血凝操作规程

血凝项目标准操作规程

1．一般注意事项

1.1样品采集

●静脉抽血；

●穿刺要一针见血，避免淤血，气泡，溶血和组织液污染；

●如果使用真空采集管，以第二或第三管样品为佳；

如果从导管取样，则需用生理盐水冲洗管道，前面5ml血不能使用；

●采血后立即与抗凝剂充分混合，尽快送往实验室；

●采血量必须准确，如果少于计划量的90%，则不能使用；

●不能在静脉穿刺部位或附近部位采样。

1.2样品处理

●使用3.8%或3.2%(W/V)枸橼酸钠溶液作为抗凝剂；

●血样与抗凝剂的比例为9：1，如果血球压积﹤20%或﹥55%，则需调整这个比例，

方法是：0.00815X血液毫升数X(100-压积)=抗凝剂毫升数；

●血浆分离（如果不能立即测试，应尽快分离血浆）；

——采样后60分钟内进行；

——离心速度为1000g/10分钟

●盛血浆容器应加塞，防止PH改变；

●血浆应保存在2-8℃；

●血浆存放时间不能太久；

●低温保存的样品，要在37℃迅速解冻，减低凝血因子的消耗，并立即测试。

●与样品接触的所有器材（注射剂，样品管，检测杯等）必须采用塑料袋或硅化玻璃材质。

●全部器材均不得含去污剂或清洗液。

1.3影响测定结果的几种因素

●抗凝剂：草酸钠、EDTA、肝素不适于作抗凝剂；

●黄疸，脂血，重度溶血和冰冻血浆影响测定结果不准；

●使用纤溶药物，如双香豆素，链激酶，尿酶等可使凝固时间延长；

●超过治疗试剂量的肝素使凝固时间延长；

●FDP增加使凝固时间延长；

●某些药物，如口服避孕药，雌激素，天门冬酰胺酶，钠络酮等影响测试结果；

●样本采集和处理不当，都会使凝固时间缩短或延长；

●妊娠和急性炎症会影响某些测试结果。

1.4干粉试剂及血浆溶解

●保证干粉完全溶解；

●溶解时，轻轻转动容器，避免剧烈震荡；

●确认溶剂种类，一般溶解液包括：蒸馏水/生理盐水/缓冲液/厂家特定溶解液，按说明书选择；

复溶后，室温放置5-10分钟后方可使用

二．具体项目操作注意事项

1.PT凝血酶原时间

I. 概述

凝血酶原时间(Prothrombin Time)测定用来作为外科手术前对某一凝血因子的评价，以及用于监视抗凝治疗，当进行凝血酶原时间测试时，对于正常结果需有2、3级所有因子。因此，该实验对因子I、II、V、VII和X的量减少或不足是很灵敏的。

除了因子IX，凝血酶原时间测试对于其它所有因子缺乏是灵敏的，它已被证明在监视抗凝治疗是有效手段。

凝血酶原时间测定也用于因子II、V、VII和X的定量分析(因子分析)。

II.试剂

干粉试剂需复溶，液体试剂直接使用，使用前轻轻混合，可使用一些备件如搅拌。使用期间保持适当的悬浮液状态。如质控结果在范围之外，或试剂颜色发生变化，可能表明产品变质。然而，差的性能、结果也可能是由于其他因素包括试验系统引起的。

警告：PT-DS试剂含有叠氮钠，勿服、勿接触皮肤和黏膜。

III. 样本收集

3.8%(0.109M)枸橼钠做为抗凝剂。避免溶血和其他组织液的污染。样本体积不得少于所需体积的90%。在3000×g下离心10分钟，如样本在22—24℃下，须在2小时内测定。有关样本收集和储存的详细资料，请参见NCCLS文件。

IV. 步骤

提供材料PT试剂

另需材料：

①纯化水

②合适的计时器

③精密移液管：0.1ml和0.2ml

④正常和异常质控物，（凝血质控血浆三个水平)

PT适合于手工、仪器、光度计和其它凝固的测定方法。

手工方法

A：在37℃预热PT试剂；

B：加0.1ml血浆到比色杯中，在37℃下预热；

C: 用力加0.2ml预热的PT试剂到血浆中凝结形成，并记录时间建议至少使用一正常和一异常对照血浆，每40份病人样品至少一次轮换，逐日测定对照血浆，建议每个实验室应做好室内质控范围。

V. 结果

用最近的0.1秒报告每个血浆的凝固时间，所得PT时间结果与正常参考范围值一起列入报告。(勿报告相对于商业质控血浆凝结时间的病人比值。质控仅仅是为了保证试验系统的准确性。)

VI. 局限性

血凝生物化学包含一系列受许多预试验条件影响的反应。这些变异性必须被控制，以获得好的结果：

样本收集

勿延迟血液与抗凝剂的混合；

避免样本产生泡沫；

用塑料或硅硼酸盐玻璃容器；

混浊、溶血、脂血或黄疸的样本，可能会引起错误结果；

冷冻和解冻包含残留细胞血浆，会裂解细胞膜而影响结果；

急性炎症反应由于纤维蛋白原的升高，会缩短PT结果；

红细胞压积在20—55%范围以外，所加抗凝剂需调整比例。

技术：

如果血浆暴露到空气中pH将升高；

PT工作要求37℃±0.5℃。经常检查加热部分的温度。在4—8℃保持的血浆可能会引起冷激活而导致PT缩短；

所有的实验器皿必须清洁，没有脏物痕迹；

按照仪器供应商的要求，保养仪器。

影响物质：

草酸钠，EDTA和肝素不适合做抗凝剂；

口服避孕药物、天门冬氨酰胺酶、皮质酮、EDTA、红霉素、酒精、四环素和抗凝剂如肝素和华法令可能引起PT延长。

抗组织胺药、布塔巴比妥、咖啡因、口服避孕药、苯巴比妥、维生素K.可能引起PT缩短。

VII. 期望值

PT对正常人评估可获得以下结果

平均±2SD范围

仪器11.9 11.0—15.0

可见光度计12.5 10.7—14.3

这些值仅作为一个指导，每个实验室应建立自己的正常参考范围。试剂、仪器操作、血样收集技术或抗凝剂的改变，都应重新建立新的正常参考范围。

有关性能特征、因子分析精密度等详见英文说明书。