高级生理学实验教学大纲(09生技教学版)

实验1 坐骨神经腓肠肌标本的制备【目的要求】学习蛙类动物双毁髓的实验方法学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法【动物与器材】蟾蜍或蛙、常用手术器械（手术剪、手术镊、用术刀、金冠剪、眼科剪、眼科镊、毁髓针、玻璃分针），蛙板，蛙钉，锌铜弓，培养皿，滴管，纱布，线，任氏液【方法与步骤】制备双毁髓蟾蜍（毁脑和脊髓）录制后肢标本分离两后肢分离坐骨神经分离股骨头游离腓肠肌检验标本注意：制备标本过程中经常用任氏液湿润去皮的标本。

【思考题】剥去皮肤的后肢，能用自来水冲洗吗？为什么？金属器械碰压，触及或损伤神经及腓肠肌，可能引起哪些不良后果？如何保持标本的机能正常？实验2 刺激强度与骨骼肌收缩的影响【目的要求】1学习肌肉实验的电刺激方法及肌肉收缩的记录方法。

2观察刺激强度与肌肉收缩反应的关系。

【基本原理】腓肠肌由许多肌纤维组成，刺激腓肠肌时，不同的刺激强度会引起肌肉的不同反应。

当刺激强度过小时，不引起肌肉发生收缩发应，此时的刺激为阈下刺激。

当全部肌纤维同时收缩时，则出现最大收缩发应。

这时，即使再增大刺激强度，肌肉收缩的力量也不再随之加大。

可以引起肌肉发生最大收缩发应的最小刺激强度为最适刺激强度。

【动物与器材】蟾蜍（或蛙）的腓肠肌标本、常用手术器械、计算机采集系统、张力传感器（100g）、刺激电极、支架、双凹夹、肌槽、瓷盘、滴管、任氏液、橡皮泥、棉线。

【方法与步骤】1开启刺激，观察肌肉收缩反应。

如果肌肉无收缩反应，则适当增加刺激强度，其他刺激参数保持不变。

间隔少许时间，同法进行第二次刺激，直到出现最小收缩。

测量收缩幅度并记下刺激强度，此时的刺激强度为阈强度。

2 同法逐渐增强刺激强度，观察刺激强度与肌肉收缩反应的关系。

3当刺激强度达到某一数值后，肌肉收缩幅度不再随刺激强度的增加而升高，记录3～4次同等高度的收缩曲线和刺激强度。

1. 如何保持标本在实验过程中机能稳定？2. 何为标本的最适刺激强度？3. 观察实验中同一标本的阈刺激强度与最适刺激强度是否会变化？为什么？实验3、血细胞的观察、计数和ABO血型鉴定【目的要求】1 观察、了解血细胞形态、结构与功能2学习血细胞的计数方法3学习掌握ABO血型鉴定的方法及原理。

【动物与器材】家兔、血细胞计数板、专用盖玻片、微量吸管、计数器、血细胞稀释液、人血涂片、采血针、显微镜、载玻片、A型和B型标准血清、滤纸片、酒精棉球、蒸馏水、消毒牙签、生理盐水等【方法步骤】（一）血涂片观察1 红细胞观察2 白细胞观察3 血小板观察（二）ABO血型鉴定1采血2滴入A、B标准血清中并搅拌3辨别血型4显微镜观察5记录受试者的血型，讨论判断机理。

（三）血细胞计数1熟悉计数板2红细胞计数3血小板计数【思考题】1根据自己的血型，说明你能接受或输血何种血型的人，为什么？2如何区别血液凝集与凝固，其机制是否一样？3 输血前为何要做交叉配血试验？4如何减少血细胞计数的误差？实验 4 心肌的期前收缩与代偿间歇【目的与要求】1观察心室收缩活动的不同时相对额外的刺激的反应2了解心肌的生理特性3通过实验阐述心肌产生期外收缩的条件与代偿间歇出现的机理【基本原理】心肌收缩的机能特性之一是具有较长的不应期，整个收缩期和舒张早期都是不应期。

在心室收缩期给任何刺激，心室都不发生反应。

在心室舒张期给单个阈上刺激，则产生一次正常的节律以外的收缩反应，称为期外收缩。

当静脉窦传来的节律性兴奋恰好落在期外收缩的收缩期时，心室则不发生兴奋，须静脉窦传来下一次兴奋才会收缩。

因此。

在期外收缩之后，就会出现一个较长时间的间歇期，称为代偿间歇。

【动物与器材】蟾蜍或蛙，常用手术器械，蛙板(或蜡盘)，蛙心夹，计算机采集系统，张力传感器，支架，双凹夹，滴管，双针形露丝刺激电极，培养皿(或小烧杯)，纱布，棉线，橡皮泥，任氏液【方法与步骤】1暴露蟾蜍或蛙的心脏，连接记录装置。

将刺激电极安放在心室外壁，使之既不影响心搏又能使心室紧密接触。

刺激电极与刺激电极输出端相连。

2记录正常的心搏曲线作对照3选择能引起心室发生期外收缩的刺激强度(于心室舒张期调试)，分别与心室收缩期和舒张期的早，中，晚给予单个刺激(注意:刺激前后要有三四次正常心搏曲线作对照，不可连续输出两个刺激)。

观察心搏有无变化，重复并肯定实验结果。

4同上法，加大刺激强度，观察心室肌对额外刺激的反应【思考题】1 实验结果同骨骼肌比较，表明心肌有何特性2 心肌的不应期长有何生理意义3 本实验不用连续刺激，为什么?于心室收缩和舒张期早、中、晚分别给与刺激的实验设计思路是什么?4 为何刺激前后要有对照曲线?实验 5 家兔呼吸运动的调节【目的要求】1学习记录家兔呼吸运动的方法。

2观察并分析肺牵张反射及不同因素对呼吸运动的影响。

【基本原理】人体及高等动物的呼吸运动所以能持续地、有节律地进行，是由于体内调节机制的存在。

体内、外的各种刺激，可以直接作用于中枢或不同部位的感受器，反射地影响呼吸运动，以适应机体代谢的需要。

肺的牵张反射参与呼吸节律的调节。

【动物与器材】家兔、手术台、手术器械、张力传感器与滑轮或动物呼吸传感器、计算机采集系统、20ml 与1ml注射器、橡皮管（长1.5m，内径1cm）、20％或25％氨基甲酸乙酯、生理盐水、装有CO2的气袋、装有钠石灰的气袋。

【方法与步骤】急性动物实验时，记录呼吸运动的方法有三种，一种是通过压力传感器与气管插管连接记录；另一种是通过系在胸（或腹）部、装有张力或压力传感器的呼吸带记录；第三种是通过张力传感器记录膈肌运动。

本实验采用第三种操作方法。

1动物麻醉、固定，进行颈部气管、动脉及神经的分离术，插入气管插管，分离出一侧颈总动脉和双侧迷走神经，穿线备用。

2剑突软骨分离术剪开胸骨下端剑突部位的皮肤，再沿腹白线切开长约2cm左右的切口。

细心分离剑突表面的组织（勿伤及胸腔），暴露出剑突软骨和骨柄，用金冠剪剪去一段剑突软骨的骨柄，使剑突软骨与胸骨完全分离，但必须保留附于其下方的膈肌片，并使之完好无损。

此时膈肌的运动可牵动剑突软骨。

3将系有长线的金属钩钩住游离的剑突软骨中间部位，线的另一端通过万能滑轮系于张力传感器的应变梁上。

4开启计算机采集系统，接通张力传感器的输入通道，调节记录系统，使呼吸曲线清楚地显示在显示器上。

5实验观察（1）记录呼吸运动曲线，仔细识别吸气或呼气运动与曲线方向的关系。

（2）增加无效腔对呼吸运动的影响将长约1.5m，内径1cm的橡皮管连于气管插管的一个侧管上，然后用止血钳夹闭另一侧管，以增加无效腔。

观察并记录呼吸运动曲线的改变。

一旦出现明显变化，则立即打开止血钳，去除橡皮管，待呼吸恢复正常。

（3）CO2对呼吸运动的影响将气管插管的一个侧管接通装有CO2的气袋，同时夹闭另一侧管，使家兔对于CO2气袋呼吸，观察并记录呼吸运动的变化。

一旦出现明显变化，则立即打开止血钳，去除橡皮管，待呼吸恢复正常。

（4）缺氧对呼吸运动的影响将气管插管的一个侧管接通装有钠石灰的气袋，同时夹闭另一侧管，观察并记录呼吸运动的变化。

一旦出现明显变化，则立即打开止血钳，去除橡皮管，待呼吸恢复正常。

（5）增加气道阻力对呼吸运动的影响待呼吸运动恢复正常后，将气管插管的两个侧管同时夹闭数秒钟，观察呼吸变化。

实验 6 人体心音听诊与动脉血压测定一、心音听诊【目的要求】学习心音听诊的方法，识别第一心音与第二心音。

【基本原理】心音是由心脏瓣膜关闭和心肌收缩引起的振动所产生的声音。

用听诊器在胸壁前听诊，在每一心动周期内可以听到两个心音。

第一心音：音调较低（音频为25～40次/s），而历时较长（0.142s），声音较弱，是由房室瓣关闭和心室肌收缩振动所产生的。

由于房室瓣的关闭与心室收缩开始几乎同时发生，因此第一心音是心室收缩的标志，其响度和性质变化，常可反映心室肌收缩强弱和房室瓣膜的机能状态。

第二心音：声调较高（音频为50次/s）而历时较短（0.08s），较清脆，主要是由半月瓣关闭产生振动造成的。

由于半月瓣关闭与心室舒张开始几乎同时发生，因此，第二心音是心室舒张的标志，其响度常可反映动脉压的高低。

【实验器材】听诊器或心音放大器【方法与步骤】1受试者安静端坐，胸部裸露。

2.检查者带好听诊器，注意听诊器的耳具应与外耳道开口方向一致（向前）。

以右手的食指、拇指和中指轻持听诊器胸具紧贴与胸部皮肤上，依次由左房室瓣听诊区→主动脉瓣听诊区→肺动脉瓣听诊区→右房室瓣听诊区，仔细听取心音，注意区分两心音。

如难以区分两心音，可同时触诊心尖搏动或颈动脉脉搏，此时出现的心音为第一心音。

【注意事项】1实验室内保持安静，以利听诊。

2听诊器耳具应与外耳道方向一致。

橡皮管不得交叉、扭结，切勿与它物摩擦，以免发生摩擦音影响听诊。

3如呼吸音影响听诊，可令受试者暂停呼吸片刻。

【思考题】第一心音与第二心音是怎样形成的？它们有何临床意义?二、人体动脉血压的测定及其影响因素【目的与要求】1 学习并掌握间接测定人体血压的原理和方法2 观察某些因素对动脉血压的影响3 学习用生物统计学简易处理方法处理数据【基本原理】通常血液在血管中流动时没有声音，但当外加压力使血管变窄形成血液涡流时，则可发生声音。

因此，可以根据血管音的变化来测量动脉血压。

测定人体动脉血压最常用的方法是使用血压计间接测量。

测压时，用压脉带在上臂或手腕加压，当外加压力超过动脉的收缩压时，动脉血流完全被阻断，此时在动脉处听不到声音。

当外加压力等于或稍低于动脉内的收缩压时而高于舒张压时，则在心脏收缩时，动脉内有少量血流通过，而心室舒张时而无血流通过。

血流连续通过血管时，会发出声音。

故恰好可以完全阻断血流的最小外加压力相当于收缩压。

当外加压的等于或小于舒张压时，血管内血流连续通过，所发出的音调会突然降低或声音消失。

在心室舒张时有少许血液通过的最大管外压力相当于舒张压。

在正常情况下，人或哺乳动物的血压是通过神经和体液调节保持其相对的稳定性。

但是血压的稳定性是动态的，是在不断连续的变化而不是静止不变的。

人体的体位、运动、呼吸、温度以及大脑的思维活动的等因素对血压均有一定的影响。

【实验器材】血压计，听诊器，冰水【方法与步骤】1 受试者取坐位，心脏与血压计零点同一水平。

静坐5分钟，待肢体放松，呼吸平稳与情绪稳定。

2 松开打气球上的螺丝，将压脉带内的空气排空后再将螺丝旋紧。

3 受试者脱左臂衣袖，将压脉带裹于左上臂距肘窝3cm上方处，压脉带应与心脏同一水平，使其松紧适度，手掌向上放在实验台上。

4 在压脉带下方，肘窝上方找到动脉搏动处，将听诊器的胸具置于动脉上。

5 听取血管音变化。

向压脉带充气加压，同时注意倾听声音变化，在声音消失后再加压30mmHg，然后稍稍扭松打气球上的螺丝，缓慢放气，仔细倾听听诊器内血管音的一系列变化；声音先是由无到有，次之由低到高，而后突然变低，最后完全消失。