 关 孔 隐性 孔 雀 石 绿 ； 留 ； 测 方 法 残 检 【 图分 类 号 】Ｓ９ ２ 中 ４ 【 献 标 识 码 ］Ｂ 文
１ 前 言
孔 雀 石 绿ｆ １ 翠 绿 色 有 光 泽 的 结 晶 体 。 ＭＧ 为 属 三苯 甲烷类 染 料 。孔雀石 绿号 称 苏丹红 第二 ， 有 具
际情况进行适当增减或改进 。 ①提取 ： 一般用 乙腈
进 行 提取 ， 取 过程 中根 据 情况 要 加 入 氧化 铝 、 提 盐
酸羟胺溶液 、 乙酸 铵 溶 液 、 甲苯 磺 酸 溶 液 、 氢 对 硼 化 钾等 。加 人 中性或 酸性 氧化 铝来 吸附 油脂 ； 入 加
水产品中的孔雀石绿的毒性残留及其研究概况
192区域治理PRACTICE作者简介：宋卫清，生于1988年，本科，助理水产工程师，研究方向为畜禽水产品药物残留的检测。
水产品中的孔雀石绿的毒性残留及其研究概况娄底市畜牧水产和农机事务中心 宋卫清摘要：孔雀石绿是一种具有较强实用性的化学物质，常见的孔雀石绿都是人工化合物，用途广泛，但又充满危害，所以如何科学合理地使用孔雀石绿成了当今研究领域的热门话题。
因此，对孔雀石绿展开相关实验研究具有一定的实际意义和实际价值。
本文基于孔雀石绿的基本性质、新陈代谢以及毒性展开详细介绍，此外，本文还对孔雀石绿的检测方法进行相关探讨，希望为相关研究提供微薄之力。
关键词：孔雀石绿；水产品；毒性；残留；检测方法中图分类号：S859.82文献标识码：A文章编号：2096-4595（2021）01-0192-0002人工合成的孔雀石绿的主要成分包括：苯甲醛和二苯甲胺，是一种三苯基甲烷类工业产品。
因孔雀石绿具有杀菌杀虫的功能，常用于水产养殖业。
孔雀石绿在水产品中新陈代谢后可形成无色孔雀石绿和无色结晶紫。
相关研究表明，无论是孔雀石绿还是其代谢物，都具有较强的副作用，如致癌、致畸等[1]。
所以20世纪90年代起，越来越多的国家开始明令禁止水产养殖业使用孔雀石绿。
但是因为孔雀石绿的杀菌杀虫的效果十分良好，而且没有找到代替药物，所以仍然存在部分水产养殖户继续使用孔雀石绿的情况。
然而水产品营养丰富、味道鲜美，一直以来都是人们餐桌上很受欢迎的食材，因此对水产品质量安全的监控至关重要。
本文基于孔雀石绿的基本性质、新陈代谢以及毒性展开详细介绍，此外，本文还对我国孔雀石绿的检测方法进行相关探讨，希望能为我国孔雀石绿的检测工作提供微薄之力。
一、孔雀石绿的理化性质及应用一般来说，孔雀石绿拥有两种存在形态：①天然矿石；②人工有机化学合成物。
天然矿石类的孔雀石绿物理性质为：表明呈草绿色；化学性质为：易溶于酸性液体；常用作颜料。
人工合成的孔雀石绿的物理性质为：表明呈孔雀绿色；化学性质为：易溶于水和醇类液体，具有毒性[2]。
水产品中孔雀石绿药物残留检测的研究概述
水产品中孔雀石绿药物残留检测的研究概述■刘毓(长沙市水生动物防疫检疫站长沙410000)孔雀石绿是一种带有金属光泽绿色的结晶体，化学名称为四甲基代二氨基三苯甲烷，分子式(c23h25cln2)易溶于水、甲醇、乙醇和戊醇，水溶液呈蓝绿色，它可用来作杀菌剂、驱虫剂，是药物染料中抗菌效力较强的一类，属于三苯甲烷类染料。
我国曾将孔雀石绿作为养殖过程中清塘的杀菌剂，而且在运输过程中和存放池内，也常使用孔雀石绿，它们在鱼体内可分别代谢为无色孔雀石绿和无色结晶紫，由于其母体化合物和代谢物均具有潜在的致癌、致畸、致突变等副作用，20世纪90年代以来许多国家都将其列为水产养殖的禁用药物。
但是由于其抗菌效果好、价格便宜，不少渔民仍在违规使用，因此孔雀石绿残留监控就显得格外重要。
本文从孔雀石绿分布及代谢、制毒机制及检测方法概述水产品中孔雀石绿残留检测研究进展。
1孔雀石绿的分布及代谢孔雀石绿进入机体后，通过生物转化，还原成脂溶性的衍生物无色孔雀石绿，在组织中残留。
国外研究发现孔雀石绿在鱼体内的残留量远远高于水体中孔雀石绿的浓度水平，主要分布在血浆、肾脏、肝脏，肌肉、皮肤以及其它的内脏器官中，并且孑L雀石绿还能在体内蓄积，尤其脂肪含量较多的组织中浓度较高。
孑L雀石绿和无色孔雀石绿在体内的清除速率除了自身解毒能力以及脂肪含量的影响以外，还受温度和pH值等一系列环境因素的影响。
孔雀石绿在体内有两条代谢途径：一是孔雀石绿在还腿的催化作用下降解成无色孔雀石绿；二是在细胞色素催化下经N—脱甲基作用生成初级和次级代谢产物芳香胺。
无色孔雀石绿的代谢途径：一是在氧化酶的作用下被重新氧化成孔雀石绿，二是在催化作用下脱甲基再进一步酯化后与DNA反应生成DNA加合物。
2孔雀石绿的毒性及致毒机制国内外众多研究表明孔雀石绿对水生动物的毒性较强。
研究表明孔雀石绿能引起鱼鲍和皮肤上皮细胞轻度炎症，使肾管腔有轻度扩张，肾小管壁细胞的胞核扩大，更重要的是，减少鱼肠中酶的分泌量，从而影响鱼的摄食及生长。
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福建水产,2007年3月第1期NO.1JOURNAL OF FUJI AN F IS HER IESM ar .26.2007水产品中孔雀石绿检测方法研究进展刘海新,张 农,钱卓真(福建省水产研究所,福建厦门361012)摘要:水产品的安全问题日益成为社会关注的焦点,近年来,我国出口的鳗鲡以及国内市场上的水产品都发现了孔雀石绿残留。
国内各有关检测机构相继开展了水产品中孔雀石绿残留量的检测。
本文对现有的各种检测方法的优点和局限性作一概述,以便研究者能在此基础上进一步改进和发展。
关键词:水产品;孔雀石绿;检测1 孔雀石绿的特性与危害孔雀石绿(M alachite green ,MG )属三苯甲烷类染料,化学名称为:四甲基代二氨基三苯甲烷,结构见图1。
在水产养殖中,孔雀石绿主要用来抗真菌感染和杀灭寄生虫,鱼类一般用于防治水霉病、烂鳃病以及寄生虫等。
其价格低廉,疗效显著,当前还找不到一种特效药完全取代孔雀石绿,因此曾经在水产养殖业中广泛应用[1]。
孔雀石绿进入水生动物体内后,会快速代谢成脂溶性的无色孔雀石绿(Leuco m a lach ite green ,L MG ),结构见图1。
据Berg w erff [2]等的研究,对欧鳗(Anguilla anguilla )采用孔雀石绿0 1mg L -1药浴处理24h 。
药浴开始6h 后,鳗鱼体内孔雀石绿残留到达峰值,药浴处理后72h ,体内90%孔雀石绿被代谢,720h 后有些鱼体中已检测不出孔雀石绿残留,1920h 后所有鱼体中都检测不出孔雀石绿残留。
而无色孔雀石绿在药浴处理后72h 达到峰值,然后缓慢代谢,720h 后只代谢了50%,2400h 后仍然可检测出鱼体肌肉中有15 12 g kg -1的无色孔雀石绿残留。
孔雀石绿具有潜在的致癌、致畸、致突变的作用,其在养殖业中的使用未得到美国食品与药物管理局(FDA )的认可[3];根据欧盟法案2002/675/EC 规定[4],动物源性食品中孔雀石绿和无色孔雀石绿残留总量限制为2 g kg -1;日本的肯定列表也明确规定在进口水产品中不得检出孔雀石绿残留;我国在农业行业标准《NY5071-2002无公害食品鱼药使用准则》中也将孔雀石绿列为禁用药物。
2005年,福建、江西、安徽等省出口欧盟、日本、韩国的鳗鱼产品先后被检出孔雀石绿残留,我国水产品出口因此受严重影响;2006年,上海市场上的多宝鱼和香港市场上的桂花鱼,也福建水产总第112期都检出孔雀石绿残留。
水产品中孔雀石绿的残留问题日益成为社会关注的焦点。
2 检测方法现状孔雀石绿在水生动物体内会很快代谢成无色孔雀石绿,无色孔雀石绿的毒性甚至超过孔雀石绿。
因此,有关法规对动物源性食品中孔雀石绿残留限量的规定都是以孔雀石绿和无色孔雀石绿的总量为限量指标,要求相关的检测方法能检测出孔雀石绿和无色孔雀石绿总量。
目前,孔雀石绿的检测方法以理化检测法和免疫学检测法为主。
2 1 理化检测法2 1 1 薄层层析法[5-7](TLC)采用硅胶板分离孔雀石绿的薄层层析法,灵敏度低、定量误差范围大,要求被检样液中的目标化合物浓度较高。
该方法主要用于孔雀石绿药物的鉴定和具有高残留量基质中孔雀石绿的定性测定,不适于动物源性食品中孔雀石绿残留量的检测要求。
2 1 2 分光光度法[8]分光光度计灵敏度低,且没有对目标化合物进行分离定量的功能,在低浓度水平的复杂基质中,检测结果假阳性概率高。
目前,该方法仅局限于水样的检测,尚未见在复杂基质样品中应用。
2 13 高压液相色谱法(HPLC)孔雀石绿的沸点高,不易挥发,其色谱分析法多采用液相色谱法。
据H ajee[9]研究,采用正相的CN柱或反相的C8、C18柱都可以实现分离,反相柱的柱效和分离度较好。
目前,大多采用C18反相柱分离。
孔雀石绿在618nm处有吸收峰[10],可采用紫外可见检测器检测;无色孔雀石绿的吸收峰在267nm[11],同时也有荧光特性(激发265nm、发射360nm)[12],可采用紫外或荧光检测器检测。
基于孔雀石绿和无色孔雀石绿的光学特性,在检测手段上主要是通过以下四种方式实现对孔雀石绿和无色孔雀石绿同时检测。
2 13 1 可编程的紫外可见检测器[11]:根据出峰时间的不同,对孔雀石绿用618n m检测,对无色孔雀石绿用267nm检测,孔雀石绿和无色孔雀石绿的检测限都是2 g kg-1。
由于很多有机小分子在267nm处都有吸收,无色孔雀石绿目标峰附近干扰峰较多,该方法定性和定量的准确性不够理想。
2 13 2 紫外可见检测器前连接在线PbO2氧化柱[10,13]:通过PbO2将无色孔雀石绿氧化成孔雀石绿,618n m检测。
该方法定性和定量的准确性都比较理想,是我国现行的水产行业标准[10]和国家标准[13]采用的检测方式,对孔雀石绿检测限都是2 g kg-1;对无色孔雀石绿的检测限分别为4 g kg-1和2 g kg-1。
目前,国内各政府部门的检测机构和各水产品生产、加工单位普遍采用该检测方法。
由于使用了PbO2氧化柱,使得该方法也存在一些弊病,主要表现在:第一,由于在检测器前增加了氧化柱,加大了柱后体积,色谱峰扩展较大,降低了检测的灵敏度。
第二,氧化铅会将部分孔雀石绿转化成去甲基孔雀石绿[14],影响检测灵敏度。
第三,氧化柱的性能对色谱峰的对称性和响应值的大小会有一定的影响,目前这种PbO2氧化柱多为检测人员自己填装,性能不稳定。
2 13 3 紫外可见检测器检测和荧光检测器串联[12]:紫外可见检测器在618nm检测孔雀石绿,荧光检测器采用激发265nm、发射360n m检测无色孔雀石绿。
该方法充分利用紫外可见和荧光检测器的优点,克服了前两种检测方法中对无色孔雀石绿定性准确性不高和灵敏度低的缺点,将无色孔雀石绿的灵敏度提高到0 5 g kg-1,但对孔雀石绿的灵敏度仍然只有2 g kg-1。
2 134 荧光检测器[15]:在样品前处理过程中加入硼氢化钾,将孔雀石绿还原成无色孔雀石绿,荧光检测器定量检测。
该方法利用了无色孔雀石绿的荧光特性和荧光检测器的高灵敏度和选择性,有效地提高了检测的灵敏度,使检测限达到05 g kg-1。
但该方法对样品前处理要求较高,在处理过程中要保证所有的孔雀石绿都转化成无色孔雀石绿,操作上有一定的难度。
选用配备紫外可见检测器的高压液相色谱,对孔雀石绿和无色孔雀石绿的检测限都是2 g kg-1,不能满足欧盟法规对孔雀石绿和无色孔雀石绿总量2 g kg-1的限制规定。
只有采用荧光42第1期刘海新等:水产品中孔雀石绿检测方法研究进展检测器才能将其灵敏度提高到0 5 g kg-1,符合各国食品进出口检验的要求。
2 1 4 液相色谱质谱联用检测法选用配备紫外可见和荧光检测器的高压液相色谱法,其优势在于对目标物定量分析,并不能对检测结果给出可靠的定性结果,存在假阳性风险。
因此,在水产品进出口检验中还要求对所检出的阳性样品有定性的确证结果。
目前,有机小分子的定性分析,主要以质谱的定性分析结果为主。
根据欧盟法案2002/657/EC[4]要求,在农药和兽药残留分析中,对禁用药(G roupA),以质谱作为确证方法,必须达到4个点的要求。
低分辨率单级质谱要监测4个离子,一个用于定量,三个用于确证;高分辨率单级质谱要监测2个离子,一个用于定量,一个用于确证;多级质谱要监测1个母离子和2个产物离子,产物离子一个用于定量,一个用于确证。
以液相色谱质谱联用检测孔雀石绿,目标化合物分离与高压液相色谱法原理相同,都是应用反相色谱柱分离,运用质谱检测的目的是通过质谱的高选择性,进一步提高检测结果定性、定量的准确性和灵敏度;另外,以质谱为检测器,可以用氘代孔雀石绿和氘代无色孔雀石绿为内标,应用内标法检测,降低由于前处理过程中目标化合物的损失所带来的定量结果的偏差,提高定量的准确性。
2 1 4 1 单四极杆质谱[14]:以单四极杆为检测器的液质联用仪,虽然选择离子监控(SI M)模式,可提高灵敏度和定性的准确性,但液相色谱柱分离能力低,且四极杆为低分辨率质谱(质量分辨率只能达到0 5Da),检测结果背景干扰大。
在低浓度水平的复杂基质中,阳性结果较难确证。
2 1 4 2 离子阱质谱[16]:离子阱质谱也属于低分辨率质谱,虽然它可以通过多级质谱来提高其定性的准确性,但仪器本身固有的质量歧视效应(1/3质量效应)、空间电荷效应、定量线性范围窄、质量准确度差等缺陷,其定性和定量的准确性都不高。
因此采用离子阱质谱检测主要在科研上,质检部门大多不采用该仪器检测。
2 1 43 串联四极杆质谱[13,17]:该方法是目前国家标准[13]的检测方法,也是各国进出口检验部门普遍采用的检测方法。
应用三重极极杆多重反应监测(M u ltiple Reacti o n M on itor,MRM)定量分析的功能:第一级四级杆挑选出监测离子,第二级四极杆进行碰撞反应,第三级四极杆挑选出一个离子用于定量,一个离子用于确证。
该仪器通过第一级四极杆的离子选择,有效地降低了背景的干扰,极大提高了灵敏度和定性准确性。
2 1 4 4飞行时间质谱[3]:飞行时间质谱属高分辨率质谱,其质量分辨率可达到1mDa,高质量选择性有效地降低了背景干扰,定性和定量准确性高。
在样品分析中,选择2个监测离子,一个离子用于定量,一个离子用于确证。
飞行时间质谱与串联四极杆质谱比较,其灵敏度稍低,但还是能满足各国相关法规对孔雀石绿检测的要求。
总体来说,采用液相色谱质谱联用测定水产品中孔雀石绿残留量,其灵敏度都能达到0 5 g kg-1的水平,符合相关法规的要求。
但在低浓度水平的复杂基质中,定性结果的可靠性差异较大,单四极杆和离子阱质谱测定结果较难确证;串联四极杆和飞行时间质谱的检测结果较可靠。
2 1 5 气相色谱质谱联用[18]孔雀石绿沸点高、不易挥发,但无色孔雀石绿是易挥发的有机物,可以用气相色谱质谱联用检测无色孔雀石绿。
无色孔雀石绿在水生动物体内的代谢速度慢、残留期长,在阳性样品中,主要还是以无色孔雀石绿残留为主。
因此,采用气相色谱质谱联用对水产品中无色孔雀石绿残留进行定性检测也是有一定的实际意义。
气相色谱单四极杆质谱联用检测无色孔雀石绿,选用12 5 -M H P-1毛细管柱分离,质谱检测器以选择离子监控(SI M)模式监测四个离子,进行定性、定量分析,气相色谱毛细管柱分离度高,检测结果背景干扰小,检测灵敏度和定性准确性都较理想。
2 2 免疫学检测法酶联免疫法(enzy m e-li n k i m m unosorbent assay,ELISA)[19]:ELISA方法的基本原理是将酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合,结合产物不会改变抗体的免疫学特性,也不影响酶的生物学活性。