铁皮石斛组织培养
铁皮石斛组织培养研究进展组织培养.
铁皮石斛组织培养研究进展1、1 种子萌发1.2 基本培养基铁皮石斛种子在N6，改良N6，MS , 1 / 2 MS , SH 、KS 、VW 、KundsonC , 1 / 2N6，White等培养基上均可萌发。
赵天榜等比较风、MS 等14 种培养基对铁皮石斛种胚成苗率的影响，除残外，所有的基本培养基均优于其减半培养基，其中以N6最好，SH 、Kn 、MS 次之，l /2MS 、1 / 2 Vw 最差。
曾宋君等田将铁皮石斛种子在SH 、改良N6、MS 、KS 、VW 、KundsonC 培养基中培养，得出最适培养基为改良N6或自制PT 培养基。
罗吉凤等比较了*** / 2MS 、1 / 2 N6和White 培养基对铁皮石斛种子萌发的影响，30d 种子发芽率均达到95 % ，但1 / 2MS 培养基上所萌发的原球茎较大。
1.3 激素在培养基中添加一定浓度的NAA 可促进种子的萌发，浓度以0.2 一0.5mg/L最适合胚的萌发和生长，过高起抑制作用。
2 , 4-D对胚的萌发起抑制作用。
6 一BA 对胚萌发后的生长起抑制作用。
KT 、IAA对胚萌发和成苗的影响不大，当浓度超过1mg/L 时，对胚萌发和成苗起抑制作用。
ABA 有抑制种子萌发和抑制植物生长的作用，但张铭等发现ABA 能显著提高铁皮石斛原球茎的质量，浓度以0.5mg/L为最佳。
1.4 天然添加物在培养基中添加适量的马铃薯汁、香蕉汁、椰乳可促进铁皮石斛种胚的萌发，但张玲等认为香蕉提取物和椰乳对种子萌发和正常发育有不利影响，干扰其正常发育过程。
1.5 炭源在组培过程中适当添加活性炭，可以吸附代谢过程中产生的废弃物，防止组织褐变，并刺激胚胎的发生与生根，可加人2 ％蔗糖。
曾宋君等在改良N6＋NAA 0.2mg/L 的最适培养基上，发现以白糖、片糖为炭源时，胚萌发和成苗的效果比蔗糖好，这可能是白糖、片糖中含有适合胚萌发和成苗的矿质元素2 原球茎增殖2.1 基本培养基铁皮石斛原球茎增殖可以1/2 MS，MS等作为基本培养基。
铁皮石斛种苗组培实施方案
铁皮石斛种苗组培实施方案铁皮石斛（Dendrobium）是一种重要的兰科植物，具有多种药用价值，被广泛用于中药材生产和养生保健。
其种苗组培是一种快速繁殖的方法，可以大大提高植物的繁殖效率和质量。
下面将介绍铁皮石斛种苗组培的实施方案。
一、材料准备1. 无菌种子：选择外观完整、无病害的铁皮石斛种子。
2. 培养基：配制适合铁皮石斛生长的培养基，包括营养物质、植物生长调节物质等。
3. 器具：培养瓶、无菌操作台、无菌手套、无菌培养室等。
二、种子消毒1. 将铁皮石斛种子浸泡于75%酒精中消毒5分钟，然后用无菌水冲洗3次。
2. 将种子浸泡于含有0.1%过氧化氢的无菌水中消毒20分钟，然后用无菌水冲洗3次。
3. 最后将种子浸泡于含有0.1%漂白粉的无菌水中消毒15分钟，然后用无菌水冲洗3次。
三、组培操作1. 在无菌操作台上进行操作，先将培养瓶中的培养基加热至121摄氏度，压力15磅，持续20分钟，使其无菌化。
2. 将消毒处理好的种子移入无菌培养瓶中，每瓶放入适量的种子。
3. 将培养瓶密封，放入无菌培养室中，温度控制在25-28摄氏度，光照强度控制在3000-5000勒克斯，光照时间为12小时。
四、生长管理1. 定期观察种苗生长情况，发现有病虫害立即进行处理。
2. 每隔一周更换一次培养基，保持培养基的新鲜和养分充足。
3. 控制培养室的温度、湿度和光照，提供良好的生长环境。
五、移栽1. 当种苗长到一定高度时，可以进行移栽。
将种苗移入含有适量营养物质的培养基中，继续进行培养。
2. 移栽后继续进行生长管理，直至种苗长成成熟植株。
通过以上实施方案，可以实现铁皮石斛种苗的组培繁殖，提高植物繁殖效率，为铁皮石斛的种植生产提供了可行的技术方案。
希望这些内容对您有所帮助。
铁皮石斛
• 进行栽种，效果较好。试管苗栽后 宜放在荫棚内，荫蔽度要求60％～ 80％。石斛喜湿润，怕积水。积水 会使根茎腐烂，叶片脱落而死。当 移栽苗根伸长后，每月用MS大量 元素1000倍稀释液喷施追肥，促 进生长发育。
在国内，石斛组织培养的研究相对其它植 物来说起步较晚，与国外相比还有一定的 距离，但无论是在国内还是国外，石斛花 药培养，原生质体培养等尚未见报道。可 喜的是国内的组织培养技术已相当成熟， 这为石斛组织培养的研究提供了很好的技 术保证。国内有不少人研究石斛的组织培 养，此间重要的是解决组培苗的栽培问题， 使石斛组织培养技术更好地为生产服务。
实验过程
• 将已经灭菌地石斛茎段，在无菌条件下切 成至少带有一个茎节地茎段，接种于诱导 培养基中诱导出芽，将芽再诱导出原球茎， 原球茎再分化，再壮苗，便可将生长健壮 地植株移植
培养基
选择适宜的培养基对石斛的分化至关重要， 常用的培养基为MS。 （1）芽增殖培养基：MS＋NAA0.1～0.5毫 克／升＋BA0.5～2.0毫克／升；（2）壮苗 培养基：MS无激素培养基；（3）生根培养 基：1/2MS+IBA0.1毫克／升
• 出管取苗要小心操作，不能折断根部。从 试管取出的苗须洗净附着在其根部的琼脂， 然后3～5株一丛种植。石斛苗具有群体抗 性作用，丛栽比单株栽培效果好。春季气 温逐渐回升，有利于试管苗适应自然环境， 最宜移栽试管苗。
石斛试管苗可直接栽在树干或岩石 上，也可以盆栽。在阴凉潮湿、长 有苔藓的树干和岩石上，栽种石斛 成活率高。盆栽选用木屑、吸水石、 砂岩、片麻岩等作基质，5℃ ，光照强度2000lx ，光照时 间10h/d
生根培养
• 将增殖培养产生的2 cm以上的小苗放在生 根培养基中进行生根培养，以长成完整植 株
铁皮石斛组培方案样本
铁皮石斛组织培养方案报告一、实验目二、理解铁皮石斛培养办法和环节, 纯熟掌握外植体取材、消毒、接种、初代培养操作过程。
三、实验器材超净工作台、高压灭菌锅、电磁炉、长镊子、培养皿、酒精灯、接种工具、烧杯、玻璃棒、移液管、培养箱、剪刀、培养瓶等。
四、实验环节配方：依照不同阶段, 培养基配方有所差别。
如表1表1 各种培养基配方配制（以1000ml幼株生根壮苗培养基为例）10%香蕉（w/w）+MS +3%蔗糖（w/w）+0.8%琼脂（w/w）+2.0mg/L NAA1）量取800ml蒸馏水于干净大烧杯中, 加热至沸腾；2）精确称量100g香蕉果肉, 切成碎片状, 并倒入上述烧杯中, 加热煮沸5min, 其间搅拌使之充分溶解；3）按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ顺序, 量取MS各种母液于盛有50ml蒸馏水烧杯, 混合均匀；4）将2）和3）溶液混合, 然后加入30g蔗糖, 并移取2ml NAA（0.1mg/ml）, 混合均匀；5）加热至沸腾, 加入8g琼脂并煮沸5min, 其间不断搅拌使之充分溶解；6）冷却至50±5℃时, 调pH至5.4—5.6。
分装于培养瓶内, 33.3ml/瓶。
注意事项:①溶解香蕉蒸馏水尽量多, 以保证香蕉各种成分完全溶解；②各种母液混合时, 要按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ顺序；③煮沸时, 小心溶液溢出；④分装时不要污染培养瓶瓶口。
灭菌：1）检查灭菌锅水位、电源、排气阀、排气管、安全阀以及压力表, 保证灭菌锅各指标和功能正常, 以防事故发生；2）把带灭菌培养基装入锅内, 盖上锅盖, 对称而均匀地扭紧螺丝；3）打开电源和排气阀, 调节电压至220V；4）待排气阀排除水蒸气30s—1min后, 关闭排气阀；5）当温度上升到121℃后, 调节电压至135V, 保持20min；6）关闭电源, 使之自动降温至0℃。
10min后, 打开排气阀和锅盖；7）5—10min后, 取出培养基放于实验台上冷却, 待用。
铁皮石斛组织培养课件
根据培养的材料和目的，组织培养可以分为胚胎培养、 愈伤组织培养、器官培养和细胞培养等类型。
组织培养技术的发展历程
01 19世纪中期
植物组织培养的萌芽期，科学家开始尝试将植物 组织放在人工控制的条件下进行培养。
02 20世纪初
植物组织培养技术的初步形成，科学家发现植物 细胞具有全能性，能够发育成完整的植株。
开花时，铁皮石斛会形成黄绿色的花朵，并散发 03 出淡淡的香气。
铁皮石斛的生长环境
铁皮石斛主要生长在温暖湿润的环境中，如热带 01
雨林、季雨林等。
它需要附生于树木或岩石上，并需要较高的空气 02
湿度和适度的光照。
02 适宜的生长温度为15-25℃，且需要保持一定的 空气流通，以斛具有滋阴清热、生津止渴的功效，常用 于治疗热病伤津、口渴咽干等症状。
它还具有益胃生津、滋阴清热的功效，对于胃脘 痛、上腹胀痛等症状也有一定的疗效。
此外，铁皮石斛还具有一定的抗肿瘤、抗氧化、 增强免疫力等作用。
组织培养技术概述
组织培养的定义与分类
组织培养的定义
组织培养是一种在人工控制的条件下，将植物的细胞、 组织或器官进行离体培养，使其生长、发育的技术。
02
快速繁殖
通过组织培养技术可以实现铁皮石斛的快速繁殖， 提高种苗质量和产量，满足市场需求。
铁皮石斛组织培养的实践操 作
实验材料与设备
实验材料
铁皮石斛幼苗、培养基质（如珍珠岩、 蛭石等）、活性炭、植物生长调节剂 等。
实验设备
超净工作台、培养皿、玻璃瓶、烧杯、 量筒、天平、灭菌锅、PH试纸等。
实验操作流程
培养条件
将接种好的培养皿放入恒温培养箱 中，设定适宜的温度和光照时间， 保持一定的湿度。
铁皮石斛组织培养实验流程
铁皮石斛组织培养实验流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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铁皮石斛组织培养培训材料
技术要求高、成本较高、可能存在变 异和遗传稳定性问题等。
02
铁皮石斛组织培养基本流程
外植体的选择与处理
外植体的选择
选择健康、无病虫害的铁皮石斛植株作为外植体，如茎尖、 叶片等。
外植体的处理
对外植体进行清洗、消毒、切割等处理，以去除表面污垢和 微生物。
无菌操作技术
01
02
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无菌操作环境
在无菌操作室内进行组织 培养操作，确保环境清洁 无菌。
光照与温度控制
总结词
光照和温度是影响铁皮石斛组织培养的重要环境因素。
详细描述
适宜的光照强度、光照时间和温度能够促进铁皮石斛组织的生长和分化。在不同的生长阶段，需要调整光照和温 度条件，以满足铁皮石斛生长的需求。
激素的种类与浓度
总结词
激素的种类和浓度是调控铁皮石斛组织培养的关键因素。
详细描述
在铁皮石斛组织培养过程中，需要添加适量的激素，如生长素和细胞分裂素，以促进细胞的分裂和生 长。同时，激素的种类和浓度也需要根据实验需求进行选择和调整，以达到最佳的组培效果。
4. 将接种好的培养皿 放置在适宜的温度和 湿度条件下进行培养。
实验操作步骤与注意事项
注意事项 1. 在操作过程中要保持无菌环境，避免交叉污染。
2. 取材时要选择健康、无病虫害的植株，并确保取下的组织健康无病。
实验操作步骤与注意事项
01
3. 培养基的成分和pH值要适宜， 以保证组织的正常生长。
02
病虫害防治
总结词
病虫害是影响铁皮石斛组织培养的重要 因素，防治病虫害是组培过程中的重要 环节。
VS
详细描述
在铁皮石斛组织培养过程中，可能会受到 细菌、真菌等病原体的侵害，以及害虫的 侵害。为了防治病虫害，需要定期检查组 培苗的生长情况，及时发现并处理病虫害 ，同时采取生物、化学、物理等多种防治 方法进行综合防治。
铁皮石斛组培技术介绍
铁皮石斛组培技术介绍铁皮石斛的组织培养技术，大都以茎段、根尖、原球茎、茎尖和种胚等为外植体。
除了固体培养外，近几年来还出现了铁皮石斛液体悬浮培养。
一、铁皮石斛组培技术（1）茎段培养1.培养条件2.取材与消毒从铁皮石斛植株上切下长2～5cm的幼嫩茎段，在流水下冲洗，用刷子蘸少许洗衣粉水溶液轻轻刷洗，并经自来水充分洗净。
在超净工作台上将茎段放置在75%的酒精中消毒30s后，再用0.1%的HgClz 水溶液浸泡8～10min，无菌水冲洗5～6次。
3.诱导培养用解剖刀将铁皮石斛的幼嫩茎段切下，接种在诱导培养基①中进行培养。
15～20天后，外植体开始萌动，茎段膨大，切面及顶部组织形成疏松组织。
继续培养20天后，转入培养基②中，切面及顶部膨大组织的表面形成凹凸不平的颗粒物，随着培养时间的延长，颗粒物长大形成直径1～2mm的类原球茎颗粒物。
4.增殖培养将诱导形成的原球茎转入到增殖培养基中，原球茎增殖速度很快，增殖倍数可达3～4倍，同时部分原球茎开始分化出芽点并长出1～2片小叶，原球茎的增殖与芽分化同时进行。
5.生根培养待增殖芽数量较多时，将高1～2cm、带有2～3片叶的小芽切下转入生根培养基上进行生根培养。
培养30天左右，基部开始出现2～3条约1cm长的白色根，随后逐渐伸长，生根率达到90%以上。
6.出瓶苗的过渡管理当苗高3cm以上、具3～4片叶时，便可出瓶移栽。
移栽前，将生根瓶苗打开瓶盖，移至常温下炼苗7天，然后将瓶苗取出，洗去附着在根部的培养基，用0.01%的高锰酸钾溶液浸泡8～10min，栽种于已灭菌的碎树皮基质中(移栽前浇透水)，放置在遮光度50%～60%、湿度达80%以上的温室中，2 个月后，成活率达90%以上。
（2）种子培养(胚培养)取人工授粉的铁皮石斛果实，用75%的酒精表面消毒，30秒后再用0.1%升汞消毒8分钟，无菌水冲洗4—5次。
在无菌操作下，把果实切成0.1mm方块，接种到培养基上，每瓶3—5块。
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铁皮石斛的组织培养技术路线
外植体
培养基
丛生芽
生根发育
完整植株
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初代培养基的设计 诱导培养基
MS+BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖3%+琼脂6.8%【pH值5.2~5.6】
MS母液： I-V50ml,5ml,5ml,5ml 5ml。 激素母液：
BA10ml,NAA5ml
取MS母液： IV25ml,5ml,5ml,5ml, 5ml; 激素母液： NAA2~5ml
蔗糖：30g 琼脂：6.8g 香蕉汁：200ml 活性炭：20g
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生根培养将丛生芽无菌操作切下单株放在 生根培养基中于适宜条件下培养，约1~2 周后即生根，以长成完整植株。
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用洗洁剂 清洗后置 流水下冲 20~30 min。
Text 3
在超净工作台上 用75%的酒精消 30s0.1%HgCl2 灭菌5min后，用 无菌水冲洗5~6 次，放入垫有干 无菌滤纸的培养 皿中，以吸去多 余水分，茎段两 端各切 0.2~0.3cm。
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接种实验
一、接种准备工作 1、超净工作台开紫外灯照射10-20min送风 2、外植体消毒（继代培养采用已建立的无菌培养
铁皮石斛 组织培养
B1小组准备素材
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铁皮石斛的组织培养 铁皮石斛，为兰科多年生附生草本植物。生
于海拔达1600米的山地半阴湿的岩石上， 喜温暖湿润气候和半阴半阳的环境，不耐寒。 一般均能耐－5℃的低温。石斛可分为黄草、 金钗、马鞭等数十种，铁皮石斛为石斛之极 品，它因表皮呈铁绿色而得名。
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增殖培养将建立的无菌系中的小苗转入增殖培养基中进行增殖 培养。增殖培养基以MS为基本培养基，添加不同浓度的生长 调节剂BA、NAA、IAA、IBA及土豆汁和香蕉汁等附加物。
IBA
BA
NAA
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土豆汁
香蕉汁 IAA
生根培养基的设计 生根培养基
1/2MS+NAA0.2~0.5mg/L+香蕉汁20%+活性炭2.0%【pH值5.2~5.6】
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外植体的选择
优选1年生铁皮石斛植株上生长健壮的茎段
1 接种小芽苗多易于在苗基部形成丛生芽。 2 苗的高度为1～2cm时,丛生芽增殖倍数最高数。 3 生长发育健壮苗优先
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外植体的处理
Text 1
摘去叶片和 膜质叶鞘， 剪成约2cm 长带节的小 段。
Text 2
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参考文献
• [1]郑宽瑜,邓君浪,赵培快繁技术体系研究[J].云南 农业科技,2009,(S2):57-59。
• [2]周根余,谢薇,程磊.影响铁皮石斛原球茎生长的 若干因素[J].江西科学,1999,17(4):231-235.
• [3]叶纪沟.铁皮石斛试管苗的人工栽培研究[J].中 国药业,2001,10(1):53。
蔗糖：30g继代培养基的设计 增殖培养基
MS+BA0.5ml+NAA0.2+土豆汁10%~20% 【pH值5.2~5.6】
取MS母液： IV50ml,5ml,5ml,5ml, 5ml; 激素母液： BA5ml,NAA2ml
蔗糖：30g 琼脂：6.8g 土豆汁150ml
物作为材料） 3、工具消毒 二、接种操作 1、用消毒工具、器皿，切取铁皮石斛幼茎段2cm 2、接种环烧红，沾一下培养基 3、镊取茎段插于培养基中 4、封口、标记
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各时期的培养条件 • 茎段的诱导时间在5~11天之间 • 培养温度23~25℃，光照强度2000lx，光
照时间10h/d
• [4]李铭宗.铁皮石斛的生物学特性和人工栽培[J]. 福建热作科技,1999,24(1):29-31。
• [5]张明,夏鸿西,朱利泉,等.石斛组织培养研究进展 [J].中国中药杂志,2000,25(6):323-326。
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B1小组成员展示结束
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