jc1线粒体膜电位流式
JC 线粒体膜电位的检测方法
JC-1线粒体膜电位检测试剂盒产品组成：产品编号BB-4105-1 BB-4105-2 BB-4105-3规格20 assays 50 assays 100 assaysJC-1 100ul 250ul 500ul10×孵育缓冲液4ml 10ml 20ml产品简介：线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。
JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)△Ψm的理想荧光探针。
可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。
在线粒体膜电位较高时，JC-1聚集在线粒体的基质中，形成聚合物，488nm激发时的最大发射波长为590nm，可以产生红色荧光，在流式图上表现为FL1和FL2双阳性；在线粒体膜电位较低时，JC-1不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1为单体，488nm激发时最大发射波长为527nm，可以产生绿色荧光，形成流式图中所有细胞FL1均为阳性。
凋亡细胞则大多为FL1单阳性。
这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。
常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。
贝博线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)可以快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位变化，可以用于早期的细胞凋亡检测。
试剂盒染料与其他的阳离子染料如DiOC6(3)和罗丹明123相比，特异性更高，对线粒体膜电位变化的特异性高于质膜电位变化，对线粒体去极化检测的检测一致性更好；红绿色荧光强度比率只受线粒体膜电位的变化，不受线粒体大小，形状，密度的差异干扰；检测灵敏度强，对细胞应激反应的微小异质性都能辨别；使用方法：悬浮细胞1、孵育缓冲液和JC-1染色工作液的配制：根据样品数按下列比例配制孵育缓冲液和JC-1染色工作液。
取100ul 10×孵育缓冲液加900ul无菌纯水稀释，混匀并预热至37℃，即成1×孵育缓冲液；在500ul 1×孵育缓冲液中加入5ul JC-1，涡旋混匀配成JC-1染色工作液；2、收集样本细胞以及阴性、阳性对照细胞。
线粒体膜电位测量
线粒体膜电位测量线粒体功能状态和不少疾病的密切相关，线粒体膜电位（MMP）则是反映细胞内线粒体功能状态的重要参数之一。
本人整理一下线粒体膜电位测量方法，包括主要测量仪器和常用荧光探针，欢迎补充讨论。
常用测量仪器：（1）普通荧光显微镜；（2）激光扫描共聚焦显微镜；（3）流式细胞仪。
常用荧光探针：JC-1，DioC6，mitocapture，罗丹明123，TMRM等。
JC-1（也称CBIC2(3)）是一种广泛用于检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)△Ψm的理想荧光探针。
可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。
在线粒体膜电位较高时，JC-1聚集在线粒体的基质(matrix)中，形成聚合物(J-aggregates)，可以产生红色荧光；在线粒体膜电位较低时，JC-1不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1为单体(monomer)，可以产生绿色荧光。
这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。
JC-1单体可采用488或514nm激光激发，发出绿色荧光波长为529nm左右；JC-1聚合物(J-aggregates)的最大激发波长为585nm，发出红色波长为590nm。
罗丹明123（Rhodamine 123, Rh123）是一种可透过细胞膜的阳离子荧光染料，在正常细胞中能够依赖线粒体跨膜电位进入线粒体基质，荧光强度减弱或消失。
在细胞凋亡发生时，线粒体膜完整性破坏，线粒体膜通透性转运孔开放，引起线粒体跨膜电位(ΔΨm) 的崩溃，Rh123 重新释放出线粒体，从而发出强黄绿色荧光，通过荧光信号的强弱来检测线粒体膜电位的变化和凋亡的发生，可用于培养的细胞或从组织中提取出的线粒体的膜电位检测。
Tetramethylrhodamine, methyl ester (TMRM)也是一种可透过细胞膜的阳离子荧光染料，单激光激发和单荧光发射峰。
可用543nm激光激发，发射橙红色荧光波长在580nm左右。
(完整版)线粒体膜电位检测(JC-1).
线粒体膜电位检测（JC-1)大量的研究表明线粒体与细胞凋亡密切相关，其中线粒体跨膜电位（△ψ的破坏，被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件之一，它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前，一旦线粒体跨膜电位崩溃，则细胞凋亡不可逆转。
JC-1(5,5’,6,6’-tetrachloro-1,1’,3,3’-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine iodide)是一种阳离子脂质荧光染料，可作为检测线粒体跨膜电位指示剂。
JC-1有单体和多聚体两种存在状态，在低浓度时以单体的形式存在，高浓度时以多聚体形式存在，两者的发射光谱不同，但均可在流式细胞仪绿色（FL-1）通道检测出绿色荧光，JC-1可透过正常细胞膜以单体状态聚集胞内，正常健康线粒体的膜电位（△ψ）具有极性，JC-1依赖于△ψ的极性被迅速摄入线粒体内，并因浓度增高而在线粒体内形成多聚体，多聚体发射光为红色荧光；可被流式细胞仪的红色（FL-2）通道检测到，而细胞发生凋亡时，线粒体跨膜电位被去极化，JC-1从线粒体内释放，红光强度减弱，以单体的形式存在于胞质内发绿色荧光。
根椐这一特征检测线粒体膜电位的变化。
所需仪器或者试剂流式细胞仪或荧光显微镜、高速离心机、CO2培养箱、微量移液器1.5m L Microtube、载玻片、盖玻片（荧光显微镜观察需用）、PBS、灭菌去离子水使用注意事项1．微量试剂取用前请离心集液。
2． JC-1避光保存及使用。
3．细胞培养的数量不宜超过1×106，否则细胞会产生自然凋亡影响检测。
4．对PH变化过于敏感的细胞建议用胎牛血清取代Buffer孵育染色及洗涤，或延长观测时间5．流式细胞仪检测线粒体膜电位变化受到多种因素的影响，因诱导剂、细胞株类型，作用时间的不同而荧光强度比例都有不同，因此没有通用标准的补偿设门指南，因此每个试验需设阴性及阳性对照组进行荧光补偿及设门。
流式细胞仪检测细胞凋亡操作流程 - 线粒体膜电位变化检测细胞凋亡
线粒体膜电位变化检测细胞凋亡实验原理JC-1（5,5′,6,6′-Tetrachloro-1,1′,3,3′-tetraethyl-imidacarbocyanine iodide）是一种广泛用于检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)△Ψm的理想荧光探针。
可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。
在线粒体膜电位较高时，JC-1 聚集在线粒体的基质(matrix)中，形成聚合物(J-aggregates)，可以产生红色荧光（FL-2 通道）；在线粒体膜电位较低时，JC-1 不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1 为单体(monomer)，可以产生绿色荧光（FL-1 通道）。
这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。
常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。
线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。
通过JC-1 从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降，同时也可以用JC-1 从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。
JC-1 单体的最大激发波长为514nm，最大发射波长为527nm；JC-1 聚合物(J-aggregates)的最大激发波长为585nm，最大发射波长为590nm。
实验用品1.12⨯75mm 的Falcon 管和15ml 聚苯乙烯离心管2.微量加样器和加样头3.线粒体检测试剂盒（货号551302，100tests），包括JC-1和10 ⨯ Assay Buffer, 注：每个KIT 包括 4 小瓶JC-1 试剂，每小瓶试剂足够检测25 个样本4.离心机5.CO2 培养箱6.流式细胞仪样本制备图1：试剂准备和JC-1 染色步骤总揽1.在JC-1粉末中加入125ulDMSO使其充分溶解，配成JC-1 Stock Solution，需根据实验的量分装-20度保存。
2.根据样本量配制JC-1 Working Solution，每个样品500ul 1×Assay Buffer + 5ulJC-1 Stock Solution。
jc1线粒体膜电位流式
jc1线粒体膜电位流式
"jc1线粒体膜电位流式"可能是指使用JC-1染料进行流式细胞仪分析线粒体膜电位的方法。
JC-1染料是一种用于检测线粒体膜电位的荧光探针。
在线粒体膜电位正常的情况下，JC-1呈现聚集态，形成红色荧光；而在线粒体膜电位丧失或降低时，JC-1分散，形成绿色荧光。
这一性质使得JC-1可以用来评估细胞的线粒体功能。
流式细胞仪是一种广泛用于单个细胞分析的仪器。
通过使用适当的激光和荧光检测器，流式细胞仪可以同时分析成千上万个细胞的多个参数，包括细胞大小、形状、表面标记物和荧光探针的荧光等。
在进行JC-1线粒体膜电位流式分析时，一般的步骤如下：
1.染色：将细胞用JC-1染色，允许染料进入细胞内并与线粒体
结合。
2.洗涤：洗涤细胞，以去除多余的染料。
3.流式细胞仪分析：使用流式细胞仪对染色后的细胞进行分析。
通过设置适当的激光和检测器，可以同时获得JC-1的红色和绿
色荧光信号。
4.数据分析：通过流式细胞仪的软件或其他分析工具，对得到的
数据进行解析和进一步的统计分析。
这种方法可以用于评估细胞的线粒体膜电位，进而了解线粒体的功能状态。
常见的应用包括研究细胞凋亡、药物筛选和疾病研究等。
JC-1 线粒体跨膜电位检测
JC-1线粒体跨膜电位检测MCE JC-1 Kit 资料规格：1T, 1 mL (100 万细胞)用途：早期细胞凋亡检测设备：荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计或流式细胞仪通道：FITC 通道看绿色，PI 通道看红色指示：红绿荧光比例变化Phosphate-buffered saline (PBS) (1× )的配制a.将PBS (10×)温浴，直至完全融化。
b.按1:10 的比例，用dH2O 稀释PBS (10×)至PBS (1×)。
■细胞染色1) 悬浮细胞：a.以6 孔板为例，每孔用1 mL 培养基重悬100 万细胞，其他培养器皿以此类推。
b.阳性对照的设置：取适量CCCP (50 mM) 恢复至室温，阳性对照孔培养基中加入1 μL，其终浓度为50 μM，细胞培养箱37℃孵育5 分钟。
c.取适量JC-1 (200 μM) 恢复至室温，每孔培养基中加入10 μL JC-1 (200μM)，其终浓度为2 μM，细胞培养箱37℃孵育15-20 分钟。
d.37℃孵育结束后，400 g 4℃离心3-4 分钟，沉淀细胞。
弃上清，注意尽量不要吸除细胞。
e.用PBS (1×) 洗涤2 次：加入2 mL PBS (1×) 重悬细胞，400g 4℃离心3-4 分钟，沉淀细胞，弃上清。
重复洗1 次。
f.再用500 μL 的PBS (1×) 重悬细胞，用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察，也可以用荧光分光光度计或流式细胞仪分析(绿色荧光：Ex/Em=510/527 nm；红色荧光：Ex/Em=585/590 nm)。
2) 贴壁细胞：注：若用荧光分光光度计或流式细胞仪检测贴壁细胞，可先对贴壁细胞进行消化、收集，重悬后参考悬浮细胞的检测方法。
若用荧光显微镜或共聚焦显微镜检测，方法如下：a.以 6 孔板为例，每孔加入 1m L细胞培养液。
b.阳性对照的设置：取适量CCCP (50 mM) 恢复至室温，阳性对照孔培养基中加入1 μL，其终浓度为50 μM，轻摇混匀，细胞培养箱37℃孵育5 分钟。
如何快速检测分析线粒体膜电位变化？JC-1来助力
如何快速检测分析线粒体膜电位变化？JC-1来助力JC-1 检测线粒体膜电位（Membrane potential）原理：在细胞凋亡的过程中往往伴随着线粒体跨膜电位的破坏，这被广泛认为是细胞凋亡过程中zui早发生的事件之一。
线粒体膜电位的检测有很多方法，JC-1的流式检测是比较常见的一种方法。
JC-1有单体和多聚体两种存在状态，低浓度时，以单体存在，可检测到绿色荧光，用流式检测时，通常为FL-1通道(和FITC同通道）高浓度时，以多聚体存在，可检测到红光，流式检测通常为FL-2通道（和PE同通道)。
因JC-1浓度的变化,在单体和多聚体之间形成一个可逆的转变过程。
正常细胞，膜电位正常时，JC-1通过线粒体膜J性进入线粒体内，并因浓度升高而形成发射红色荧光的多聚体，而凋亡细胞，线粒体跨膜电位去J化，JC-1从线粒体内释放，浓度降低，逆转为发射绿色荧光的单体形式。
故而可以通过检测绿色和红色荧光来定性(细胞群的偏移）定量（细胞群的荧光强度）的检测线粒体膜电位的变化。
近年来研究发现线粒体功能状态和不少疾病的密切相关，多种细胞在不同因子作用下发生凋亡时均伴有MMP的下降，而检测线粒体膜电位(MMP)的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。
如何快速检测分析线粒体膜电位变化？我们可以通过JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降，同时也可以用JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。
Abbkine线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）#KTA4001 就此提供了一种简单的方法，基于JC-1来检测线粒体跨膜电位的变化，区分健康和凋亡细胞。
在健康细胞中，这种染料在线粒体中积聚并聚集，在线粒体中形成明亮的红色荧光团块。
任何消除线粒体膜电位的事件都会阻止JC-1染料在线粒体中的积累，因此，染料以其单体形式保留在细胞质中，导致红色转变（聚集的JC-1，Ex/Em =585/590nm）至绿色荧光（JC-1单体，Ex/Em = 510/527nm）。
JC-1线粒体膜电位检测---流式细胞仪
JC-1线粒体膜电位检测---流式细胞仪一、实验简介线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。
JC-1是一种理想的用于检测线粒体膜电位的荧光探针，可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。
其原理是，当线粒体膜电位较高时，JC-1聚集在线粒体基质中，形成聚合物，488nm激发时的最大发射波长为590nm，可以产生红色荧光，在流式上表现为FL1和FL2双阳性；当线粒体膜电位较低时，JC-1不能聚集在线粒体基质中，此时JC-1为单体，488nm激发时最大发射波长为527nm，可以产生绿色荧光，形成流式图汇总所有细胞FL1为阳性。
凋亡细胞则大多为FL1单阳性。
不同荧光颜色的转变反应线粒体膜电位的变化，常用红绿荧光的相对比例衡量线粒体去极化的比例。
二、实验步骤(1) 收集细胞：细胞悬液转入离心管中，1000rpm离心5min收集细胞,弃上清。
(2) PBS洗涤细胞：加入3ml 4℃预冷的PBS完全重悬细胞，1000rpm离心5min，弃上清。
沉淀震荡混匀。
(3) 细胞计数：移取10微升在血细胞计数仪上进行细胞计数 ,调整细胞为0.5-1×10^6/ml。
(4) 装载探针：按照1:500用无血清培养基稀释JC-1，使终浓度为10μg/mL。
(5) 孵育探针：37°C细胞培养箱内孵育20分钟，每隔3-5分钟颠倒混匀一下，使探针和细胞充分接触，用无血清的培养液洗涤细胞三次，以去除未进入细胞内的探针。
(6) 上机检测：流式细胞仪使用激发波长Ex=488 nm，发射波长FL1(Em=525±20 nm)；FL2(Em=585±20 nm)，用Flow Jo软件分析结果。
三、实验结果展示。
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jc1线粒体膜电位流式
（实用版）
目录
一、JC1 检测线粒体膜电位的原理
二、JC1 的流式检测方法
三、JC1 的应用优势
四、总结
正文
一、JC1 检测线粒体膜电位的原理
线粒体膜电位是指线粒体内膜两侧的电位差，它是线粒体进行氧化磷酸化反应的重要驱动力。
JC1 是一种常用的线粒体膜电位探针，能够通过荧光信号的变化反映线粒体膜电位的变化。
JC1 有单体和多聚体两种存在状态。
在低浓度时，JC1 以单体存在，此时可以检测到绿色荧光。
在流式检测中，通常使用 FL-1 通道（与 FITC 同通道）。
当 JC1 浓度较高时，会以多聚体形式存在，此时可以检测到红色荧光。
在流式检测中，通常使用 FL-2 通道。
二、JC1 的流式检测方法
JC1 的流式检测方法可以分为以下几个步骤：
1.细胞培养：首先需要将待检测的细胞进行培养，使其在适当的条件下生长。
2.JC1 的添加：将 JC1 添加到细胞培养液中，使其与细胞接触。
3.荧光信号的检测：使用流式细胞仪对细胞进行检测，通过 FL-1 或FL-2 通道检测 JC1 的荧光信号。
4.数据分析：根据检测到的荧光信号强度，分析线粒体膜电位的变化。
三、JC1 的应用优势
相较于其他线粒体膜电位检测方法，JC1 具有以下优势：
1.高灵敏度：JC1 能够检测到线粒体膜电位的微小变化。
2.高特异性：JC1 只对线粒体膜电位发生变化产生响应，对其他细胞内环境变化不敏感。
3.便捷性：JC1 的检测方法简单，不需要复杂的实验操作。
4.适用范围广：JC1 可应用于各种类型的细胞。
四、总结
JC1 作为一种常用的线粒体膜电位探针，具有高灵敏度、高特异性和便捷性等优点，广泛应用于线粒体膜电位的检测。