抗狂犬病血清生产简介
抗血清制备原理、步骤及应用
抗血清制备原理、步骤及应用抗血清是一种含有高效价特异性抗体的血清，一般为动物被人工注射某类抗原后制备的动物血清。
通过注射抗血清可以传递被动免疫治疗许多疾病。
一、抗血清制备原理：将抗原注射于动物体，将引起免疫应答。
可刺激动物的淋巴细胞转化为浆细胞并产生特异性抗体，待血清中积累大量抗体时，采集动物血液并分离析出血清，此即含抗体的免疫血清（抗血清）。
抗血清包括抗细菌、抗毒素、抗病毒血清。
二、抗血清制备步骤：1、选择免疫动物➢免疫动物一般选择青壮年期、健壮雌性个体。
➢抗原与免疫动物的种属差异越远越好。
➢针对不同性质的免疫原选择相应的动物。
➢制备H血清用马，制备R血清用兔，制备补体用豚鼠血清。
２、抗原制备➢抗原剂量：用灭菌生理盐水将抗原稀释为2mg/mL，与佐剂混合制成乳剂后用于动物免疫。
➢免疫原的注射剂量应考虑其抗原性的强弱、分子量大小、动物的个体状态和免疫时间。
通常小鼠首次抗原剂量为50～100μg/次，大鼠为100～200μg/次，兔为100～1mg/次，合成免疫原为2mg（半抗原约为20～200μg），一般需要与等量的福氏完全佐剂混合。
加强免疫原与福氏不完全佐剂混合或不用免疫佐剂，剂量为首次计量的1/2。
➢抗原乳剂的配制：将等量的佐剂与抗原溶液倒入钵内，经过反复碾磨，形成油包水乳剂。
制成的油包水乳剂直接影响免疫效果，因此使用前需进行质量检查。
检查方法是将制成的乳剂滴一滴在自来水表面，质量合格的乳剂滴入水面保持滴珠完整不分散，不合格的乳剂立即扩散，水面油亦逐渐扩大。
若检查不合格，则须继续操作至质量合格为止。
３、确定免疫方案➢根据免疫目的的要求、抗原性质、佐剂种类来制定免疫方案。
可采用全量免疫法、微量免疫法或混合免疫法。
免疫接种途径通常有静脉、腹腔、肌肉、皮下、淋巴结等接种途径，对抗原的吸收速度为静脉=腹腔=淋巴结＞肌肉＞皮下＞皮内。
若抗原宝贵可采用淋巴结内微量注射法；半抗原宜皮内多点注射。
免疫接种剂量应根据分子量大小、免疫原性强弱、动物个体状态和免疫时间决定。
狂犬病被动免疫制剂的安全性-重庆狂犬抗体检测
狂犬病被动免疫制剂的安全性一、狂犬病被动免疫制剂的安全性最早上市的抗狂犬病被动免疫制剂为马抗狂犬病血清，因血清病发生率高达40%，美国于1965年停止了该抗血清的使用。
目前应用的马抗狂犬病血清为利用胃蛋白酶切除ERIG免疫球蛋白Fc段，通过纯化提高制剂中F（ab'）2纯度并降低其他血清蛋白成分及过敏物质含量的纯化制剂。
部分马抗狂犬病血清制剂有引起血清病的风险，取决于其总蛋白质含量。
一项对使用者的研究发现，ERIG制剂血清病的发生率从0．82%至6．19%不等。
与ERIG相比，纯化的F（ab'）2制剂血清病发生率大幅降低，且大部分为轻症病例。
尽管F（ab'）2制剂安全性较好，但由于无法完全除去异性蛋白，仍然不能排除引起个别敏感者出现不良反应的风险。
与马抗狂犬病血清相比，狂犬病人免疫球蛋白（HRIG）则不存在因异源蛋白等因素而导致过敏的风险，不良反应发生率相对更低。
其存在的另一个问题就是因其来源于人，理论上具有传播血源性病原体的潜在风险。
因此在HRIG制品的生产工艺中除采用低温乙醇法外还增加了严格的病毒灭活/去除工艺。
国内大量的实验和资料证实，目前国内外上市的HRIG具有很高的安全性。
二、狂犬疫苗行业市场格局2021年中国城镇家庭宠物猫的数量是5806万只，犬的数量是5429万只。
整个城镇犬猫市场的规模达到2490亿，同比增长20．6%，比2021年社会消费品零售总额高8个百分点。
从渗透率来看，我国宠物市场增量空间仍较大。
公开数据显示，我国城市养宠家庭为10%，宠物数量高达2．5亿只，其中猫与狗占大部分。
对比美国、加拿大、英国以及日本的宠物渗透率分别高达68%、52%、40%、28%，中国宠物渗透率仅6%。
宠物经济增势强劲叠加涨价等因素，利好狂犬疫苗产业。
据悉，受长生生物事件遗留影响，2021年哈尔滨、安徽以及河北等多地曾出现疫苗部分短缺的情况，此后新一轮的狂犬疫苗招标，河北、内蒙、海南等多个省市的狂犬疫苗中标价有所提升。
抗狂犬病马血清效价ELISA检测试剂的制备
Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ，ｔｈｅ ｃｏｎ．ｅｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｅｔｅｍｌｉｎａｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔ ｂｙ ｔｈｅ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｋｉｔ
ｗａｓ
ｔｌｌａｔ ｂｙ ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ
ｔｅｓｔ
ｗａｓ
ｓｔｕｄｉｅｄ．
Ｒ鹳ｕｌｔｓ
Ｔｈｅ
ｗａｓ
ｃｏ—
ｏｐｔｉｍａｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉ—ｒａｂｉｅｓ ｖｉｎｌｓ ＩｇＹ
层析柱，收集第１峰，作为免疫原，加弗氏佐剂，免疫
健康家兔。双向琼脂扩散效价≥１：３２时，颈动脉
采血，分离血清。用过碘酸钠改良法制备ＨＲＰ标记 的兔抗马ＩｇＧ，稀释成不同浓度１：５００、１：１
ｌ：１ ５００、１：２ ０００、１：２ ０００、
５００和１：３ ０００，用方阵滴
定法测定最适使用浓度。
１．８
应用１０、２０和４０恤ｇ／ｍｌ抗狂犬病病毒Ｉ“包
Ｏ．５７３ ｍｉｎ， ｒｎｏｌ／Ｌ Ｈ２ｓ０４
终止反应。在酶标仪上测定Ａ伽值，以Ｐ／Ｎ≥２．１
２．４灵敏度 经检测，试剂的灵敏度为Ｏ．０７２ ２．５特异性 经检测，小鼠、豚鼠、绵羊、家兔、小牛、人血清及
ＩＵ／ｌＩｌｌ。
ＩＵ／１１１ｌ开始倍比稀释，共５个稀释度，用本试
剂进行检测，以出现阳性的最高稀释倍数判定其灵 敏度。 １．１０特异性检测 将小鼠、豚鼠、绵羊、家兔、小牛、人血清（本所提 供）及ＩｇＹ（本所制备）共７份样品，从１：５０开始稀 释至１：ｌ ６００；抗狂犬病病毒马血清半成品（２０６ Ｉｕ／ｍ１） 从０．５７３ ＩＵ／ｍｌ开始、抗狂犬病病毒马血清（中和 指数为６ ０００）从１：２ ０００开始，均稀释至１：１６ 用本试剂测定Ａ伽值，判定其特异性。 １．１１精密性检测 １．１１．１批问精密性：用３批试剂检测１２份样品，
被疯狗咬伤后要注射狂犬疫苗和抗狂犬病抗血清
抗狂犬病免疫是最早的免疫方法之一，由法国著名科学家巴斯德发明。
1885年狂犬疫苗第1次用于人体。
目前我国广泛使用的狂犬疫苗是是用地鼠肾组织培养，经过灭活制成。
抗狂犬病血清是将患过狂犬病而产生了抗狂犬病抗体的马的血清经适当处理后制成的。
当人被狗或其它动物咬伤、抓伤或舔伤后，无论是不是疯狗或疯动物都应注射狂犬病疫苗。
如咬伤人的狗或动物肯定是疯狗或疯动物时，或虽不能肯定是疯狗或疯动物，但咬伤严重，或伤口在头面部、颈部等紧靠中枢神经系统部位时，除应立即注射狂犬疫苗外，还应合并使用抗狂犬病血清。
这是因为注射狂犬病疫苗后要15~20天才产生抗体，1个月左右抗体水平才能达到高峰，才能有效的防止发病。
当咬伤较重或被咬伤部位靠近中枢神经系统时，往往在注射疫苗后体内还没来得及产生足够的抗体就发病了。
而合并使用抗狂犬病血清，
血清的抗毒素可以及时中和体内的游离病毒，防止病毒扩散，相对的延长狂犬病的潜伏期，使机体有足够的时间产生自身的抗体，减少发病的机会。
使用抗狂犬病血清应做过敏试验。
狂犬疫苗应分别在第0、3、7、14、30天各肌肉注射1针，共注射5针。
0是指注射第1针的当天，以后以此类推。
如果需注射抗狂犬病血清时，最好在使用疫苗的前一天或当天使用，并应在疫苗全程注射5针后的第10天、第20天再各加强注射1针。
注
射狂犬疫苗和血清要及时、全程、足量，注射时间距咬伤时间越早，预防效果越好。
血清的制备方法-概述说明以及解释
血清的制备方法-概述说明以及解释1.引言1.1 概述血清是一种重要的生物学样品，它在医疗诊断、生物医学研究以及药物开发等领域都具有广泛的应用。
血清是在血液凝固后，将血浆中的纤维蛋白原和其他凝血因子除去后所得到的液体。
它包含了许多重要的生物活性物质，如抗体、蛋白质、细胞因子等，这些物质对于疾病的诊断和治疗具有重要的意义。
血清的制备方法主要包括采集血样、分离血清以及清洁和储存血清等步骤。
首先，采集血样是制备血清的第一步，一般采用静脉采血的方式，将血液采集到无菌的试管或容器中。
然后，通过离心等方法，将血液中的红细胞、白细胞等细胞成分分离出来，得到血清。
最后，为了确保血清的质量和纯度，需要对血清进行清洁和储存处理，通常会进行过滤和低温保存等措施。
血清在许多领域都有重要的应用。
在医疗诊断中，血清可用于检测人体内的生化指标，如血糖、血脂等，从而帮助医生判断疾病的种类和严重程度。
在生物医学研究中，血清可以用于病原体的检测和研究，以及对药物的评价和筛选。
此外，血清中的抗体和蛋白质也可以作为治疗某些疾病的药物。
因此，血清的制备方法对于保证研究结果的准确性和可靠性至关重要。
综上所述，血清的制备方法是获得高质量血清的关键步骤，它在医疗诊断、生物医学研究以及药物开发等领域有着广泛的应用前景。
通过不断研究和改进制备方法，我们可以获得更加纯净、稳定和有效的血清样品，为相关领域的发展和进步提供有力支持。
文章结构部分的内容可以如下编写：1.2 文章结构本文将按照以下结构进行介绍血清的制备方法：第一部分是引言，主要介绍了本文的概述、文章的结构以及本文的目的。
通过这一部分，读者可以了解到本文的整体架构和目标。
第二部分是正文，主要包括三个小节。
2.1血清的定义和作用：在这一小节中，将详细介绍血清的定义和其在生物医学领域中的作用。
这将为读者提供一个对血清的整体认识。
2.2血清的制备方法：这是本文的重点部分，将详细介绍血清的制备方法。
具体来说，将包括采集血样的步骤、分离血清的方法以及清洁和储存血清的注意事项。
抗狂犬病血清操作要点
3. 冲洗和消毒后伤口处理
（1）只要未伤及大血管，尽量不要缝合，也不应包扎。
伤口缝合不便于引流，且有可能将病毒引响面容时，确需缝合的，在做完清创 消毒后，应先用动物源性抗血清或人源免疫球蛋白作伤口周围的浸 润注射，使抗体浸润到组织中以中和病毒。数小时后（不低于2小时） 再行缝合和包扎；伤口深而大者应放置引流条，以利于伤口污染物 及分泌物的排出。
伤口部位浸润注射及同侧大腿 前外侧肌肉下1/3处偏外侧45度 进针
大腿 5支
成人三角肌， 按体重 儿童大腿前 测算 外侧
伤口部位浸润注射及同侧大腿 前外侧肌肉下1/3处偏外侧45度 进针
臀部 5支
成人三角肌， 按体重 儿童大腿前 测算 外侧
伤口部位浸润注射及同侧大腿 前外侧肌肉下1/3处偏外侧45度 进针
假如手指或足趾浸润注射， 必须小心进行防止引起间隔综合 征，掌侧伤口可注射于大、小鱼 际及前臂，指背伤口可注射于手 背及前臂，避开神经血管丰富部 位。
当全部伤口进行浸润注射后 尚有剩余时，应将其注射到远离 疫苗注射部位的深部肌肉。
伤口严重或有多处伤口（特 别是幼儿），按常规剂量不足以 浸润注射伤口周围的，可用生理 盐水将抗血清稀释到足够体积再 进行浸润注射。
应按推荐剂量将抗血清全部浸润注射到 伤口周围，同时应避免多次重复针刺进伤口。
（2）脱敏注射法：在一般情况下，可用氯化 钠注射液将抗血清稀释10倍，分小量数次作 皮下注射，每次注射后观察20-30分钟。第 一次可注射1 ml，观察无紫绀、气喘或显著 呼吸短促、脉搏加速时，即可注射第二次2 ml，如注射量达到4 ml仍无反应，可缓慢地 将全量注入。
4. 特殊部位的伤口处理
（1）眼部 眼部周围皮肤的伤口处理同其他部位，无特殊 要求，处理时注意保护眼睛，不能污染眼内，尤 其是用流水冲洗时避免液体流入眼内。波及眼内 伤口处理时要求用无菌生理盐水冲洗，一般不用 任何消毒剂。 （2 ）口腔 口腔的伤口处理最好在口腔专业医生协助下完 成，需要注意的是冲洗时保持头低位以免冲洗液 流入咽喉部而造成窒息，同时也避免扩大污染范 围。消毒剂可用低浓度酒精、碘伏、安尔碘等。 高浓度酒精、碘酒对粘膜损伤大，尽量避免使用。
精制抗狂犬病血清制造及检定规程
精制抗狂犬病血清制造及检定规程本品系由狂犬病固定毒免疫马的血浆，经胃酶消化后用硫酸铵盐析法制得的液体或冻干免疫球蛋白制剂。
仅用于配合狂犬病疫苗对被疯动物严重咬伤者进行预防注射。
对已有狂犬病临床症状的患者，注射本制品无效。
1 制造1.1对血浆的要求1.1.1 用于制造精制抗狂犬病血清的血浆除须按附录1《抗狂犬病血清生产用马匹免疫方法》中的要求外，应符合《抗毒素生产用马匹免疫方法》的规定。
在保存期间如发现明显的溶血、染菌及其他异常现象，不得投入生产。
1.1.2 血浆的中和效价不得低于80IU/ml。
1.2 制造程序按《精制抗毒素制造及检定规程》中1.2项进行。
1.3 制造工艺的要求及规定按《精制抗毒素制造及检定规程》中1.3项进行。
1.4 半成品检定按《精制抗毒素制造及检定规程》中1.4项进行。
2成品检定由质量检定部门进行全面检定，半成品已会同检定的项目可抽检。
2.1 鉴别试验按《精制抗毒素制造及检定规程》2.1项进行。
2.2理化检定、无菌试验、安全试验、热原质试验及类A血型物质测定等项均按《精制抗毒素制造及规定规程》中2.2～2.6项规定进行。
2.3 效价测定2.3.1 按《精制抗狂犬病血清效价测定方法》（附录2）进行。
效价测定用血清标准品由中国药品生物制品检定所分发或认可。
2.3.2 效价要求精制抗狂犬病血清效价在200IU/ml以上为合格。
3保存与效期保存于2～8℃。
自效价测定合格之日起，液体制品效期为3年；冻干制品效期为5年。
附录1 抗狂犬病血清生产用马匹免疫方法1 马匹用于免疫采血之马匹必须符合《生物制品生产用马匹检疫及管理规程》的规定。
2 抗原及佐剂2.1基础免疫用抗原用羊脑死毒抗原或羊脑固定毒抗原，灭活前病毒滴度应在7.0Log/1.0ml以上。
2.2 超免疫用抗原用羊脑固定毒抗原或细胞培养疫苗抗原。
2.3 所用抗原及佐剂不得含有人体成分。
3 免疫与采血3.1马匹免疫采血参照《抗毒素生产用马匹免疫方法》中有关规定进行。
狂犬疫苗的生产工艺
狂犬疫苗的生产工艺狂犬疫苗是用于预防狂犬病的重要疫苗。
狂犬病是由狂犬病病毒引起的一种严重传染病，患者一旦感染极易死亡。
因此，狂犬疫苗的生产工艺至关重要。
首先，狂犬疫苗的生产工艺开始于病毒分离。
研究人员通过采集狂犬病患者的体液样本，特别是唾液和脑组织样本。
然后，将这些样本接种到实验动物身上，如小白鼠或小狗，让病毒在这些动物体内复制增殖。
一旦病毒分离成功，研究人员将在实验室中对病毒进行培养。
接下来，狂犬病病毒经过培养后，会将病毒制备成病毒抗原。
这个过程包括病毒的提取和纯化。
研究人员将培养液离心分离出病毒，然后使用一系列的化学和生物技术手段，如超离心、凝胶过滤和柱层析等，将病毒纯化为高纯度的病毒抗原。
然后，研究人员将病毒抗原灭活，使其失去活性。
这样做的目的是防止病毒抗原在后续的疫苗生产过程中继续复制和感染宿主。
通常，病毒抗原会经过一定的时间和温度处理，以确保病毒完全失活。
灭活后的病毒抗原具有一定的免疫原性，可以引起人体产生免疫应答。
接着，灭活的病毒抗原会与辅助物质混合，以提高疫苗的免疫效果。
这些辅助物质包括佐剂和防腐剂等。
佐剂可以增强疫苗的免疫原性，使得疫苗具有更好的免疫效果；防腐剂则用于防止疫苗在保存和使用过程中受到污染和损坏。
最后，疫苗会进行灌装和包装。
研究人员将制备好的疫苗按照一定的剂量装入瓶子中，并进行密封。
通常狂犬疫苗以液体形式保存，因此密封瓶子的选择和密封工艺非常重要，以确保疫苗在贮存期间不受污染和破损。
总结起来，狂犬疫苗的生产工艺包括病毒分离、培养和纯化、病毒灭活、加入辅助物质、疫苗灌装和包装等步骤。
通过严格的工艺控制和质量检验，研究人员可以生产出高质量的狂犬疫苗，为狂犬病的预防提供有效的手段。
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(三)免疫方法
❖ 基础免疫：从马体初次接受免疫原刺激， 到产生少量特异性抗体的阶段即第一次免 疫应答阶段。 ❖ 超免疫：基础免疫以后的强化免疫。
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有了第一次免疫应答后，再次接触同一免疫原 就会迅速出现第二次免疫应答。抗血清效价将会 急剧上升。 对超免成功的马匹予以采血并开始 再次免疫注射，如此反复的每一循环通称“1 程”、“2程”……超免疫。
1．安全性
主要指制品污染的杂质引起的副作用。 例如细菌、热原质、类A血型物质以及其 它毒性物质等， 2019年版《药典》三部中 都有具体的检定方法并规定有最低要求标 准(参阅2019年版《药典》三部)。
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2．纯度及比活性
由于马匹免疫方法及抗血清精制方法的 改进，抗血清的纯度(免疫球蛋白的纯一性) 与比活性(每g蛋白所含单位数)均有显著的 提高，这些是代表精制抗毒素质量的主要 指标，2019年版《药典》三部中均有检查 方法及要求标准的规定。
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层析技术
抗血清纯度提高 从 50%--60% 提高到80%以上。
比活性 从 <4000 IU/g 提高到 > 10000 IU/g以上。
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抗狂犬病血清工艺流程
免疫血浆 ← 马匹检疫、免疫、基免、超免、 采血、血浆分离
↓ 血浆精制 ← 去除杂蛋白
↓ 胃酶消化 ← 切去Fc端
↓ 第一次沉淀 ← 硫酸铵沉淀、去除Fc端 及加热处理
↓
↓ 第二次沉淀 ← 硫酸铵沉淀 明矾沉淀
↓ 纯化
↓
浓缩
↓ 最后处理
↓
↓ 原液检定
↓ 半成品配制及除菌
↓ 半成品检定
↓ 分装
↓ 成品检定
↓ 入库
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❖ 最初的阶段是“原制血清”．即不做加工处理， 仅加防腐剂、除菌过滤。 ❖ 其次是应用适宜的理化方法(主要是硫酸铵盐析法) 去除血浆中的大部分非特异性蛋白(包括白蛋白、纤维 蛋白等)，并使抗体蛋白得到一定的浓缩，单位体积所 含抗毒素单位数量显著提高，称为“浓制血清”。 ❖ 蛋白酶精制法的研究和创建，使得抗血清制造方 法跨入了一个新的历史阶段。
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精制工艺改进
抗血清制造工艺的改进很大的提高了临 床应用于治病防病的免疫血清制品的质量。
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蛋白酶精制法
马血清抗体的分子结构与人的IgG基本相同，分子量 184KD，大小4×27.7nm。
马血清抗体在马匹免疫初期阶段从属于免疫血清的γ 球蛋白。
随着免疫程度的逐步加深，抗血清的分布逐渐向β球 蛋白转移，从属于γ与β两球蛋白之间新出现的免疫球 蛋白，被称为T球蛋白或β2球蛋白(此时原β球蛋白称 作β1球蛋白)。
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(四)采血及血浆的分离
❖ 免疫血清效价不低于100IU/ml时即可采血。 ( 2019年版《药典》三部 ) ❖ 采血有 “部分采血”与“全采血”两种方式。 前者指每程超免疫后由颈静脉采血l—3次，每次 5000m1左右；后者指由颈动脉采血直至马匹死 亡。
二、抗血清的精制
抗血清制造方法的改进与制品质量 的提高大体经历了三个历史阶段。
❖ 制造抗毒素所用马匹应健壮(过幼者免疫器官 发育不健全，过老者免疫机能衰退，最好是4∽8 岁)。 ❖ 无传染病(包括马传染性贫血、马鼻疽、布氏 杆菌病、马副伤寒性流产及其他传染病)和恶性肿 瘤等。
（二）免疫原长期反复地给马进行免 疫，在马体内将产生高效价的抗血清。
由液体石蜡与羊毛脂配成“油包水” 的 不完全福氏佐剂是马匹免疫最常用、效能 最好的佐剂。
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抗毒免疫马血清经硫酸铵盐析。30％一50％ 饱和沉淀β2与γ之间出现一个 新峰。进一步用硫酸铵盐析浓缩，此新峰乃被 提纯成精制抗血清。
经胃酶处理，IgG分子在重链间的二硫键的c 端侧被切断。切下的Fc片段无抗毒活性，不耐 热，经继续消化与热变性而被除掉。保留下来的 F(ab)2片段具有抗毒活性，即前述的所谓改性球 蛋白抗毒素，分子量98KD，分子大小 4.1×13.6nm，电泳位置在β2与γ两球蛋白之间。
衡量精制效果优劣的主要指标
①纯净度：含杂蛋白的程度。 ②提纯系数：通称R值，即精制品每g蛋白 所含单位数与原血浆每g蛋白所含单位数的 比值。 ③收获率：精制品总单位数与原血浆总单 位数的比值(%)。
前两指标经常与后者互相矛盾，在工艺
上予以适度调节而兼顾。
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质量的要求及检定
抗毒素除做预防用外还常被用于治疗， 而且治疗剂量往往很大。 制造工艺比较复 杂，生产周期较长，容易被污染。
抗狂犬病血清 生产简介
2019年5月
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抗狂犬病血清
系由狂犬病固定毒免疫马的血浆，经精制、 胃酶消化、纯化制得的液体或冻干免疫球蛋白 制剂。
用于狂犬病的预防。
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一、免疫血浆
为获抗毒效价高的免疫血浆 ，马匹、免 疫原及免疫方法是重要的条件。
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（一）马匹的选择