高效菌筛选方法及策略
菌种筛选办法
菌种筛选方法在实际工作中，为了提高筛选效率，往往将筛选工作分为初筛和复筛两步进行。
初筛的目的是删去明确不符合要求的大部分菌株，把生产性状类似的菌株尽量保留下来，使优良菌种不致于漏网。
因此，初筛工作以量为主，测定的精确性还在其次。
初筛的手段应尽可能快速、简单。
复筛的目的是确认符合生产要求的菌株，所以，复筛步骤以质为主，应精确测定每个菌株的生产指标,测得的数据要能够反映将来的生产水平。
1 从菌体形态变异分析有时，有些菌体的形态变异与产量的变异存在着一定的相关性，这就能很容易地将变异菌株筛选出来。
尽管相当多的突变菌株并不存在这种相关性，但是在筛选工作中应尽可能捕捉、利用这些直接的形态特征性变化。
当然，这种鉴别方法只能用于初筛。
有人曾统计过3,484的育种中，fujikuroi）1)2) 或喷洒在已3)4)3 摇瓶培养法摇瓶培养法是将待测菌株的单菌落分别接种到三角瓶培养液中，振荡培养，然后，再对培养液进行分析测定。
摇瓶与发酵罐的条件较为接近，所测得的数据就更有实际意义。
但是摇瓶培养法需要较多的劳力、设备和时间，所以，摇瓶培养法常用于复筛。
但若某些突变性状无法用简便的形态观察或平皿快速检测法等方法检测时，摇瓶培养法也可用于初筛。
初筛的摇瓶培养一般是一个菌株只做一次发酵测定，从大量菌株中选出10-20%较好的菌株，淘汰80-90%的菌株；而复筛中摇瓶培养一般是一个菌株培养3瓶，选出3-5个较好的菌株，再做进一步比较，选出最佳的菌株。
4 特殊变异菌的筛选方法上述一般的筛选菌株方法的处理量仍是很大的，为了从存活的每毫升106左右细胞的菌悬液中筛选出几株高产菌株，要进行大量的稀释分离、摇瓶和测定工作。
虽然平皿快速检测法作为初筛手段可减少摇瓶和测定的工作量，但稀释分离的工作仍然非常繁重。
而且有些高产变异的频率很低，在几百个单细胞中并不一定能筛选到，所以，建立特殊的筛选方法是极其重要的。
例如营养缺陷型和抗性突变菌株的筛选有它们的特殊性，营养缺陷型或抗性突变的性状就象一个高效分离的"筛子"，以它为筛选的条件，可以大大加快筛选的进程并有效地防止漏筛。
高效聚磷菌的筛选
磷矿废水中高效聚磷菌的筛选近年来我国水体富营养化越来越严重，水体受到污染不仅破坏了环境与动植物的生存也影响了人们的生活和人们的工农业发展。
而水体富营养化都与水中的磷含量剧增有关，所以除去水中的磷对治理水体富营养化特别重要，这也是个社会非常关注的问题。
我校的南湖水体污染特别严重是我校的美中不足。
关键词：生物去磷聚磷菌筛选环境污染污水处理目前城市污水处理主要使用生物除磷，它是利用聚磷菌一类的微生物从水中摄取磷，并将磷存于体内，在水低形成高磷的污泥，达到了去磷防水体富营养化的效果。
聚磷菌是生物除磷的决定生物，而聚磷菌的工作受到环境的影响，如氧浓度，PH值，温度等，且不同的聚磷菌的聚磷能力不同，所以要想达到高去磷的效果就必须筛选出聚磷效率高的菌种.实验材料与方法1.1主要的的仪器设备摇床，超净工作台，全自动高压灭菌锅，培养箱，电子天平，酸度计，离心机,可见分光光度计，培养皿20个，细菌过滤器，移液枪（100ul和1000ul），量筒（10ml和50ml各一个)，锥形瓶（150ml,250ml和500ml），草酸铵结晶紫，革兰氏碘液，95%的酒精，石碳酸复染红，显微镜，载玻片及盖玻片。
1.2主要的试剂微生物分离纯化用的试剂均是国产分析纯，主要有牛肉膏，蛋白胨，琼脂，乙酸钠，磷酸氢二钾，硫酸镁，硫酸亚铁，氢氧化钠硫酸铵，钼酸钾，抗坏血酸，酒石酸锑钾，磷酸二氢钾，氢氧化钾过硫酸钾，MOPSHighPurityGrade,Tricine,X--Pi.1.3样本采集磷矿废水1.4培养基及溶液（1)YG培养液：酵母侵膏1g,葡萄糖1g，K2HPO4 0.3g KH2PO4 0.25g 七水硫酸镁0.2g, 蒸馏水1000ml.（2)MOPS培养基:100ml的10*MOPS 8.370g, tricine 0.717g, 30ml的去离子水，10mol/L KOH调PH到7.4. 总体积44ml. 0.01mol/L, 硫酸亚铁1ml，按下列加：氯化铵（1.9mol/L)5ml, 硫酸钾（0.276mol/L)1ml,二水氯化钙0.02mol/L)0.025ml, 六水氯化镁（2.5mol/L)0.21ml, NaCl(5mol/L)10ml, 微量元素混合液0.02ml, 葡萄糖0.1g, )取25ml置于两个500ml的三角瓶中，向一个三角瓶加0.0087gK2HPO4，成为限磷培养基。
高效油脂降解菌的筛选及其对油脂废水的强化处理研究
高效油脂降解菌的筛选及其对油脂废水的强化处理研究高效油脂降解菌的筛选及其对油脂废水的强化处理研究概述油脂废水是各种生产过程中常见的工业废水，具有高浓度、高粘度和难降解的特点。
传统的处理方法如物理方法和化学方法在处理这类废水时存在着效率低、工艺复杂和对环境污染等问题。
因此，研究高效油脂降解菌的筛选及其对油脂废水的强化处理具有重要意义。
本文将探讨高效油脂降解菌的筛选方法以及其在油脂废水处理中的应用。
一、高效油脂降解菌的筛选方法1. 筛选菌种的来源高效油脂降解菌主要从自然环境中筛选获得，如油田、市区下水道和石油化工厂等。
这些环境中富含大量的油脂，是高效油脂降解菌的潜在来源。
2. 筛选菌种的方法（1）富集培养法：通过连续传代培养，利用油脂为唯一碳源来增加油脂降解菌的数量。
（2）筛选培养基的优化：为了提高油脂降解菌的筛选效率，可以通过优化培养基成分和条件，如pH值、温度和培养时间等。
3. 初步筛选方法通过测定菌株对油脂的降解率、生长速度等指标，初步筛选出具有较高降解能力的菌株。
4. 准确筛选方法（1）酶活测定法：通过测定油脂降解菌体外分泌的酶活性，筛选出具有高降解能力的菌株。
（2）分子生物学方法：利用16S rDNA基因测序技术，鉴定出属于高效油脂降解菌的菌株。
二、油脂废水的强化处理1. 微生物降解方法高效油脂降解菌通过分泌酶类降解废水中的油脂物质，将其分解为小分子物质，使废水中的油脂得以降解。
该方法具有效率高、成本低和对环境友好等优点，是一种较为理想的处理方法。
2. 强化菌株的应用将筛选出的高效油脂降解菌株应用于油脂废水的处理中，可以增加废水处理系统的油脂降解能力。
通过培养优良菌株，可以形成一种稳定的微生物群落，提高废水处理系统的稳定性和连续性。
3. 条件优化在使用高效油脂降解菌处理油脂废水时，需要优化处理条件，如菌株的培养条件、温度和pH值等，以提高处理效果。
4. 协同处理法将高效油脂降解菌与其他废水处理方法结合，如物理方法和化学方法，可以使废水处理效果更好。
环境污染物高效降解菌的筛选
发展复合降解技术
结合物理、化学和生物等多种方法，发展复合降解技 术，提高污染物的去除效果。
06 结论
研究成果总结
成功筛选出多种高效降解不同类 型污染物的菌种，这些菌种在实 验室条件下表现出良好的降解性 能。
研究结果为进一步开发高效生物 治理技术提供了理论依据和实践 指导，有助于解决环境污染问题 。
02
探索高效降解菌的生态学特征和进化机制，以 更好地了解其在自然界中的分布和作用。
04
加强高效降解菌在实际污染治理中的应用研究，包 括工艺优化、成本效益分析和长期稳定性评估等。
THANKS
降解特性分析
总结词
研究高效降解菌在各种环境条件下的降解性能和降解机制。
详细描述
降解特性分析包括降解动力学研究、降解产物检测、降解酶的分离与鉴定等，有助于全面了解菌种的 降解能力和应用潜力。
05
高效降解菌的应用前景与挑 战
应用前景
高效降解污染物
高效降解菌能够快速分解和转化多种环境污染物，降低其对环境和生态系统的危害。
详细描述
生理生化鉴定主要包括形态观察、培养特性分析、代谢产物检测等，有助于初步 判断菌种的降解能力和适应环境的能力。
分子生物学鉴定
总结词
利用分子生物学技术，如16S rRNA基因测序，对高效降解菌进行准确鉴定和分类。
详细描述
通过分子生物学鉴定，可以更深入了解菌种的基因组信息和系统发育关系，为后续的降解机制研究提供基础。
生物修复技术
利用高效降解菌进行生物修复，对受污染的环境进行治理和恢复，具有成本低、环保等优势。
促进可持续发展
高效降解菌的应用有助于推动环保产业和循环经济的发展，促进可持续发展。
产纤维素酶菌种的筛选与优化
产纤维素酶菌种的筛选与优化一、菌种筛选的原理与方法菌种筛选的原理是通过筛选产纤维素酶活性高、产量大的菌种。
常用的菌种筛选方法有以下几种：1.传统菌种筛选：分离环境中的纤维素降解菌株，通过纤维素酶活性测定筛选产纤维素酶能力较强的菌株，再通过多次温育和活性测定，逐步筛选出高活性的菌株。
2.显性菌种筛选：利用纤维素酶结构上保守的区域设计引物，在环境DNA中扩增出纤维素酶基因片段，使用这些基因片段进行克隆构建，然后在宿主中进行表达，通过纤维素酶活性测定筛选产纤维素酶能力较强的菌株。
3.基因工程菌种筛选：利用已知纤维素酶的基因进行基因工程，通过载体导入宿主细胞中，通过外源表达基因，从而获得产纤维素酶菌种。
二、菌种优化的原理与方法菌种优化的原理是通过改变菌株基因组或环境条件，提高纤维素酶产量和活力。
常用的菌种优化方法有以下几种：1.自然进化优化：通过长期培养，逐渐挑选出产酶能力强、极端环境适应能力强的突变菌株。
2.诱变优化：利用物理、化学或基因工程等方法对菌株进行诱变，通过筛选获得产纤维素酶能力强、菌株稳定的变种。
3.基因工程优化：利用已知纤维素酶的基因进行基因编程，通过基因工程技术对菌株基因组进行改造，以提高纤维素酶的产量和活力。
三、未来的研究方向1.菌种筛选方法的改进与创新：应综合运用传统筛选、显性筛选和基因工程筛选等方法，发展新的高效、快速的菌种筛选方法。
2.菌种优化技术的优化与提高产量、活性：要通过生理、代谢工程的方法改造纤维素酶产生菌，提高纤维素酶的产量和活力。
3.开发新型纤维素酶菌株：从不同环境中分离筛选出产酶能力强的菌株，进一步发现和研究产纤维素酶的新菌株。
4.提高纤维素酶产量与废弃物转化率的研究：将纤维素酶应用于废弃物转化过程，提高纤维素酶产量和转化率。
综上所述，产纤维素酶菌种筛选与优化的研究是促进纤维素酶应用的关键。
通过不断改进筛选和优化方法，进一步开发新的菌种，提高纤维素酶的产量和活力，将对纤维素酶的应用产生积极的推动作用。
高效菌株的筛选及其抑菌物质的初分析
第５ 期
林
业 科
技
Ｖ０ ． ５ Ｎｏ ５ １３ ． Ｓ ｔ ｅ） ． ２０ｌＯ
２０ １０ 年 ９ 月
Ｆｏ ＲＥＳＴＲＹ ＳＣＩ ＥＮＣＥ ＆ ＴＥＣ ＨＮ ｏ Ｌｏ ＧＹ
文章 编号 ：１０ — ４ ９ （０ ０ ５－ ０ ９—０ ０ １ ９ ９ ２ １ ）０ ０ ２ ５
西安 ７ ０ ６ ） １０３
摘 要 ：通 过 ８个 菌株 对 物 树 烂 皮病 病 原 茵 茵 丝 及 孢 子 萌 发 抑 制 作 用的 比较 ， 筛 选得 到 的 高 效 菌 株 有 ：鳞 柄 白 鹅 膏 （ ｍ ｎ ａｖ ｏａ 、 瑚 茵 （ ａ ａｉ ｈｔｅ ｄ嗍 ） 白 霜 杯 伞 （ ｌｏｙｅｄａｂｔ） 对 ３种 菌 株 粗 提 物 进 行 紫 外 Ａ ａ ｉ ｉ ｓ） 珊 ｔ ｒ Ｒ ｍ ｒ ｅ ｅｖ ｏｅ ａ ｐ ｒｒ 、 Ｃｉｃｂ ｅｌａａ 。 ｔ 可 见 光谱 扫 描 的 结 果 显 示 ： 瑚 茵活 性 物 质 粗提 物 的 发 色 团吸 收 峰 分 布 在 ２ ０— ７ ｍ、８ 珊 ５ ２ ５ｎ ２ ０～３０ ｎ ３０ｎ 白 ０ ｍ、６ ｍ； 霜 杯 伞 活性 物 质 粗提 物 的发 色 团吸 收峰 分布 在 ２ ０～ ０ ｍ、６ ｍ 左 右 ； 柄 白鹅 膏粗 提 物 的发 色 团吸 收峰 分 布 ５ ３０ｎ ３０ｎ 鳞
高 效 菌株 的 筛 选 及 其 抑 菌 物 质 的初 分 析
冀瑞 卿 宋瑞 清 一 孟 黎 莹４ ＇ 。
（．吉林 农 业 大 学 ，长 春 １ １０ １ ；２ ３０ ８ ．黑 龙 江 省林 业 科学 院 ，哈 尔 滨 １０ ８ ； ５０ １
３ 东北林业 大学 ， ． 黑龙江
哈尔滨
１０ ４ ； ． ５ ０ １ ４ 西北 政法大学 ，陕西
高效菌筛选方法及策略
高效菌筛选方法及策略菌筛选是指在大量细菌中筛选出具有特定性状或有潜力的菌株。
高效菌筛选方法和策略的研发对于开展微生物研究和利用具有重要意义。
以下是一些常用的高效菌筛选方法及策略。
1.快速筛选方法：快速筛选方法主要通过缩短菌筛选的时间，提高筛选效率。
其中一种常用方法是利用荧光标记在特定条件下或对特定物质的响应。
如利用绿色荧光蛋白（GFP）标记菌株，通过荧光筛选可以快速获取目标菌株。
2.抗性筛选方法：抗性筛选方法通过添加特定抗性基因或对抗特定抗生素，来获得对这些抗生素具有耐受性的菌株。
这样一来，对抗生素的敏感菌株可以被消除，而具有抗性的菌株则可以快速筛选出来。
3.变异筛选方法：变异筛选方法通过利用菌落的形态、色素等可变性特征，筛选出变异菌株。
可以通过菌落形态观察、涂片染色、荧光筛选等方法，快速获得形态或性状变异的菌株。
4.高通量筛选方法：高通量筛选方法利用自动化设备，如微孔板阵列、高通量测序仪等，对大量菌株进行快速筛选。
这种方法主要应用于菌株库的筛选或特定代谢产物高效筛选等方面。
5.代谢产物筛选方法：这种方法通过检测菌株代谢产物的产量或特性，筛选出具有特定代谢产物的菌株。
可以通过色谱-质谱联用技术、高效液相色谱、质谱成像等手段，对菌株代谢物进行分析和筛选。
6.分子筛选方法：分子筛选方法利用特定的分子探针或探测基因，在菌株中筛选具有特定基因或特定基因表达的菌株。
可以通过PCR、南方印迹等技术，对菌株的基因组或转录组进行筛选。
综合利用上述方法和策略，可以实现高效菌株的筛选。
同时，还可以采用多因素组合的策略，如结合菌株形态、生长能力、产物产量和基因组信息等进行筛选。
高效菌筛选方法和策略的研发有助于加快菌株研究和开发，提高微生物资源的利用效率。
从土壤中分离提纯高效的酵母菌
从土壤中分离提纯高效的酵母菌主要内容：利用各种微生物实验技术，从土壤中分离并提纯酵母菌，再通过检测酵母菌发酵速率，从而筛选出高效的酵母菌。
关键词：分离提纯高效酵母菌在土壤中分离酵母菌，因此土壤的采样地点在果树下较好。
采集好土壤，将土壤配制成10^-2悬液，主要方法是称取1g土壤，放入三角瓶，迅速倒入99ml无菌水，震荡5-10min即成所需的土壤悬液。
1.由于土壤中酵母菌含量较低，因此在分离前要先进行富集培养24h。
2.接下来是配制培养基，由于要分离的是酵母菌，配制马丁氏培养基。
3.对培养基进行灭菌放入高压蒸汽灭菌锅115℃/30min4.取出后待50℃以下是加入链霉素，每一百克三毫升5.队超净台消毒，点燃酒精灯6.在酒精灯旁倒平板。
7.接种，画线。
8.放入26℃保温箱3-4d。
9.取生长较好的六个菌落分别接入0.05mol/L4ml的六个试管中，编号1-6。
10.3d后检测葡萄糖含量。
11.配置新制的氢氧化铜0.5mol/L50ml12.将强氧化铜分别放入六个试管中每个4ml。
摇匀加热。
13. 5min后比较六个试管的颜色深浅。
编号颜色1褐色'++褐色+2褐色'--3褐色-4褐色+5褐色6结论：三号试管的颜色最浅，所含葡萄糖最少，所以三号试管的酵母菌效率最高。
结果讨论：实验比较成功，但是培养基的菌株较少，这可能和富集培养的时间太短有关系，忘了设置对照试验。
选取高校教务军，可以重复做这个实验，选出比较高效的酵母菌。
注意:1.注意培养基的灭菌2.注意紫外线只能在无人的时候开启3.注意接种环要灼烧彻底4.注意在培养箱中放培养技师要倒置5.注意统一变量。
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筛选过程
特点：发生频率低；随机性大 过程：先初筛，后复筛，测突变菌株性能
诱变育种的基本筛选程序： 出发菌株→绝大多数个体死亡，少数存活（存活 率）→少数突变（突变率）→少数正变（正变率） →少数降解酶活增加幅度大（增加率）且要求稳 定
三. 原生质体融合
原生质体融合 (Protoplast fusion)指在一 定选择条件下，使遗传性状不同的两细胞的原 生质体发生融合，并进而发生遗传重组以产生 同时带有双亲性状的、遗传性稳定的融合子。 始于1976年，最早是在动物实验中发现的， 后来早微生物中得以应用。使细胞间基因重组 的频率大大提高了，已大于10-1 （而诱变育种 一般仅为10-6 ）。发生基因重组亲本的选择范 围更大，可以在不同种、属、科，甚至更远缘 的微生物之间进行。
3.2原生质体制备：去除细胞壁是制备原生质体的
关键，一般采用酶解法去壁。多酶混合除壁效果较好。 影响因素：菌体前处理、菌龄、酶浓度、酶处理 温度、PH、渗透压稳定剂（不仅起保护原生质体免于 膨裂，而且还有助于酶和底物的结合。 原生质体对渗透压极其敏感，低渗引起细胞破裂。 多采用甘露醇、山梨醇、蔗糖等有机物和氯化钾和氯 化钠等无机物。稳定剂的浓度一般均在0.3-0.8mol/L 之间。
三. 原生质体融合
3.3原生质体融合：融合促进剂：聚乙二醇（PEG，浓度 为25%－40%）可有效促进原生质体融合。 另外，紫外线照射和脉冲电场等物理因素处理也能促进 原生质体融合。 3.4原生质体再生：是使原生质体重新长出细胞壁，恢复 完整的细胞形态结构。可再生的只占原生质体的一部分， 细菌再生率为3%~10%；真菌为20%~80%。用再生培养基。 提高再生率必须避免因强力动作而使原生质体破裂， 另外菌液浓度不宜太高。菌龄、再生时的温度、溶菌酶用 量和溶壁时间、细胞壁去除程度等因素都会影响再生。
一、传统分离及驯化技术 不经人工诱变，利用微生物的自然突变进行 菌种选育的过程称为自然选育或自然分离。 微生物自然突变有两种原因： (1) 自然环境中存在的低剂量的宇宙射线、各种 短波辐射、低浓度的诱变物质和微生物自身代谢 产生诱变物质的作用引起的突变； （2）在DNA的复制过程中所发生的错配。
一、传统分离及驯化技术
出发菌株的选择： 1.选择纯种作为出发菌株，借以排除异核体或异质体 的影响； 2.不仅效果好，而且要考虑其它形状，如生长快、营 养要求低等； 3.对诱变剂敏感的菌株； 4.选择已经诱变过的菌株。 诱变剂的选择（物理：紫外线、X射线等，化学：碱基类 似物，5-氟尿嘧啶；烷化剂，亚硝基胍，甲基磺酸乙酯） 要考虑诱变剂本身的特点，如紫外线作用于DNA分子的嘧 啶碱基，而亚硝酸主要作用于DNA分子的嘌呤碱基，两者 复合使用，突变谱宽，效果较好。
五.基因工程
主要过程：
目标基因片段
获得特定的目标基因
DNA重组
载体 DNA进入受体细胞并扩增、表达 组体 具目标基因表达功能重
基因工程的“专用工具”
1、限制性核酸内切酶 黏性末端
EcoRI
黏性末端
来源：主要从原核细胞分离 作用： 限制酶是在生物体(主要是微生物)内的一种酶，一种限制性内
切酶只能识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且 使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开 （切割DNA分子）
第三章 高效有机物降解菌的构建 技术及策略
第三章 高效有机物降解菌的构建 技术及策略
第一节 高效有机物降解菌的构建技 术
一、传统分离及驯化技术 二、诱变技术 三、细胞融合技术 四、基因重组技术 五、基因工程
第三章 高效有机物降解菌的构建技 术和策略
第二节 高效有机物降解菌的构建策略
常用的运载体主要有两类：
三. 原生质体融合
原生质体融合特点： 1 杂交频率较高 2 遗传物质体传递更为完整 3 存在着两株以上亲株同时参与融合形 成融合子的可能 4 提高效果的潜力较大
三. 原生质体融合
3.1选择亲株：必须选遗传性状稳定且具有优势互补
的两个亲株，而且必须带有可以识别的遗传标记（多 为营养缺陷型或抗药性标记）。
3、接合
供体菌（雄）通过其性菌毛与受体 菌（雌）相接触，前者传递不同长度的 单链DNA给后者，并在后者细胞中进行双 链化或进一步与核染色体发生交换、整 合，从而使后者获得供体菌的遗传性状 的现象。 F因子：决定性别的质粒
五.基因工程技术
基因工程是分子水平上在生物体外用人工 方法进行ＤＮＡ的重组，以改变生物的性状创 造生物的新品种或新物种的一门新学科。 对于环境中难以降解的有毒有害化合物， 可通过基因工程的方法，设计新的代谢途径， 利用相关的基因构建工程菌。这样不仅提高细 胞单一酶的浓度增加代谢途径中某一限制酶的 表达，还能使代谢途径中所有基因的表达获得 同步增加，从而大大提高降解效率，促使有毒 化合物分子进一步降解为无害的末端产物。
三. 原生质体融合
3.5筛选优良性状融合重组子：原生质体 融合后，来自两亲代的遗传物质经过交 换并发生重组而形成的子代成为融合重 组子。这种重组子通过两亲株遗传标记 的互补而得以识别。（真正的融合和暂 时的融合） 融合子生理生化测定。 原生质体技术还可用于诱变育种中。
四、基因重组技术
1.转化
2. 传导
完全普遍传导：完全缺陷噬菌体将外源DNA导 入受体细胞，该片段可与受体细胞核染色体组 上的同源区段配对，再经过双交换而整合到受 体菌染色体组上，使后者成为一个遗传性状稳 定的转导子。 流产普遍传导：经转导而获得的供体菌DNA片 段的受体菌，如果外源DNA在其内不进行交换、 整合和复制，也不迅速消失，而仅进行转录、 翻译和性状表达。
G AA T T C
G AA T T C C T T AA G AA T T C G
C T T AA G
G AA T
同种限制酶 切割 T C G
G
C T T AA
基因的针线： DNA连接酶
GA A T T C
C T T A AG
C T T AA
• 基因的针线——DNA连接酶
DNA连接酶可把黏性末端之间的缝 隙“缝合”起来，即把梯子两边扶手的 断口连接起来(形成磷酸二酯键)，这样一 个重组的DNA分子就形成了。
1.转化
转化因子
本质：DNA 大小：占细菌核染色体组的0.3%，含15个基因。 转化频率：0.1%~1%，最高达10%。 呈质粒形式的转化因子，其转化频率最高，因为 它进入受体菌后，可不必同受体染色体进行交换、整 合即可进行复制和表达，一般认为转化因子都是线状 双链DNA。
1.转化
过程：
一、优化污染物的降解途径 1.重组互补代谢途径 2.改变污染物代谢产物流向 3.同源基因体外随机拼接 4.拓宽氧化酶的专一性 二、提高污染物生物可利用性 1.重组表面活性剂编码基因 2.重组污染物跨膜转运基因 三、增强细菌的环境适应性 1.增强细菌的抗毒能力 2.增强细菌的放射线耐受性
第一节 高效有机物降解菌的构建技术
作用结果：平未端及粘性未端
• 什么叫黏性末端？
被限制酶切开的DNA两条单链的切口， 带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互 补配对，这样的切口叫黏性末端。
• 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几 个切口？可产生几个黏性末端？
要切两个切口，产生四个黏性末端。 • 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶 来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性末端，然后让两者的 黏性末端黏合起来，就似乎可以合成重组的 DNA分子了。
1）双链DNA片段与感受态受体细胞 表面的特异位点结合； 2）在吸附位点上的DNA被核酸内切 酶分解，形成片段； 3）一条单链被膜上的另一种核酸 酶切除，另一条单链逐步进入细胞； 4）DNA片段与受体细胞核染色体组 上的同源区段配对，交换、整合和 取代，形成杂合DNA片段； 5）受体菌染色体复制，一个为转 化子，一个不是。
诱变过程
影响诱变效果的因素： 菌种的生理状态：对分裂中的细胞更 有效； 细胞悬浮液要求生理状态一致，为分 散均匀的单细胞或单孢子悬浮液（一方面 分散状态的细胞可以均匀地接触诱变剂， 另一方面可避免长出不纯菌落）。
诱变过程
诱变剂的剂量：诱变率随诱变剂量的增加 而提高，但达到一定程度后，再提高剂量，反 而会使诱变率下降，使负变异株多，因此，主 张用中等剂量，如75%-80%或更低剂量。 充分利用复合处理的协同效应。复合处理 可以将两种或多种诱变剂分先后或同时使用， 也可以用同一诱变剂重复使用。复合处理可扩 大突变的位点范围，使获得正突变菌株的可能 性增大。
二、诱变育种
诱变育种是人为地利用物理、化学 等因素，使诱变的细胞内遗传物质染色 体或DNA的片段发生缺失、易位、倒位、 重复等畸变，或DNA的某一部位发生改变 (又称点突变)，从而使微生物的遗传物 质DNA或其化学结构发生变化，引起微生 物的遗传变异。因此，诱发突变的频率 远大于自然突变。
诱变过程
一、传统分离及驯化技术
纯化：1.菌落纯
2.菌株纯
1.菌落纯：从“种”的水平来说是纯的，其方 法有划线分离法、涂布分离法和稀释分离法。 2.菌株纯：较为精细的单孢子或单细胞分离法。
性能鉴定：菌的生长情况、酶活测定、效 果测定
自然选育是一种简便易行的选育方法。但自然选育的效 率低（10-8—10-10）。
三. 原生质体融合
பைடு நூலகம்
在有些情况下，两种或多种微生物在共同存 在时才能降解某种污染物，单独存在时不能降解 该污染物，这可能是因为彼此为对方提供了生长 所必须的条件或为对方消除了生长的障碍，使得 它们在共存的条件下能够顺利降解环境污染物。 在这种情况下，可以采用原生质体融合技术 融合这两种微生物，融合子就会具备两个亲本的 基因与优点，能够降解某种环境污染物，这也是 目前污染治理工程菌制备的一个主要途径。