嘌呤霉素说明书
巯嘌呤片说明书
1.较常见的为骨髓抑制：可有白细胞及血小板减少。 2.肝脏损害：可致胆汁郁积出现黄疸。 3.消化系统：恶心、呕吐、食欲减退、口腔炎、腹泻，但较少发生，可见于服药量过大的患者。 4.高尿酸血症：多见于白血病治疗初期，严重的可发生尿酸性肾病。 5.间质性肺炎及肺纤维化少见。
禁忌 :
已知对本品高度过敏的患者禁用。
注意事项 :
1.对诊断的干扰：白血病时有大量白血病细胞破坏，在服本品时则破坏更多，致使血液及尿中尿酸浓度明显增高，严重者可产生尿酸盐肾结石。 2.下列情况应慎用：骨髓已有显著的抑制现象，（白细胞减少或血小板显著降低）或出现相应的严重感染或明显的出血倾向；肝功能损害、胆道疾患者、有痛风病史、尿酸盐肾结石病史者；4～6周内已接受过细胞毒药物或放射治疗者。 3.用药期间应注意定期检查外周血象及肝、肾功能，每周应随访白细胞计数及分类、血小板计数、血红蛋白1～2次，对血细胞在短期内急骤下降者，应每日观察血象。
药物相互作用 :
1、与别嘌呤同时服用时，由于后者抑制了巯嘌呤的代谢，明显地增加巯嘌呤的效能与毒性。 2、本品与对肝细胞有毒性的药物同时服用时，有增加对肝细胞毒性的危险。 3、本品与其他对骨髓有抑制的抗肿瘤药物或放射治疗合并应用时，会增强巯嘌呤效应，因而必须考虑调节本品的剂量与疗程。
Hale Waihona Puke 药理毒理 :属于抑制嘌呤合成途径的细胞周期特异性药物，化学结构与次黄嘌呤相似，因而能竞争性地抑制次黄嘌呤的转变过程。本品进入体内，在细胞内必须由磷酸核糖转移酶转为6－巯基嘌呤核糖核苷酸后，方具有活性。其主要的作用环节有二：（1）通过负反馈作用抑制酰胺转移酶，因而阻止1－焦磷酸－5－磷酸核糖（PRPP）转为1－氨基－5－磷酸核糖（PRA）的过程，干扰了嘌呤核苷酸合成的起始阶段。（2）抑制复杂的嘌呤间的相互转变，即能抑制次黄嘌呤核苷酸转为腺嘌呤核苷酸及次黄嘌呤核苷酸转为黄嘌呤核苷酸、鸟嘌呤核苷酸的过程，同时本品还抑制辅酶I（NAD+）的合成，并减少了生物合成DNA所必需的脱氧三磷酸腺苷（dATP）及脱氧三磷酸鸟苷（dGTP），因而肿瘤细胞不能增殖，本品对处于S增殖周期的细胞较敏感，除能抑制细胞DNA的合成外，对细胞RNA的合成亦有轻度的抑制作用。用巯嘌呤治疗白血病常产生耐药现象，其原因可能是体内出现了突变的白血病细胞株，因而失去了将巯嘌呤变为巯嘌呤核糖核苷酸的能力。
细胞筛选一嘌呤霉素Word版
细胞筛选一嘌呤霉素(一) 确定最优筛选浓度当用于筛选特定细胞的嘌呤霉素合适浓度未知时，需进行滴定，或制定针对那种细胞的嘌呤霉素杀菌曲线。
一般而言，嘌呤霉素浓度范围在2-10微克/毫升时是足以杀灭大多数未转染的哺乳动物细胞系。
1. 培养待转染（而不是转染后）的细胞。
（筛选的目的是杀灭未转染的细胞）2. 取对数生长期的细胞（一般在铺满培养器皿底部的70%~80%时），用新鲜无抗无血清的培养基制成1.5×105 个/ml 的细胞悬液。
3. 向96孔培养板中加细胞悬液，每孔100微升（使每孔细胞数在1.5×104个），然后向每孔加新鲜无抗无血清的培养基适量，培养箱中静置培养过夜。
（这样做是为了保证在固定细胞密度下确定最佳G418药物筛选浓度。
） 4. 第二天用嘌呤霉素浓度分别为0, 2, 4, 6, 8, 10微克/毫升的新鲜无抗无血清培养基溶液替换各孔中的旧的培养基。
（每个浓度可用两个复孔，相当于每个浓度测定三次）。
（注意：对于多数细胞种类而言，过量的嘌呤霉素能引起许多非必需的表型的反应。
） 5. 每日检查细胞活力，根据细胞活力，每三天( 即每隔两天)更换含嘌呤霉素的新鲜无抗无血清培养基溶液一次。
如细胞生长过快，可以缩短换液时间（每隔一天）。
6. 在正常的实验操作规程时，一种细胞最优筛选浓度的确立时间随细胞的生长率和一般生存时间而定，大概需3到14天。
在所需时间之后，嘌呤霉素的导致所有细胞死亡的最小浓度就是应该用于该细胞和该实验的浓度。
最优浓度为在3-5天内杀死所有细胞的浓度。
(二) 转染细胞 1. 第一天：在60mm培养皿内种植细胞，细胞密度为能使第二天细胞融合能达到70%-80%的密度，CO2孵箱过夜培养。
2. 第二天：准备3ml无抗生素无血清培养基，加入Polybrene使其终浓度为8μg/ml。
将已经制备的病毒颗粒0.5 ml加至上述培养基，轻吹混匀。
去除60mm培养皿内的旧的培养基，加入含病毒培养基。
Puromycin aminonucleoside_抗生素嘌呤霉素的氨基核苷部分_58-60-6_Apexbio
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参考文献: [1] Grond J,μMuller EW,van Goor H,Weening JJ,Elema JD. Differences in puromycin aminonucleoside nephrosis in two rat strains. Kidney Int.1988 Feb;33(2):524-9. [2] Bertram JF,μMessina A,Ryan GB. In vitro effects of puromycin aminonucleoside on the ultrastructure of rat glomerular podocytes. Cell Tissue Res.1990 May;260(3):555-63.
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嘌呤霉素说明书
说明：蛋白质合成抑制剂。
抑制细菌、藻类原生物和哺乳动物细胞生长。
嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑链霉菌（Streptomyces alboniger）发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌，各种动物和昆虫细胞。
某种特殊情况下有效作用大肠杆菌。
作用机制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。
嘌呤霉素同A位点结合后，不会参与随后的任何反应，从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。
嘌呤霉素产生菌Streptomyces alboniger内发现的pac基因编码嘌呤霉素N-乙酰转移酶（PAC），赋予机体对嘌呤霉素产生抗性。
这一特性如今普遍应用于筛选特定携带pac基因质粒的哺乳动物稳定转染细胞株。
嘌呤霉素在细胞稳转株筛选中的普遍应用与慢病毒载体的特性有关，现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac基因。
在某些特定情况下，嘌呤霉素亦可以用来筛选转化携带pac基因质粒的大肠杆菌菌株。
溶解性：溶于水，参考浓度50mg/ml。
使用方法1.建议使用浓度哺乳动物细胞：1-10 μg/mL，最佳浓度需要杀灭曲线来确定；大肠杆菌：LB琼脂培养基筛选稳定转化pac基因的大肠杆菌，使用浓度为125μg/mL。
注：使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌稳转株需要精确的pH值调节，而且受宿主细胞本身的影响。
2.溶解方法用蒸馏水溶解嘌呤霉素配制成50 mg/ml的母液，经0.22 μm滤膜过滤除菌后分装于-20℃冻存；也可溶于甲醇，配制成10 mg/ml的储存液。
3. 嘌呤霉素杀灭曲线的确定（以shRNA转染或者慢病毒转导为例）嘌呤霉素有效筛选浓度跟细胞类型、生长状态、细胞密度、细胞代谢情况及细胞所处细胞周期位置等有关。
为了筛选到稳定表达的shRNA细胞株，确定杀死未转染/转导细胞的最低浓度嘌呤霉素至关重要。
建议初次做实验的客户一定要建立适合自身实验体系的杀死曲线（kill curve）。
慢病毒Cas9表达系统使用说明
慢病毒Cas9表达系统使用说明本说明书用于：¾构建Cas9蛋白表达细胞系¾在Cas9蛋白表达细胞系中敲除目的基因适用于以下产品货号货号pLV‐Cas9载体系列 CR2001，CR2002pLV‐Cas9‐Nick载体系列 CR2003，CR2004pGR载体系列 CR2011~CR2013pGR‐EGFP载体系列 CR2014~CR2016北京英茂盛业生物科技有限公司北京市昌平区沙河镇青年创业大厦B‐916Tel：010‐62495135Emai：order@Web site：目录1、产品简介 (2)1.1CRISPR/gRNA基因敲除原理 (2)1.2慢病毒Cas9表达系统特点 (2)2、Cas9表达慢病毒制备 (3)2.1试剂准备 (3)2.2简要实验流程 (4)2.3实验前准备 (4)2.4病毒制备步骤 (5)2.4 PEG纯化慢病毒 (6)3、筛选Cas9表达稳定细胞株 (7)3.1 试剂 (7)3.2 实验前准备 (7)3.3 筛选细胞系实验步骤 (8)3.4 Cas9表达细胞系检测 (9)4、用pTYNE载体对Cas9表达细胞系进行验证 (10)4.1验证Cas9蛋白表达细胞系 (10)4.2验证Cas9Nicknase蛋白表达细胞系 (11)5、pGR和pGR‐EGFP载体构建 (13)5.1 pGR和pGR‐EGFP载体图谱 (13)5.2 靶点设计 (13)5.3 pGR载体构建步骤 (14)附录1 用到的产品 (17)附录2 引物列表 (17)11、产品简介1.1CRISPR/gRNA基因敲除原理CRISPR (clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats)是一种来自细菌降解入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免疫机制。
在该机制中，Cas蛋白（CRISP‐associated protein）含有两个核酸酶结构域，可以分别切割两条DNA链。
嘌呤霉素盐酸盐58-58-2
14.3 运输危险类别
欧洲陆运危规 : 6.1
国际海运危规 : 6.1
国际空运危规 : 6.1
14.4 包裹组
欧洲陆运危规 : III
国际海运危规 : III
国际空运危规 : III
14.5 环境危害
欧洲陆运危规 :否
国际海运危规 海运污染物 :否
国际空运危规 : 否
14.6 对使用者的特别预防
无数据资料
6.2 环境预防措施
丢弃处理请参阅第160节
6.3 抑制和清除溢出物的方法和材料
避免接触皮肤和眼睛。避免形成粉尘和气溶胶。在有粉尘生成的地方,提供合适的排风设备。
7 安全操作与储存
7.1 安全操作的注意事项
无数据资料
7.2 安全储存的条件,包括任何不兼容性
无数据资料
7.3 特定用途
避免与皮肤、眼睛和衣服接触。休息前和操作本品后立即洗手。Aldrich-D60400页码4的7
4.2 最重要的症状和影响，急性的和滞后的
主要症状和影响，急性和迟发效应
4.3 及时的医疗处理和所需的特殊处理的说明和指示
如必要的话,戴自给式呼吸器去救火。
5 消防措施
5.1 灭火介质
火灾特征
https:// 1/4
化学品安全技术说明书
无数据资料 灭火方法及灭火剂 碳氧化物,氮氧化物,氯化氢气体,氢氰酸
吸入 可能引起眼睛刺激。 吞咽 无数据资料 皮肤 无数据资料 眼睛 无数据资料 接触后的征兆和症状 无数据资料 附加说明 无数据资料
https:// 3/4
化学品安全技术说明书
12 生态学资料
12.1 毒性
无数据资料
12.2 持久存留性和降解性
Polybrene (Hexadimethrine Bromide)说明书
Polybrene (Hexadimethrine Bromide)产品编号 产品名称包装 C0351-1ml Polybrene (Hexadimethrine Bromide) 10mg/ml×1mlC0351-50mgPolybrene (Hexadimethrine Bromide)50mg产品简介：Polybrene (聚凝胺)，也称Hexadimethrine Bromide (海美溴铵)，是一种聚溴化季铵阳离子，可显著提高慢病毒(lentivirus)、腺病毒(adenovirus)等病毒对细胞的感染效率。
本产品为进口分装。
Polybrene 的化学名称为1,5-Dimethyl-1,5-diazaundecamethylene polymethobromide ，分子式为(C 13H 30Br 2N 2)n ，CAS 号为28728-55-4，纯度≥94% (titration)。
Polybrene 可显著提高慢病毒、腺病毒等病毒对某些细胞的感染效率，其原理可能是通过中和细胞表面唾液酸与病毒颗粒之间的静电排斥从而促进吸附作用。
另外，Polybrene 也可用于哺乳动物细胞的转染、增强脂质体的转染效率。
带正电荷的Polybrene 也是一种抗肝素剂(肝素拮抗剂)，可中和红细胞表面负电荷而常用于制备非特异性凝集的红细胞；其抗凝特性也为体外测定肝素活性提供了一种准确、快速、简单的方法。
Polybrene 在蛋白测序中有一定的作用：少量的Polybrene 在自动测序分析中可明显增加多肽的降解；加入Polybrene 能提高PVDF 膜的亲水性，降低测序过程中多肽的机械损伤。
Polybrene 也可降低某些酶原的自发激活而用于酶动力学测定。
本产品为进口分装，其中10mg/ml 包装产品为超纯水配制并用0.22μm 滤膜除菌处理。
50mg 包装为粉末装。
包装清单：产品编号 产品名称包装 C0351-1ml Polybrene (Hexadimethrine Bromide) 10mg/ml×1mlC0351-50mgPolybrene (Hexadimethrine Bromide)50mg —说明书1份保存条件：4ºC 保存，至少一年有效；-20ºC 保存，至少二年有效。
Vero-EGFP 细胞说明书
重庆英茂盛业‐产品说明书Vero ‐EGFP 细胞说明书品名：Vero ‐EGFP 细胞 货号：CG008包装：1×10^6~1×10^7 1 支细胞株类型：稳定表达EGFP 荧光蛋白多克隆细胞株 细胞来源：Vero(非洲绿猴肾细胞） 表达基因：EGFP 抗性：嘌呤霉素培养基：DMEM (g i b c o 货号：12100-061)培养基+10%FBS消化液：0.25%胰蛋白酶，0.53mM EDTA 冻存液：50%胎牛血清，40%DMEM ，10%DMSO 培养条件：37℃，5% CO 2 产品简介：Vero-EGFP 细胞稳定表达EGFP 荧光蛋白，培养时无需抗生素维持。
可作为慢病毒感染实验中的对照细胞株使用。
细胞株构建方法：慢病毒载体pLV ‐EGFP ‐C （货号VL3215）包装慢病毒后感染Vero 细胞，用嘌呤霉素筛选得到EGFP 过表达多克隆细胞株。
收到细胞的处理：根据客户所在地及发货季节，我们可能采用干冰运输的冻存细胞或者常温运输的培养瓶细胞两种不同形式发货。
收到细胞后根据细胞运输类型采用下面两种方式操作。
干冰运输细胞：1、 37℃水浴融化细胞冻存液，间或摇动冻存管以加速融化过程。
待细胞冻存液完全融化后，用70%乙醇消毒细胞冻存管外壁。
2、 室温200g 离心 5 分钟收集细胞。
吸去上清。
3、 用1ml 培养基重悬细胞。
4、 将细胞接种到6mm 培养皿或25cm 培养瓶中，补加5ml培养基，37℃ 5%CO 2 培养。
常温运输细胞：1、 3000g 10min 室温离心收集细胞。
2、 用细胞培养基轻柔吹吸重悬细胞。
3、 接种到25cm 培养瓶或60mm 培养皿，补足培养基到5ml 。
4、 放到细胞培养箱，37℃ 5%CO2培养过夜。
5、 第二天观察细胞贴壁情况，换液去除未贴壁细胞，继续培养。
6、 细胞生长后及时消化传代，尽早冻存1~2支。
细胞传代：1、 传代前将细胞培养液、PBS 和胰蛋白酶温浴到37℃。
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说明：蛋白质合成抑制剂。
抑制细菌、藻类原生物和哺乳动物细胞生长。
嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑链霉菌（Streptomyces alboniger）发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌，各种动物和昆虫细胞。
某种特殊情况下有效作用大肠杆菌。
作用机制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。
嘌呤霉素同A位点结合后，不会参与随后的任何反应，从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。
嘌呤霉素产生菌Streptomyces alboniger内发现的pac基因编码嘌呤霉素N-乙酰转移酶（PAC），赋予机体对嘌呤霉素产生抗性。
这一特性如今普遍应用于筛选特定携带pac基因质粒的哺乳动物稳定转染细胞株。
嘌呤霉素在细胞稳转株筛选中的普遍应用与慢病毒载体的特性有关，现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac基因。
在某些特定情况下，嘌呤霉素亦可以用来筛选转化携带pac基因质粒的大肠杆菌菌株。
溶解性：溶于水，参考浓度50mg/ml。
使用方法
1.建议使用浓度
哺乳动物细胞：1-10 μg/mL，最佳浓度需要杀灭曲线来确定；
大肠杆菌：LB琼脂培养基筛选稳定转化pac基因的大肠杆菌，使用浓度为
125μg/mL。
注：使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌稳转株需要精确的pH值调节，而且受宿主细胞本身的影响。
2.溶解方法
用蒸馏水溶解嘌呤霉素配制成50 mg/ml的母液，经0.22 μm滤膜过滤除菌后分装于-20℃冻存；也可溶于甲醇，配制成10 mg/ml的储存液。
3. 嘌呤霉素杀灭曲线的确定（以shRNA转染或者慢病毒转导为例）
嘌呤霉素有效筛选浓度跟细胞类型、生长状态、细胞密度、细胞代谢情况及细胞所处细胞周期位置等有关。
为了筛选到稳定表达的shRNA细胞株，确定杀死未转染/转导细胞的最低浓度嘌呤霉素至关重要。
建议初次做实验的客户一定要建立适合自身实验体系的杀死曲线（kill curve）。
1）Day 1：24孔板内以5~8 x 104 cells/孔的密度铺板，铺足够量的孔以进行后续的梯度实验。
37℃细胞孵育过夜；
2）Day 2：a）准备筛选培养基：含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基（如
0-15μg/mL，至少5个梯度）；b）往孵育过夜后的细胞内更换新鲜配制的筛选培养基；之后37℃孵育细胞；
3）Day 4：更换新鲜的筛选培养基，并观察细胞存活率。
4）根据细胞的生长状态，约2-3天更换新鲜的筛选培养基；
5）每日监测细胞，观察存活细胞率，从而确定抗生素筛选开始4-6天内有效杀死非转染或者所有非转导细胞的药物最低浓度。
4. 哺乳动物稳定转染细胞株的筛选
等转染含有pac基因的质粒后，细胞在含有嘌呤霉素的培养基中增殖，以筛选出稳定转染子。
1）细胞转染48h后，将细胞（原样或稀释）置于含有适当浓度嘌呤霉素的新鲜培养基中培养。
注意：当细胞处于分裂活跃期时，抗生素作用最明显。
细胞过于密集，抗生素产生的效力会明显下降。
最好进行细胞分盘使其密度不超过25%。
2）每隔2-3天，移除和更换含有嘌呤霉素的培养基。
3）筛选7天后评估细胞形成的病灶。
病灶可能需要额外的一周或者更多时间，这依赖于宿主细胞系和转染筛选效率。
注意：每日进行细胞生长状态的观察。
嘌呤霉素的筛选至少需要48h，有效浓度嘌呤霉素的筛选周期一般在3-10天。
4）转移和放置5-10个抗性克隆到一个35mm的培养皿中，用选择培养基继续培养7天。
此次富集培养是为日后的细胞毒性实验做准备。
注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）嘌呤霉素为有毒化合物，操作时请小心拿放。