HPLC测定盐酸美金刚胺及其前药的脂水分配系数_曹俊涵
高效液相色谱串联质谱法检测美金刚血浆浓度
高效液相色谱串联质谱法检测美金刚血浆浓度目的：建立高效液相色谱串联质谱法测定人体血浆中美金刚的浓度。
为内标，方法：采用Triple Quad-4500的液质联用技术系统，以美金刚-d3血浆经乙腈蛋白沉淀后，采取Agilent EC-C18 2.7μm 50x4.6mm色谱柱分离，以多反应检测模式（MRM）进行检测。
结果：美金刚的线性范围为0.6ng/mL~225ng/mL，提取回收率和内标平均提取回收率分别为96.31%～98.08%和106.70%，批内和批间准确度精密度均＜15%。
结论：该方法简便、快速、灵敏，重现性好，适应于美金刚人体内血药浓度的测定及其药代动力学和生物等效性研究。
关键词：美金刚、高效液相色谱串联质谱法、含量测定盐酸美金刚是FDA批准的第1个用于治疗中、重度阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的药物，主要通过调节脑内谷氨酸水平发挥作用。
临床研究表明,盐酸美金刚是一种安全、有效，且较有市场前景的药物。
本文建立HPLC-MS/MS法测定人血浆中美金刚的浓度，采用乙腈蛋白沉淀法，简单，快速，稳定，可同时满足临床药代动力学及生物等效性研究中大批量样品分析的要求。
1.仪器与对照品美国应用生物系统公司Triple Quad-4500三重四极杆质谱仪，配ESI（电喷雾离子源），日本岛津UPLC-30A超高效液相系统。
美金刚来源：USP，批号：R044E0；美金刚-d来源：TLC，批号：1221-081A6。
31.方法2.1液相色谱-质谱条件液相条件：色谱柱为Agilent EC-C18 2.7μm 50x4.6mm，流动相乙腈-0.4%甲酸水溶液（PH=3.20），流速0.6mL/min，进样体积5μL。
质谱条件：ESI（电喷雾离子源），正离子检测，其中离子化电压4500V，干燥器温度500℃，气帘气压力45psi，雾化气压力50psi，涡轮气压力50psi，多反应检测（MRM）方式定量，美金刚180.1→163.1，美金刚-d183.5→166.2。
比色法测定盐酸美金刚片含量
我 们采 用经 典 的 比色 法 测 定 盐 酸美 金 刚片 的含 量 ，
方 法 简便可 靠 。 １ 仪器 与试 药
精 密量 取 对 照 品溶 液 与供 试 品溶 液 各 ２ｍ ， ｌ分 别 置 于 分 液 漏 斗 中 ， 加 水 ５ Ｉ 与 溴 甲酚 绿 溶 液 各 Ｔ ｌ ｌ
维普资讯
江 苏 药 学与 临床 研 究
２０ 第 １ 第 １ ０６年 ４卷 期
・
药物 分 析 ・
比色 法测 定 盐酸 美金 刚 片含 量
严相 平 。 杜 云 ２０ Ｏ ） １Ｏ ９
本法 简便 、 确 、 准
江 苏省 药物研 究所 （ 南京
摘 要： 的 目
ＫＥＹ Ｗ ＯＲＤＳ： ｏ ｒ ｔｉ ｍ ｔｏ Ｍｅ ｎ ｉｅ ｈ ｄｏ ｈｏ ｉｅ Ｃ ｎｅ ｔ ｅｅｍｉａｉｎ Ｃ ｌ ｍｅｒ ｅｈ ｄ； ｍａ ｔ ｙ ｒｃ ｌｒ ； ｏ ｔｎ ｔｒ ｎ ｔ ｏ ｃ ｎ ｄ ｄ ｏ
盐 酸美 金 刚胺 （ ｅ ａ ｔ ｅＨ ｄｏｈｏ ｄ ） 德 国 Ｍ ｍ ｎ ｎ ｙｒｃｌ ｉｅ 是 ｉ ｒ
配 制成含 ２ ・ ｌ 的对 照品溶 液 。 ５ ｒ ｎ
疗 效 ， 国 Ｆ Ａ于 ２０ 美 Ｄ ０３年 １ 批 准其 作 为 治 疗 重 Ｏ月 症 阿 尔茨海 默 氏症 的药 物 。有 文献 报道 采用 液相 色 谱 一 谱 技 术 … 气 相 色 谱一 谱 技 术 Ｊ 及 柱 前 衍 质 １、 质 以
器设 备 在 国 内生 产 企 业 和 药 品检 验 机 构 尚未普 及 ，
取本 品对 照 品溶 液 在 ４０～７ ０ｎ ０ ０ ／ 围 扫描 ， ｎ范
HPLC_远紫外吸收光谱法测定盐酸美金刚胶囊的溶出曲线
本无影响。
参考文献
［1］ Koeberle M，Hughes P，Wilson C，et al． Development of a liquid chromatography － mass spectrometric method for measuring the binding of memantine to different melanins［J］． J Chromatogr B： Analyt Technol Biomed Life Sci，2003，787（ 2） ： 313-322．
在上 述 色 谱 条 件 下，盐 酸 美 金 刚 峰 的 保 留 时 间约为 6. 71min； 二极管阵列检测器记录盐酸美金 刚的 紫 外 吸 收 图 谱，提 取 的 最 大 吸 收 波 长 为 194. 3nm，分别见附图 1 与附图 2。
Journal of Medical Forum Vol． 32 No． 16 August 2011
［3］ Zhou Xing － qin，Qin Xiao － feng，et al． Determination of Memantine tablets by HPLC － ELSD［J］． Chinese Journal of Pharmceuticals（ 中国医药工业杂志） ，2004，35 （ 11） ： 675-676．
［4］ Duh TH，Wu HL，Kou HS，et al． （ 2 － Naphthoxy） acetyl chloride a simple fluorescent reagent［J］． J Chromatogr A，2003，987（ 1 － 2） ： 205-209．
［5］ 卫生部． 中国药典二部［M］． 9 版． 北京： 人民卫生出 版社，2010： 86-87． 2011-04-20 收稿
HPLC法测定复方氨酚烷胺胶囊中盐酸金刚烷胺的含量
HPLC法测定复方氨酚烷胺胶囊中盐酸金刚烷胺的含量目的：建立测试复方氨酚烷胺胶囊中盐酸金刚烷胺含量的高效液相方法，并对此方法进行系统的方法学验证，以确保应用该方法测试的结果准确、可靠。
方法：采用蒸发光散射检测器，色谱柱：Agilent TC-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm，Agilent，美国），流动相：甲醇-1%醋酸铵缓冲溶液（用醋酸调至pH 3.5）（22∶78），流速：1 ml/min，检测温度为104 ℃。
结果：盐酸金刚烷胺在20～120 μg/ml范围内线性关系良好，相关系数为0.9990（n=6）；本法灵敏度高，精密度和重复性良好；平均加样回收率为101.96%，RSD为0.89%；供试品溶液室温放置8 h稳定。
结论：本方法测定盐酸金刚烷胺的含量准确、可靠，测得的盐酸金刚烷胺灵敏度高，操作简单、用时短，可用于复方氨酚烷胺胶囊中盐酸金刚烷胺的含量测定。
标签：蒸发光散射检测；复方氨酚烷胺胶囊；盐酸金刚烷胺；含量测定复方氨酚烷胺胶囊由对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺、马来酸氯苯那敏、人工牛黄、咖啡因几种主要成分组成，是临床常用的解热镇痛药。
中国药典中盐酸金刚烷胺的含量测定方法采用的是滴定法[1]，该方法操作较为繁琐，认为误差较大。
为更有效、快速、可靠的测定盐酸金刚烷胺含量，2006年修虹等[2]建立了HPLC-ELSD方法测定复方氨酚烷胺胶囊中盐酸金刚烷胺的含量。
笔者在此基础上对盐酸金刚烷胺的测定方法进行了适当的改进，经过方法学验证，该方法回收率、准确度及重现性均为良好，且灵敏度与峰形更好，现报告如下。
1 实验材料1.1 仪器与设备Agilent 1260型高效液相色谱仪（配有脱气机、自动进样器、恒温箱、液相色谱泵、柱温箱及蒸发光散射检测器），由Chemstation化学工作站系统控制（Agilent，德国）；METTLER TOLEDO AB135-S型十万分之一天平（METTLER，瑞士）；XW-80A涡旋混合器（上海沪西分析仪器厂）；TGL16M型冷冻离心机（长沙英泰仪器有限公司）；AHL-2001-P痕量型分析型超纯水机（艾科浦，重庆颐洋企业发展有限公司）。
盐酸美金刚胺的合成及表征
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科技与开发
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气相色谱法测定盐酸美金刚原料药中有机溶剂残留量
精 密 量 取 ２ 项 下 的 对 照 储 备 液 ． ２
１ ，．，．， ．，．，． ，分 别 置 于 ｌｍｌ 瓶 中 ， ． ２０ ４０ ５０ ６０８０ ０ ｍｌ Ｏ 量 另 分 别精 密量 取 内标储 备 液 １ ｍ 置 上 述 量 瓶 中 ， ． ｌ ０
分别精密量取对照储备液 ５ ｍ 和内标储备液 ． ｌ ０ １ ｍ 置 １ｍｌ 瓶 中 ， 溶 剂 稀 释 至 刻 度 ， 匀 即 ． ｌ ０ ０ 量 加 摇
色谱柱 ：Ｂ ５毛细管色谱柱（０ ５ｍ Ｄ一 ３ｍ Ｘ ． ｍ× ０３
１ｕ ５ ． ｍ）％苯基 一 ５ ５ ９ ％Ｚ． 聚硅 氧烷 ； 甲基 检测 器 ： 火 氢
焰离 子 化检 测 器 （Ｉ ， 测 温度 ：８ Ｔ ； 样 口温 ＦＤ）检 ２ ０ ；进 度 ：３ ℃ ； 温 ：０ ２０ 柱 ５ ％保 持 １ｍｉ， 后 以 ３ ℃／ｉ ２ ｎ然 ０ ｍｎ 升 温 至 ２０Ｃ， ３ ￣ 至少 保 持 ｌ 钟 ； 气 ： 纯 氮 ， ２分 载 高 流 速 １ ｍｌ ｎ 分流 比 ：０１直 接进 样 ， 样量 ： ｌ ． ／ ； ０ ｍｉ １：； 进 １ 。 在 上 述 色谱 条 件 下 ， 剂 乙醇 、 溶 乙腈 、 乙醚 、 二 氯 甲 烷 的 保 留 时 间 分 别 为 ：． ７ ８８４ ９２０ ８０ 、． 、．３ 、 ８ ２ １． ６ｍｉ， 内 标 物 质 乙 酸 乙 酯 的 保 留 时 间 为 ０１ ｎ ６ １．７ｍｉ。 ３１６ ｎ 计算 结果 表 明上 述各 溶剂 分离 度均 大 于 ２０ 理论 塔板 数均 大于 １０ ０ ．， ０ ０ 。色谱 图见 图 ｌ 。
作者简介 ： 以兵（ ９ ４ ， ， 余 １７ 一）男 工程师 ， 主要从事药物分析 工作 。Ｅ ｍａ ：ｈ７ １０ Ｃ ｒ ｏ． ｍｅ － ｉ ｃｂ４ １ ２￣ａ ｏ ｏ ． ｌ ６ｈ ｅ ｎ
盐酸美金刚胶囊的丹磺酰氯柱前衍生化-HPLC法测定
盐酸美金刚胶囊的丹磺酰氯柱前衍生化-HPLC法测定
叶晓霞;乐健;杨永健
【期刊名称】《中国医药工业杂志》
【年(卷),期】2010()1
【摘要】建立了柱前衍生化-HPLC法测定盐酸美金刚胶囊的含量。
样品与丹磺酰氯在25℃、避光衍生化反应90 min后测定。
采用C_8色谱柱,以磷酸盐缓冲液(pH 3.0)-乙腈(25:75)为流动相,检测波长218 nm。
在5～180μg/ml浓度范围内线性关系良好(r=0.999 9),日内和日间RSD为1.15%和0.48%,平均回收率为99.7%～101.1%,衍生化产物在17 h内稳定。
【总页数】3页(P35-37)
【关键词】盐酸美金刚;丹磺酰氯;柱前衍生;高效液相色谱法;测定
【作者】叶晓霞;乐健;杨永健
【作者单位】上海市食品药品检验所
【正文语种】中文
【中图分类】TQ460.7;O657.72
【相关文献】
1.丹磺酰氯作为生物胺柱前衍生试剂衍生化条件的研究 [J], 董伟峰;李宪臻;林维宣
2.丹酰氯柱前衍生化-高效液相色谱法测定单胺类神经递质及其代谢物 [J], 黄晓;陈佳文;贺莉萍;康学军
3.丹磺酰氯柱前衍生-超高效液相色谱-串联质谱法测定人体尿样中的环己胺 [J],
杨华梅;杭莉;杨建国;张雪梅;黄为红;李晨;蒋晓丽
4.对酞内酰胺苯磺酰氯柱前衍生HPLC法测定仲丁胺残留量 [J], 崔同;傅承光
5.柱前衍生化HPLC法测定盐酸美金刚的含量 [J], 楼姝含;王栋;顾晓彤;王伊凡;李学明
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HPLC法测定盐酸美克洛嗪原料及片剂的含量和有关物质_图文_(精)
生国垫旦握蕉２塑生筮２鲞笙！翅６５３．４系统适用性和色谱图记录时间的要求分别对不同批次的“羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯倍，羟苯丙酯记录色谱图至主峰保留时间的３倍，羟苯丁酯记录色谱图至主峰保留时间的２倍。
参考文献丙酯、羟苯丁酯”样品的进行检测，这４种羟苯酯中均含有其他３种酯和合成原料对羟基苯甲酸，其中羟苯甲酯与羟苯乙酯之间分离度最小，为了确保实［１］ｕｓＰ２９／Ｎ蹦．３３７４，３３３３，３４１４，３２８７．［２］ＰｌｌＥｕ６．Ｏ．２０１３～１５５４，２３２６，１１４０．［３］ＪＰｘⅣ９７６，９１６，１０２ｌ，８７６．［４】中国药典２００５年版二部．９ｌｏ．验的有效性，使所有杂质的检出，根据实验结果，系统中羟苯甲酯与羟苯乙酯之间分离度的分离度应符合要求，羟苯甲酯记录色谱图至主峰保留时间的４ＨＰＬＣ法测定盐酸美克洛嗪原料及片剂的含量和有关物质隆艳１，文彬，毛振民‘（上海交通大学药学院，上海２０００３０）摘要目的：建立测定盐酸美克洛嗪原料及片剂的含量和有关物质的高效液相色谱法。
方法：采用以十八烷基硅烷化学键合硅胶为填充剂的色谱柱，流动相为甲醇．磷酸盐缓冲溶液ｐＨ７．０（８８：１２），检测波长为２３０胁。
结果：线性浓度范围０．６一１．４ｇ・Ｌ－１（ｒ＝ｏ．９９９７），ＲＳＤ％为ｏ．１５％。
结论：用同一高效液相色谱法来测定盐酸荚克洛嗪原料及片刺的含量争有关物质，经方法学验证，此方法简便、灵敏、准确。
关键词：高效液相色谱法；盐酸美克洛嗪；含量；有关物质中图分类号：９２１．２文献标识码：Ａ文章编号：１００９—３６５６（２００８）一ｌ一６５—３Ｄｅｔｅ咖ｉｎａｔｉｏｎｌｅｔｓｏｆＣｏｎｔｅｎｔ粕ｄＲｄａｔｅｄＳｕｂｓｔａＩｌｃ姻ｆｏｒｂｙｌ肌ＣＢｉｎ，ＭａｏＭｅｃｌ晒ｎｅＨｙｄｒ∞Ｍｏｒｉｄｅ舳ｄＩｔｓＴａｂ－【ｏｎｇＹ觚，ＷｅｎＺｈｅｎ—ＩＩｌｉｎ（例如酽旷盹㈣唧，虢ｌ咖ｆｃｏ，姗＂衄溉矾姗蚵，ｓｋ嘴搬２０００３０）０ｆＡ蜘ｃｔｏｂｊｅｃｔｉ他：Ｔｏ鹪ｔａｂｌｉｓｈ舳鹪ｓａｙＭｅｃｌｏｚｉ∞Ｈｙｄｒｏｃｌｌｌ耐ｄｅｍａｔｅｒｉ丑：ｌＢ舳ｄｔａｂｌｅ协ＷｉｔｌｌｎＩｐｈｙ．Ｍ础ｏｄ：Ｃ培ｗ拍ｐａｃｋｅｄｉＩｌｔｌｌｅ７）．ＲＳＤ啪ｓＫｅｙｗｏｒｄｓａＩｌａｌ面ｃａｌｃｏｌ呲７ｒｈｅ脚ｂｉｌｅｐｈ瑚ｅｃｏｎＢｉｓ吲０ｆｍｅｔ｝蛐ｏｌ—ｐｈＤｓｐＩＩａｔｅｂｕⅡｂｒ舳ｌＶｅｎｔ（ｐＨ７．Ｏ）ｃａｌｉｂ枷锄ｃｕｎｒｅｗ船Ｈｎｅｒｉｎｔ｝ｌｅ瑚＾ｇｅｏｆＯ．６ｔｏｈｉｇｌｌｐｅ血曲瑚ｌｃｅＨｑＩｌｉｄｃｌｌｌ０咖ｇ．（８８：１２）．Ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉ鲫ｗ盯ｅｌｅｎｇＩｌｌｗ鹬２３０ｎ肌Ｒ嘲ｌｌｔ：弧ｅＬ４ｇ・Ｌ“（ｒ＝Ｏ．９９９０．１５％．Ｃ伽山ｓｉｏｎ：－１１ｌｉ８ｍｅｔＩｌｏｄｗ酗ｓｉｍｐｌｅ，∞璐ｉｔｉｖｅ锄ｄｃ叫ｌｄｂｅ璐ｅｄＲ）ｒｔ｝ｌｅｑｕａｌｉｔｙｅｖａｌｕａｔｉ∞ｏｆＭｅｃｌｏｚｉ嘴ＨｙｄｒｏｃｌｌｌｏｒｉｄｅＩ眦ｔ面ａｌｓ蛐ｄｔａｂｌｅ协．ＨＰＩｌＣ；Ｍｅｃｌｏｚｉ∞Ｈｙｄｒｏｃｈｌ蕊ｄｅ；Ａ孵ａｙ；Ｒｅｌ曲ｅｄ８ｕｂｓｔａ琳∞１仪器与试药盐酸美克洛嗪为抗组胺药，收载于《中国药典》２００５年版二部。
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华西药学杂志W C J ・P S 2009,24(5)ζ536～537作者简介:曹俊涵(1984-),女,四川自贡,正攻读药物分析专业的硕士学位。
3通讯作者(Corres pondent author ),Email:zdan321@HP LC 测定盐酸美金刚胺及其前药的脂水分配系数曹俊涵,毛惠英,张 丹3,粟 立,李文莉(四川大学华西药学院,四川成都610041)摘要:目的 测定盐酸美金刚胺(MH )及其前药(P MH )的脂水分配系数。
方法 用HP LC 法测定脂水两相药物的浓度,采用恒温摇瓶法测定脂水分配系数;色谱柱为Luna C 18,流动相为甲醇-水-三乙胺(70ζ30ζ0.5,磷酸调pH7),检测波长为225n m,流速1.0m l ・m in -1。
结果 MH 及P MH 脂水分配系数分别为2.09、227.05。
结论 P MH 的脂水分配系数显著大于MH,证明P MH 比MH 具有更高的脂溶性,推测其具有良好的血脑屏障通透性。
关键词:盐酸美金刚胺;P MH;脂水分配系数;高效液相色谱法中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:1006-0103(2009)05-0536-02D eterm i n a ti on of partiti on coeff i c i en ts of m eman ti n e hydrochlor i de and its prodrug P M HCAO Jun -han,MAO Hui -ying,ZHANG Dan 3,S U L i,L IW en -li(W est China school of Phar m acy,S ichuan U niversity,Chengdu,S ichuan,610041P .R.China )Abstract:O BJECT I VE To deter m ine the partiti on coefficients of me mantine hydr ochl oride (MH )and its p r odrug (P MH ).M ETH 2OD S The partiti on coefficient in trichl or methane /water syste m was measured using shaking flask method by deter m ining the drug con 2centrati ons in t w o phases .Luna C 18colu mn (phenomenex 150mm ×4.6mm,5μm )was used with detecti on wa welength at 225n m,and the mobile phase consisted of methane -water -triethylam ine (70ζ30ζ0.5,adjust t o pH7.0with phos phoric acid ).The fl ow rate was 110m l ・m in -1.RESUL TS The partiti on coefficients of MH and P MH were 2.09and 227.05,res pectively .CO NCL US I O N The partiti on coefficient of P MH is higger than that ofMH which p r oves P MH shows higher li pos olubility than MH,and i m p lies that the infiltrati on ability of MH acr oss BBB is increased in the for m of P MH.Key words:Me mantine hydr ochl oride;Pr odrug;Partiti on coefficient;HP LC CLC nu m ber:R917 D ocu m en t code :A Arti cle I D :1006-0103(2009)05-0536-02 盐酸美金刚胺(me mantine hydr ochl oride,MH )是第一个在阿尔茨海默氏病和血管性痴呆方面有显著疗效的NMDA 拮抗剂,已被F DA 批准用于中、重度AD 的治疗[1～3]。
为增加盐酸美金刚胺的脂溶性,提高其通过血脑屏障(BBB )的能力,目前已设计并合成了盐酸美金刚胺前药(P MH ),其理化性质未见报道。
从化学结构分析可能具有脑靶向性,实际药理药效还处于处于基础研究阶段。
现采用恒温摇瓶法测定MH 及P MH 脂水分配系数,证明P MH 比MH 具有更高的脂溶性。
推测其具有良好的透过BBB 的能力,可提高药物在脑内的浓度。
1 实验部分111 仪器与试药LC -10ATv p 液相色谱仪系统(日本岛津);PHS -3C 型酸度计(成都方舟科技开发公司);盐酸美金刚胺(MH,含量99.5%)及盐酸美金刚胺前药P MH (含量9911%)(四川大学化学学院);盐酸金刚烷胺(市售);水为重蒸水,其余试剂均为化学纯。
112 方法与结果11211 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱为Luna C 18(150mm ×4.6mm ,5μm );流动相为甲醇-水-三乙胺(70ζ30ζ0.5,磷酸调pH7);流速为1.0m l ・m in -1;检测波长为225nm 。
理论板数按盐酸美金刚胺衍生物峰计算应不低于3×103。
盐酸美金刚胺衍生物峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。
11212 盐酸美金刚胺的测定 取盐酸美金刚胺适量,精密称定,用三氯甲烷制成1mg ・m l -1的溶液;取该溶液适量,与磷酸盐缓冲溶液(pH7.8～8.0)混合,置恒温振荡仪(37℃、281r ・m in -1)上振荡16h 后,4℃避光静置2.5h 。
分取脂水两相溶液,离心,各取1m l,用甲醇稀释至50m l;各取10μl,加10μl内标溶液(20μg ・m l -1盐酸金刚烷胺甲醇溶液),60℃水浴中挥干,加衍生化试剂(苯甲酰氯丙酮溶液)100μl 和三乙胺10μl,混匀,4℃下避光放置30m in,60℃水浴中挥干,加100μl 流动相溶解后,取20μl 进样测定。
采用内标标准曲线法计算脂水两相中盐酸美金刚胺的浓度,以两相浓度比为盐酸美金刚胺的脂水分配系数。
11213 P MH脂水分布系数测定 按“11212”项下方法配制P MH溶液,取水相溶液20μl直接进样测定;取脂相溶液1m l,用甲醇稀释至50m l,取10μl,于60℃水浴中挥干,用100μl流动相溶解,取20μl 直接进样测定;采用外标标准曲线法计算P MH脂水两相中的浓度,以两相浓度比为P MH的脂水分配系数。
11214 线性关系与范围 分别用相互饱和的脂相和水相配制一系列浓度的MH溶液。
按“1.212”项下方法测定,以MH与内标的峰面积比对浓度进行线性回归。
两相中盐酸美金刚胺0.01～6.37mg・m l-1与峰面积的线性关系良好,得回归方程分别为: Y水相=01869X+0.029(r=0.9995)和Y脂相= 01964X+0.089(r=0.9996)。
P MH按上述操作直接进样,以P MH的峰面积对浓度进行线性回归。
P MH水相溶液0.39～50.50μg・m l-1与峰面积的线性关系良好(r=0.9996),回归方程为:Y=11551×103X+41755×103。
11215 两相体积比的考察 按“1.211”项下方法,测定脂水两相的体积比分别为5ζ1、3ζ1、1ζ1、1ζ3、1ζ5时MH及P MH的脂水分配系数。
经考察,两种药物在脂水两相的体积比为1ζ1时均测得最大脂水分配系数。
因此,确定测定脂水分配系数的两相体积比为1ζ1。
1.216 平衡时间及平衡温度的考察 取两相体积比为1ζ1,按“11212”项下方法试验,分别测定经恒温振荡1、3、5、12、16、24h后MH与P MH的脂水分配系数。
经考察,药物两相平衡所需时间均为16h。
取两相体积比为1ζ1,按“11212”项下方法试验,分别在25℃、37℃下恒温振荡达平衡后测定MH 与P MH的脂水分配系数。
经考察,振荡温度对其脂水分配系数的影响较小。
1.217 脂水分配系数的测定与比较 分别精密称取MH与P MH适量,照“11212”项下方法测定其脂水分配系数并进行比较。
结果,P MH的脂水分配系数为277.05,MH的脂水分配系数为2.09。
试验表明,P MH的脂水分配系数明显大于MH的脂水分配系数,显示前者具有较高的脂溶性。
2 讨论由此盐酸美金刚胺(MH)无紫外吸收,采用常规HP LC-UV法无法检测,因此,须建立柱前衍生化法。
P MH有较强的紫外吸收,可用HP LC-UV法直接测定。
以衍生化试剂苯甲酰氯,与MH发生亲核取代反应转化为芳香衍生物,可增大其紫外吸收和脂溶性,从而可用UV法检测。
试验表明,所建方法专属性强,准确度及精密度较高,可用于测定MH 及其P MH脂水分配系数的测定。
选择合适的脂水两相溶剂对于准确测定MH、P MH的脂水分配系数十分重要。
二氯甲烷和三氯甲烷均为脂相溶剂。
以二氯甲烷为脂相时,MH在水中几乎无分布,即脂水分配系数极大;以三氯甲烷为脂相时,MH在水相中有一定分布,故确定以三氯甲烷为脂相溶剂。
进行水相溶剂选择时,考虑到MH、P MH均为有机弱碱盐,为增大其脂溶性,选用呈弱碱性的磷酸盐缓冲液(pH7.8～8.0)作为水相。
考察中发现,在相对较低温度下,MH和P MH 的脂水分配系数略有增加,这种情况与通常情况下物质溶解度随温度降低而减小有所不同。
可能是由于温度对两相溶解度影响程度不同引起的比值变化。
由于人体正常体温为37℃,因此,选择在此温度下考察脂水分配系数,可为P MH的进一步研究提供更有参照性的实验参数。
文中侧重于体外脂水分布系数的考察,相关体内分布研究及组织中的药物浓度的HP LC测定方法另文发表。
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