常见肿瘤基因检测规范及进展：肺癌EGFR
egfr突变丰度划分标准
egfr突变丰度划分标准
EGFR突变丰度划分标准是指对肿瘤细胞中EGFR基因突变的程度进行分类的标准。
EGFR基因突变是指肿瘤细胞中EGFR基因发生了异常变异，导致EGFR在细胞生长和分化中的信号传导发生改变，从而导致肿瘤的发生和进展。
EGFR突变丰度是指肿瘤细胞中EGFR基因突变的百分比，是评估EGFR基因突变在肿瘤发生和预后中的重要指标。
EGFR突变丰度划分标准旨在为临床医学中EGFR突变的治疗选择和预后评估提供参考依据。
根据EGFR突变丰度的百分比，目前已经确定了以下三种划分标准：
1. 高表达型：EGFR突变丰度大于50%。
这种情况下，EGFR基因的异常变异对肿瘤发生和进展的影响非常明显，治疗中可以考虑使用EGFR特异性抑制剂。
2. 中表达型：EGFR突变丰度在5%~50%之间。
这种情况下，EGFR 基因的异常变异对肿瘤发生和进展的影响较为显著，治疗中需要根据具体情况进行选择。
3. 低表达型：EGFR突变丰度小于5%。
这种情况下，EGFR基因的异常变异对肿瘤发生和进展的影响较小，治疗中可以考虑使用其他药物进行治疗。
EGFR突变丰度的划分标准在肿瘤治疗中起到了重要的作用。
随着技术的不断发展和临床数据的不断积累，EGFR突变丰度的划分标准也将不断完善，为肿瘤治疗和预后评估提供更为准确的指导。
egfr基因报告解读
EGFR基因报告解读EGFR（表皮生长因子受体）基因是一种重要的癌症相关基因，它在肿瘤的发生和进展中起着重要的作用。
EGFR基因报告是一种通过分析个体携带的EGFR基因突变信息，帮助医生制定个体化治疗方案的检测方法。
本文将从多个方面解读EGFR基因报告，以帮助读者更好地了解其意义和应用。
1.EGFR基因背景知识 EGFR基因位于人类染色体7p12.3上，编码一种膜上受体酪氨酸激酶。
该受体在正常细胞中参与细胞生长、分化和存活等生理过程。
然而，EGFR基因突变或过表达与多种癌症的发生和进展密切相关，特别是肺癌、结直肠癌和乳腺癌等。
因此，对EGFR基因进行分析和检测对于确定治疗方案具有重要意义。
2.EGFR突变的临床意义 EGFR基因突变会导致EGFR信号通路的异常激活，进而促进肿瘤细胞的生长和扩散。
目前已经发现一些特定的EGFR突变与肿瘤的敏感性和抗药性相关。
例如，在非小细胞肺癌患者中，EGFR基因突变对于靶向治疗药物（如吉非替尼）的疗效预测具有重要意义。
因此，EGFR 基因报告可以帮助医生针对患者个体情况，选择最合适的治疗方案。
3.EGFR基因报告的解读 EGFR基因报告通常包含患者的突变类型、突变频率、突变位点等信息。
其中，最常见的EGFR突变类型包括点突变、插入突变和缺失突变等。
通过解读EGFR基因报告，医生可以了解患者是否存在EGFR基因突变，以及突变类型和频率的具体情况。
这些信息有助于指导个体化治疗方案，提高治疗的准确性和有效性。
4.EGFR靶向治疗的应用基于EGFR基因报告的结果，医生可以选择合适的靶向治疗药物。
对于带有特定EGFR突变的患者，如EGFR T790M突变，可以选择奥西替尼作为治疗药物。
而对于EGFR基因突变阴性的患者，则需要考虑其他治疗方案。
EGFR靶向治疗的应用可以提高治疗效果，减少治疗的不必要性和副作用。
5.EGFR基因报告的局限性 EGFR基因报告虽然在个体化治疗中发挥重要作用，但也存在一些局限性。
EGFR基因突变及其检测方法的研究进展
EGFR基因突变及其检测方法的研究进展高云;陈嘉昌;朱振宇;彭焕玉【摘要】表皮生长因子受体(EGFR)属于酪氨酸激酶受体,它介导的信号转导途径调节细胞的生长、增殖和分化.在癌症中发现EGFR酪氨酸激酶区常发生各种突变,这些突变和酪氨酸激酶抑制剂的疗效密切相关.因此,EGFR突变的检测对癌症的个体化治疗具有重要的参考价值.目前常用的EGFR突变检测方法有测序法、PCR-SSCP、突变体富集PCR、ARMS、微数字PCR、HRM、DHPLC.【期刊名称】《分子诊断与治疗杂志》【年(卷),期】2011(003)001【总页数】7页(P51-57)【关键词】EGFR;突变;检测【作者】高云;陈嘉昌;朱振宇;彭焕玉【作者单位】中山大学中山医学院,广东,广州510080;中山大学达安基因诊断中心,广东,广州510665;中山大学中山医学院,广东,广州510080;中山大学达安基因诊断中心,广东,广州510665【正文语种】中文EGFR已成为近年来肿瘤治疗研究和抗肿瘤药物筛选的热点,有关EGFR突变与肿瘤发生以及EGFR突变在分子靶向治疗中的作用日益受到人们的关注。
EGFR突变是癌症患者是否对TKI敏感的强预测因子,因此EGFR基因突变的检测能为肿瘤靶向治疗提供依据。
现就EGFR基因突变及其主要检测方法做一综述。
1.1 EGFR的生物学特征人类表皮生长因子受体家族（epidermal growth factor receptor family, EGFR家族）属于酪氨酸激酶受体家族，也被称作HER家族或erbB家族。
EGFR家族由四个成员组成，分别是erbB1（EGFR/ HER1），erbB2 （neu/HER2），erbB3（HER3），erbB4（HER4）。
EGFR基因位于第七号染色体短臂上（7p12），长约118 kb，由28个外显子组成。
其转录形成的mRNA长约5.6 kb，编码的EGFR是分子量为170 kD的跨膜糖蛋白，编码蛋白由1186个氨基酸组成，具有酪氨酸激酶（tyrosine kinase, TK）活性，是传递胞外信号到胞内的重要途经蛋白。
EGFR和KRAS基因检测意义
• 检测K-ras基因突变是深入了解癌基因的情 况、了解各种癌症的发展预后、放化疗疗 效的重要指标。 • 1.K-ras基因突变发生在肿瘤恶变的早期， 并且原发灶和转移灶的K-ras基因高度保持 一致。一般认为，K-ras基因状态不会因治 疗而发生变化。 • 2.K-ras基因突变见于20%的非小细胞肺癌 (NSCLC)，其中肺腺癌占30%～50%。
KRAS基因 - K-ras基因突变发生的时间 • K-ras基因突变发生在肿瘤恶变的早期，并 且原发灶和转移灶的K-ras基因高度保持一 致。一般认为，K-ras基因状态不会因治疗 而发生变化。 大肠癌患者K-ras基因突变异 常的概率为30％－35％。
KRAS基因 - K-ras基因检测（K-ras,p21） 临床意义
EGFR基因检测在肺癌中的应用
检测方法：DNA测序法 检测周期: 7-10天
检测位点：EGFR的18，19，21号外显子
标本要求： 肿瘤组织病理切片，厚度8-10μm, 5-10张，要 求肿瘤组织占标本的70%以上 支气管镜活检组织，厚度8-10μm，需要10张 切片
KRAS基因检测
KRAS蛋白处于EGFR信号 通路通路的下游。在生理情况 下，EGFR信号通路活化后， KRAS蛋白短暂激活，其后迅 速失活，KRAS激活/失活效应 是受控的。 而KRAS基因突变时，可以 导致 EGRF 信号通路持续激活， 加 速 肿 瘤 细 胞 增 殖 。
KRAS基因检测在大肠癌中的应用
检测方法：DNA测序法 检测周期: 7-10天
检测位点：KRAS基因第2外显子的12，13密码子
标本要求： 肿瘤组织病理切片，厚度8-10μm, 5-10张，要求肿 瘤组织占标本的70%以上。 肠镜活检组织，厚度8-10μm，需要10张切片。
egfr检测内容
egfr检测内容
EGFR 检测是一种用于诊断和评估肺癌的重要方法，可以检测出肺癌细胞中 EGFR 基因的表达水平。
EGFR 是一种受体酪氨酸激酶，其在肺癌细胞中的表达水平与肺癌的恶性程度、预后和治疗反应等方面密切相关。
EGFR 检测的方法主要包括以下几种:
1. 免疫组化法 (IHC):IHC 是一种常用的 EGFR 检测方法，可以通过检测肺癌组织中 EGFR 的表达来诊断和评估肺癌。
IHC 可以使用单克隆抗体或多克隆抗体来检测 EGFR 的表达，通常需要使用染色强度和染色面积两个指标进行评估。
2. 基因测序：基因测序是一种用于检测 EGFR 基因变异的方法，可以用于评估肺癌患者的预后和治疗反应。
EGFR 基因变异与肺癌的恶性程度和治疗反应等方面密切相关，因此可以通过基因测序来检测EGFR 基因变异。
3. 荧光原位杂交 (FISH):FISH 是一种用于检测 EGFR 扩增和
突变的方法，可以通过检测肺癌细胞中 EGFR 基因的扩增和突变来诊断和评估肺癌。
EGFR 检测在肺癌的诊断、治疗和预后等方面具有重要作用，需要根据具体病情选择合适的检测方法。
egfr突变解读
egfr突变解读
EGFR基因突变是指表皮生长因子受体基因发生了某种形式的改变，从而导致其编码的蛋白质的结构或功能发生改变。
EGFR基因突变与多种恶性肿瘤的发生、发展密切相关，如非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌等。
EGFR基因突变通常在肺癌患者中发生，其中非小细胞肺癌患者中约有40-50%存在EGFR 突变。
这些突变主要发生在EGFR酪氨酸激酶区域的18～21外显子，其中19和21号外显子突变更为重要。
EGFR基因突变检测已成为肺癌等恶性肿瘤的常规检查项目，并被纳入多个国家的肿瘤治疗指南。
EGFR突变还被广泛应用于新型抗癌药物的开发和临床试验中，为肿瘤治疗提供了更多的手段和机会。
靶向药物治疗已经比较成熟，可以成功地提升患者的中位生存期。
总而言之，EGFR基因突变是一种重要的分子遗传学现象，在恶性肿瘤的发生、诊断和治疗中扮演着重要角色。
EGFR和KRAS基因检测与肿瘤的个性化治疗
KRAS基因Байду номын сангаас测在大肠癌中的应用 KRAS基因检测在大肠癌中的应用
KRAS基因检测可以筛选出EGFR靶向治 疗药物有效的大肠癌患者，帮助医生选择 对肿瘤病人最有效的治疗方法，实现肿瘤 病人的个体化治疗。 目前在欧美国家，大肠癌患者内科治疗 前已经常规检测KRAS状态，并且成为能否 报销相关抗EGFR治疗费用的凭据。
检测方法：DNA测序法 检测方法 检测周期: 检测周期 7-10天 检测位点：EGFR的18，19，21号外显子 检测位点 标本要求： 标本要求 肿瘤组织病理切片，厚度8-10μm, 5-10张，要 求肿瘤组织占标本的70%以上 支气管镜活检组织，厚度8-10μm，需要10张 切片
KRAS基因检测 KRAS基因检测
EGFR和KRAS基因检测与肿 EGFR和KRAS基因检测与肿 瘤的个性化治疗
辽宁省肿瘤医院生物治疗室 2010.04.01
EGFR表达 EGFR表达
EGFR表达于正常上皮细胞表面，而在 一些肿瘤细胞中常过表达，EGFR的过表达 和肿瘤细胞的转移、侵润、预后差有关。
EGFR信号通路 EGFR信号通路
细胞外区域 跨膜区域 细胞内区域
EGFR突变率 EGFR突变率
100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0%
NS腺癌 NS 腺癌
东亚 欧美
EGFR突变细胞 癌基因休克假说 EGFR突变细胞—癌基因休克假说 突变细胞
EGFR基因检测在肺癌中的应用 EGFR基因检测在肺癌中的应用
KRAS基因检测在大肠癌中的应用 KRAS基因检测在大肠癌中的应用
检测方法：DNA测序法 检测方法 检测周期: 检测周期 7-10天 检测位点：KRAS基因第2外显子的12，13密码子 检测位点 标本要求： 标本要求 肿瘤组织病理切片，厚度8-10m, 5-10张，要 求肿瘤组织占标本的70%以上。 肠镜活检组织，厚度8-10m，需要10张切片。
肺癌常见突变基因EGFR与ALK的认知
肺癌常见突变基因EGFR与ALK的认知肺癌是我国发病率最高，也是我国死亡率最高的癌症，而幸运的是在我国大约有40-50%的肺癌具有敏感基因突变，最常见的是EGFR突变及ALK融合突变（欧美10%），可以应用靶向药物治疗，EGFR/ALK靶点的突变应用靶向药物有效率高达70%，明显提高患者生存质量，提高生存期。
有效率虽然很高但总有一个跨不过去的坎那就是耐药。
一、EGFR（表皮生长因子受体）突变EGFR大家已经非常熟悉了，是非小细胞肺癌最常见的致癌基因，是目前肺癌靶向药物对应的主要驱动基因，常见的突变位点发生在18、19、20和21号外显子上。
最常见的有两种，一种是19号外显子的缺失（45%），另外一种是21号外显子L858R（40-45%）的突变。
针对EGFR突变的肺癌患者，比如19外显子缺失和L858突变，常用的药物一代EGFR抑制剂厄洛替尼、吉非替尼、埃克替尼和二代EGFR抑制剂阿法替尼，三代奥西替尼（9291），这些药物对EGFR 突变的非小细胞肺癌患者不错的药物。
但多数病人在使用第一代靶向药物1-2年时间内，就会出现耐药，肿瘤进展。
其中原因有四：1，60%的患者是由于出现继发耐药突变——T790M突变，一旦T790M突变，可以使用三代靶向药物奧希替尼（9291）；2，20%的患者耐药是因为旁路激活，比如c-MET扩增，也就是说肿瘤细胞的增殖绕开了EGFR，走了另外一条路。
如果基因检测显示MET扩增或突变，可以应用克唑替尼；3，表型改变也是一代靶向药物产生耐药的一种情况，比如腺癌会向小细胞肺癌转化；4，EGFR驱动基因的下游信号通路激活，也会导致的原发耐药或者获得性耐药。
这种情况就要考虑化疗。
奧希替尼作为一代靶向药耐药后的选择，仍然会产生耐药。
比如继发C797S的共生突变，其他旁路激活等。
在EGFR突变的患者中，除了常见的19/21基因突变外，还有3种罕见突变：G719X（18外显子）、S768I（20外显子）和L861Q （21外显子）。
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常见肿瘤基因检测规范及进展：肺癌EGFR 2013/12/29 医脉通
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导读肺癌患者在应用靶向治疗前进行EGFR基因突变检测具有重要临床意义，而检测结果的准确性也将直接影响患者靶向治疗选择和疗效。
本文就肺癌EGFR基因突变的分子病理学检测中主要的质量控制和质量保证要点进行介绍。
目前，吉非替尼和厄洛替尼等小分子酪氨酸激酶抑制剂（TKI）已被证明是治疗晚期非小细胞肺癌（NSCLC）的有效靶向药物，并只对表皮生长因子受体（EGFR）基因敏感突变类型的肺癌患者才显示很好疗效，肺癌患者在应用EGFR-TKI靶向治疗前进行EGFR基因突变检测具有重要临床意义，而检测结果的准确性也将直接影响患者靶向治疗选择和疗效。
本文就肺癌EGFR基因突变的分子病理学检测中主要的质量控制和质量保证要点进行介绍。
1、检测实验室及人员要求
常规EGFR突变检测方法基于基因扩增技术之上，其检测应严格在基因扩增实验室进行，实验室包括试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增区和产物分析区等4
个区。
因肺癌EGFR检测的标本多为石蜡包埋的组织蜡块，实验室应设置独立的标本制备预处理区（切片区），严防标本在制片过程中被污染。
各工作分区应标识清晰，仪器设备应满足检测要求，各工作区专用的仪器设备、办公用品、工作服、实验耗材和清洁用具等不可混用。
检测过程中严格质量控制，实验完毕后做好清洁消毒工作。
分子病理学聚合酶链式反应（PCR）实验室工作人员应参加我国卫生和计划生育委员会指定的机构举办的技术培训后取得合格证，并定期进行培训。
2、EGFR突变检测的标本要求
需要进行EGFR-TKI靶向治疗的患者应进行EGFR基因突变筛选；临床标准（女性，无吸烟史等）不能决定是否进行检测；有研究表明，免疫组织化学染色（IHC）检出总EGFR蛋白表达也不推荐TKI治疗筛选。
EGFR突变检测，对肺癌部分切除标本建议用于腺癌和含腺癌成分的混合型肺癌，不考虑组织学分级；对肺癌全切标本，不建议用于无任何腺癌成分的肺癌，例如纯鳞癌、纯小细胞癌或IHC未显示腺癌分化的大细胞癌；对小标本（活检、细胞学标本），如果不能完全除外腺癌，可检测组织学表现为鳞癌或小细胞癌的标本检测，但应结合临床标准（年轻患者、无吸烟史）协助筛选；对初治患者，检测原发灶或转移灶；对于多发性原发肺腺癌，可分别检测，但不必对同一肿瘤多个区域检测。
在确定EGFR-TKI治疗的进展期（Ⅳ期）肺癌患者，或低期别患者发生复发或进展（原先未进行检测）时，应行EGFR突变检测。
由于肺癌复发转移率高，对Ⅰ~Ⅲ期肺癌，在诊断时鼓励患者进行检测，以便出现复发时及时治疗，但应视具体情况决定。
3、EGFR突变检测流程
标本处理手术或活检组织标本应在离体30分钟内用10%中性福尔马林固定，避免用酸性、重金属固定液或脱钙液等处理；活检小标本固定6~24小时，手术切除大标本固定8~48小时；细胞学标本可用于EGFR突变检测，细胞石蜡包埋块优于细胞涂片。
标本评估及DNA提取对检测标本进行病理形态学评估是EGFR检测最重要的质量控制之一，病理医生首先应评估整个样本中肿瘤细胞含量（肿瘤细胞百分比），确定标本是否满足检测要求（所采用检测方法的敏感性），必要时进行微切割富集肿瘤，EGFR突变检测标本使用的切片机刀架座须清洁并消毒，不同标本切片时要更换刀片；制备3~10张厚8μm组织切片，对照HE染色结果刮取肿瘤细胞丰富区域，避开非肿瘤区和坏死区等；采用标准试剂盒提取基因组DNA，并测定DNA浓度。
EGFR突变检测EGFR突变检测方法有很多种，应结合检测标本特点来判断是否进行检测。
最传统的直接测序法（Sanger测序）可得到序列的直接信息，对未知突变的检出具有优势，是直接有效地检测基因突变状态的方法，但敏感性较低，实验操作时间长、步骤复杂、易污染。
以实时定量PCR（RT-PCR）为平台的突变检测技术，均须根据已知的突变类型设计引物和探针，因此无法检测出所有可能的突变，但敏感性较直接测序法高，操作简单，不必对PCR产物进行操作，很大程度避免了扩增产物的污染。
实验室应采用能在至少含50%肿瘤细胞的标本中检测到突变的方法。
推荐采用更敏感的方法，至少能在含10%肿瘤细胞的标本中检测到突变，但不可一味追求高敏感性，而忽视对特异性和准确性的考量。
另外，不同实验条件、不同样本中检测的最适方法也可能不同，应根据实际情况选择适合的EGFR基因突变检测方法，通过预实验验证所采用方法的准确性和敏感性，无论采用何种检测方法，临床EGFR基因突变检测应能检测所有突变频率在1%以上的突变类型。
EGFR突变检测结果分析与报告EGFR突变检测根据各自检测方法的判读标准分析检测结果。
测序法检测EGFR基因突变，成功的峰形图的峰形规则，如图1，RT-PCR 法检测EGFR基因突变结果如图2所示；如果检测结果可疑（图3，4），应重复进行检测或采用其他的检测方法验证。
EGFR突变检测报告须包括结果和说明，报告内容应让肿瘤医生和其他病理医生易于理解，检测实验室收到标本后2周（10个工作日）内签发报告，平均检测周期＞2周的实验室应有措施（自身或第3方实验室）来保证紧急病例能更快得到检测结果。
4、EGFR突变检测的其他质量控制与质量保证
分子检测实验室人员应严格按照已经验证的标准化操作流程进行EGFR检测，EGFR突变检测验证应与其他分子诊断相同，每次实验设置阴性和阳性质控，定期总结检测结果，及时发现并解决问题。
实验室每月采用不同的检测平台验证一定数量的EGFR基因突变检测结果，每年应至少参加两次单项能力验证（室间质控）。
验证机构有我国卫生计生委病理质控中心（PQCC），国际机构如美国病理学家学会（CAP），欧洲分子基因诊断质量联盟（EMQN）等。
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