色谱基本理论a塔板理论
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色谱法共同的基本特点是具备两个相：不动的一相，称为固 定相；另一相是携带样品流过固定相的流动体，称为流动相。 当流动相中样品混合物经过固定相时，就会与固定相发生作 用，由于各组分在性质和结构上的差异，与固定相相互作用 的类型、强弱也有差异，因此在同一推动力的作用下，不同 组分在固定相滞留时间长短不同，从而按先后不同的次序从 固定相中流出（洗脱）。
因为这种物质不被固定相吸附或溶解，故 其流动速度将与流动相的流动速度相近．测 定流动相平均线速ū时，可用柱长L与tM的 比值计算。
u L tm
2．保留时间tR 试样从进样开始到柱后出现峰极大点
时所经历的时间，称为保留时间，如图 2-1 O′B．它相应于样品到达柱末端的 检测器所需的时间．
图2-1 色谱流出曲线
二、基线
柱中仅有流动相通过时，检测器响应讯号 的记录值，即图2-1中O—t线．理想的基线 应该是一条水平直线。基线噪声，基线漂移
三、峰高
色谱峰顶点与基 线之间的垂直距离， 以h表示，如图2-1 中B′A
2-1
四、保留值
1．死时间tM
不被固定相吸附或溶解的物质进入色谱柱 时，从进样到出现峰极大值所需的时间称为 死时间，如图2-1中 O′A′。
➢利用组分在离子交换剂（固定相）上的亲和力大小不同而达到 分离的方法，称为离子交换色谱法。
➢利用大小不同的分子在多孔固定相中的选择渗透而达到分离的 方法，称为凝胶色谱法或排阻色谱法。
➢利用不同组分与固定相（固定化分子）的高专属性亲和力进行 分离的技术称为亲和色谱法，常用于蛋白质的分离。
三．按固定相的外形分类
第二章 色谱法原理
（Principles of Chromatography）
2-1 概述
色谱法早在1903年由俄国植物学家M.Tswett（茨维特） 提出，成为十分重要的分离分析手段。 实验：叶绿素分离：石油醚浸提叶片——碳酸钙填充拄——纯 净石油醚淋洗———叶绿素分离（a，b，叶黄素，胡萝卜素）
3．调整保留时间tR′
某组份的保留时间扣除死时间后称为该 组份的调整保留时间，即
tR′ = tR-tM
由于组份在色谱柱中的保留时间tR包含了组份随 流动相通过柱子所需的时间和组份在固定相中滞留 所留的需总的时时间间．，保所留以时tR′间实可际用上时是间组单份位在（固如定s相）中或停距 离单位（如cm）表示。
tR2 t R1
这时式α中总tR是2′大为于后1出的峰。的调整保留时间，所以
五、区域宽度
色谱峰的区域宽度是组份在色谱柱中谱 带扩张的函数，它反映了色谱操作条件的动 力学因素．度量色谱峰区域宽度通常有三种
方法： 1. 标准偏差σ
即0．607倍峰高处色谱峰宽的一半，如 图2-1中EF距离的一半。
2. 半峰宽Y1/2 即峰高一半处对应的峰宽，如图2-1中
VM = tM·F0
5．保留体积 VR
指从进样开始到被测组份在柱后出现浓度 极大点时所通过的流动相体积。保留体积与 保留时间t。的关系如下：
VR = tR·F0
6．调整保留体积VR′
某组份的保留体积扣除死体积后，称该组 份的调整保留体积，即
VR′ = VR- VM
7．相对保留值γ2.1
某组份2的调整保留值与组份1的调整 保留值之比，称为相对保留值：
色谱法分类
一．按两相状态分类
气体为流动相的色谱称为气相色谱（GC），根据固定相是固 体吸附剂还是固定液（附着在惰性载体上的一薄层有机化合物 液体），又可分为气固色谱（GSC）和气液色谱（GLC）．
液体为流动相的色谱称液相色谱（LC）。同理，液相色谱亦可 分为液固色谱（LSC）和液液色谱LLC）．
2.1
t
R
2
t
R1
VR2 VR1
由于相对保留值只与柱温及固定相的性质有关，而与Байду номын сангаас柱径、柱长、填充情况及流动相流速无关，因此，它是色 谱法中，特别是气相色谱法中，广泛使用的定性数据．
必须注意，相对保留值绝对不是两个组份保留时间或保 留体积之比 .
选择因子
在定性分析中，通常固定一个色谱峰作为标准 （s），然后再求其它峰（i）对这个峰的相对保 留值．在多元混合物分析中，通常选择一对最难 分离的物质对，将它们的相对保留值作为重要参 数．在这种特殊情况下，可用符号α表示：
保留时间是色谱法定性的基本依据，但同一组份 的保留时间常受到流动相流速的影响，因此色谱工 作者有时用保留体积等参数进行定性检定．
4．死体积 VM
指色谱柱在填充后，柱管内固定相颗粒间 所剩留的空间、色谱仪中管路和连接头间 的空间以及检测器的空间的总和．当后两 项很小而可忽略不计时，死体积可由死时 间与流动相体积流速F0（L／min）计算：
固定相装于柱内的色谱法，称为柱色谱。 固定相呈平板状的色谱法，称为平板色谱，它又可 分为薄层色谱和纸色谱。
根据以上所述，将色谱法的分类总结于表2-l中。
2-1
2-2 色谱流出曲线及有关术语
一．流出曲线和色谱峰
2-1
基线(Baseline) 、基线噪声(Baseline noise) 基线漂移(Baseline drift) 死时间(Dead time)、死体积(Dead volume) 保留值(Retention value): Retention time &
超临界流体为流动相的色谱称为超临界流体色谱（SFC）。
通过化学反应将固定液键合到载体表面，这种化学键合固定相 的色谱又称化学键合相色谱（CBPC）。
二．按分离机理分类
➢利用组分在吸附剂（固定相）上的吸附能力强弱不同而得以分 离的方法，称为吸附色谱法。
➢利用组分在固定液（固定相）中溶解度不同而达到分离的方法 称为分配色谱法。
Retention volume 调整保留值(Adjusted retention value)：Adjusted
retention time & Adjusted retention volume 相对保留值(Relative retention value) 区域宽度(Peak width) 标准偏差(Standard deviation) 半峰宽度(Peak width at half-height) 峰底宽度(Peak width at peak base) 峰高（Peak height）
因为这种物质不被固定相吸附或溶解，故 其流动速度将与流动相的流动速度相近．测 定流动相平均线速ū时，可用柱长L与tM的 比值计算。
u L tm
2．保留时间tR 试样从进样开始到柱后出现峰极大点
时所经历的时间，称为保留时间，如图 2-1 O′B．它相应于样品到达柱末端的 检测器所需的时间．
图2-1 色谱流出曲线
二、基线
柱中仅有流动相通过时，检测器响应讯号 的记录值，即图2-1中O—t线．理想的基线 应该是一条水平直线。基线噪声，基线漂移
三、峰高
色谱峰顶点与基 线之间的垂直距离， 以h表示，如图2-1 中B′A
2-1
四、保留值
1．死时间tM
不被固定相吸附或溶解的物质进入色谱柱 时，从进样到出现峰极大值所需的时间称为 死时间，如图2-1中 O′A′。
➢利用组分在离子交换剂（固定相）上的亲和力大小不同而达到 分离的方法，称为离子交换色谱法。
➢利用大小不同的分子在多孔固定相中的选择渗透而达到分离的 方法，称为凝胶色谱法或排阻色谱法。
➢利用不同组分与固定相（固定化分子）的高专属性亲和力进行 分离的技术称为亲和色谱法，常用于蛋白质的分离。
三．按固定相的外形分类
第二章 色谱法原理
（Principles of Chromatography）
2-1 概述
色谱法早在1903年由俄国植物学家M.Tswett（茨维特） 提出，成为十分重要的分离分析手段。 实验：叶绿素分离：石油醚浸提叶片——碳酸钙填充拄——纯 净石油醚淋洗———叶绿素分离（a，b，叶黄素，胡萝卜素）
3．调整保留时间tR′
某组份的保留时间扣除死时间后称为该 组份的调整保留时间，即
tR′ = tR-tM
由于组份在色谱柱中的保留时间tR包含了组份随 流动相通过柱子所需的时间和组份在固定相中滞留 所留的需总的时时间间．，保所留以时tR′间实可际用上时是间组单份位在（固如定s相）中或停距 离单位（如cm）表示。
tR2 t R1
这时式α中总tR是2′大为于后1出的峰。的调整保留时间，所以
五、区域宽度
色谱峰的区域宽度是组份在色谱柱中谱 带扩张的函数，它反映了色谱操作条件的动 力学因素．度量色谱峰区域宽度通常有三种
方法： 1. 标准偏差σ
即0．607倍峰高处色谱峰宽的一半，如 图2-1中EF距离的一半。
2. 半峰宽Y1/2 即峰高一半处对应的峰宽，如图2-1中
VM = tM·F0
5．保留体积 VR
指从进样开始到被测组份在柱后出现浓度 极大点时所通过的流动相体积。保留体积与 保留时间t。的关系如下：
VR = tR·F0
6．调整保留体积VR′
某组份的保留体积扣除死体积后，称该组 份的调整保留体积，即
VR′ = VR- VM
7．相对保留值γ2.1
某组份2的调整保留值与组份1的调整 保留值之比，称为相对保留值：
色谱法分类
一．按两相状态分类
气体为流动相的色谱称为气相色谱（GC），根据固定相是固 体吸附剂还是固定液（附着在惰性载体上的一薄层有机化合物 液体），又可分为气固色谱（GSC）和气液色谱（GLC）．
液体为流动相的色谱称液相色谱（LC）。同理，液相色谱亦可 分为液固色谱（LSC）和液液色谱LLC）．
2.1
t
R
2
t
R1
VR2 VR1
由于相对保留值只与柱温及固定相的性质有关，而与Байду номын сангаас柱径、柱长、填充情况及流动相流速无关，因此，它是色 谱法中，特别是气相色谱法中，广泛使用的定性数据．
必须注意，相对保留值绝对不是两个组份保留时间或保 留体积之比 .
选择因子
在定性分析中，通常固定一个色谱峰作为标准 （s），然后再求其它峰（i）对这个峰的相对保 留值．在多元混合物分析中，通常选择一对最难 分离的物质对，将它们的相对保留值作为重要参 数．在这种特殊情况下，可用符号α表示：
保留时间是色谱法定性的基本依据，但同一组份 的保留时间常受到流动相流速的影响，因此色谱工 作者有时用保留体积等参数进行定性检定．
4．死体积 VM
指色谱柱在填充后，柱管内固定相颗粒间 所剩留的空间、色谱仪中管路和连接头间 的空间以及检测器的空间的总和．当后两 项很小而可忽略不计时，死体积可由死时 间与流动相体积流速F0（L／min）计算：
固定相装于柱内的色谱法，称为柱色谱。 固定相呈平板状的色谱法，称为平板色谱，它又可 分为薄层色谱和纸色谱。
根据以上所述，将色谱法的分类总结于表2-l中。
2-1
2-2 色谱流出曲线及有关术语
一．流出曲线和色谱峰
2-1
基线(Baseline) 、基线噪声(Baseline noise) 基线漂移(Baseline drift) 死时间(Dead time)、死体积(Dead volume) 保留值(Retention value): Retention time &
超临界流体为流动相的色谱称为超临界流体色谱（SFC）。
通过化学反应将固定液键合到载体表面，这种化学键合固定相 的色谱又称化学键合相色谱（CBPC）。
二．按分离机理分类
➢利用组分在吸附剂（固定相）上的吸附能力强弱不同而得以分 离的方法，称为吸附色谱法。
➢利用组分在固定液（固定相）中溶解度不同而达到分离的方法 称为分配色谱法。
Retention volume 调整保留值(Adjusted retention value)：Adjusted
retention time & Adjusted retention volume 相对保留值(Relative retention value) 区域宽度(Peak width) 标准偏差(Standard deviation) 半峰宽度(Peak width at half-height) 峰底宽度(Peak width at peak base) 峰高（Peak height）