双波长光度法测定抗坏血酸的研究
关于紫外分光光度法在Vc药片中抗坏血酸含量测定的探究
根据待测溶液的稀释倍数和浓度 ， 求出待测样 品的含量
计算 公 式 ： ｐ ０ ＝Ｐ Ｘ× ｎ ｔ Ｏ ％： × １ ０ ０ ％ ｐ Ｏ 一 原始 样 品溶 液 的浓度 ， Ｈ ｇ ／ Ｉ Ｉ ｆ Ｌ ； ｐ ｘ — — 查 出的样 品溶 液 浓度 ， ¨ｇ ／ ｍＬ， ” —— 未 知溶 液 的稀释 倍数 。 ∞％一 维 生素 Ｃ 含量 ｒ ｎ— — 称取 的样 品质量 ＝． 讨论 与结 论 １ 讨论 １ ． １维生 素 Ｃ 的还原 能力 强 而易 被氧 化 ， 特别 是在 碱 性溶 液 中易 被氧化 。 另 外在碱 性溶 液或 强酸 性溶 液 中还能进 一步 发生 水解 。 因此 ， 选择 硫酸 溶液 使
精密 称取 Ｖ ｃ ｘ Ｊ － ， ＂ 照 品０ ． Ｏ ５ ｇ （ 经１ ０ ５ （ ＂ ３ 干燥 至恒 重 ） 放在 小烧 杯 中 ， 加硫 酸溶 液溶 解 ， 无 损 转移 到 ｌ ｏ ｏ ｍ￣ 量 瓶 中 ， 稀释 至 刻度 线 ， 摇 匀待 用 。 ２ ． １ ． ２ ｖｃ 标 准溶 液 的配 制 用刻 度 吸 管分 别移 取０ ． ５ ｍＬ 、 １ ． ０ ｍＬ ， １ ． ５ ｍＬ， ２ ． ０ ｍＬ、 ２． ５ ｍＬ 上 述 母 液于 ｌ Ｏ Ｏ ｍｔ ￣ 量瓶中， 加硫 酸 溶液 稀释 至刻 度 线 ， 摇匀 ， 避光， 待 测定 。
产 的ｖ ｃ 药片进 行 比较 。 ［ 关键 词］ 紫外 分光 光度 法 Ｖｃ 药 片 抗 坏血 酸含 量 中图分类 号 ： Ｓ １ ２ ３ 文献标 识码 ： Ａ
文 章编 号 ： １ ０ ０ ９ － ９ １ ４ Ｘ （ ２ ０ １ ５ ） ３ ４ － ０ ３ ９ ３ － ０ １
பைடு நூலகம்
原理 ： 由于 ｖ ｃ 的还原性 较强 ， 较容易 被溶液 和空气 中的氧 氧化 ， 在 碱性介 质 中这 种 氧化作 用更强 。 Ｖ ｃ 显弱酸 性 ， 在 酸 陛条件下 比较稳 定 ， 因此测定 就 酸 陛 介质 中进行 。 Ｖ ｃ 水 溶液 在 Ｐ Ｈ５ ＂ ６ 之 间稳定 ， 本法 选 择 用０ ． ０ ５ ｍｏ ｌ ／ Ｌ ￣ 酸溶 液 （ Ｐ Ｈ ＝５ ． ２ ） 作 溶剂 。 通 过实 验验 证 ， 在 酸性介 质 中 ， ｖｃ 在紫 外 区２ ４ ５ ． ０ ｉ ｒ ｍ处有 最 大吸收 ， 且 线性 良好 ， 可直接 采用紫 外分光 光度法 进行测 量 。 根据样 品溶液 的吸 光度， 由工作曲线查出Ｖ ｃ 的浓度 ， 即可求出ｖ ｃ 中抗坏血酸的含量。 实验 部分 １ 仪器 与试 剂 紫外可 见分 光光 度计 （ ＵＶ－ １ ８ ０ ０ Ｐ Ｃ －Ｄ Ｓ ） ， 容量 瓶 ， Ｖ ｃ Ｘ ￣ 照 品（ 分 析纯抗 坏 血酸 ） 及Ｖ ｃ 药片（ 规格 ： ５ ０ ｍｇ ） ， 硫酸溶液（ ０ ． Ｏ Ｏ ５ ｍｏ ｌ ＪＬ ， ｐ Ｈ＝ ５ ． ２ ） 。
双波长分光度法原理
双波长分光度法原理
双波长分光度法是一种在化学和生物分析中常用的分析方法，它利用物质在不同波长下的吸收性质来定量分析。
其原理如下：
1. 波长选择：选择两个不同的波长，一般一个波长用于测定待测物质的吸光度，另一个波长则用作基准。
这两个波长的选择应保证待测物质在其中一个波长下的吸光度较大而在另一个波长下的吸光度较小。
2. 校正基准吸光度：在基准波长下测量样品吸光度，并用其作为基准吸光度。
这一步骤旨在消除样品中其他物质的干扰。
3. 测定待测物质吸光度：在测定波长下测量样品吸光度，其绝对值与待测物质的浓度成正比。
将所得吸光度减去基准吸光度，可以消除其他物质的干扰，使吸光度仅与待测物质有关。
4. 构建标准曲线：在一系列已知浓度的标准溶液中重复上述步骤，得到一系列吸光度值。
将这些吸光度值与其对应的标准溶液浓度绘制在坐标图上，通过拟合曲线可以建立标准曲线。
5. 样品浓度测定：根据待测样品的吸光度，利用标准曲线可以得到对应的浓度。
维生素C制剂的鉴别、检查、含量测定
维生素C制剂的鉴别、杂质检查、含量测定2010级药学一班陶磊2010102135[摘要]维生素C (Vitamin C ，Ascorbic Acid)又叫L-抗坏血酸，是一种水溶性维生素，能够治疗坏血病并且具有酸性。
在化学结构上和糖类十分相似，有4种光学异构体，其中以L-构型右旋体生物活性最强。
ChP2010收载有维生素C原料及其片剂、泡腾片、颗粒剂、泡腾颗粒剂、注射剂和复方制剂维生素C银翘片〔1〕。
本文通过查阅文献资料总结了维生素C 原料药及各种剂型的鉴别，杂质检查，含量测定，并结合实验室实际情况确定实验方法。
[关键词]维生素C；鉴别；杂质检查；含量测定1仪器及试剂1.1仪器754型紫外可见分光光度计；高效液相色谱仪；电炉；250 mL碘量瓶；分析天平；电子天平；碱式滴定管；移液管等。
1.2试剂0.1 mol/L HNO3、硝酸银试液（0.1 mol/L AgNO3）、0.05 mol/L H2SO4、0.1 mol/L HCl、二氯靛酚钠、稀硝酸、草酸、氢氧化钠试液、氯化钙试液、盐酸、淀粉指示液、碘滴定液、0.05%亚甲蓝乙醇液、醋酸盐缓冲液（pH=3.5）、碱性酒石酸铜、标准铁溶液、标准铜溶液、醋酸铵、醋酸钠、醋酸、磷酸二氢钾, 均为分析纯; 甲醇、乙腈, 为色谱纯; 蒸馏水,维生素C 对照品等。
部分试剂的配制如下：（1）淀粉指示剂：称取0.5 g可溶性淀粉，加水5 mL搅拌均匀，缓缓加入100 mL沸水中，边加边搅拌，煮沸2 min，放冷，取上清液，应新鲜配制。
（2）稀醋酸：量取冰醋酸6 mL，加水定容至100 mL。
（3）碱性酒石酸铜：称取硫酸铜结晶6.93 g,加水溶解定容至100 mL；称取酒石酸碱钠34.6 g,氢氧化钠10 g,加水溶解定容至100 mL；用时等量混合。
2 方法2.1 鉴别2.1.1与硝酸银反应: 除维生素C钙、维生素C钠、维生素注射液、维生素C银翘片，其余制剂均可用此方法。
水果、药物或蔬菜中抗坏血酸的分光光度测定综合实验
水果、药物或蔬菜中抗坏血酸的分光光度测定综合实验1 实验项目的提出传统分析化学实验主要是利用书本提供的经典实验，属于验证型实验，且依附于理论课教学，其实验内容单一，缺乏相互的联系，实验过程基本上是“照方抓药”[1]，仅仅完成了实验步骤。
学生独立思考的空间少，不利于学生分析与解决问题的能力、综合实验能力、创新能力的培养。
众所周知，实验教学是人才培养的重要环节，也是高等院校培养学生创新能力的重要手段[2-4]。
由于综合性实验是至少涉及两个以上知识点的复杂实验，要求学生将不同的知识点与实验技能联系在一起，综合起来思考和分解实验确立的主题目标，分步实施或将各个实验环节有机地压缩整合在一起，从而得出实验结果，因此在培养学生实验技能、分析问题和解决问题的能力、创新思维能力方面起了非常重要的作用。
无机及分析化学实验是淮海工学院制药工程、材料化学、环境工程和化学工程与工艺等专业的专业基础课程，鉴于此，我们结合课题组教师的科研成果[5]，开发了涉及学科内容多、操作步骤多、知识面宽的综合性实验-水果、药物或蔬菜中抗坏血酸的分光光度测定综合实验。
2 实验项目的特点（1）本实验项目是一个工科无机及分析化学实验课程的基础实验项目，涉及到多项单学科的知识，如无机化学、分析化学、生物化学、药物学、有机化学及计算机基础。
（2）本实验项目应用的知识面宽：本实验涉及到抗坏血酸的性质，特别是还原特性的应用；氧化还原反应、配位显色反应、掩蔽剂的应用；涉及到探索测试条件对该显色反应的影响；本实验还涉及到样品溶液的制备、分离、分析化学实验的基本操作及分光光度计的使用。
（3）本实验项目应用的研究手段和方法广泛：本实验采用在室温条件下，利用定量过量的铁（III）与抗坏血酸发生氧化还原反应产生脱氢抗坏血酸和铁（II），新生的铁（II）在一定条件下能与邻菲罗啉形成红色配合物，采用可见分光光度法测定样品中的抗坏血酸含量。
3 实验项目简单介绍该实验利用定量过量的铁（III）与抗坏血酸发生氧化还原反应产生脱氢抗坏血酸和铁（II），新生的铁（II）在一定条件下能与邻菲罗啉形成红色配合物；剩余的铁（III）也能与邻菲罗啉形成有色配合物，该有色配合物在光作用下会发生光还原反应使其还原为铁（II）-邻菲罗啉配合物，需要选择合适的掩蔽剂消除铁（III）-邻菲罗啉配合物的光还原作用，并采用分光光度法测定样品中的抗坏血酸含量。
果蔬中抗坏血酸含量的测定[1]
![果蔬中抗坏血酸含量的测定[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/6c398128453610661ed9f427.png)
果蔬中抗坏血酸含量的测定摘要：分别采用２，６－二氯靛酚钠法、高锰酸钾滴定法和紫外分光光度法测定果蔬中抗坏血酸的含量，通过对比研究，优选出测定果蔬中抗坏血酸含量的方法为分光光度法。
关键词：抗坏血酸；果蔬；测定方法抗坏血酸（ａｓｃｏｒｂｉｃ aｃｉｄ，ａａ）也称ｖｃ，是维持人体健康的一种重要物质。
人体所需的ｖｃ大多数由水果、蔬菜及食品供给［１］。
人体长期缺乏抗坏血酸会得坏血病、关节疼痛、牙龈出血、发炎、感染、身体骨骼易损伤且不易愈合等疾病，而过量摄入ｖｃ不仅不能抵御疾病，而且还可能缩短寿命［２－４］。
这是因为ｖｃ能够破坏ｄｎａ自由基，这种破坏会导致早衰和癌症。
因此，对果蔬中抗坏血酸含量的定量分析具有重要的意义。
ｖｃ含量的测定方法很多。
一般有２，６－二氯靛酚钠法、高锰酸钾滴定法、紫外分光光度法、库仑分析法、原子分光光度法和碘量法等［５－１０］。
本研究采用２，６－二氯靛酚钠法、高锰酸钾滴定法和紫外分光光度法测定果蔬中抗坏血酸的含量，然后通过对比分析，确定测定果蔬中抗坏血酸含量的最优方法。
１材料与方法１．１仪器与试剂紫外分光光度计（美国安捷伦）；岛津分析天平（日本岛津）；ｓｈｂ－循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；微量移液器（上海安亨微量进样器厂）。
２．０％（ｗ／ｖ，下同）偏磷酸溶液；标准抗坏血酸；０．０２ｍｏｌ／ｌｅｄｔａ溶液；高锰酸钾；２，６－二氯靛酚钠。
以上试剂均为分析纯，实验用水为蒸馏水。
１．２样品的处理选取新鲜的西红柿和黄瓜洗净、擦干，称取约１００ｇ至研钵中，捣碎，加入１００ｍｌ２．０％偏磷酸浸提剂，迅速捣成匀浆，用纱布过滤至烧杯中，然后抽滤。
取滤液转移至１０００ｍｌ容量瓶中，用浸提剂定容，备用。
１．３样品的检测１．３．１紫分光光度法校准曲线的绘制：配制一系列抗坏血酸标准溶液，浓度分别为１．００、２．００、４．００、６．００、８．００、１０．００μｇ／ｍｌ。
以２％偏磷酸为参比，在波长２４３ｎｍ处用石英皿测定标准系列抗坏血酸溶液的吸光度。
盐酸氯丙嗪的含量测定
盐酸氯丙嗪的含量测定摘要：盐酸氯丙嗪是一种常用的强安定药，其注射剂处方中有维生素C等附加剂。
盐酸氯丙嗪在紫外光区有两个最大吸收峰，一个吸收峰在254nm 处，另一个在306nm 处，而维生素最大吸收峰在( 243±1) nm 处，在254nm 处有吸收，在306nm处无吸收。
目前该品种的含量和溶出度测定方法是紫外分光光度法，其还有报道含量测定采用毛细管电泳电化学法、光化学荧光法和分光光度法等。
关键词：盐酸氯丙嗪药物分析含量测定法正文：1. 高效液相色谱法高效液相色谱的方法灵敏、准确、简便，可作为盐酸氯丙嗪注射液的含量测定方法。
采用C18色谱柱；流动相：0.1 mol/L磷酸二氢钾(用磷酸调节pH 3.0)-乙腈(55∶45)；检测波长254 nm；流速：1.0ml/min；进样量：20μl；柱温：35℃。
结果显示，在该色谱条件下，盐酸氯丙嗪在4.99～49.91μl/ml范围内呈良好的线性关系，(r=0.9999，n=8)。
2. 分光光度法2.1 双波长分光光度法在单位时间内有两条波长不同的光束λ1和λ2交替照射同一个溶液，由检测器测出的吸收度是这两个波长下吸收度的差值△A。
△A与被测定物质的浓度成正比，这个方法称双波长分光光度法。
根据盐酸氯丙嗪与维生素C在紫外区的吸收，维生素C 干扰测定的特征，制定了双波长分光光度法测定盐酸氯丙嗦含量的方法。
样品无需特殊处理，操作简便，有实用性。
利用维生素C的等吸收波长，测定盐酸氯丙嗦注射液含量，可有效地消除维生素C 等附加剂的干扰，不需分离混合物即可直接测定主药含量，方法简便、快捷，结果可靠。
2.2 差示分光光度法用差示分光光度法测定盐酸氯丙嗪注射液的含量，能消除维生素C等附加剂的干扰，测定波长343nm，回收率100.37％，变异系数RSD=0.34％。
本法操作简单，结果准确。
2.3 电化学发光法基于盐酸氯丙嗪对联吡啶钌电化学发光的增敏作用,以石墨烯(Graphene)和Nafion复合膜修饰的玻碳电极(GCE)为工作电极,建立了一种直接测定盐酸氯丙嗪的电化学发光新方法。
双波长法实验报告
一、实验目的1. 理解双波长分光光度法的原理及其在物质定量分析中的应用。
2. 掌握双波长分光光度计的使用方法。
3. 通过实验，学会利用双波长法测定溶液中特定物质的含量。
二、实验原理双波长分光光度法是在传统分光光度法的基础上发展起来的，其原理基于差吸光度和等吸收波长。
该方法利用两个不同波长的光同时照射同一吸收池的溶液，通过检测器检测两个波长下的吸光度，并计算两者的差值。
根据朗伯-比尔定律，差吸光度与被测物质的浓度成正比，从而可以测定溶液中特定物质的含量。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：- 双波长分光光度计- 紫外-可见光分光光度计- 移液器- 容量瓶- 比色皿- 水浴锅- 待测溶液2. 试剂：- 标准溶液（已知浓度）- 待测溶液- 溶剂四、实验步骤1. 将待测溶液和标准溶液分别稀释至适当浓度。
2. 使用移液器将待测溶液和标准溶液分别转移至比色皿中。
3. 将比色皿放入双波长分光光度计的样品池中，设定合适的波长（测量波长和参比波长）。
4. 打开仪器，调整光路，使光束通过比色皿，检测两个波长下的吸光度。
5. 记录吸光度值，并计算差吸光度。
6. 以标准溶液的浓度为横坐标，差吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
7. 根据待测溶液的差吸光度值，从标准曲线上查得待测物质的浓度。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：根据实验数据，绘制标准曲线，计算相关系数R²，验证曲线的线性关系。
2. 待测物质含量测定：根据待测溶液的差吸光度值，从标准曲线上查得待测物质的浓度，并计算其相对误差。
六、实验讨论1. 双波长分光光度法具有以下优点：- 可以消除共存物质的干扰，提高测定结果的准确性和可靠性。
- 可以测定具有相似吸收峰的化合物，扩大了分光光度法的应用范围。
- 可以同时测定多个物质的含量，提高实验效率。
2. 影响双波长分光光度法测定结果的因素：- 仪器性能：仪器稳定性、波长准确性、吸光度测量精度等。
- 样品预处理：样品的浓度、pH值、溶剂等。
双波长分光光度法同时测定药物中维生素C和维生素E
双波长分光光度法同时测定药物中 维生素C和维生素E
二、实验原理
朗伯-比耳定律应用于双组分体系，可得到下列 联立方程式：
A k k 总 1
c C C
1
c E E
1
A k k 总 2
C cC
2
E cE
2
上下两个方程式分别为波长1、波长2下总吸
光度、与维生素C浓度及维生E浓度的关系式。 解上述方程即可求维生素C浓度及维生E浓度
无水乙醇稀释至刻度，摇匀。在波长1和2处
分别测定其吸光度。
双波长分光光度法同时测定药物中 维生素C和维生素E
五、操作要点和注意事项
1、正确使用参比溶液校正仪器。
2、每变换一次波长就需用参比溶液校正仪器。
双波长分光光度法同时测定药物中 维生素C和维生素E
六、数据处理
1、打印维生素C和维生素E的吸收光谱图，确定1 和2。
双波长分光光度法同时测定药物中 维生素C和维生素E
四、实验步骤
(二) 扫描吸收光谱
以无水乙醇为参比，取6.00ml的标准溶液，在 200～300nm范围扫描出维生素C和维生素E的
吸收光谱，并确定1和2，打印谱图。
(三) 建立工作曲线
以无水乙醇为参比，在波长1和2处分别测定步
骤1配制的8个标准溶液的吸光度。运用UNICO2000数据处理软件系统，分别建立并打印4条工 作曲线。
双波长分光光度法同时测定药物中 维生素C和维生素E
一、实验目的
1、掌握紫外—可见分光光度计的使用方法。
2、学习在紫外光谱区同时测定双组分体系— —
维生素C和维生素E的方法。
双波长分光光度法同时测定药物中 维生素C和维生素E
二、实验原理
抗坏血酸含量测定(分光光度计法)
植物生理学模块实验指导李玲主编科学出版社一、维生素C含量的测定方法(分光光度计法）【实验目的】学习利用分光光度计法测定维生素C（抗坏血酸）含量的原理和方法。
【实验原理】维生素C（抗坏血酸）具有较强的还原力，可以把铁离子（Fe3+）还原成亚铁离子（Fe2+），亚铁离子与红菲啰啉(4,7—二苯基—1,10-菲啰啉,BP)反应形成红色螯合物。
此化合物在波长534nm处具有强的吸收峰，且吸光度与反应液中抗坏血酸含量呈正相关.因此，可用比色法来测定抗坏血酸含量。
【器材与试剂】1.实验仪器与用具离心机、分光光度计、研钵、电子天平、容量瓶(50ml和100ml）、漏斗、滤纸、离心管、试管.2.实验试剂50g/L三氯乙酸（TCA）溶液：称取5g三氯乙酸(分析纯），用蒸馏水溶解，稀释至100ml.0.4%磷酸—乙醇溶液:量取0.47ml 85%磷酸溶液加入到无水乙醇中，并用无水乙醇稀释至100ml。
5g/L BP—乙醇溶液：称取0。
25g BP（纯度>97%）加入到无水乙醇中溶解,并用无水乙醇稀释至50ml.0.3g/L FeCl3—乙醇溶液:称取0.03g FeCl3加入到100ml无水乙醇中,摇匀。
100μg/ml 标准抗坏血酸溶液:称取10mg 抗坏血酸(应为洁白色，如变为黄色则不能用），用50g/L TCA 溶液溶解，定容至100ml，即1ml溶液含100μg抗坏血酸。
现用现配，保存于棕色瓶中，低温冷藏。
3.实验材料苹果、梨、香蕉、柑橘等果实。
【实验步骤】1.制作标准曲线取7支试管,编号，按表1加入各种溶液，将混合液置于30℃反应60min，然后以0号试管混合液为参照，于波长534nm处测定吸光度值.以抗坏血酸质量为横坐标，吸光度为纵坐标汇至标准曲线，求的回归方程。
表1 制作抗坏血酸标准曲线试剂含量项目试管号0123456抗坏血酸标准液/ml00。
10。
20。
30。
40。
50。
650g/L TCA/ml 2.0 1.9 1.8 1.7 1.6 1.5 1.4无水乙醇/ml 1.0 1.01。
抗坏血酸(维生素C)的测定
抗坏血酸（维生素C）的测定维生素C（vitaminC）又称为抗坏血酸，一般水果、蔬菜中维生素C的含量均较高，不同的水果、蔬菜品种，以及同一品种在不同栽培条件、不同成熟度等情况下，其维生素C的含量都有所不同。
测定维生素C含量，可以作为果蔬品质指标之一。
Ⅰ.滴定法一、原理维生素C具有很强的还原性，染料2，6-二氯酚靛酚（2，6-dichlorophenolindophenol）具有较强的氧化性，且在酸性溶液中呈红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色。
因此当用蓝色的碱性2，6-二氯酚靛酚溶液滴定含有抗坏血酸的草酸溶液时，其中的抗坏血酸可以将2，6-二氯酚靛酚还原成无色的还原型。
但当溶液中的抗坏血酸完全被氧化之后，则再滴2，6-二氯酚靛酚就会使溶液呈红色。
借此可以指示滴定终点，根据滴定用去的标准2，6-二氯酚靛酚溶液的量，可以计算出被测样品中抗坏血酸的含量二、材料、设备及试剂（一）材料：水果或蔬菜（二）设备：1.蒸发皿；2. 研钵一套；3. 移液管；4. 漏斗；5. 滤纸；6. 容量瓶；7. 微量滴定管。
（三）试剂：1. 2％草酸。
2. 2，6-二氯酚靛酚（NaOC6H4NC6H2OCL,M=290.09)将50mg2，6-二氯酚靛酚燃料溶于200ml 含有52mgNaHCO3的热水中，冷却后，稀释至250ml,装入棕色瓶内，放在冰箱里保存（因该染料性质不稳定，配制后超过一周必须重新配制）。
3.0.1mg/ml标准抗坏血酸溶液将50mg纯抗坏血酸溶于少量2%草酸溶液中，然后用2%草酸溶液定容至500ml(使用前临时配置）。
三、实验步骤（一）称取水果和蔬菜样品10g，放在研钵中加入2％草酸溶液约5ml研碎。
通过漏斗将研碎的样品倒入一只100ml的容量瓶中，研钵及杵用2％草酸冲洗，并将洗液一并倒入该容量瓶中，最后用2％草酸定容到刻度，过滤，滤液备用。
（二）空白滴定取2%草酸溶液10ml至蒸发皿中，以2，6二氯酚靛酚溶液滴定呈粉红色，并在30s内不褪色为终点，耗用的染色体积（ml）作为空白。