解析中和法在微生物限度检查中的应用
氧氟沙星栓微生物限度检查方法探讨
【 摘 要 】 目的 建立氧氟沙星栓微生物限度检查方法并验证 。方法 采用低速离 心 、 薄膜过 滤中和法联合法
确立 的方法 该方法适合氧氟沙星栓的检查。
进行细菌计数测定 ， 采用培养基稀释法 进行 真菌计数测定 ， 采用薄膜过滤 中和法进行控制菌检查 。结果 可 以较好的溶解 样品 ， 使易于过滤 ， 降低冲洗量 ， 验证结果符合要求 。结论
物安全柜 （ 新加坡 Ｅ Ｃ Ｓ Ｏ公 司 ） 高 压灭 菌锅 （ 洋电气 公 司， ， 三
ＭＬ 一 ８ Ｓ３ ０型 ） ７ 。
１４ 样 品 ．
２ 方 法
氧 氟沙 星栓 ： 号 ：５ ８ １０ ０ ０ ，５ ８３ 生 产 批 ０ ０ ０ ，５ ８２ ００ ０ ；
道等部位 的急、 慢性 感染。氧氟 沙 星栓为 外用制 剂 ， 依据 《 中 国药典 ）０ ５年版要 求 ， 进行细 菌 、 菌和 酵母 菌计 数及控 ）０ ２ 应 霉
氧氟沙 星 （ｆ ｘｃ ） 第 ３代 喹诺 酮类 抗 生素 ， ｏｏａｉ 为 ｌ ｎ 为细菌 Ｄ Ａ螺旋酶抑制剂 ， Ｎ 对革 兰阴性菌 、 阳性菌和部分 厌氧菌均有 较强的抗菌作用 ， 临床用于因革 兰阴性菌所致的呼吸道、 咽喉 、 扁桃体 、 泌尿道 （ 包括前列腺 ） 皮肤及软组织 、 、 胆囊及 胆管 、 肠 １３ 仪器 ． 生化 培养箱 （ 广东 医疗器 械厂 ， Ｈ 一５ Ｌ Ｒ ２０型 ） 生 ，
制菌金 黄色葡萄球菌 、 铜绿假单胞菌检查。鉴于氧氟沙星具有 很强的广谱抗菌活性 ， 对其进行 微生物 限度 检查 时， 在 应首先 消除其抗菌活性 ， 并通 过实验验证 抗菌活性 去除 的是 否彻底 ，
ｍｅ ｔ Ｃｏ ｃｕ ｉ ｎ Ｔｈ ｔ ｏ ｓｓ ｉ ｂ ｅ ｆｒｍｉｒｏ ｇ ｎ ｓ ｌ ｔ ｅ ｔｏ ｆ ｘ ｃ ｎ ｓ ｐ ｏ ｉ ｒ ｓ ｎ． ｎ ｌｓ ｏ ｅ ｍｅｈ ｄ ｉ ｕ ｔ ｌ ｏ ｃ ｏ ｒ ａ ｉｍ ｉ ｓ ｆｏ ｏ ａ ｉ ｕ ｐ ｓｔｉ ． ａ ｍｉ ｔ ｌ ｏｅ
微生物限度检查法专家讲座
8．液体制剂检验量为10毫升。
9．膜剂除另有要求外，中药膜剂检验量为30～50cm2 ，化学膜 剂及生化药膜剂检验量为 100cm2 。
10．珍贵或微量包装供试品检验量能够酌减，除另有要求外， 口服固体制剂不低于3克，液体制剂采取原液者不得少于6毫升， 采取供试液者不得少于3毫升，外用药品不得少于5克 6
培养基加入滤器或取出滤膜，加入增菌培养基中，能够用加入滤 器中供试品量来控制检验量，也能够把滤膜取出来剪成2～4片， 使每片相当于供试品1g或1ml，放入增菌培养基中，作控制菌检 验。
微生物限度检查法
第16页
本法适合用于水溶性抑菌成份中、西药品和滴眼剂等制剂“灭活” 处理。安放滤膜时，注意滤膜与滤器应密合，预防滤膜破损、漏 液。本法所用滤膜孔径0.45um±0.02um。
微生物限度检查法
第12页
3．非水溶性供试品
①软膏剂、乳化剂 称取供试品5g(5ml)，加入含已灭菌熔化 并保温45℃左右司盘－80 50g、单硬脂酸甘油酯 3g 、聚山梨酯 －80 10g混合物烧杯中，用无菌玻棒搅拌成团后，慢慢加入45℃ 左右0.9％无菌氯化钠溶液约80ml ，（实际测可能是85ml），边 加边搅拌，使供试品充分乳化，作为供试液（1：20）。
⑧ 胶剂 （如阿胶） 取胶剂若干，捣碎，称取10g ，再用研钵研 细，转入250ml锥形瓶内，加入稀释剂100ml，置45℃±1℃水浴 中，振摇使溶，即为
4．含抑菌成份供试品 （仅限检验控制菌时用）
凡含防腐剂或抑菌成份且影响检验（供试品按常规检验法，加入 要求量对照菌，不能检出时）供试品，可依据供试品性质，控制 菌特征及检验条件等按以下方法之一或两种以上方法联合应用处 理后，依法检验。同时做阳性和阴性对照。
中和剂对消毒剂微生物学检查的影响
１ ２ ３ 培 养 基 营 养 琼 脂 培 养 基 由 中 国 药 品 生 物 制 品 检 定 ．．
所提供。
２ 实 验 方 法
对 ５ 医 院 配 制 的 常 用 消 毒 剂 进 行 了 活 菌 回 收 率 比较 实 验 ， 种 检 验 结果 明显 高 于我 国药 典规 定使 用 的稀 释剂 。
在 供 试 品 溶 液 中 加 入 相 应 的 中 和 剂 作 为 稀 释 剂 对 提 高 医 院 配 制 消 毒 剂 中 微 生 物 的 检 出 率 是 至 关 重 要 的 。 文 使 用 加 本 入 表 面 活 性 剂 吐 温 ８ 、 磷 脂 配 制 的 中 和 剂 作 为 稀 释 剂 与 中 Ｏ卵 国 药 典 ２ ０ 年 版 规 定 使 用 的 ０ ９ 生 理 盐 水 和 磷 酸 盐 缓 冲 液 ００ ．％
先 将 消 毒 剂 １ ０ 与 中 和 剂 溶 液 ９ ０ 混 合 ， 成 中 和 产 ． ｍｌ ． ｍｌ 制 物 溶 液 ， 按 表 １ 组 进 行 。 后 ， 注 平 板 置 ３ ℃ 培 养 ４ ｈ 计 再 分 然 倾 ７ ８， 数 菌 落 数 ， 稀 释 倍 数 计 算 出 回 收 菌 数 （ｆ／ ） 按 ｃｕ ｍ１ 。
１１ ％ 、．５ 。４ 毒 液 、． 碘酊 用 ０ ７／ 卵 磷 脂 ＋ ２ ． ６ ０ ７ ８ 消 ０２ ．ｇＬ
消毒学 杂志 ，９５ １ （）７． １ ９ ， ２ ２ ：１
２ 林 锦 炎 ， 朝 森 ． 温８ 对硫 代硫 酸 钠 中和 消 毒剂 效 果 的影 响 ． 袁 吐 ｏ 中
国消 毒 学 杂 志 ， ９ ５ １ （ ） ２ ３ １ ９ ， ２ ４ ：３ ．
中 和 剂 对 消 毒 剂 微 生 物 学 检 查 的 影 响
中和试验及应用(经典)
中和试验机体受到病毒感染后，体内产生特异性中和抗体，并与相应的病毒粒子呈现特异性结合，因而阻止病毒对敏感细胞的吸附，或抑制其侵入，使病毒失去感染能力。
中和试验 (Neutralization Test)是以测定病毒的感染力为基础，以比较病毒受免疫血清中和后的残存感染力为依据，来判定免疫血清中和病毒的能力。
中和试验常用的有两种方法：一种是固定病毒量与等量系列倍比稀释的血清混合，另一种是固定血清用量与等量系列对数稀释(即十倍递次稀释)的病毒混合；然后把血清－病毒混合物置适当的条件下感作一定时间后，接种于敏感细胞、鸡胚或动物，测定血清阻止病毒感染宿主的能力及其效价。
如果接种血清病毒混合物的宿主与对照(指仅接种病毒的宿主)一样地出现病变或死亡，说明血清中没有相应的中和抗体。
中和反应不仅能定性而且能定量，故中和试验可应用于1.病毒株的种型鉴定：中和试验具有较高的特异性，利用同一病毒的不同型的毒株或不同型标准血清，即可测知相应血清或病毒的型，所以，中和试验不但可以定属而且可以定型。
2.测定血清抗体效价：中和抗体出现于病毒感染的较早期，在体内的维持时间较长。
动物体内中和抗体水平的高低，可显示动物抵抗病毒的能力。
3.分析病毒的抗原性。
毒素和抗毒素亦可进行中和试验，其方法与病毒中和试验基本相同。
用组织细胞进行中和试验，有常量法和微量法两种，因微量法简便，结果易于判定，适于作大批量试验，所以近来得到了广泛的应用。
(一) 定血清－稀释病毒法(病毒中和试验)1.病毒毒价的测定毒价单位：衡量病毒毒价(毒力)的单位过去多用最小致死量(MLD)，即经规定的途径，以不同的剂量接种试验动物，在一定时间内能致全组试验动物死亡的最小剂量。
但由于剂量的递增与死亡率递增不呈线性关系，在越接近100％死亡时，对剂量的递增越不敏感。
而一般在死亡率越接近50％时，对剂量的变化越敏感，故现多改用半数致死量(LD50)作为毒价测定单位，即经规定的途径，以不同的剂量接种试验动物，在一定时间内能致半数试验动物死亡的剂量。
微生物限度(无菌)检查讲义.rtf
《中国药典》2005年版微生物限度检查的方法学验证微生物限度检查的范围根据药品使用要求,把药品化为两大类:(1) 规定灭菌药品:(2) 非规定灭菌药品:在非灭菌的各种制剂中,对每克或每毫升的药品按剂型或品种不同规定(1)染菌量检查:包括细菌数,霉菌数及酵母菌数测定,以检查这几类微生物对药品的污染程度.(2) 控制菌检查:包括大肠埃希菌,大肠菌群，沙门菌,金黄色葡萄球菌及铜绿假单孢菌,生孢羧菌及白色念珠菌.药品微生物限度检验中的困难,最根本的原因在于检验对象本身的特殊性.(1) 不确定性:(2) 分布的不均匀性:(3)活体特征:药典中以活的微生物作为检验对象也是独特特性.验证的目的确认所采用的方法适合于供试品的微生物限度检查,即确认供试品在该检验量、该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性以已被充分消除到可以忽略不计。
保证检验结果的准确、可靠及检验方法的完整性。
验证的类型（1）建立药品的微生物限度检查法时。
（2）修订的检验方法。
（3）供试品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时。
（4）定期的验证。
（5）同一产品不同批次、不同企业生产的同一产品。
当建立药品的微生物限度检查方法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数的方法学验证，以确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌及酵母菌数的测定。
验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法及下列要求进行，对各试验菌的回收率逐一进行验证。
微生物限度检查样品（1）首先应是合格的样品。
（2）本底微生物太多可以先灭活，但不应因此影响药效。
供试液的制备制剂形式多样，决定前处理各异1.液体供试品取供试品溶液10ml,加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,混匀作为1:10的供试液.油剂可加入适量的无菌聚山梨酯80使供试品分散均匀.水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液.2.固体、半固体或粘稠性供试品取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,混匀作为1:10的供试液.必要时加入适量的无菌聚山梨酯80，并置水浴中适当加温使供试品分散均匀.增订：3.需要特殊供试液制备方法的供试品（1）非水溶性供试品（2）非水溶性膜剂供试品二部未变动，化学药膜剂取100cm2，剪碎，加100ml pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，浸泡，振摇，作供试液。
中和法在微生物限度检查中的应用
Ｃｏ ｎ ｃ ｌ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ Ｎｅ ｕ ｔ ｒ ｌｉ ａ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｓ ｗ ｉ ｄ ｅ ｌ ｙ ｕ ｓ ｅ ｄ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｂ ｉ ａ ｌ ｌ ｉ ｍｉ ｔ ． ｏ ｂ ｖ ｉ ｏ ｕ ｓ ｌ ｙ ｉ ｎ ｈ ｉ ｂ ｉ ｔ ｉ ｎ ｇ ｔ ｈ ｅ ａ ｎ ｔ ｉ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｌ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ
ｄ ｒ ｕ ｇ ｓ ， ｏ ｂ ｖ ｉ ｏ ｕ ｓ ｌ ｙ ｉ ｎ ｃ ｒ ｅ ａ ｓ ｉ ｎ ｇ ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｃ ｏ ｖ ｅ ｒ ｙ ｒ ａ ｔ ｅ ｏ ｆ ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｂ ｉ ｌ ａ ａ ｎ ｄ ｓ ｉ ｍｐ ｌ ｉ ｆ ｙ ｉ ｎ ｇ ｏ ｐ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ．
【 Ｋｅ ｙ ｗｏ ｒ ｄ ｓ 】 Ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｂ ｉ ｌ ａ ｌ ｉ ｍ ｉ ｔ ｔ ｅ ｓ ｔ ； Ｎ ｅ ｕ ｔ ｒ ａ ｌ ｉ ｚ ｅ ｒ
在做药物 的微生物 限度 方法 学验证时 ， 一般首先采 用常 规法、稀释法验证 ， 当药物有一 定抑菌性 的时候 ， 经 常采 用
【 摘要 】 目的 为有抑菌性的药物提供中和剂 ， 建立有效的微生物限度检验方法。方法 通过葡
萄糖酸氯 己定软膏 ， 盐 酸多塞平乳膏和盐酸二 甲双胍控释 片三种 药物 为例 ， 说 明如何采用 中和法进行微
生物限度方法学验证。结果 中和荆的合理运用 ， 可更好满足微生物限度试验的要求。结论 中和法在
微生物限度检查中的广泛应用 ， 可明显降低抑菌性药物的抑茵能力 ， 提高菌的回收率 ， 简化试验操作。
【 关键词 】 微生物限度检查 ； 中和剂
Ａｐ ｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｎｅ ｕ ｔ ｒ ａ ｌ ｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｂ ｉ ａ ｌ ｌ ｉ ｍｉ ｔ ｔ ｅ ｓ ｔ ｚ ＨＡ ｏ Ｌ ｉ － ｙ ｕ ａ ｎ ｚ ＨＡＮＧ Ｘｉ ｎ ｇ－ ｚ ｈ ｅ ． ｕＵ Ｙ ｉ ｎ ｇ— ｈ ｕ ｉ
中和稀释法在食品微生物检验中的应用探讨
中和稀释法在食品微生物检验中的应用探讨中和稀释法在食品微生物检验中的应用探讨摘要：中和稀释法是一种常用的微生物计数方法。
本文介绍了中和稀释法的原理、方法、注意事项以及在食品微生物检验中的应用，分析了该方法的优缺点及应用前景，旨在提高食品微生物检验的准确性和可靠性。
关键词：中和稀释法、微生物计数、食品安全、检测方法一、中和稀释法的原理与方法中和稀释法是一种通过连续稀释和接种微生物菌液来进行微生物计数的方法。
该方法的原理基于菌落形成单位(CFU)，即每个菌落表示1 个细胞形成的菌群。
通过中和稀释法可以得出样品中微生物的密度。
中和稀释法的方法如下：1.准备0.9%生理盐水或其他适宜的缓冲液。
2.准备一种具备重要生长条件的富含营养因子的培养基，使得微生物菌落可以形成。
3.通过称重或体积测量等方式，将测试样品加到称量瓶或试管中，用缓冲液配制样品稀释液。
4.对第一级瓶进行稀释处理，如1：10，按比例添加缓冲液。
5.从刚制好的第一级液体中，取出1ml 加入到第二级瓶中溶解，并稀释。
6.具备上述条件，在第二级瓶重复步骤5，直至取到合适数量的菌落。
7.针对每个稀释级别，将溶液接种到富含营养因子的培养基中，并放置在特定的环境下使其发育至菌落能够计数的大小。
8.按照菌落数量共推算出样品中微生物的数量，并以CFU/g、CFU/ml 等单位出具分析报告。
二、中和稀释法在食品微生物检验中的应用中和稀释法是食品检测中常用的微生物计数方法之一。
它可以将液态或可分散食品测定中的微生物数目计算出来。
特别是在检测微生物水平的营养液中及微生物分布不均匀的食品甚至包装材料中十分常见。
它可以通过菌落形成单位，得出样品中微生物的密度，并可以针对不同菌群进行检测。
但是，在使用中和稀释法时应注意以下几点：1.首先，要求检测时特别注重采样区域的均匀性，以避免不均衡样品导致进行不准确的检测。
2.除非液相小于10 ml，否则建议使用其他方法进行分析。
中和剂在牙膏和漱口水微生物检测及抗菌测试中的应用探讨及验证
本 部 分参 考 医 院 消 毒 卫 生 标 准 列 出 了 常 见 抗 菌剂 所 对应 的 中和剂 种类 （ 表 １ ） 。
表１ 常见 抗 菌 剂 所 对 应 的 中 和 剂
４ ． １ ． １ 菌种
金 黄色 葡 萄球 菌 （ Ａ Ｔ Ｃ Ｃ ６ ５ ３ ８ ） 或 大 肠埃 希 氏菌
和剂 。
过滤冲洗法是将与抗菌剂作用后 的微生物样本 加入一定量的稀释液中， 充分混匀 ， 通过稀释作用减
弱抗 菌 剂对 微 生 物 的 抑 制 或杀 灭 作 用 。之 后 ， 通 过 微孔 滤 膜过 滤 ， 将稀 释 液去 除 ， 继 续 向微 孔 滤膜 上加 入适 量 的稀 释液 将 残 留在微 生 物 的抗 菌 剂 去除 。此
浓度的中和剂中， 将样品中存 留的抗菌剂迅速中和 ，
不再 持 续抑 制或 杀灭 微 生物 。 化学 中和法 所使 用 的 中和剂 通 常需 要满 足 以下
要求 ： ① 中和剂能够有效 的中和样 品中的抗菌剂 ； ②
中和剂 的浓 度要 能 够 充 分 反 应 完 样 品 中 的抗 菌 剂 ，
口 腔 护 理 用 品 工 业
ＯＲＡＬ ＣＡＲＥ Ｉ ＮＤＵＳ ＴＲＹ
第 二 十 七 卷 第 五 册 ２ ０ １ ７年 １ Ｏ月
中和 剂 在 牙 膏 和 漱 口水 微 生物 检 测 及 抗 菌 测 试 中 的应 用探 讨 及 验 证
李 林 黄 丹虹
（ 广州薇美姿实业有 限公 司 广州 ５ １ ０ ６ ６ ５ ）
作 用 达 到设定 时 间 时 ， 取 适 量 样 品加 人 合 适 种 类 与
配方原料含有丰富的糖类 、 醇类等碳水化合物 ， 在生 产制造 、 运输 、 储存 及使用 过程 中有可能受到原料、 包 材 和环境 微 生 物 的污染 ， 引 发产 品变质 ， 当产 品被
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解析中和法在微生物限度检查中的应用
摘要：在做药物的微生物限度方法学验证时,一般首先采用常规法、稀释法验证,当药物有一定抑菌性的时候,经常采用薄膜过滤法。
中和法的使用,在中国药典中由于没有给出具体的方法,而且受到中和剂的选择、中和剂的使用量等因素的影响,不如薄膜过滤法更容易被采用。
但在实际工作中, 薄膜过滤法不仅操作繁琐而且易染菌,中和法因其自身的优势，也常常被使用，本文作者以3种药物为例,详细说明如何采用中和法进行微生物限度方法学验证，希望能够对大家有所帮助。
关键词：中和法；微生物限度检查；应用
前言：
中和法即在所用的稀释剂和培养基中加入一定量的中和剂和灭活剂,使其抑菌力得到消除的方法,在《中国药典》2010年版中,凡含汞、砷或防腐剂等具有抑菌作用的供试品可以选用此方法。
胡文红等［1］采用0.1mol/LMnSO4溶液作为中和剂来进行氟喹诺酮类药物的无菌及微生物限度检查。
张光华等［2］用3%聚山梨酯80%和0.3%蛋黄卵磷脂作为中和剂来进行化学药的微生物限度检查,可明显降低药品的抑菌性。
孙伟等［3］用β-环糊精作为中和剂来消除喹诺酮类抗生素药品抑菌活性,解决该类药品微生物限度检查方法建立困难问题。
在中华人民共和国国家标准GB/T24404-2009(即ISO21149:2006)化妆品中需氧嗜温性细菌的检测和记数法［4］中,详细列出了针对防腐剂抑菌活性的中和剂和漂洗剂,较《中国药典》2010年版二部［5］中关于中和剂的选择列表更为详细和全面。
1、材料
1.1样品
①葡萄糖酸氯己定软膏：规格：0.2%；②盐酸多塞平乳膏：规格：10g：0.5g；
③盐酸二甲双胍控释片：规格：0.5g。
1.2试验菌株培养基及试剂
本文所使用菌株均来源于中国药品生物制品检定所,培养基均来源于中国药品生物制品检定所,试剂均来源于国药集团化学集团试剂有限公司。
2、方法参考《中国药典》2010年版二部附录ⅪＪ。
3、结果
3.1葡萄糖酸氯己定软膏
葡萄糖酸氯己定是一种广谱的抑菌剂和杀菌剂,对革兰氏阴性菌,革兰氏阳性
菌及真菌均具有较强的抑制和杀菌作用。
在微生物限度检查时,常规法和培养基稀释都无法完全消除其抑菌作用,需选用一定的中和剂消除葡萄糖酸氯己定的抑菌作用才能进行检验。
研究人员制备的D/E中和培养基可有效的中和多种有抑菌成分物质的抑菌作用。
研究人员采用一定的中和剂对葡萄糖酸锌氯己定乳膏的抑菌作用进行中和,可以满足微生物限度检查回收率的要求。
由于本品为软膏剂,因此我们选择了聚山梨酯80和油酸山梨坦作为乳化剂和中和剂来对葡萄糖酸氯己定进行中和,通过对微生物限度检查法的验证,建立其微生物限度检查法。
3.1.1供试品制备
取供试品10g置无菌锥形瓶中,加10g聚山梨酯80和5g油酸山梨坦,缓慢搅拌,并加入45℃的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,制成1:10供试液。
3.1.2回收率结果
见表1。
由表1可见,稀释剂对照组回收率均大于70%,3批样品的试验组回收率均大于70%,符合《中国药典》2010年版二部附录ⅪＪ的要求,因此可以按此方法进行微生物限度检查。
3.1.3控制菌检查
本品对金黄色葡萄球菌仍具有较强的抑制作用,因此采用培养基稀释法进行金黄色葡萄球菌检查,结果见表2。
由表2可见,1:10供试液10ml加入到400ml 营养肉汤培养基中,增菌后依法检查,验证试验符合规定。
3.2盐酸多塞平乳膏
盐酸多塞平具有阻断H1和H2受体的作用,同时也是胆碱能受体和肾上腺素受体拮抗剂,用于慢性单纯性苔癣,局限性瘙痒症,恶急性、慢性湿疹及异位性皮炎引起的瘙痒。
3.2.1供试品制备
取本品10g,加10g吐温80,缓慢搅拌加入45℃的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,制成1:10供试液。
3.2.2回收率结果
本品按常规法进行检验,细菌的回收率达不到70%,特别对金黄色葡萄球菌抑菌能力更强,本品为乳膏剂,加入聚山梨酯80后,溶解更完全,因此加入10%聚山梨
酯80即作为乳化剂同时作为中和剂,回收率试验结果见表3。
由表3可见,3批样品的试验组回收率均大于70%,符合药典要求,因此可按此方法进行微生物限度检查。
3.3盐酸二甲双胍控释片
盐酸二甲双胍控释片用于治疗2型糖尿病和高胰岛素血症,其结构为1,1-二甲基双胍盐酸盐。
3.3.1供试品制备
①常规法；②培养基稀释法：0.2ml/皿；③中和法1:加入含0.3%卵磷脂的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液；④中和法2：加入含0.7%卵磷脂的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml；⑤中和法3：加入10g聚山梨酯80；⑥中和法4：加入含3%聚山梨酯80和0.3%卵磷脂的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液；
⑦中和法5：加入含3%聚山梨酯80、0.3%卵磷脂及0.1%盐酸组氨酸的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液。
3.3.2回收率结果
按上述7种方法对样品进行微生物限度验证试验,供试品对照组均无菌生长,回收率结果见表4。
由表4可见,本品的抑菌能力较强,常规法5种菌株均未见生长,培养基稀释法的细菌抑制能力仍较强。
本品为双胍类,在《中国药典》2010年版二部附录ⅪＪ中和法中,双胍类药品的中和剂为卵磷脂,因此我们考虑用0.3%和0.7%两个浓度的卵磷脂作为中和剂进行中和；同时考虑到聚山梨酯80的中和作用较强,因此也考察了10%聚山梨酯80的中和作用；在美国药典和欧洲药典普遍采用3%聚山梨酯80和0.3%卵磷脂联合使用,以及3%聚山梨酯80、0.3%卵磷脂和0.1%盐酸组氨酸联合使用,我们也同时进行了考察。
结果中和法1~3,5种菌株的回收率均未达到要求,中和法4的金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的回收率达不到要求,只有中和法5回收率均可达到要求,因此选择此方法进行微生物限度检查。
4、讨论
4.1聚山梨酯80为O/W型乳化剂,油酸山梨坦为反型乳化剂(W/O型),它们在与药物混合后,可将其包裹在内部,因此降低了与菌体的接触,因此可对药物的抑菌能力得到中和。
4.2对于乳膏剂和软膏剂,在溶解的时候可加入一定量的聚山梨酯80,不仅促进样品的溶解,而且对样品的中和效果较好,聚山梨酯80对于季胺类化合物、酚
类、苯胺、咪唑、醛类、双胍类均有一定的中和作用。
4.3当一种中和剂无法达到较好的中和效果的时候,可以考虑中和剂的联合使用,常用中和剂为3%聚山梨酯80和0.3%卵磷脂,在此基础上可再加入其它的中和剂进行联合应用,从盐酸二甲双胍控释片的微生物限度验证看,其联合应用的效果更好一些。
4.4在中华人民共和国国家标准GB/T24404-2009化妆品中需氧嗜温性细菌的检测和记数法中比较详细的介绍了中和剂的品种和浓度,因此可以参考样品的成分来选择一定的中和剂,有可能获得事半功倍的效果。
5、结束语
综上所述，如果我们选择合适的中和剂,药物的抑菌能力会大大降低,检验方法会大大简化,工作效率会大大提高。
因此当我们遇到有较强抑菌性的药物时,可尝试中和法来进行方法学验证试验。
参考文献：
［1］胡文红,程春雷,王德利.应用中和剂对氟喹诺酮类药物微生物学检查方法的影响.食品与药品,2011,13(11):417-420.
［2］张光华,余立.聚山梨酯80和卵磷脂在化学药微生物限度检查时的中和作用.药物分析杂志,2008,28(7):1127-1130.
［3］孙伟,刘文杰,崔颖,等.β-环糊精在喹诺酮类抗生素药品微生物限度检查方法建立中的应用.药物分析杂志,2013,33(1):18-21.
［4］中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局,中国国家标准化管理委员会.化妆品中需氧嗜温性细菌的检测和记数法.中国标准出版社,2009:30.。