中药提取分离纯化过程的自动化控制技术及装备

中药提取分离纯化过程的自动化控制技术及装备

作者：李建业， 沈晓平， 葛发欢， 李金华

作者单位：李建业(海正药业(杭州)有限公司 浙江台州 311004)， 沈晓平,葛发欢,李金华(中药提取分离过程现代化国家工程研究中心,广州 510240)

1.会议论文夏建军.施荣富.杨益忠.王春红高选择性吸附树脂在中药有效成分分离纯化中的应用2006

本文研究了高选择性吸附树脂的结构设计方法,调节树脂孔结构、骨架性质、功能基、引入多重弱相互作用的协同效应,以期达到制备高纯度提取物以及单体组分分离的目的.研究结果表明,高选择性吸附树脂在多种有效成分(如黄酮类、生物碱类、皂甙类)的分离纯化中具有重要的作用,可成功制备多种高纯度提取物,所建立的提取工艺适用于工业化生产,具有广泛的应用前景.

2.会议论文许汉林.陈军.张赤志D301大孔树脂分离纯化大黄总葸醌的研究2005

本文对D301大孔树脂分离纯化大黄总葸醌进行了研究。结果表明，D301树脂交换吸附大黄总蒽醌的纯化方法可取,具有良好的应用前景。

3.学位论文姜东黄芪多糖的提取、分离、纯化及其生物学活性研究2006

黄芪是一种常用的中药。含有多糖、蛋白质、生物碱、氨基酸、黄酮类、甙类、微量元素等多种生物活性物质，其中黄芪多糖(Astragaluspolysaccharides，APS)是黄芪主要生物活性成分。黄芪多糖具有增强机体的免疫功能，强心降压、降血糖、抗应激、抗肿瘤、抗病毒、抗辐射、抗氧化等多种药理功效。由于黄芪多糖的多种生物活性及良好的临床效果，多年来在国内外已成为中药提取及中草药现代化研究的焦点之一。

巨噬细胞在宿主防御反应中起了重要的作用，是天然免疫应答的主要参与者。激活的巨噬细胞能抑制多种肿瘤细胞和病原微生物的生长。另外，巨噬细胞还可作为抗原呈递细胞与T细胞相互作用来调节适当的免疫应答。巨噬细胞还参与胚胎期组织再塑、创伤修复、凋亡细胞的清除以及血细胞的生成。

研究表明黄芪多糖具有免疫调节作用。但对黄芪多糖的研究都是以总的多糖为研究对象，而尚未见对黄芪多糖进行分离，然后研究其对巨噬细胞细胞因子生成和释放的报道。为了探索黄芪多糖各级分对巨噬细胞细胞因子生成和释放的影响，本课题通过提取、分离、纯化得到不同分子量的黄芪多糖，然后将各级分黄芪多糖直接作用于巨噬细胞，运用酶联免疫吸附实验(ELISA)的方法，观察其对巨噬细胞细胞因子IL_1β、TNF-α和GM-CSF分泌的影响。同时将上述不同分子量级分黄芪多糖进行整体动物实验，通过酶联免疫吸附实验检测血清中细胞因子IL_1β、TNF-α和GM-CSF的含量，体内实验和体外实验相结合，进一步阐明黄芪多糖对巨噬细胞功能的影响以及增强机体免疫功能的机理。

黄芪多糖的制备结果显示：100g黄芪饮片通过水浴浸提，浓缩(浓缩液体积50ml，糖浓度为0.06g/ml，含糖量为60％)，醇沉后所得的粗多糖，经超滤分离为分子量小于3万、3万到5万之间、大于5万三个不同组分，质量分别为1.4g、1.6g、1.45g，硫酸—苯酚法测定糖含量，三部分分别含糖0.7g、1.12g、1.17g，其中分子量3万到5万之间和大于5万两个组分中糖的含量较高，含糖量分别为70％、81％。

ELISA实验结果显示：分子量3万到5万，大于5万和总的黄芪多糖均能显著促进巨噬细胞分泌IL-1β，而分子量3万到5万组还能显著促进巨噬细胞分泌TNF-α和GM-CSF。

本实验结果表明：用超滤的方法分离纯化黄芪多糖，所得的分子量3万到5万、大于5万两个组分含糖量较高，二者均能促进巨噬细胞分泌IL-

1β，3万到5万级分还能促进巨噬细胞分泌TNF-α和GM-CSF。

4.期刊论文许明淑.罗明芳.邢新会.黄璐琦酶法强化中药提取的研究进展-中国中医药信息杂志2005,12(12)

近年来,全球兴起了利用天然产物的有效成分治疗和预防疾病的热潮,中药日益受到关注.由于中药成分十分复杂且很多贵重有效成分含量很低,为微量甚至痕量,因此,有效成分的提取与分离纯化是中药开发中的关键工序.但传统的提取分离方法(如煎煮法、浸渍法、渗滤法、回流法等)存在有效成分提取率不高、杂质清除率低等问题,这些根本问题制约着中药开发的进程.目前,如何快速有效地从中药材中提取分离和纯化低含量成分并保持高活性的技术己成为天然产物提取研究的重点.

5.学位论文许云峰银杏内生菌纤维素酶的分离、纯化及其在银杏总黄酮提取中的应用研究2009

本文通过分离银杏内生菌，筛选高产纤维素酶菌株并优化产酶条件，建立发酵液应用于银杏黄酮提取的辅助技术，同时，对银杏内生菌纤维素酶进行了分离纯化，对产酶内生菌开展了分子鉴定，我们的研究为内生菌在中药提取中的应用提供了方法和技术参考。内生菌纤维素酶在黄酮提取中的辅助应用为我们首次报道。

首先对银杏内生菌进行了分离纯化，共分离出71株菌株，再通过刚果红染色及发酵液酶活测定最终筛选出1株高产纤维素酶菌株，暂定编号为Y2菌。筛选和优化了真菌Y2的产酶培养基及产酶条件，最终确定培养基：马铃薯20％，葡萄糖2％，KH2PO40.3％，MgSO40.15％，维生素B110 mg/L，酵母膏0.5％。发酵最佳条件：温度28℃，转速150 rpm，装液量200 mL/500 mL，该条件下培养6 d后测定酶活达4.47 U/mL。

我们对分离到的活性真菌Y2进行了形态学观察及分子鉴定，经过玻片小培养、光学显微观察，基本确认为青霉属真菌。为进一步了解该菌，又进行了DNA的提取及rDNA的ITS(Internal Transcribed Space)区段分子鉴定，DNA提取采用真菌常用的CTAB法，提取的DNA符合质量标准，PCR扩增条件经过筛选为：94℃预变性3 min→94℃40 s52℃1.0 min→72℃1.0 min，30个循环后72℃8 min。取5 mL产物于1.5％的琼脂糖凝胶100 V电泳，在紫外灯下观察结果，PCR产物单一，条带清晰。分子鉴定PCR扩增片段，经测序获得亚基，共564个碱基，GenBank核酸序列数据库中进行blast搜索结果，序列与草酸青霉有100％的同源性，结合形态学观察确定为草酸青霉菌(Penicillium oxalicum)。

对草酸青霉菌纤维素酶进一步进行了蛋白分离和纯化，通过硫酸铵分级沉淀、透析、DEAE-Sephadex A-25阴离子交换层析、Sephadex G-75分子筛凝胶过滤层析获得了电泳纯的纤维素酶CMCase组分，并对该组分酶学性质进行考察。纯化后蛋白质总量下降了89.87％，总酶活下降了30.65％，酶的比活力达到466.59 U/mg，提高到原来的6.67倍，酶的总回收率为10.13％，该酶的分子量约为34.2 kD。该纤维素酶纯化组分最佳酶解温度为50℃，最佳酶解pH为5.0。Fe3+、Fe2+、Al3+离子对酶活有一定的激活作用，Zn2+、Cu2+、Hg2+对酶活有很强的抑制作用，在酶的稳定性研究中表明该酶最佳保存温度为低于50℃，最佳保存pH为5.0。该纤维素酶Km值为2.13 mg/mL，Vmax为0.22 mg/mL/min。

建立了HPLC法测定银杏总黄酮(槲皮素、山奈酚、异鼠李素)的方法，确定色谱条件：色谱柱为.Agilent C18柱(4.6 mm×250/mm，5μm)；流动相为甲醇:0.4％磷酸溶液=59:41；流速为1.0 mL/min；柱温为30℃；进样量为20μL：检测波长为360 nm。

我们还研究了银杏鞣质对纤维素酶活性的抑制，并筛选了去除该类抑制剂的有效吸附剂胶原纤维。同时，优化了纤维素酶发酵液辅助提取银杏黄酮的条件，通过单因素试验和正交试验，得出纤维素酶发酵液酶解银杏叶的最佳条件为：酶料比15:1加入银杏干粉中，在pH5.0、温度50℃下，酶解处理3 h，该条件下的银杏黄酮提取率达到了1.33％，比常规醇提法提高了18.75％。

本研究从银杏中筛选出一株高产纤维素酶的内生菌，经分子鉴定为草酸青霉菌。我们分离和纯化了草酸青霉纤维素酶，确定了该酶的生化性质。通过该菌株培养条件的优化，成功地利用该菌的发酵液辅助提取银杏总黄酮，有效地提高了银杏黄酮提取率。本研究为内生菌研究和中药提取提供了新思路，也为中药材酶法提取的大规模应用提供了可能。

6.期刊论文侯飞燕.李菁.Hou Fei-yan.LI jing中药提取现代新技术研究进展-中医药导报2011,17(1)

从超临界液体萃取、酶工程及其联用、超声提取、高速逆流色谱分离、大孔吸附树脂分离纯化、微波提取、半仿生提取、分子蒸馏8个方面综述了中药提取现代新技术在中药有效成分提取中的应用研究进展,认为现代技术使得中药有效成分的提取更高效和简便.

7.学位论文黄伟ARIs筛选模型的建立及相关药物的筛选2009

糖尿病是一种伴有诸多严重并发症的疾病，在退行性糖尿病并发症病变的发生和发展过程中，多元醇代谢通路（PP通路）起了十分重要的作用。醛糖还原酶（AR）是多元醇代谢通路中的关键限速酶，是治疗糖尿病并发症的靶位酶，该酶以NADPH为辅酶，使葡萄糖还原为不易透过细胞膜的山梨醇，引起细胞的渗透性损伤，是糖尿病并发症发生的重要原因。由于目前可用于治疗糖尿病并发症的药物不足以满足临床需要，现有的醛糖还原酶抑制剂索比