失眠动物模型的建立
二十种常见实验动物模型
二十种常见实验动物模型 一、缺铁性贫血动物模型 缺铁性贫血（iron deficiency anemia，IDA）是体内用来合成血红蛋白（HGB）的贮存铁缺乏，HGB合成减少而导致的小细胞低色素性贫血，主要发生于以下情况：（1）铁需求增加而摄入不足，见于饮食中缺铁的婴幼儿、青少年、孕妇和哺乳期妇女。（2）铁吸收不良，见于胃酸缺乏、小肠粘膜病变、肠道功能紊乱、胃空肠吻合术后以及服用抗酸和H2受体及抗剂等药物等情况。（3）铁丢失过多，见于反复多次小量失血，如钩虫病、月经量过多等。 IDA是一种多发性疾病，据报道，在多数发展中国家，约2/3的儿童和育龄妇女缺铁，其中1/3患IDA，因此，研究IDA的预防和治疗具有重要的意义。在这些研究中，缺铁性贫血的动物模型（Animal model of IDA），又是实施研究的基础工具。常见的IDA动物模型的构建技术如下： 实验动物：一般选用SD大鼠，4周龄，雌雄不拘，体重65g左右，HGB≥130g/L。 建模方法：低铁饲料加多次少量放血法。低铁饲料一般参照AOAC 配方配制，采用EDTA浸泡处理以去除饲料中的铁，饲料中的含铁量是诱导SD大鼠形成缺铁性贫血模型的关键，现有研究表明，饲喂含铁量<15.63mg/Kg的饲料35天，SD大鼠出现典型IDA表现，而饲喂
含铁40.30mg/Kg的饲料SD大鼠出现缺铁，但并不表现贫血症状。建模时一般采用去离子水作为动物饮水，以排除饮水中铁离子的影响。少量多次放血主要用于模拟反复多次小量失血导致的铁丢失，还可以加速贫血的形成。放血一般在低铁饲料饲喂2周后进行，常用尾静脉放血法，1～1.5ml/次，2次/周。 模型指标：（1）HGB≤100g/L；（2）血象：红细胞体积较正常红细胞偏小，大小不一，中心淡染区扩大，MCV减小、MCHC降低；（3）血清铁（SI）降低，常小于10μmol/L，血清总铁结合力（TIBC）增高，常大于60μmol/L。 需要指出的是，以上模型不能用于铁吸收不良相关IDA的防治研究。根据具体的研究需要，也可以适当调整建模方法。 二、白血病动物模型 用免疫耐受性强的人类胎儿骨片植入重症联合免疫缺陷病(SCID)小鼠皮下，出于人类造血细胞与造血微环境均植入小鼠，建立具有人类造血功能的SCID小鼠模型称为SCID－hu小鼠。再将髓系白血病患者的骨髓细胞植入SCID－hu小鼠皮下的人类胎儿骨片内，植入的髓系白血病细胞选择性生长在SCID－hu小鼠体内的人类造血微环境中，即为人类髓系白血病的小鼠模型。SCID小鼠是由于其scid所致。T、B淋巴细胞功能联合缺陷，这种小鼠能接受人类器官移植物。 造模方法：
国内近期关于动物模型的文献
九、国内近期动物疾病模型文献 （一）中医中药研究用动物模型 1．熊启达等：“卫气营血”模型，四川医学，（2）：65，1983。 2．梁月华等：“寒症、热症”模型，中医杂志，（11），1982。 3．毛腾敏：大鼠“血瘀”模型，北京医学院学报，（4）：306，1981。 4．金惠铭等：家兔“血瘀”模型，中医杂志，（8）：1982。 5．贲长恩等：大鼠“血虚”模型，中医杂志（6）：69，1981。 6．李传英等：大鼠“脾虚”模型，浙江中医杂志，（8）355，1982。 7．张启元等：金黄地鼠、大鼠“脾虚”模型，中华医学杂志，（2）：83，1980。 8．黄柄山等：小鼠“脾虚”模型，中西医结合杂鼠，3（5）：295，1983。 9．施玉华等：小鼠“阳虚”模型，中医杂志，（2）：31，1982。 10．宫斌等：小鼠“阳虚”模型，上海中医学院科研汇编，1980。 11．董笃一等：小鼠“阴症”与“阳症”模型，陕西中医学院学报（3）：1，1981。 12．左箴等：脉微欲绝模型，第二军医大学学报，（1）：19，1982。 13．杨连卿等：大鼠“阴阳失调”模型，中西医结合杂志，（6）：353，1983。 14．孙爱真等：狗“里实”模型，上海中医研究所科研资料汇编，1979。 15．施玉华等：某些助阳药对阳虚动物模型的作用，上海中医药杂志（2）：6，1980。 16．北京师范大学生物系消化生理科研组：中医脾虚证动物模型的造型，中华医学杂志60（2）：83，1980。 17．陕西中医学院生理教研室：“阴定”与“阳症”动物模型的初步建立，陕西中医学院学报，4（3）：1，1981。 18．南京医学院中西医结合研究组，脾虚泄泻证动物模型的研究，浙江中医杂志，（8）：355，1982。 19．史荫绵等：“血瘀”动物模型的初步研究，中医杂志（8）：64，1982。 20．胡素坤等：大黄所致大鼠“虚证”模型的形态学研究，免疫学快报3（4）：14，1983。 21．关崇芬等：大黄所致大鼠“虚症”模型的免疫功能观察，免疫学快报3
实验方法总结：动物模型部分
实验方法总结：动物模型部分 1、研究肿瘤细胞增殖 (1) 2、研究肿瘤细胞转移 (2) 2.1. 体外(浸润模型) (2) 2.2. 体内(转移模型) (2) 3、研究肿瘤细胞耐药 (4) 3.1. 耐药细胞株的建立 (4) 3.2. 裸鼠移植瘤耐药模型的建立 (5) 从肿瘤起源分，肿瘤动物模型的分类如下： 从研究目的来分，可以从增殖、转移、耐药三个角度来分析： 1、研究肿瘤细胞增殖 细胞准备：GeneA敲减慢病毒感染细胞扩增至需要的细胞量。分为：空白对照组、阴性对照组、实验组。 取Balb/c裸鼠，雄性，6周龄，每组10只，适应一周后进行肿瘤细胞注射。
XXX细胞消化离心后制成单细胞悬液，计数后取适量的细胞用PBS悬浮，在Balb/c裸鼠侧腹部皮下接种。每只接种2×106个细胞，注射体积为100 μL。此后，每隔5天测量注射部位肿瘤的体积。30天后裸鼠小鼠腹腔注射80 mg/kg 戊巴比妥钠，小鼠麻醉后置蓝色背景布上拍照（侧卧位，接种部位朝上），小鼠颈椎脱臼处死，取出肿瘤称重，将肿瘤置蓝色背景布上拍照，肿瘤一分为二，一份4%多聚甲醛固定，待后续病理分析，一份-80℃冻存。 2、研究肿瘤细胞转移 肿瘤转移的模型包括两大类：体外(浸润模型)和体内(转移模型)。体外(浸润模型)：了解肿瘤细胞对周围相连组织的侵润性。体内模型主要研究肿瘤细胞的转移性即肿瘤细胞在远端组织形成病灶的能力。 2.1. 体外(浸润模型) 例：浸润型脑胶质瘤动物模型的建立 方法：取若干只Balb/c免疫缺陷裸鼠，将分离和鉴定并转染携带绿色荧光蛋白的脑胶质瘤干细胞立体定向法行小鼠颅内接种，每组10只。小鼠麻醉后头部正中切口，剥离骨膜后钻孔(坐标是冠状缝后0.5 cm，矢状缝右侧2.5 cm) 。取2 μL胶质瘤干细胞以1×104 cells /只小鼠的剂量，经微量注射器缓慢注射入鼠脑纹状体内(深度是2.5 ～3 mm) 。在确定的时间点处死一部分动物进行荧光( 立体荧光显微镜下) 病理证实和比较，同时检查脑胶质瘤干细胞的体内生长特征以及干细胞标志物等。 2.2. 体内(转移模型)
失眠-诊疗方案
重点病种临床诊疗方案 失眠症（insomnia）
失眠症是临床最为常见疾病之一，是指入睡困难、夜间睡眠维持困难和早醒，是睡眠量的不足或质的不佳。中医学称之为“不寐”、“不得眠”等。近年来,我国失眠等神经精神疾病发病率的迅速增高。相关文献显示，35％的人口曾患急性失眠，而9%～12%的人患有慢性失眠。失眠已成为许多国家广泛关注的社会公共卫生问题。 西医治疗失眠症强调定时作息及合理使用镇静催眠药物，临床首选服用安眠药，该种药物虽催眠速度较快，但有相当大的毒副作用，给患者带来诸如加重呼吸抑制，记忆力减退、头昏、乏力、嗜睡等危害，且疗效短，需不断加大剂量，停药即复发，还有耐药性、成瘾性等弱点。因此，从中医药探寻治疗失眠的有效治疗方案，具有非常重要的现实的意义。 中医运用整体观念和辨证论治调治失眠具有独特的优势，这在临床已得到验证。总结近年来中医对失眠症的治疗，我们认为单纯依靠脏腑功能失调辨证，仍旧存在着一定的局限性。失眠症患者所具有的心理认知和情绪等紊乱，是影响治疗效果的关键因素。因此，我们在研究古今文献的基础上，结合多年的临床探索，形成了失眠症中医心理紊乱状态的诊断、量化标准，通过对古人认识到的具有调整心理状态的药物作用进行研究，临床筛选出了对特定心理紊乱状态具有疗效的药物和方剂，确立了调整心理紊乱状态的诊疗方案，该方案适用于原发性失眠症，不包括躯体疾病或精神障碍症状导致的继发性失眠。 一、病例选择 (一)诊断标准 1.西医诊断标准：参照美国《精神障碍诊断和统计手册(DSM-IV)》原发性失眠症患者的诊断标准： (1)主诉难以入睡和维持睡眠困难，起病至少1个月； (2)睡眠紊乱引起苦恼或社会、职业等方面的障碍； (3)睡眠紊乱排除由发作性睡病、与呼吸相关的睡眠障碍、生物节律睡眠障碍等所致； (4)睡眠紊乱排除由重性抑郁症、广泛性焦虑等障碍所致； (5)睡眠紊乱排除由各种躯体性疾病、酒精或药物的心理作用所致。 2.中医诊断标准：参照《中药新药临床研究指导原则》 (1)有失眠的典型症状：入睡困难，时常觉醒．旺而不稳或醒后不能再睡；
实验动物模型
第章实验动物模型 第一节实验动物选择的原则 第二节生物科学研究中的动物模型
实验动物模型 选择什么样的实验动物作实验是生物医学研究工作中一个重要环节，不能随便选用一种实验动物来作科学研究，因为在不适当的动物身上进行实验，常可导致实验结果的不可靠，甚至使整个实验徒劳无功，直接关系到科学研究的成败和质量。事实上，每一项科学实验都有其最适宜的实验动物。
第一节实验动物选择的原则 ?科学研究工作中实验动物的选择，首先应根据实验目的和要求来选择，其次再参考是否容易获得、是否经济，是否容易饲养和管理等情况。 ?在实验动物选择上必须注意三点，即实验动物的种类（Species）；品种（Breed）或品系（Strain）；质量和实验动物的健康状态。
尽量选择与研究对象的机能、代谢、结构及疾病特点相似的实验动物； ?生物医学研究的根本目的是要解决人类疾病的预防和治疗问题。因此，在选择实验动物时应优先考虑的问题是动物的种系发展阶段。在可能的条件下，尽量选择那些机能、代谢、结构和人类相似的实验动物作实验。一般来说，实验动物愈高等，进化愈高，其机能、代谢、结构愈复杂，反应就愈接近人类，猴、狒狒、猩猩、长臂猿等灵长类动物是最近似于人类的理想动物。
第二节生物科学研究中的动物模型 一、动物模型的意义和优越性 ?生物科学研究的进展常常依赖于使用动物模型作为实验假说和临床假说二者的试验基础。人类各种疾病的发生发展是十分复杂的，要深入探讨其疾病的发病机理及疗效机理不能也不应该在病人身上进行。可以通过对动物各种疾病和生命现象的研究，进而推用到人类，探索人类生命的奥秘，以控制人类的疾病的衰老，延长人类的寿命。
失眠诊疗方案
国家中医药管理局“十一五”重点专科（专病）项目重点病种临床诊疗方案 失眠症 （insomnia） 山东中医药大学附属医院老年病重点专科强化建设项目失眠症是临床最为常见疾病之一，是指入睡困难、夜间睡眠维持困难和早醒，是睡眠量的不足或质的不佳。中医学称之为“不寐”、“不得眠”等。近年来,我国失眠等神经精神疾病发病率的迅速增高。相关文献显示，35％的人口曾患急性失眠，而9%～12%的人患有慢性失眠。失眠已成为许多国家广泛关注的社会公共卫生问题。 西医治疗失眠症强调定时作息及合理使用镇静催眠药物，临床首选服用安眠药，该种药物虽催眠速度较快，但有相当大的毒副作用，给患者带来诸如加重呼吸抑制，记忆力减退、头昏、乏力、嗜睡等危害，且疗效短，需不断加大剂量，停药即复发，还有耐药性、成瘾性等弱点。因此，从中医药探寻治疗失眠的有效治疗方案，具有非常重要的现实的意义。 中医运用整体观念和辨证论治调治失眠具有独特的优势，这在临床已得到验证。总结近年来中医对失眠症的治疗，我们认为单纯依靠脏腑功能失调辨证，仍旧存在着一定的局限性。失眠症患者所具有的心理认知和情绪等紊乱，是影响治疗效果的关键因素。因此，我们在研究古今文献的基础上，结合多年的临床探索，形成了失眠症中医心理紊乱状态的诊断、量化标准，通过对古人认识到的具有调整心理状态的药物作用进行研究，临床筛选出了对特定心理紊乱状态具有疗效的药物和方剂，确立了调整心理紊乱状态的诊疗方案，该方案适用于原发性失眠症，不包括躯体疾病或精神障碍症状导致的继发性失眠。 一、病例选择 (一)诊断标准 1.西医诊断标准：参照美国《精神障碍诊断和统计手册(DSM-IV)》原发性失眠症患者的诊断标准：
心肾不交所致失眠大鼠模型_郜红利
tamin D 3，recombinant human transforming growth factor-beta 1，and recombinant human bone morphogenetic protein-2induce in vitro differentiation of canine osteosarcoma cells ［J ］．J Vet Med Sci ，1999，61（6）：649-656． ［15］ Sitara D ，Ｒazzaque M S ，St-Arnaud Ｒ，et al ．Genetic ablation of vitamin D activation pathway reverses biochemical and skele-tal anomalies in Fgf-23-null animals ［J ］．Am J Pathol ，2006，169（6）：2161-2170． ［16］ Wasserman ＲH ，Fullmer C S．Vitamin D and intestinal calci-um transport ：facts ，speculations and hypotheses ［J ］．J Nutr ，1995，125（7）：1971-1979． 心肾不交所致失眠大鼠模型 郜红利1，涂星2*，卢映2，孙敏红3，张方 4 （1．湖北民族学院中医药学院，湖北恩施445000；2．广州中医药大学第一临床医学院，广东广州510405；3．湖北省恩施州疾病控制中心，湖北恩施445000；4、湖北省恩施自治州优抚医院，湖北恩施 445000） 收稿日期：2013-10-12作者简介：郜红利（1967—），男，副教授，研究方向：民族药物的开发与利用。E-mail ：349523825@qq．com *通信作者：涂 星（1987—），男，博士生，研究方向：中药药理学，药物制剂新剂型与新技术。E- mail ：kuangsheng1234@126．com 摘要：目的 建立同时符合中医“心肾不交”和下丘脑-垂体-肾上腺轴紊乱的失眠大鼠模型。方法 采用母乳鼠分离 法、多种焦虑刺激和腹腔注射对氯苯丙氨酸造失眠模型，并考察受试大鼠的一般行为学、血象及血浆Orexin 、促肾上腺皮质激素释放激素（CＲH ）、促肾上腺皮质激素（ACTH ）的水平。结果模型组大鼠睡眠时间显著减少，目光呆 滞，双目、口唇呈苍白色，爪甲较光滑，皮毛重度枯槁蓬乱；血象检查血浆中红细胞数目和血红蛋白水平显著降低； 血浆中ACTH 、Orexin 、CＲH 水平显著性升高。结论本实验的失眠大鼠模型能体现了“心肾不交”所致下丘脑-垂 体-肾上腺轴内分泌紊乱的失眠发生特点。 关键词：失眠；心肾不交；下丘脑-垂体-肾上腺轴；动物模型；激素分泌中图分类号：Ｒ285.5 文献标志码：A 文章编号：1001-1528（2014）06-1138-04doi ：10.3969/j．issn．1001-1528.2014.06.006 Ｒat model for insomnia caused by heart-kidney imbalance GAO Hong-li 1， TU Xing 2， LU Ying 2， SUN Min-hong 3， ZHANG Fang 4 （1．Institute of Traditional Chinese Medicine ，Hubei Institute for Nationalities ，Enshi 445000，China ；2．The First Affiliated Hospital of Guangzhou Uni-versity of Chinese Medicine ，Guangzhou 510405，China ；3．The Enshi Center for Disease Control and Prevention ，Enshi 445000，China ；4．Special Care Hospital of Enshi ，Enshi 445000，China ） ABSTＲACT ：AIM To establish a rat model for insomnia that was consistent with both heart-kidney imbalance and disorder of hypothalamic-pituitary-adrenal （HPA ）axis．METHODS Maternal separation ，multiple anxiety stimulation ，and the abdominal administration of chlorophenylalamine were adopted to induce rats with insomnia．The general behavior of rats was observed and their hemogram and the levels of ACTH ，orexin ，CＲH were meas-ured．ＲESULTS Compared to the control group ，the rats in the model group showed sleep-less ，glassy-eyed ， pale lips ，and withered fur．The number of red blood cells and the hemoglobin concentration in plasma decreased significantly as well ，while the level of ACTH ，orexin and CＲH significantly increased．CONCLUSION The in-somnia rats can present the symptom of heart-kidney imbalance and dysfunction of hypothalamic-pituitary-adrenal axis． KEY WOＲDS ：insomnia ；heart-kidney imbalance ；hypothalamic-pituitary-adrenal （HPA ）axis ；animal model ；hormone secretion 8 311
建立动物模型
1、建立动物模型 实验组：采用腹腔注射法定期注射定量抗生素到5只大鼠体内，，然后每只大鼠注射等量的LPS到体内，注射一周后观察大鼠体征（体重、食欲、运动情况），检测肠道菌群和SYN。 对照组：采用腹腔注射法定期注射定量抗生素到5只大鼠体内，确保肠道无菌，然后每只大鼠注射等量的安慰剂到体内，注射一周后观察大鼠体征（体重、食欲、运动情况），检测肠道菌群和SYN。 2、观察动物体征 体重：每天称量每一只大鼠的体重，并记录，进行横纵比较。 食欲：每只给相同足量食物，计量每只老鼠的摄入量，记录进行横纵比较。 运动情况：在固定时间给予相同刺激，观察每只老鼠的反应情况和运动能力。 3、肠道菌群检测 肠道菌群失调检测： 早期诊断菌群失调是正确有效治疗的前提。 菌群失调的诊断包括三部分： ①有无菌群失调。②菌群失调的程度。③菌群失调的诱因。 菌群失调患者常表现为严重腹泻或慢性腹泻，在应用抗生素治疗过程中，如突然发生腹泻，或原有腹泻加重，即有可能已发生了菌群失调。 菌群失调的程度可分为三度: Ⅰ度（轻度）为可逆性轻度菌群失调，去除致病因素后即可恢复好转，症状消失，临床上多见于急性疾病引起的肠道功能紊乱； Ⅱ度（中度）菌群失调较重，去除病因常不能恢复，多有慢性肠道症状； Ⅲ度（重度）菌群失调，表现为菌群交替或二重感染。详细地了解粪便性状并结合实验室检查可以确定一些有特异性诱因的菌群失调，如志贺菌、沙门菌、空肠弯曲菌、艰难梭菌和轮状病毒感染等。 粪便切片观察： 4、syn检测 利用免疫荧光手段，通过激光扫描共焦显微镜检测了过表达α-syn各片段后与线粒体分布情况。结果证明，α-synN端能够与线粒体共定位；JC1染色流式细胞术检测结果提示，该组细胞线粒体存在膜电位降低趋势。同时被截去N末端的突触核蛋白不会形成高分子量复合体，也不会影响线粒体功能。
实验动物模型的制备
病理生理学实习指导 一、缺氧模型的实验性复制 ㈠目的与原理 通过给动物低氧环境，影响Hb的带氧能力及使组织不能利用氧等方法，复制不同类型缺氧模型，经呼吸、机能状态、皮肤粘膜颜色等指标，显示了其不同症状与特征，同时对复制模型的方法及原理又有大概的了解，有利于深入和研究各缺氧症的发生、发展和转归的规律。 ㈡实验对象 小白鼠。 ㈢器材与药品 缺氧瓶（装有管道瓶塞的250ml广口瓶），酒精灯，一氧化碳发生器，1ml注射器，5ml 和2ml刻度吸管，粗天平（附砝码），剪刀，普通镊。 钠石灰（氢氧化钠、氧化钙），甲酸，浓硫酸，0.125%氰化钾溶液，1%亚硝酸钠溶液，10%硫代硫酸钠溶液。 ㈣步骤与观察 表8-3-1观察指标 呼吸机能状态皮肤粘膜颜色类型（频率、幅度）（活动度） –––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––– 低张性缺氧 一氧化碳中毒 氰化钾中毒 ⒈低氧性缺氧 ⑴将小白鼠至于250ml广口瓶（内装钠石灰吸收二氧化碳）中观察上述指标。 ⑵将瓶塞紧，同时记录时间，每5min重复观察上述指标一次（如有变化则随时记录）直到动物死亡为止。 ⒉一氧化碳中毒性缺氧 ⑴如图8-3-1装好一氧化碳发生装置。 ⑵将小白鼠一只放入瓶中，观察上述指标。 ⑶取甲酸3ml放入试管内，加入浓硫酸2ml，塞紧。如气泡产生较少，可用酒精灯加热，加速一氧化碳的产生（但不可过热以至液体连续沸腾，因一氧化碳产生过快，动物迅速死亡，血液颜色改变不明显）。 ⑷在整个过程中，注意观察上述指标。 （注）：一氧化碳产生原理： H2SO4 HCOOH CO↑+H2O △ ⒊氰化钾中毒性缺氧 ⑴称小白鼠体重，观察上述指标，预先准备1%亚硝酸钠及10%硫代硫酸钠各10ml·Kg-1，以备急救用。
实验动物模型设计原则_
实验动物模型设计原则_ 实验动物模型设计原则生物医学科研专业设计中常要 考虑如何建立动物模型的问题，因为很多阐明疾病及疗效机制的实验不可能或不应该在病人身上进行。常要依赖于复制动物模型，但一定要进行周密设计，设计时要遵循下列一些原则。 一、相似性 在动物身上复制人类疾病模型。目的在于从中找出可以推广（外推）应用于病人的有关规律。外推法（Extrapolation）要冒风险，因为动物与人到底不是一种生物。例如在动物身上无效的药物不等于临床无效，反之也然。因此，设计动物疾病模型的一个重要原则是，所复制的模型应尽可能近似于人类疾病的情况。能够找到与人类疾病相同的动物自发性疾病当然最好。 例如日本人找到的大白鼠原发性高血压就是研究人类原发 性高血压的理想模型，老母猪自发性冠状动脉粥样硬化是研究人类冠心病的理想模型；自发性狗类风湿性关节炎与人类幼年型类风湿性关节炎十分相似，也是一种理想模型，等等。与人类完全相同的动物自发性疾病模型毕竟不可多得，往往需要人工加以复制。 为了尽量做到与人类疾病相似，首先要注意动物的选择。例
如，小鸡最适宜做高脂血症的模型，因它它的血浆甘油三酯、胆固醇以及游离脂肪酸水平与人十分相似，低密度和极低密度脂蛋白的脂质构成也与人相似。其次，为了尽可能做到模型与人类相似，还要在实践中对方法不断加以改进。例如结扎兔阑尾血管，固然可能使阑尾坏死穿孔并导致腹膜炎，但这与人类急性梗阻性阑尾炎合并穿孔和腹膜不一样，如果给兔结扎阑尾基部而保留原来的血液供应，由此而引起的阑尾穿孔及腹膜炎就与人的情况相似，因而是一种比较理想的方法。 如果动物型与临床情况不相似，在动物身上有效的治疗方案就不一定能用于临床，反之也然。例如，动物内毒性性休克（Endotoxin Shock，单纯给动物静脉输入细菌及其毒素所致的休克）与临床感染性（脓毒性）休克（Septic Shock）就不完全一样，因此对动物内毒素性休克有效的疗法长期以来不能被临床医生所采用。现在有人改向结扎胆囊动脉和胆管的动物胆囊中注入细菌，复制人类感染性休克的模型，认为这样动物既有感染又有内毒素中毒，就与临床感染性休克相似。 为了判定所复制的模型是否与人相似，需要进行一系列的检查。例如有人检查了动物压、脉率、静脉压、呼吸频率、动脉血pH、动脉氧分压和二氧化碳分压、静脉血乳酸盐浓度以及血容量等指标，发现一次定量放血法造成的休克模型与
疼痛动物模型规范
疼痛实验动物模型 科研探索2007-04-25 23:11:36 阅读147 评论0 字号：大中小订阅 疼痛是机制非常复杂的神经活动。疼痛研究已经成为当前神经科学研究的重要课题之一。由于疼痛机制的复杂性，使得在患者身上研究与疼痛有关的神经机制成为不可能的事。因而，我们的研究需要相应的动物模型。本章介绍了在现代神经科学研究中常用的疼痛动物模型。在概要介绍了疼痛研究的意义及其现状之后，重点介绍了在生理痛研究和急性、慢性病理痛研究中所应用的动物模型。生理痛的模型即常用的动物伤害性感受阈测定法；急性病理痛的模型则主要是各种急性炎症模型模型；慢性病理痛的模型则包 括慢性炎症模型和慢性神经损伤模型。 前言 疼痛(pain)是人们一生中经常遇到的不愉快的感觉。它提供躯体受到威胁的警报信号，是生命不可缺少的一种特殊保护功能。另一方面，它又是各种疾病最常见的症状，也是当今困扰人类健康最严重的问题之一。近年来，仅在美国就有三至四千万人患有慢性痛。据估计，美国每年用于治疗慢性痛的费用约为400~600亿美元；澳大利亚每年用于治疗疼痛的费用占全部医疗费用的40%。随着医学的进步和人类生活水平的提高，烈性传染病逐渐得到控制，疼痛在人的身心痛苦和医疗费用消耗上的相对地位将越来越重要。 由于难以在人体对疼痛进行深入的机制研究，有必要建立疼痛的动物模型。但疼痛是是包括性质、强度和程度各不相同的多种感觉的复合，并往往与自主神经系统、运动反应、心理和情绪反应交织在一起，它既不是简单地与躯体某一部分的变化有关，也不是由神经系统某个单一的传导束、神经核和神经递质进行传递的，所以很难将某种客观指标与疼痛直接联系起来。因而，我们只能根据模型动物对伤害性刺激的 保护反应和保护性行为来推测它们的疼痛程度。 伤害性感受(nociception)和痛觉是两个有密切关系但又不相同的概念。前者是指中枢神经系统对由于伤害性感受器的激活而引起的传入信息的加工和反应，以提供组织损伤的信息；痛觉则是指上升到感觉水 平的疼痛感觉。两者之间有时并没有严格的相关性。 生理痛模型与常用的痛阈测定法 概述 为了能够对痛觉现象及其机制作深入细致的观察，特别是在中枢神经系统的形态学、细胞生物学和分子生物学水平研究痛觉机制，必须建立动物的痛觉模型。又由于痛觉是意识水平的感觉，我们无法确定动物是否具有痛觉，只能观察其对伤害性刺激的行为反应。因而在下文的描述中有时用伤害性感受阈 (nociceptive threshold)取代痛阈(pain threshold)。 正常情况下，疼痛是机体对外界伤害性刺激的感受，它是一种报警系统，提示实存的或潜在的组织损伤的可能性。如果这种伤害性刺激是可以回避的，那么痛觉就是一种具有完全的积极意义的感觉形式，称为生理痛。这种意义上的疼痛模型实际上就是对伤害性感受阈的测量。它是通过观察动物对伤害性温度 和机械刺激的逃避反应实现的。 如果动物遇到无法逃避的伤害性刺激，就会引起它的情绪反应，发出嘶叫声。这是需要高级神经中枢配合的反应，并且不受局部运动功能的影响。因而，在伤害性刺激下引起的嘶叫反应也可以作为伤害性 感受阈的测量指标。 热辐射-逃避法 这是最常见的伤害性感受阈测量方式。最常用的有热辐射-甩尾法、热辐射-甩头法和热辐射-抬足法。
失眠 诊疗方案
国家中医药管理局“十一五”重点专科（专病）项目 重点病种临床诊疗方案 失眠症 （insomnia） 山东中医药大学附属医院老年病重点专科强化建设项目
失眠症是临床最为常见疾病之一，是指入睡困难、夜间睡眠维持困难和早醒，是睡眠量的不足或质的不佳。中医学称之为“不寐”、“不得眠”等。近年来,我国失眠等神经精神疾病发病率的迅速增高。相关文献显示，35％的人口曾患急性失眠，而9%～12%的人患有慢性失眠。失眠已成为许多国家广泛关注的社会公共卫生问题。 西医治疗失眠症强调定时作息及合理使用镇静催眠药物，临床首选服用安眠药，该种药物虽催眠速度较快，但有相当大的毒副作用，给患者带来诸如加重呼吸抑制，记忆力减退、头昏、乏力、嗜睡等危害，且疗效短，需不断加大剂量，停药即复发，还有耐药性、成瘾性等弱点。因此，从中医药探寻治疗失眠的有效治疗方案，具有非常重要的现实的意义。 中医运用整体观念和辨证论治调治失眠具有独特的优势，这在临床已得到验证。总结近年来中医对失眠症的治疗，我们认为单纯依靠脏腑功能失调辨证，仍旧存在着一定的局限性。失眠症患者所具有的心理认知和情绪等紊乱，是影响治疗效果的关键因素。因此，我们在研究古今文献的基础上，结合多年的临床探索，形成了失眠症中医心理紊乱状态的诊断、量化标准，通过对古人认识到的具有调整心理状态的药物作用进行研究，临床筛选出了对特定心理紊乱状态具有疗效的药物和方剂，确立了调整心理紊乱状态的诊疗方案，该方案适用于原发性失眠症，不包括躯体疾病或精神障碍症状导致的继发性失眠。 一、病例选择 (一)诊断标准 1.西医诊断标准：参照美国《精神障碍诊断和统计手册(DSM-IV)》原发性失眠症患者的诊断标准： (1)主诉难以入睡和维持睡眠困难，起病至少1个月； (2)睡眠紊乱引起苦恼或社会、职业等方面的障碍； (3)睡眠紊乱排除由发作性睡病、与呼吸相关的睡眠障碍、生物节律睡眠障碍等所致； (4)睡眠紊乱排除由重性抑郁症、广泛性焦虑等障碍所致； (5)睡眠紊乱排除由各种躯体性疾病、酒精或药物的心理作用所致。 2.中医诊断标准：参照《中药新药临床研究指导原则》 (1)有失眠的典型症状：入睡困难，时常觉醒．旺而不稳或醒后不能再睡；
最新1建立全脑缺血再灌注动物模型的实验研究进展汇总
1建立全脑缺血再灌注动物模型的实验研 究进展
医学院检验系，广东广州510182;2.广州医学院第一附属医院，广东广州510120) 【关键词】全脑缺血再灌注动物模型实验研究进展 心脏骤停(CA)是急诊医学常见的急症之一，因其居高不下的致死率及致残率给社会和家庭造成严重威胁，所以心肺脑复苏是现代医学研究的热点课题。心搏骤停是指心跳及呼吸突然停止，血液循环终止。由于脑细胞对缺氧十分敏感，循环停止4～6 min脑组织即可出现不可逆性损害[1]。面对突如其来的心脏骤停，目前最有效的治疗方法是心肺复苏。但是即使复苏后，心脏恢复了搏动，但脑功能的恢复是心肺复苏成功的关键。一般心脏停止搏动，脑缺血、缺氧立即发生，如超过4～6 min就可以出现不可逆的大脑损害。心脏停搏时间长，如>8 min以上，大脑功能很难恢复，成功率极小。有学者研究认为，心脏停搏后，约50%左右患者死于中枢神经系统损害，即脑死亡。即使心、肺复苏成功，生命保留，仍约有20%～50%左右存在着不同程度的脑功能障碍，成为植物状态(植物人)或痴残等[2]。 在成功进行心肺复苏后有20%～40%的患者遗留下永久性神经损害[3]。鉴于脑保护和脑复苏的重要性，近年来对缺血性脑损伤的机制进行了大量的研究，脑是一个血流量大、代谢旺盛的器官，其功能几乎全靠葡萄糖的氧化代谢。心脏骤停后引起的脑损害的病理生理主要是缺血缺氧性脑损伤以及自主循环恢复后的大脑缺血再灌注损伤，其中涉及兴奋性氨基酸的神经毒性、钙离子稳态失调、神经元凋亡等机制[4]。所以心肺复苏的最终目的是脑复苏。 大量研究旨在寻找可减轻或预防脑缺血再灌注损伤的方法或药物，并且已经在动物模型上获得一定成功，但是这些方法和药物很少能成功用于临床。缺血预处理对心脏和神经系统缺血再灌注损伤具有明显的保护作用，但是在临床实践中预处理只适用于缺血再灌注可预期的情况。尽快恢复灌注是减轻缺血导致的损伤和行为障碍的最有效方法，然而再灌注也可能加重损伤。在再灌注早期，大量活性氧自由基的产生和钙超载导致了缺血再灌注损伤。所以近年来围绕心肺脑复苏的保护机制及其方法成为专家学者们研究的热门，而建立有效、稳定的全脑缺血再灌注模型是实验研究的基础。 针对建立全脑缺血再灌注模型的实验方法有多种，包括：二血管阻断加低血压法、四血管阻断法、三血管阻断法、颈动脉负压分流法。国内文献报道用四血管阻断法比较多[5]，国外四血管阻断法、二血管阻断加低血压法均有应用及报道，但更偏向于后者[6]。对比不同建模方法在实验过程中所显露出的特性，分析并总结各自的优缺点。选择能较好地建立大鼠全脑缺血再灌注模型的方法，为脑复苏的深入研究提供良好的实验基础。本文将从实验的可操作性、成功率、发展前景等方面对各类建模方法进行综述。 1制作全脑缺血再灌注动物模型及效果的判定 1.1全脑缺血再灌注模型模拟心搏骤停
NSFC2008-慢性疲劳综合征动物模型的研究
课题编号： 国家自然科学基金 申请书 资助类别：面上项目 亚类说明：青年科学基金项目 附注说明： 项目名称：慢性疲劳综合征动物模型的研究 申请者：电话： 依托单位： 通讯地址： 邮政编码：单位电话： 电子邮件： 申报日期： 2008年1月15日 国家自然科学基金委员会
摘要：作为亚健康重要组成部分的慢性疲劳综合征（CFS）将成为21世纪影响人类健康的严重问题之一，开展对CFS的系统化研究具有重要的现实意义。由于缺乏公认的CFS实验动物模型，导致CFS的基础研究以及防治研究未见突破性进展。以往的研究主要通过注射病毒、慢性束缚的方法制作慢性疲劳动物模型，与人体CFS发病的多因性有较大差距，且检测指标单一，不能满足CFS系统研究的需要。基于目前慢性疲劳动物模型研究的不成熟，本课题从病因学方面入手，不仅使动物慢性疲劳运动，而且干扰其正常睡眠，扰乱生理节律，从而使动物模型更接近于临床实际，同时系统检测CFS大鼠在免疫系统、神经系统功能异常和行为异常改变方面的多项指标。为进一步研究CFS的发病机制、防治方法提供符合临床实际的、标准的、可重复的、可控易行的实验动物模型，推动CFS研究的发展。
（一）研究的目的及意义（研究意义、国内外研究现状及分析，附主要参考文献目录。） 随着当代社会竞争的增强，生活节奏的加快，临床上以精神紧张、慢性疲劳为主诉的患者日趋增多，慢性疲劳综合征（chronic fatigue syndrome ，CFS）日益受到医学界乃至整社会的广泛关注。有研究表明，全球真正健康的人只占5%，病人占20%，亚健康人群占75%[1]，作为亚健康重要组成部份的CFS将会成为21世纪影响人类健康的严重问题之一，开展对CFS的系统化研究具有重要的现实意义。 CFS是一种以长期疲劳为突出表现，同时伴随有低热、头痛、肌肉关节疼痛、失眠和多种精神症状的一组证候群。尽管CFS介于疾病状态和健康之间，在体检和常规实验检查中一般无异常发现，且在短期内不会危及生命。但是由于其发病率高，持续时间长，对人们身心健康、生产和生活质量等方面均带来严重的负面影响，并很容易由临床前期转入疾病状态，因此世界各国医学、心理学和社会学界都极为关心和重视，已有学者开展对CFS的流行病学[2-6]、表现症状群[5-6]、病因[7]、中医发病机制[8-12]等基础研究，以及防治CFS的新药开发研究[13，14]等多方面的研究。但是，由于缺乏公认的CFS动物模型，导致CFS的基础研究以及防治研究未见突破性进展。本课题致力于研究CFS动物模型，即希望填补这一研究空白，突破CFS的研究瓶颈。 众所周知，疾病谱已由单因性疾病向多因性疾病转化，CFS的增多即是典型代表。自1987年CFS被美国疾病控制中心正式命名以来，各国学者从现代医学角度进行了大量的研究，虽然取得了一定进展，但迄今为止对其病因病理还没有获得清楚而统一的认识。一般认为CFS是由于病毒诱发、精神压力、不良生活习惯、脑力和体力劳累过度等因素导致人体神经、内分泌、免疫等多系统的功能失调所致[7，13，15-18]。正是由于CFS发病的多因素机制，西医从动物实验的角度研究CFS者很少见。有报道通过注射病毒、慢性束缚[19]的方法制作慢性疲劳动物模型，但仅考虑了病毒感染、过度劳累致慢性疲劳，与人体CFS发病的多因性仍有较大差距，而且这些研究检测指标亦较单一，不能满足CFS系统研究的需要。基于目前慢性疲劳动物模型研究的不成熟，本课题从病因学方面入手，研制CFS动物模型，为进一步研究CFS的发病机制、防治方法奠定基础。 已有的CFS流行病学研究表明[4，5，7]：CFS在某些行业（科技、新闻、公务人员、演艺人员、出租车司机、毕业班中学生等）的人群中发病率较高，其发病与长期精神紧张、不愉快的生活事件及生活习惯的改变等等个人心理与社会等应激因素有关。由
人类重大传染病动物模型体系的建立及应用-中华医学会
中华医学科技奖形式审查结果公布 年份2018 推荐奖种医学科学技术奖 项目名称人类重大传染病动物模型体系的建立及应用 推荐单位推荐单位：中国医学科学院 推荐意见： 动物模型是从事传染病感染与致病机制等基础研究、传播与致病力预警、疫苗和药物成果转化的重要支撑条件。2003年SARS爆发之初，由于缺乏动物模型，导致防控体系建设严重滞后，给人民健康和国家经济带来重大损失。面对重大和新发传染病的威胁，如何在第一时间研制实用性高的动物模型，是传染病防控的关键问题之一。该项目组在SARS爆发时临危受命，克服生物安全保障体系不健全的威胁，经过10余年努力，完成了动物模型关键技术体系的集成创新，建立了我国最大的传染病动物模型资源库，从根本上扭转了国内资源匮乏的局面，并率先实现了传染病动物模型的规范化，为疫苗研发、应急药物储备提供了国际先进的动物模型评价技术，是国家传染病防控体系高效运转必不可少的动物模型应急反应平台。 该项目包含了多项技术和模型的原始创新与集成，搭建了从病原鉴定和预警、到动物模型研制和应用、再到药物和疫苗评价的完善的传染病防控链条，针对重大疫情来之能战、战之能胜，在重大传染病防治研究，以及SARS、H5N1、手足口病、H1N1、H7N9等疫情防控时发挥了对疾病控制、卫生应急、科学进步及产业发展四位一体的重大保障作用，利用有限的资源资助，将该领域推进到了国际先进水平，历次获得中国实验动物学会、北京市和教育部奖励。 我单位认真审阅了该项目推荐书及附件材料，材料真实有效；按照要求，该项目已经过公示，公示期间无异议，同意推荐申报2018年中华医学科技奖。 项目简介全球每8个月就有一次新的传染病疫情。据WHO不完全统计，每年因传染病直接死亡300余万人，是威胁社会安定的重大因素。动物模型是病原确定与溯源、感染与致病研究、疫苗与药物评价等必需的保障条件。该领域一直存在两大国际难题，一是动物对人类病原易感性差、特异诊断难、模型模拟不全面等技术难题，二是模型需满足不同研究需求，资源需长期创制和积累等建设难题。该项目组经过15年的技术创新和集成，建立了系统的传染病动物模型体系，在重大传染病防治、SARS及之后的疫情防控中发挥了应急支撑作用。主要科技创新包括以下五方面： 一、建立了病原易感动物培育技术体系，包含特病病原体排除、协同重组近交、特种动物培育、大鼠基因快速敲入等7项技术的创新及集成。其中大鼠基因快速敲入技术使CRISPR/Cas9技术效率从16%提高到30%以上，解决了大鼠10%的生命关键基因不能直接敲除的难题，被写入国际基因修饰大鼠指导原则。 二、针对威胁较大的流感和冠状病毒，分别建立了其宿主候鸟和蝙蝠的监测体系，发现并鉴定新病毒50余种，根据病毒突变风险预测，创建了我国最大的病原易感动物资源库，包含对流感、乙肝、冠状病毒等分别易感的动物114种，以及国际最大的遗传多样性小鼠70种，国际第三大的基因工程大鼠资源147种，该资源储备使新模型研制周期从SARS时的“7个月”缩短至H7N9时的“1个月”，为疫情防控从动物模型环节节省了时间。 三、完成了27项动物模型关键技术的创新及集成。其中首次建立了我国的动物生物安全实验室保障体系；研发了12种动物模型特异的病原检测试剂，解决了由于物种差异、临床试剂无法用于动物检测的问题，缩短了模型研制时间。 四、建立了国际最大的人类传染病动物模型资源库，含动物模型96种，涵盖三种重大传染病和近15年国内发生和国外输入新发传染病，高致病病原数量国际最多，并通过比较医学分析建立了反映传染病全病程的动物模型体系。首次在国内建立了恒河猴艾滋病模型、甲流雪貂模型；首次在国际上建立了MERS非人灵长类动物模型、
肿瘤动物模型构建实验技术
肿瘤动物模型的建立可以： （1）评价抗肿瘤免疫治疗的疗效； （2）作为抗肿瘤药物筛选模型； （3）为肿瘤转移研究提供更好的研究平台； （4）为研发抗肿瘤转移性药物提供良好的实验工具。 实验方法：诱发性肿瘤动物模型 实验方法原理：诱发性肿瘤动物模型是指研究者用化学致癌剂、放射线、致癌病毒诱发动物的肿瘤等。 实验材料：肿瘤细胞小鼠 试剂、试剂盒、无血清培养基质、3%中性甲醇石腊 仪器、耗材、低温离心机、血球计数器、游标卡尺 实验步骤 一、肝癌 1．二乙基亚硝胺（DEN）诱发大白鼠肝癌 （1）取体重250 g左右的封闭群大白鼠，雌雄不拘； （2）按性别分笼饲养。除给普通食物外，饲以致癌物，即用0.25%DEN水溶液灌胃，剂量为10 mg/kg，每周一次，其余5天用0.025%DEN水溶液放入水瓶中，任其自由饮用； （3）共约4个月可诱发成肝癌； （4）也可以单用0.005%掺入饮水中口吸服8个月诱发肝癌。 2．4-2甲基氨基氮苯（DBA）诱发大鼠肝癌 （1）用含0.06%DBA的饲料喂养大鼠，饲料中维生素B2不应超过1.5～2 mg/kg； （2）4～6月就有大量的肝癌诱发成功。 3．2-乙酰氨基酸（2AAF）诱发小鼠、狗、猫、鸡、兔肝癌 （1）给成年大鼠含0.03% 2AAF标准饲料；
（2）每日每平均2～3 mg 2AAF（也可将2AAF混于油中灌喂），3～4月后有80～90%动物产生肝肿瘤。 4．二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌： （1）用剂量为每日0.3～14 mg/kg体重，混于饲料或饮水中给予； （2）6～9个月后255/300大鼠发生了肝癌。 5．亚胺基偶氮甲苯（OAAT）诱发小鼠肝癌 （1）用1%OAAF苯溶液（约0.1 ml含1 mg）涂在动物的两肩胛间皮肤上，隔日一次，每次2～3滴，一般涂100次。 （2）实验后7～8周即而出现第一个肝肿瘤，7个月以上可诱发小鼠肝肿瘤约55%。 （3）或用2.5 mg OAAT溶于葵瓜子油中，给C3H小鼠皮下注射4次，每日间隔10天，也可诱发成肝癌。 6．黄曲霉素诱发大鼠肝癌 （1）每日饲料中含0.001～0.015 ppm，混入饲料中喂6个月后，肝癌诱发率达80％。 二、胃癌 1．甲基胆蒽诱发小鼠胃癌 （1）取20 g左右的小鼠，无菌手术下，在腺胃粘膜面穿挂含甲基胆蒽（MC）线结。 （2）含MC的线结是用普通细线，在一端打结后，将线结置于盛有MC小玻璃试管内，在酒精灯上微微加温，使MC液化渗入线结。MC浓度为0.05～0.1 g 20-甲基胆蒽内浸入10～20根线。 （3）手术埋线后4～8个月可诱发成功胃癌。 2．不对称亚硝胺诱发小鼠胃癌 剂量为0.25 ml/kg体重，3个月后全部动物发生前胃乳头状癌，7～8个月后有85～100%发生前胃癌。昆明种最敏感。A系次之，615系小鼠敏感性最差。 3．甲基亚硝基醋酸尿素诱发小鼠胃癌 给BD大鼠饮水中加甲基亚硝基醋酸尿素，剂量为2 mg/kg体重，每周饮用5次，520天后全部大鼠均发生了腺胃癌。