最新流式细胞术贝克曼
贝克曼流式
贝克曼流式
贝克曼流式是一种现代生物医学技术，在细胞生物学、分子生物学、免疫学及临床诊断中得到广泛的应用。
它利用激光散射和荧光共激发技术，对细胞单元及其表面标记进行高速精确检测、分离、和定量分析。
该技术可同时检测多达18种不同的表面标记，并能够针对其物理和化学性质进行详细的分类和研究。
贝克曼流式技术的优势在于其高度的灵敏度和特异性，以及对细胞表面标记的高通量检测和定量测量能力。
它可帮助科学家们解决一些复杂的研究问题，并且在临床诊断中也得到广泛的应用。
例如，它可用于癌症筛查、免疫系统疾病的诊断和治疗等方面。
总的来说，贝克曼流式技术是一种高级的、通用的、快速的、灵敏的和特异的生物医学检测技术，在现代生物医学领域里发挥着重要的作用。
美国贝克曼库尔特流式细胞分析仪
美国贝克曼库尔特流式细胞分析仪（Beckman coulter cell）产品型号：Cell Lab Quanta SC当前价格：0.00元产品数量：0新旧程度：全新有效期至：0000-00-00所在地：产品简介：仪器简介：T细胞亚群检测的CD45/CD4/CD8/CD3、CD45/CD56/CD19/CD3；阵发性血红蛋白尿（PNH）检测的CD55、CD59；血小板无力症（GT）检测的CD41、CD61等等详细信息仪器简介：T细胞亚群检测的CD45/CD4/CD8/CD3、CD45/CD56/CD19/CD3；阵发性血红蛋白尿（PNH）检测的CD55、CD59；血小板无力症（GT）检测的CD41、CD61等等。
但对于白血病/淋巴瘤免疫分型，国际上迄今为止也没有统一的抗体组合。
在2000年国际细胞分析学会（ISAC）大会上，临床血细胞计数协会组织了一次国际专家会议，以期对检测血液淋巴系统肿瘤所需最少、最有效的单抗数达成共识。
75%与会者一致认为，对于慢性淋巴系统增殖性疾病（CLD）有9种单抗：CD5,CD19,κ,λ,CD3,CD20,CD23,CD10,CD45对初诊来说是最基本的。
淋巴瘤和CLD相似，需要至少12-16种单抗。
对于急性白血病（AL），75%的与会者认为大约13-15种单抗是最基本的：CD10,CD19,CD79a,CD13,CD33,CD34,CD45,CD2,MPO，CD7,CD14,CD3,HLA-DR等，对初步鉴别白血病系列是必需的。
其他一些（CD16,CD56,CDw65,TdT,cyCD3）可能对某些病例有用。
几乎所有的投票者都认为，要对急性白血病完善分类所需单抗的恰当数量平均为20-24种。
但这些抗体之间组合也是一大难题，目前也无统一规定（如表二）。
大会多数发言者(11/13)指出，对已确诊病人的监护和分期来说，仅需较少单抗。
抗体的质量控制是实验的关键环节。
抗体的质量包括其特异性、灵敏度、精密度。
流式细胞术检测淋巴细胞亚群的常见问题及注意事项
流式细胞术检测淋巴细胞亚群的常见问题及注意事项摘要目的规范流式细胞术检测淋巴细胞亚群的操作，保证检测结果准确性，对检测过程中出现的常见问题及注意事项进行汇总，提出解决方案。
方法对本科室使用贝克曼FC500流式细胞仪检测淋巴细胞亚群的检测过程中出现的各种问题进行汇总、整理和分析，提出解决方法。
结果流式细胞术检测淋巴细胞亚群中的常见问题包括前处理中遇到的的问题、实验操作过程中遇到的问题和分析过程遇到的问题等。
采用控制实验环境条件、多步骤多次核对标本信息、严格规范操作等方法可解决检测中存在的上述问题。
讨论淋巴细胞亚群是常见检测项目之一，实验过程中容易出现各种问题，只有发现、解决和预防这些问题，才能保证检测结果的准确性和可靠性。
关键词：淋巴细胞亚群流式细胞仪一、淋巴细胞亚群淋巴细胞是构成人体免疫系统的主要细胞，主要包括T淋巴细胞、B淋巴细胞及NK细胞，三种亚群的分布比例及数量具有重要的临床意义。
检测淋巴细胞亚群的方法有很多种，目前比较常用的是流式细胞术。
二、流式细胞术流式细胞术是用荧光素（如CD3，CD4，CD19等）标记细胞，经过与细胞上的抗原反应，经过流式细胞仪检测，通过对细胞荧光素表达情况，分析标本中的淋巴细胞及淋巴细胞亚群的比例和数量。
三、检测过程中遇到的问题1.分析前1.1 标本前处理1.1.1 实验前应核对标本的信息一致性，确认实验项目。
对标本进行排序和编号，T和NKB需分开编管，并做好标记。
1.2 实验操作1.2.1 加抗体时应核对抗体是否无误，避免加错抗体；每加一次抗体需更换枪头，避免污染试剂瓶中的抗体；检查抗体量，以防多加或漏加。
1.2.2 加标本前，应观察标本状态，是否存在凝集、黄疸、溶血等，加样时，再次核查试验号和项目，充分混匀标本，加样时避免枪头碰试管壁，如管壁沾有血迹，用干净棉签拭去；做绝对计数时，为保证结果准确性，采用反向加样。
1.2.3 溶血时应严格按量按时溶血，若溶血效果不好，可以适当延长溶血时间。
《流式细胞术贝克曼》课件
贝克曼流式细胞仪的应用
免疫学研究
贝克曼流式细胞仪在免疫学研究 中广泛应用，可以用于检测免疫 细胞的表面标志物、功能活性以
及免疫细胞的分选和培养等。
血液学研究
贝克曼流式细胞仪可以用于血液 学研究，检测血细胞的表面标志 物、血型抗原等，以及进行血细
胞的分选和培养等。
肿瘤研究
贝克曼流式细胞仪可以用于肿瘤 研究，检测肿瘤细胞的表面标志 物、肿瘤抗原等，以及进行肿瘤
辐射安全
废弃物处理
正确操作仪器，避免对实验人员造成辐射 伤害。
按照规定处理实验废弃物，确保实验室环 境的安全和环保。
贝克曼流式细胞仪的特点
高通量
贝克曼流式细胞仪具有高通量的 特点，能够在短时间内处理大量 细胞样本，提高了实验效率和检
测速度。
高灵敏度
贝克曼流式细胞仪采用先进的光电 检测技术，能够检测到微弱的荧光 信号，具有高灵敏度，能够检测到 低浓度的细胞标记物。
多参数分析
贝克曼流式细胞仪可以同时检测多 个参数，包括细胞大小、颗粒性、 荧光信号等，从而对细胞进行多维 度的分析和分选。
贝克曼流式细胞仪的原理
流式细胞术原理
流式细胞术是一种在液流中快速检测和分选细胞的技术。通 过将单个细胞与荧光染料结合，利用激光束激发荧光，并通 过光电倍增管检测荧光信号，实现对细胞的快速分析和分选 。
贝克曼流式细胞仪的原理
贝克曼流式细胞仪是应用流式细胞术的仪器之一，其原理是 将待测细胞与荧光染料结合后，通过高压液流将细胞送入流 动室，在流动室内与激光束相遇，激发荧光信号，并通过光 电倍增管进行检测和记录。
用于检测精子细胞和卵 子细胞的活性与质量。
流式细胞术的发展历程
20世纪70年代
美国贝克曼库尔特流式细胞分析仪
美国贝克曼库尔特流式细胞分析仪（Beckman coulter cell）产品型号：Cell Lab Quanta SC当前价格：0.00元产品数量：0新旧程度：全新有效期至：0000-00-00所在地：产品简介：仪器简介：T细胞亚群检测的CD45/CD4/CD8/CD3、CD45/CD56/CD19/CD3；阵发性血红蛋白尿（PNH）检测的CD55、CD59；血小板无力症（GT）检测的CD41、CD61等等详细信息仪器简介：T细胞亚群检测的CD45/CD4/CD8/CD3、CD45/CD56/CD19/CD3；阵发性血红蛋白尿（PNH）检测的CD55、CD59；血小板无力症（GT）检测的CD41、CD61等等。
但对于白血病/淋巴瘤免疫分型，国际上迄今为止也没有统一的抗体组合。
在2000年国际细胞分析学会（ISAC）大会上，临床血细胞计数协会组织了一次国际专家会议，以期对检测血液淋巴系统肿瘤所需最少、最有效的单抗数达成共识。
75%与会者一致认为，对于慢性淋巴系统增殖性疾病（CLD）有9种单抗：CD5,CD19,κ,λ,CD3,CD20,CD23,CD10,CD45对初诊来说是最基本的。
淋巴瘤和CLD相似，需要至少12-16种单抗。
对于急性白血病（AL），75%的与会者认为大约13-15种单抗是最基本的：CD10,CD19,CD79a,CD13,CD33,CD34,CD45,CD2,MPO，CD7,CD14,CD3,HLA-DR等，对初步鉴别白血病系列是必需的。
其他一些（CD16,CD56,CDw65,TdT,cyCD3）可能对某些病例有用。
几乎所有的投票者都认为，要对急性白血病完善分类所需单抗的恰当数量平均为20-24种。
但这些抗体之间组合也是一大难题，目前也无统一规定（如表二）。
大会多数发言者(11/13)指出，对已确诊病人的监护和分期来说，仅需较少单抗。
抗体的质量控制是实验的关键环节。
抗体的质量包括其特异性、灵敏度、精密度。
贝克曼流式计数微球
贝克曼流式计数微球
贝克曼流式计数微球是一种用于检测和计数的微小颗粒的技术，通常用于生物医学研究、药物开发、环境监测等领域。
贝克曼流式计数微球技术基于流式细胞术和微球技术，通过将待测样本与荧光标记的微球结合，在流式细胞仪中进行分析和计数。
微球通常由聚苯乙烯、聚碳酸酯等材料制成，直径一般在1-10微米之间。
在流式细胞仪中，微球被激光束照射并产生散射光和荧光信号，这些信号被光电倍增管等检测器接收并转化为电信号。
通过分析这些信号，可以确定微球的数量、大小、荧光强度等信息。
贝克曼流式计数微球技术的优点包括：
1. 高通量：可以在短时间内对大量样本进行分析，提高了检测效率。
2. 灵敏度高：可以检测低浓度的样本，并且可以区分不同浓度的样本。
3. 定量准确：可以根据荧光强度等信息对微球进行定量分析。
4. 自动化程度高：可以实现自动化检测和分析，减少
了人为误差和操作时间。
总之，贝克曼流式计数微球技术是一种高效、灵敏、准确的检测技术，在生物医学、药物开发和环境监测等领域具有广泛的应用前景。
贝克曼navios参数
贝克曼navios参数贝克曼navios是一款用于生物分析和质谱分析的高性能仪器。
它具有多种参数和功能，可以满足不同实验需求。
在本文中，我们将重点介绍贝克曼navios的几个重要参数及其作用。
1. 流式细胞术参数贝克曼navios可以进行流式细胞术分析，通过测量细胞在流式细胞仪中的散射信号和荧光信号来获取细胞的相关信息。
其中，细胞散射信号包括前向散射（FSC）和侧向散射（SSC），荧光信号则是通过标记染色的抗体或荧光染料来获取的。
这些参数可以用于细胞的大小、复杂度和表面标记物的检测，进而进行细胞分型和表达水平的分析。
2. 激光参数贝克曼navios配备多个激光器，可以发射不同波长的激光光束。
不同的激光波长可以激发不同的荧光染料，从而实现多参数的多色荧光检测。
常用的激光波长包括488nm、633nm等。
通过调整激光参数，可以选择合适的激发波长和检测通道，实现多参数的同时检测，提高实验的灵敏度和准确性。
3. 探测器参数贝克曼navios配备多个光电倍增管（PMT）探测器，用于检测荧光信号。
不同的探测器具有不同的检测范围和灵敏度。
通过选择合适的探测器参数，可以最大限度地提高荧光信号的检测效果，获得准确的实验结果。
4. 数据分析参数贝克曼navios配备了强大的数据分析软件，可以对实验结果进行多维度的数据分析。
通过设置合适的数据分析参数，可以进行细胞计数、细胞分型、表达水平分析等。
同时，数据分析参数还可以用于设置阈值、排除杂质和背景噪音等，提高实验结果的可靠性。
5. 温控参数贝克曼navios具有温控功能，可以对样品进行恒温控制。
通过设置合适的温度参数，可以保证实验的稳定性和可重复性。
温控参数还可以用于模拟细胞的自然生长环境，提高实验的生物学可靠性。
6. 采样参数贝克曼navios具有多种采样模式和采样参数，可以根据实验需求进行灵活的采样设置。
采样参数包括采样速度、采样体积等。
合理设置采样参数可以保证实验的高效性和准确性。
流式细胞术简介
流式细胞术简介流式细胞术简介一. 流式细胞术概述流式细胞术(Flow Cytometry， FCM)是七十年代发展起来的高科学技术，?它集计算机技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学于一体，同时具有分析和分选细胞功能。
它不仅可测量细胞大小、内部颗粒的性状，还可检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内DNA、RNA含量等，可对群体细胞在单细胞水平上进行分析，在短时间内检测分析大量细胞，并收集、储存和处理数据，进行多参数定量分析; 能够分类收集(分选)某一亚群细胞，分选纯度＞95%。
在血液学、免疫学、肿瘤学、药物学、分子生物学等学科广泛应用。
国内使用的流式细胞仪主要由美国的两个厂家生产: Becton-Dickinson公司(简称B-D公司)和BECKMAN- COULTER公司。
流式细胞仪主要有两型:临床型（又称小型机、台式机）和综合型（又称大型机、分析型）。
B-D?公司最新产品为FACS Vantage和FACS Calibur。
BECKMAN-COULTER公司最新产品为EPICS ALTRA和EPICS XL/XL-MCL。
EPICS XL/XL-MCL和FACS Calibur是临床型;EPICS ALTRA和 FACS Vantage是综合型，除具备检测分析功能外，还具有细胞分选功能，?多用于科学研究。
二.流式细胞仪主要技术指标1．流式细胞仪的分析速度：一般流式细胞仪每秒检测1000～5000个细胞，大型机可达每秒上万个细胞。
2．流式细胞仪的荧光检测灵敏度：一般能测出单个细胞上<600个荧光分子，两个细胞间的荧光差＞5%即可区分。
3．前向角散射（FSC）光检测灵敏度：前向角散射（FSC）反映被测细胞的大小，一般流式细胞仪能够测量到0.2μm～０.5μm。
4．流式细胞仪的分辨率：通常用变异系数CV值来表示，，一般流式细胞仪能够达到<2.0%，这也是测量标本前用荧光微球调整仪器时要求必须达到的。
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TETRAMER
抗原递呈细胞（APC）携带抗原片段通过与TCR复合物结合，在APC和T细胞的 MHC相容和其它共刺激分子的相互作用下激活T细胞并产生细胞免疫效应。 MHC-四聚体染色技术用于抗原特异性T细胞分析的原理在于体外模仿上述抗 原递呈的过程来实现对特异性T细胞的鉴定，通过流式细胞仪这种高通量分 析仪器对标本中这群细胞进行分析
CD26:移植后造血干细胞表达可能不利于该细胞的homing ，有证据表明抑制造血干细胞有利用移植成功
流式细胞术在移植中的应用
移植配型和群体反应性抗体的检测 荧光示踪标记的移植细胞：CFSE是一个确定的荧光标记
物，开发其它稳定的荧光素应该更有帮助
流式细胞仪分选
为达到最高的分选效率，实用中最好先用磁珠分选系 统进行初步分选
Th2细胞 ：介导体液免疫，促 进B细胞的生长、活化和分 化，是IgG1和IgE类抗体的 转换因子，其功能亢进将 导致特异性过敏反应，参 与高IgE综合症和嗜酸性粒 细胞增多症。
Th1Th2检测Tips
一定要确定T细胞是否已经活化，细胞转运阻滞是否成功，胞 膜打孔是ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ有效
一定要用胞浆内同型对照（特别是FITC标记时） ，以便分别部分弱表达的细胞因子。
流式细胞术贝克曼
1.检测淋巴细胞亚群，监测细胞免疫状态 2.白血病/淋巴瘤免疫分型 3.HLA组织配型及HLA与某些疾病的关系 4.干祖细胞的定量及成分分析. 5.其它:粘附分子;TCR多态性检测;肿瘤癌基因及
抑癌基因蛋白产物的检测;细胞内酶;耐药蛋 白的分析等等。
T细胞分析
相对计数－淋巴细胞亚群数量检查项目和意义
病毒等细胞内致病因子方面起 着重要作用
Ｔｈ2细胞分泌ＩＬ 4、ＩＬ 5 、ＩＬ 6、ＩＬ 10、ＩＬ 13等 细胞因子,主要促进体液免疫反 应,中和胞外病原体
相应地，CD8+T细胞也可以分 为Tc1和Tc2
Th1细胞：介导细胞免疫、细 胞毒性T细胞的生长和活化 、巨噬细胞的活化、介导 迟发型过敏反应。其功能 亢进将导致炎症慢性迁延 ，器官特异性自身免疫病 ，急性排异反应和接触性 皮炎等的发病和免疫病理 损伤。
疾病
CD3 CD4 CD8 CD4/CD8
自身免疫病
降低 增高 降低
AIDS SARS
降低 降低
严重 降低
降低
增高 降低 降低 降低
慢性活动性肝炎、 肝硬化
肿瘤
降低
降低 降低
正常 降低 或 增高
增高 降低
NK 降低
降低 降低
降低
CD4细胞绝对计数
对AIDS病人的诊断、疗效和预后有重要的指导意 义，一般认为CUTOFF值为200/ul.
强度不足够强
非特异性的先天免疫细胞
δＴ细胞:占外周血T细胞的10％以下，非抗原依赖型免疫 细胞，在传染病、肿瘤病人外周血数量增加，表达CD3量 较普通T细胞多
NK细胞：占外周血淋巴细胞8－25％，传染病和肿瘤病人 数量偏低。NK细胞可以根据NKR的不同而分类，丙型肝炎 的发生和预后可能与NK细胞的表型相关
F L IN
0 .8 0 .7 0 .6 0 .5 0 .4 0 .3
-2 -1 0 1 2 3 4 5 Log EC50
流式细胞仪是一个高通量的开发系 统，随着新抗体和新标记的发现和 开发，将在疾病诊断和生物医学的 研究方面为大家发挥更大的作用
活细胞分选非常有用
流式细胞术在生物医学研究的新方向
细胞多态性分析：受体、抗原折叠、HLA等，包括 CXCR4,CCR5,DC-SIGN(与AIDS易感性有关），NKR(中国科大 研究领先项目）
信号传导（实际主要为胞浆内磷酸化及去磷酸化蛋白的 检测）
新型荧光特异性探针：胞内病原体检测、转录因子检测 、细胞器或细胞生命活动指标的新荧光素的应用
四聚体技术的优势是：可以对特异性免疫细胞进行定量；用流式细胞仪检测 可以快速测定大量细胞，可以同时进行其它表面染色，可以直接用外周血测 定而不需要培养；四聚体染色不会杀伤细胞，因此染色后的细胞可以进行分 选或其它功能分析；四聚体对所有的特异性T细胞都能够结合，而不仅仅是
对有功能的细胞进行检测。
不同厂家的MHC四聚体产品不太一样：贝克曼库尔特公司创造性地 构建和表达了MHC分子α3链的区域突变的蛋白（iTAg），能降低其与 非特异性T细胞结合，大大提高了特异性。并且将MHC四聚体直接标 记荧光，和常用的抗原多肽负载后整体商品化，也有单独的MHC分 子（iTAg）单独出售，极大方便了研究者
绝对计数是加入浓度已知的标准微球与标本一起 测定，流式细胞仪控制软件在设置后能自动计算 出浓度
对任何细胞群体都可以进行绝对计数
Th1Th2细胞因子分泌细胞测定
根据产生的细胞因子的类
型和生物学功能,人的ＣＤ4+Ｔ
细胞可以分为Ｔｈ1、Ｔｈ2
Ｔｈ1细胞产生ＩＬ 2、ＩＬ 12 、ＩＦＮ γ、ＴＮＦ β等细胞因 子,主要参与细胞介导的免疫反 应、迟发性过敏反应,并在清除
CD4CD25 Treg
调控性T细胞的主要功能是抑制机体免疫功能，太强则免 疫耐受，太弱会引起自身免疫反应
调控性T细胞调节抗原递呈细胞对抗原的递呈 调控性T细胞的表型是CD4+CD25bright，逐渐发现越来越
多的其它分子可能能够更精确限定（eg.FOX-1?) CD25也是免疫细胞晚期活化的标记，但表达的平均荧光
DC：分布与淋巴组织和外周血，为非成熟状态，遇到相 应的抗原后主要分泌IFN-alpha来发挥左右
其它重要分子的流式分析的意义
粘附分子：物种间高度保守，与细胞间通讯，干细胞 HOMING，肿瘤的发生可能有很重要的关系，如 CD11C/CD18-CD54与DC成熟和迁移有关；CD209-CD102与 抗原递呈有关
利用分选的细胞进行体内和体外功能研究 与其它定位性的荧光设备联合使用（如
MPE,CONFOCAL,IC100等）
Cell Lab IC 100 细胞群定量
• Complete data mining and analysis • Flexible Analysis • Plug-in architecture • Scalable across an enterprise