高效液相色谱法测定大黄中的大黄素、大黄酚的含量
高效液相法测定大黄结康片中大黄素和大黄酚的含量
高效液相法测定大黄结康片中大黄素和大黄酚的含量目的：建立高效液相色谱法测定大黄结康片中大黄素和大黄酚的含量。
方法：采用高效液相色谱法；色谱柱为ODS-C18柱（4.6mm×150mm）流速1.0ml/min，流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液（85：15），检测波长在254nm。
结果：此方法线性关系良好，大黄素的线性范围为0.192～0.960ug （r=0.9997）、大黄酚的线性范围为0.416～2.080ug（r=0.9998），大黄素和大黄酚与其制剂的其它组分可完全分离其平均回收率为98.92%，RSD为1.97%，（n=5）。
结论：本法简单、准确，重现性良好，可用于大黄结康片中大黄素和大黄酚的总量测定。
标签：高效液相色谱法；大黄结康片；大黄素；大黄酚大黄结康片是由大黄、莪术等七味中药组成的复方制剂。
具有活血祛瘀，通络散结之功效，其中大黄的药理作用研究主要集中在蒽醌类化合物，有效成分为恩醌类衍生物，如大黄酸、大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚等[1]。
经多年临床应用，对手术后血瘀症有较好疗效[2]。
为有效控制其质量，我们选择大黄中大黄素和大黄酚总量作为指标，建立了HPLC测定法[3-5]，其实验结果准确，重现好。
1 仪器、试剂及样品日本岛津LC-10AT高效液相色谱仪，SPD-10A紫外可见检测器，WDL-95工作站；CSF-1A超声波发生器（上海超声波仪器厂生产）；MA260S型电子分析天平（上海第二天平仪器厂）；索氏提取器。
甲醇为色谱纯；磷酸、氯仿、硫酸均为分析纯。
大黄素、大黄酚对照品，由中国药品生物制品检定所提供。
阴性样品均按样品方法制备。
2 方法与结果2.1 色谱条件[6]色谱柱ODS-C18柱4.6mm×150mm，流速1ml/min，柱温30℃，检测波长254nm，流动相甲醇-0.1%磷酸溶液（85：15）。
2.2 供试品溶液的制备取本品内容物约0.4001g，精密称定，置50ml锥形瓶中，精密加甲醇25ml 称定重量，回流提取30分钟，在称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，精密量取续虑液5ml，置50ml圆底烧瓶中，挥去甲醇，加2.5mol/L硫酸溶液10ml，超声处理5min，再加氯仿10ml，加热回流1小时，冷却，移至分液漏斗中，用少量氯仿，洗涤容器，并入分液漏斗中，分取氯仿层，酸液用氯仿提取三次，每次约10ml，合并氯仿液，挥去氯仿，残渣加甲醇使溶解，移至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45um）虑过，取续滤液，即得。
高效液相色谱法同时测定大黄中14种成分的含量
高效液相色谱法同时测定大黄中14种成分的含量建立高效液相色谱法同时测定大黄中大黄素、大黄酚、大黄酸、芦荟大黄素、大黄素甲醚、番泻苷A、番泻苷B、没食子酸、儿茶素、（-）-表儿茶素-3-没食子酸酯、异莲花掌苷、4-4′-羟基苯基-2-丁酮、莲花掌苷、4′-羟基苯基-2-丁酮-4′-O-β-D-（2″-O-桂皮酰基-6″-O-没食子酰基）-葡萄糖苷14个成分含量的方法。
采用Agilent Zorbax SB-C18色谱柱（4.6 mm × 150 mm，5 μm），采用0.05%的磷酸水溶液（A）-乙腈（B）为流动相，梯度洗脱，流速1.0 mL·min-1，柱温40 ℃，检测波长268 nm。
结果表明在线性范围内14个成分线性良好（r>0.999 9）；日内精密度和日间精密度均小于3.1%；平均回收率在91.80%～104.1%。
同时，对收集到的10个掌叶大黄和10个唐古特大黄合格样品进行定量测定，发现掌叶大黄中含量比较高的成分是芦荟大黄素，唐古特大黄中含量比较高的是4-4′-羟基苯基-2-丁酮，各样品中所有化合物的含量差异都比较大。
所建立的含量测定方法能同时测定大黄中14个成分的含量，为大黄药材多成分含量测定和质量控制提供一种简便的方法。
标签：大黄；高效液相色谱法；蒽醌类；苯丁酮苷类；鞣质类；含量测定[Abstract] To establish an HPLC （high performance liquid chromatography）method for the simultaneous content determination of gallic acid，（+）-catechin，（-）-epicatechin-3-O-gallate，isolindleyin，4-（4′-hydroxyphenyl）-2-butanone，emodin，chrysophanol，physcion，aloe-emodin，rhein，lindleyin，4-（4′-hydroxyphenyl）-2-butanone-4′-O-β-D-（2″-O-galloyl-6″-O-cinnamoyl）-glucopyranoside，sennoside A and sennoside B in Rhei Radix et Rhizoma. The analysis was performed on Agilent Zorbax SB-C18 （4.6 mm×150 mm，5 μm）with 0.05% phosphoric acid solution （A）- acetonitrile （B）as mobile phase for gradient elution. The flow rate was 1 mL·min-1，with column temperature of 40 ℃and the wavelength was set at 268 nm. All calibration curves showed good linearity （r > 0.999 9）within the concentration range. Both the intra- and inter-day precision for 14 analytes was less than 3.1%，with the mean recovery at the range of 91.80%-104.1%. Meanwhile，quantitative determination was carried out for 10 qualified samples from Rheum palmatum and 10 qualified samples from R. tanguticum. respectively. It was found that the content of 4-（4′-hydroxyphenyl）-2-butanone and aloe-emodin were higher in the R. tanguticum and R. palmatum，respectively，and the content of all the compounds was different in each sample. The established HPLC method for simultaneous content determination of 14 compounds from Rhei Radix et Rhizoma could be used for quantitative assessment and quality control of Rhei Radix et Rhizoma.[Key words] Rhei Radix et Rhizoma；HPLC；anthraquinones；butanone glycosides；tannins；content determination大黄为蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum L.、唐古特大黄R. tanguticum Maxim. ex Balf. 或药用大黄R. officinale Baill.的干燥根和根茎[1]。
HPLC法测定清热凉血软膏中大黄素、大黄酚的含量
HPLC法测定清热凉血软膏中大黄素、大黄酚的含量目的：建立清热凉血软膏中大黄素、大黄酚的含量测定方法。
方法：高效液相色谱法。
色谱柱：Dionex Ultimate 3000-C18（4.6mm×250mm，5μm）;流动相：甲醇-0.1%磷酸（80∶20）;检测波长：254nm;流速：1.0ml/min。
结果：大黄素在0.010～0.200μg/ml范围内线性良好，回归方程为Y=59.069X+0.0301（r=0.9999），平均加样回收率为100.33%，RSD为 1.743% （n=5）;大黄酚在0.020～0.400μg/ml范围内线形良好，回归方程为Y=88.598X+0.1158（r=0.9999），平均加样回收率为100.253%，RSD为1.942% （n=5）。
结论：本方法操作简便快速、灵敏度高、重现性好，可以用于清热凉血软膏的质量控制。
标签：清热凉血软膏;大黄素;大黄酚;高效液相色谱法Determination of the Contents of Emodin and Chrysophonl in Qingreliangxue Ointment by HPLCDING Ke，LV Yan，ZHU TaoDepartment of Chinese Pharmacy，The First Affiliated hospital of Zhejiang Chinese Medical University，Zhejiang，Hangzhou 310005，ChinaAbstract：Objective To establish a HPLC method to determinate the contents of Emodin and Chrysophanol in Qingreliangxue Ointment. Methods The analysis was used on a Dionex Ultimate 3000-C18（4.6mm×150mm，5μm）;methanol-0.1%H3PO4（80∶20）as mobile phase; the flow rate was 1.0mL/min;the detection wavelength was 254 nm. Results A good linearity can be found in the range of 0.010～0.200μg （r=0.9999）in Emodin，the average recovery rate was 100.33%，RSD was1.743%（n=5）;the linear ranges of chrysohonl at 0.020～0.400μg （r=0.9999），the average recovery rate was 100.253%，RSD was 1.942%（n=5）.Conclusion This method is reliable，rapid and accurate. It can be used to control the quality of Qingreliangxue Ointment.Keywords：Qingreliangxue Ointment; Emodin;Chrysophanol; HPLC清热凉血软膏（以下简称“清凉膏”）主要由大黄、当、紫草等中药组成，具有清热解毒、消肿止痛、活血散淤等功效，临床适用于跌打损伤，关节肿痛，丹毒疱疹，特异性炎症等病症，是浙江省中医院传统中药软膏（浙准制字20100233）。
高效液相色谱法测定上清丸中大黄酸＼大黄素＼大黄酚的含量
高效液相色谱法测定上清丸中大黄酸＼大黄素＼大黄酚的含量目的：建立以HPLC法测定上清丸中大黄酸、大黄素、大黄酚含量的方法。
方法：采用Symmetry C18柱，以甲醇-0.1%磷酸=80:20为流动相，检测波长：430nm，流速1.0mL?min-1，柱温:室温。
结果：大黄酸、大黄素、大黄酚分别在7.92～79.2ng（r=0.9998）、14.5～145ng（r=0.9991）、27.24～272.4ng（r=0.9994）线性关系良好，平均加样回收率分别为99.7%、99.2%、99.4%，RSD分别为0.95%、1.25%、1.27%。
結论：本方法操作简便、灵敏度高、重现性好，适用于上清丸中大黄酸、大黄素和大黄酚的含量测定。
标签：高效液相色谱法；上清丸；大黄酸、大黄素、大黄酚【Abstract】Objective: To establish a HPLC for determination of rhein、emodin、chrysophanol in Shangqing Pills. Method: A Symmetry C18 Column was used. The mobile phase was methanol-0.1% Phosphoric Acid =80:20，the detecting wavelength was at 430nm，the flow rate was 1.0mL?min-1，the column temperature was room temperature. Result: The linear relationship of rhein、emodin、chrysophanol were 7.92～79.2ng（r=0.9998）、14.5～145ng（r=0.9991）、27.24～272.4ng（r=0.9994）, the recoveries were 99.7%, 99.2%, and 99.4%,respectively, the RSD were 0.95%, 1.25%, and 1.27%,respectively. Conclusion: This method was easy and simple to handle, has good repeatability, flexibility and high sensitivity. It can be used for the determination of rhein、emodin、chrysophanol in Shangqing pills.【key words 】HPLC; Shangqing pills; rhein; emodin; chrysophanol上清丸由菊花、白芷、黄芩、黄柏等12味药而制成的大蜜丸，收载于《卫生部药品标准中药成方制剂第十册》，具有清热散风、解毒、通便等功效，对头晕耳鸣、目赤、鼻窦炎、通便等有很好的作用［1］。
高效液相色谱法测定通经甘露丸中大黄酸、大黄素及大黄酚含量
关键词 ： 高效液相 色谱法 ； 通经甘 露丸； 大黄 酸； 大黄 素； 大黄 酚
中 图分 类 号 ：２ ４ １ Ｒ ８ ． １ ８ ． ； ２６ ０ １ 文 献标 识码 ： Ａ 文章 编 号 ：０ ６— ９ １ ２ １ ）３— ０ ２ ２ １ ０ ４ ３ （０ ０ １ ０ ３ —０
Ｄ ｔｒ ｎ ｔ ｎ ｏ ｈ ｉ， ｍｏ ｉ ｎ ｈ ｙｏ ｈ ｎ ｌｉ ｏ ｇｉｇ Ｇａ ｌ ｉｓ ｂ Ｌ ｅｅ ｍｉ ａｉ ｆ Ｒ ｅｎ Ｅ ｄｎ ａ ｄ Ｃ ｒ ｓ ｐ ａ ｏ ｎ Ｔ ｎ ｊ ｎｕ Ｐ ｌ ｙ ＨＰ Ｃ ｏ ｎ ｌ
药 物鉴定
２ １ 年第 ｌ 卷第 １ 期 ００ ９ ３
高效液相色谱法测定通经甘露丸中大黄酸、 大黄素及大黄酚含量
吴 袭
４８ ０ ） １０ ０ （ 湖南 省怀化 市第 一人 民 医院 ， 湖南 怀化
摘要 ： 目的 建 立 测 定 通 经 甘 露 丸 中 大黄 素 、 黄 酚 及 大 黄 酸 含 量 的 高 效 液 相 色谱 法 。 法 采 用 Ｄａ ｏｓ －色谱 柱 （５ ｍ × ． ｍ， 大 方 ｉ ｎｉＣｓ ｍ ｌ ２ ０ａ ４ ６ｍ ５ ｍ） 流 动相 为 甲 醇 一 ． ％ 磷 酸 溶 液 （５： ５ ， 速 １０ｍ ／ ｉ， 测 波 长 ２ ４ｎ 结 果 大 黄 酸进 样 量 在 ０ ０ ２ ０ ２ ６４ ， ０１ ８ １ ）流 ． Ｌ ｍ ｎ 检 ５ ｍ。 ．９ ４— ．４ ｇ范 围 内 与 峰 面 积 线性 关 系 良好 ， ＝ ．９ ， 均 加样 回 收 率为 ９ ． ５ ， Ｓ 为 ０ ８ ％ （ ６ ； ｒ ０ ９ ９８ 平 ８４ ％ Ｒ Ｄ ． ２ ｎ＝ ） 大黄 素 进 样 量 在 ０ ０ ７６— ．５ ｇ范 围 内与 ． ５ ０ １３ ６ 峰 面积 线性 关 系 良好 ， ＝ ． ９ ， 均加 样 回 收率 为 ９ ．６ ， Ｓ 为 １１％ （ ６ ； 黄 酚 进样 量在 ０ １９７ ．７ ｇ范 围 内与峰 ｒ ０ ９ ９９ 平 ８７ ％ Ｒ Ｄ ． ５ ｎ＝ ）大 ．３ ～０ ３２５ 面 积 线 性 关 系 良好 ， ＝ ． ９ ， 均 加 样 回 收 率 为 ９ ． ３ ， Ｓ 为 ０ ９ ％ （ｌ ６ 。 论 高 效 液 相 色谱 法 操 作 简便 ， 果 准 确 ， ｒ ０ ９ ９８ 平 ９０％ ＲＤ ． １ ，＝ ） 结 结 重现 性 好 ， 用 于通 经甘 露 丸 中大 黄 酸 、 适 大黄 素及 大黄 酚 的含 量 测 ｌ ２ ０ｍ ． ｍ， ｍ）Ｔ ｅｍ ｂｌ ｐ ａｅｗ ｓ ｍ ｔａｏ 一 ． ％ ｐｏｐ ｏ ｃ ａｉ （５： ５ ｉ ｈ ｏ ｈ ｏ ｎ ｗ ｓ ｉｍ ｎｉ Ｃ８（５ ｍ ｘ ６ｍ ５ ｕ ｌ ４ ． ｈ ｏ ｉ ｈｓ ａ ｅ ｎｌ ０ １ ｈｓｈｒ ｃｄ ８ １ ）ｗｔ ｔ ｆｗ ｅ ｈ ｉ ｈ ｅｌ
高效液相色谱法测定妇乐颗粒中大黄素和大黄酚含量
Ｈ Ｐ ４ ８ ２ ） ｔ ｏ ａｅ ｗ ｓ １ ０ｍＬ ｍ ｎ ｔｅ ｃ ｌｍ ｅ ｐ ｒｔｒ ｗ ｓ ３ ｔ ｅｅｔ ｎ ｗ ｖ ｌ ｇ ａ ６ ｍ． ｅｕｔ Ｔ ｅ ｃｌ ３Ｏ （ ０： ０ ，ｈ ｆ ｗ ｒ ａ ． ／ ｉ， ｏ ｎ ｔ ｅ ｕｅ ａ ０ｏ ｈ ｄ ｔｃ ｏ ａ ｅ ｎ ｔ ｗ ｓ ２ ５ｎ Ｒ ｓ ｌ ｈ ａｉ ｅｌ ｔ ｈ ｕ ｍ ａ Ｃ， ｅ ｉ ｅ ｈ ｓ ． ｂ ｔ ｎ ｃ ｒｅ ｗ ｓ ｌ ｅ ｒ ｉ ｔｅ ｒｎ ｅ ｏ ． １ ４ ｇ ０ ２ ０８ ｇ ｒ ０ ９ ９９ ｎ ） ｒｅ ｄｎ ａ ｄ ０ ０ ｌ ｌ ｇ ． ２ ０Ｉ ， ＝ ｒ ｉ ｕｖ ａ ｉ ａ ｎ ｈ ａ ｇ ｆ０ ０ ０５ 一 ． １ ０ ， ＝ ． ９ （ ＝６ ｆ ｍｏ ｉ ｎ ． ｌ ２ 一０ ２ ２４ ｇ ｒ ａｏ ｎ ｏ ， ｘ １ ０ ００ ｎ＝ ） ｒ ｅ ｒｓｐ ａ ｉ ａ ｉ． ｈ ｅ ｏｅｙ ｒｔ ｗ ｓ ０ ． ９ ， Ｓ ２ ５ ％ ｆｒ ｅ ｏ ｉ， ｎ ６ ７ ％ ， Ｓ ． ０ （ ６ ｆ ｈｙｏ ｈ ｎｃ ｃ Ｔ ｅ ｒｃ ｖｒ ａ ａ ｏ ｄ ｅ １ １ ６ ％ Ｒ Ｄ＝ ． ２ ｏ ｍ ｄ ａ ｄ ９ ． ３ ｎ Ｒ Ｄ：１ ７ ％ （ ＝６ ｆ ．４ ｎ ） ｒ ｏ
反相高效液相色谱法测定清解合剂中大黄素、大黄酚含量
反相高效液相色谱法测定清解合剂中大黄素、大黄酚含量焦志海
【期刊名称】《中国药业》
【年(卷),期】2009(18)9
【摘要】目的建立测定清解合剂中大黄素、大黄酚含量的反相高效液相色谱(RP-HPLC)法.方法色谱柱为Kromasil C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液(75∶25),流速为1.0 mL/min,检测波长为254 nm,柱温为45 ℃.结果大黄素与大黄酚进样量分别在21.12～105.6 ng和29.28～146.4 ng范围内与峰面积积分值线性关系良好,平均加样回收率分别为98.13%和98.43%,RSD分别为0.87%和0.71%(n=6).结论 RP-HPLC法专属性强、灵敏度高、干扰小、结果可靠,可用于清解合剂的质量控制.
【总页数】2页(P26-27)
【作者】焦志海
【作者单位】湖南省怀化医专附属医院暨怀化市第三人民医院,湖南,怀化,418000【正文语种】中文
【中图分类】R284.1;R286.0
【相关文献】
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张卿;张恩娟
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HPLC法测定四季三黄片中大黄素、大黄酚的含量
HPLC法测定四季三黄片中大黄素、大黄酚的含量目的采用高效液相法测定四季三黄片中大黄素、大黄酚的含量。
方法用高效液相色谱检测法，Elite C18色谱柱，流动相为甲醇∶水（87∶13，pH=4.5），流速为1.000 mL/min，检测波长254nm，柱温：室温。
结果大黄素和大黄酚分别在10.1～50.5μg/mL和9.97～99.7μg/mL范围内线性关系良好，平均回收率分别为100.8%和100.2%。
结论该方法简便、灵敏、可靠、准确、重现性好。
标签：四季三黄片；大黄素；大黄酚；含量测定四季三黄片由大黄、黄芩、栀子、黄柏四味药组成。
该药消炎退热，通便利水，用于口鼻生疮，咽疼齿痛，口干舌燥，目眩头晕，大便秘结，小便赤黄[1]，具有消炎退热、通便利水的功效[2]，临床上主要用于口舌生疮、咽喉肿痛、头晕目眩等症[3]。
其主要成分大黄为蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatum L）、唐古特大黄（Rheum tanguticum Maxim. Ex Balf）或药用大黄（Rheum officinale Bail）的干燥根及根茎。
具有泻热通便、解毒消痈、行瘀通经、清热除湿之功效。
临床用于胃肠实热积滞、大便秘结、腹部胀满、热毒疮疡、暴赤眼痛、口舌生疮、齿龈肿痛、湿热壅滞之黄疸、小便不利、大便干结等[4]。
其中大黄素和大黄酚是大黄的主要有效成分[5]。
目前测定大黄素和大黄酚含量的方法多为HPLC法，也有薄层扫描法。
本研究采用HPLC法对四季三黄片中大黄的主要有效成分大黄素和大黄酚进行含量测定[6]。
结果表明，使用该法测定时，其线性关系好、准确度高、稳定性好、专属性强、重复性好，可用于大黄素和大黄酚的质量控制方法。
1 仪器与试剂1.1 仪器LC–10AT型高效液相色谱泵（日本岛津）；SPD–10A型紫外检测器（日本岛津）；N–2000双通道色谱工作站（浙江大学智达信息有限公司）；色谱柱Hypersil–ODS（4.6 mm×150 mm，5 ?m，大连依利特科学仪器有限公司）；AG135型电子天平（瑞士，梅特勒-托利多）；HS10260D型超声波清洗机（天津市恒奥科技发展有限公司）等。
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高效液相色谱法测定大黄中的大黄素、大黄
酚的含量
【关键词】高效
摘要：采纳高效液相色谱法中的梯度洗脱测定大黄中的大黄素、大黄酚的含量。
结果显示，所测得的二组分的含量和相对标准偏不同离为%、%；、% ，提示该法操作简单，结果靠得住，与药典法没有显著性不同。
关键词：高效液相色谱法；梯度洗脱；大黄素；大黄酚
大黄是我国临床经常使用的中药之一，素有“将军”之称，在中药复方中应用相当普遍，有“泻热通畅、凉血解毒、逐瘀通经、攻积导滞、利胆退黄”之功效，《神农本草经》称大黄“主下瘀血、血闭、寒热、破症瘕积聚、留饮、宿食、荡涤肠胃、通利水谷、调中化食、安和五藏”。
人们对大黄的研究日趋加深，接踵发觉了新的活性成份。
大黄中的有效成份有蒽醌类、芪类、苯丁酮类、鞣质类、色原酮类、萘类、有机酸、糖、蛋白质、甾醇等150多种成份。
大量的研究说明，大黄的诸多制剂均以保留总蒽醌为目的。
本研究采纳高效液相色谱法中的梯度洗脱直接测定经甲醇简单提取后的样品中的大黄酚和大黄素的含量，结果靠得住。
1 仪器与试剂
11 仪器
HP1100型高效液相色谱仪(美国惠普公司)，包括四元泵、真空脱气机、柱温箱、紫外检测器。
色谱柱: Hypersil ODS ×μm；预柱:C18×50mm)5μm)（大连依利特公司）。
12 试剂
大黄素、大黄酚对照品购自中国药品生物制品检定所；大黄生药材为市售（产地为甘肃、四川）；乙腈为色谱纯，其余为分析纯。
2 方式与结果
21 色谱条件
NH4OAC水溶液（PH=）：乙腈=A:B；梯度洗脱：0分钟A:B=71:29，12分钟A:B=21:79，14分钟A:B=21:79，15分钟A:B=71:29。
检测器：紫外检测器；波长：436nm；流速：min；进样体积：10μl；柱温箱温度：25℃。
22 标准曲线的绘制
周密称取大黄素、大黄酚对照品各别离置于10ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即为大黄酚和大黄素的标准贮备液，浓度为2mg/ml。
以标准贮备液为基础，以甲醇为溶剂准确配制浓度为、、、、ml系列浓度。
精取10μl注入液相色谱仪中以对照品峰面积为纵坐标，对照品进样量为横坐标绘制标准曲线，其回归方程为：C 大黄素=×10-7A＋，r=，C大黄酚=×10-7A＋， r=。
在本研究色谱条件下，当信噪比为3时测得大黄素和大黄酚的最低检出浓度为μg/ml和μg/ml。
23 周密度实验
取样品测定项下配制的供试品溶液在一日内不同时刻0、二、4、八、12小时内进行HPLC分析测得日内周密度和持续7日内进行HPLC 分析测得日间周密度。
结果大黄素和大黄酚在日内RSD别离为%和%；日间RSD别离为%和%。
见表一、2。
表1 日内周密度（略）
24 加样回收率实验
取已知含量的大黄生药材，别离加入对照品溶液适量，按样品测定方式进行测定。
持续测得5次测得平均回收率别离为大黄
素%(RSD %)、大黄酚%(RSD %)，结果见表3、4。
表3 大黄素加样回收率结果（略）表4 大黄酚加样回收率结果（略）
3 样品的测定
将样品研成细粉，准确称取左右，置碘量瓶中加入甲醇30ml，超声提取30分钟，提取物过滤，溶剂减压蒸干，残渣用5ml甲醇溶解，经微孔滤膜过滤后取10μl注入HPLC中，带入回归方程，用外标法测定含量。
同时，按药典（2000版）附录IXH水分测定法测定含水量。
将样品按样品测定项下规定进行测定，同时按药典法（2000年版药典一部第18页）进行测定，结果见表5。
表5 HPLC法与药典法测定结果（略）
4 讨论
41 药材含量测定中提取剂的确信
在样品的预处置进程中，采纳正交设计法对甲醇、乙醇等溶剂进行考察，确信单组分甲醇为提取剂，同时对提取的时刻和方式进行考察，确信为超声波提取30分钟。
42 HPLC法中检测波长的确信
本研究考察了大黄素和大黄酚的紫外图谱发此刻436nm处用梯度洗脱法分离样品，样品的分离度和检测限均比较好，因此检测波长定为436nm。
43 HPLC法中线形范围的确信
本法的线形范围是μg ~μg，那个线形范围是参考了大量的文献和本法的最低检测限确信的。
大黄素和大黄酚属弱酸性成份，流动相呈弱酸性条件下其保留行为取得改善，本研究考察了以 NH4OAC(pH=和乙腈为流动相,分离取得的峰形对称,分离成效良好。
实验结果说明，本法结果靠得住，与药典法没有显著性不同，其最大的优势是操作简单准确。
参考文献
1 袁倚盛，等.大黄游离蒽醌的制备与纯化.中草药, 2000,31(7):508
2 向兰，郑俊华，等. 窄叶大黄蒽醌类化学成份研究. 中草药,2001,32(5):395.
3 杜鹃，等.RPHPLC法测定贵阳地域不同采收期土大黄中大黄素及总游离蒽醌含量. 中草药,1998,29(6):387.。