AKTA 设备常见问题及解决方法--气泡
AKTA 操作
ÄKTA常见问题解决方案系统（System）Q：样品与缓冲液怎么脱气和过滤？A：溶液和样品必须过滤（0.2um或者0.45um的膜过滤）和脱气，可以使用负压抽滤瓶过滤（如右图），并且在负压条件下保持10min脱气。
脱气的方法还包括：超声15min以上或者使用注射用水配制缓冲液。
对于小体积样品的过滤，可以使用高速离心的方式，吸取上清。
Q：系统怎么保存？A：使用完毕，须用水将系统冲洗干净（关机前，电导检测数值<0.1ms/cm），之后用20%乙醇清洗系并保存所有的流路。
Q：系统的清洗？A：按时清洗系统或遇到问题时清洗系统。
用1M NaOH ，小流速清洗系统30min，之后立即用中性的缓冲液（例如PBS）和去离子水将NaOH冲洗干净并且系统pH保持在中性。
系统泵（Pump）Q：系统中进了气泡，怎么排除？A：排除气泡的方式有两种：system control→Manual→Pump→PumppurifierA/B，进行泵洗，高流速将气泡排出（流速和冲洗的时间系统默认）；或者将空注射器放置在泵头黑色接头处（如右图），拧开泵头，抽出气泡后，拧紧泵头即可。
Q：泵后润洗系统，如果进入气泡怎么处理？润洗液不循环，怎么处理？A：润洗系统只是起润滑作用，有小气泡不会影响缓冲液的系统或者进入柱子；如果有大段气泡影响润滑时，则将润洗瓶中有接头处接空注射器，将气泡抽出即可。
如果润洗液不循环，说明单向阀堵塞或损坏，可以使用超声清洗或更换。
紫外监测器(UV Monitor)Q：如果紫外检测曲线有噪音或者波动，怎么处理？A：可以使用注射器推甲醇或1M NaOH注入紫外流动池，停留20分钟，用水冲洗；或者用注射器推10%的表面活性剂（如Decon90，Deconex11，DBS25，SDS等）注入紫外流动池，停留20分钟，用水冲洗。
Q：怎么查看检测器的使用时间？A：三波长检测器灯的使用时间：面板菜单-Check-press OK-Check Lamp Run Time（如果>4000h，需要更换紫外灯）；光栅转动时间：面板菜单-Check-press OK-Check Flip Time （如果>2000h，需要维护）；紫外灯的能量：面板菜单-Check-press OK-Check Lamp Intensity （如果灯的能量<20%，需要更换内部光纤）固定波长检测器灯使用寿命：（AKTApurifier UPC/FPLC）：灯的使用时间：面板菜单-Check-pressOK-Check Lamp Run Time，如果达到以下使用时间，需要更换相应灯——汞灯在254 nm的寿命，室温一般为7000h（冷室2000h)；汞灯在280 nm的寿命，室温一般为3500h；锌灯的寿命，室温一般为2000h；面板菜单-Check-press OK-Check Lamp Intensity. 如果灯能量小于以下数值，需要更换相应灯——R <300 mV for 254 nm ；R <150 mV for 280 nm；R<150 mV for 214 nm。
AKTA故障排除
UV 信号噪音、信号漂移或不稳定1. 缓冲液可能不纯。
检查用水时信号是否仍有噪音。
2. 在流动池可能有空气。
检查节流阀是否产生下列范围的反压：FR-904 0.4 .05A兆帕FR-902 0.2 .05A兆帕检查反压：拆下节流阀。
将一段管件（约1米，内径1.0毫米）连接到阀V2的自由接将此阀手工置于此接口。
将开口端置于废液容器中。
用水以10毫升/分钟运行泵，注意泵显示屏上或RUN DATA 的反压（Bp1）。
将节流阀连接到管件的开口（观察IN标志）。
将节流阀置于废液容器中。
用水以10毫升/分钟运行泵，注意泵显示屏上或RUNDATA 窗口的反压（Bp2）。
计算节流阀的反压（Bp2-Bp1）,如果不在限制内，更换之或与 Amersham Pharmacia Biotech（服务部）联系。
3. 使用前将缓冲液除气。
4. 检查UV-池光学纤维的连接。
5. 清洗UV池，参见检测器UV-900用户手册4。
4 节。
假峰1. 检查洗脱液中是否有空气，如果必要进行除气。
2. 清洗系统。
3. 按照柱说明清洗柱。
4. 检查混合器功能是否适当，使用的室体积是否正确。
通过拌棒放在混合器外套的顶部检查混合器功能。
当系统处于Run mode 时，搅拌棒应转动。
通过运行安装试验也可以检查混合器功能。
电导率曲线基线漂移和噪音信号1. 在流动池可能有空气。
一定要在流动池后使用节流阀。
2. 检查泄漏的管件连接。
3. 检查柱是否平衡，如果必要，清洗柱。
4. 检查混合器和系统泵的操作。
通过将搅拌棒放在混合器外套的顶部检查混合器功能。
当系统处于Run mode 时，搅拌棒应转动。
通过运行安装试验也可以检查混合器功能。
5. 按照检测器pH/C-900 用户手册4.5 节的方法清洗流动池。
用相同的缓冲液进行电导率测量出现随时间而降低1. 按照检测器pH/C-900 用户手册4.5 节的方法清洗流动池。
进行电导率测量出现随时间而降低2. 室温可能降低，使用温度补偿因子，参见检测器pH/C-900 用户手册中B.2.1。
AKTA操作说明
AKTA操作说明第一章：引言1.1目的本操作说明的目的是提供一个详细的指南，以帮助用户正确操作并有效利用AKTA系统。
1.2适用范围本操作说明适用于所有使用AKTA系统的操作人员。
1.3定义1.3.1 AKTA系统：指一套高效的色谱仪系统，由AKTA Pure、AKTA avant等设备组成，用于生物大分子的分离纯化。
第二章：系统组成2.1 AKTA Pure2.1.1 AKTA Pure系统由主机、泵、阀组、控制软件等组成。
2.2 AKTA avant2.2.1 AKTA avant系统由主机、泵、阀组、控制软件等组成。
第三章：系统操作3.1准备工作3.1.1确保所有液体介质已接入正确位置。
3.1.2检查设备状态，确保设备正常运转。
3.2打开系统3.2.1 AKTA Pure3.2.1.1按下主机上的电源按钮，然后按下软件界面上的“连接”按钮，确保主机和软件连接成功。
3.2.2 AKTA avant3.2.2.1按下主机上的电源按钮，然后按下软件界面上的“连接”按钮，确保主机和软件连接成功。
3.3设置方法3.3.1根据实验需求，使用软件界面上的设置按钮进行参数设置，包括流速、梯度洗脱的梯度段数和比例，柱子的温度等。
3.4样品操作3.4.1准备样品：根据实验需求，准备待分离的生物大分子样品。
3.4.2样品进样3.4.2.1 AKTA Pure：选择进样器位置，将样品稀释至合适的溶液浓度后，使用软件界面上的“加载样品”功能进行样品进样。
3.4.2.2 AKTA avant：选择进样器位置，将样品稀释至合适的溶液浓度后，使用软件界面上的“加载样品”功能进行样品进样。
3.5运行实验3.5.1设置柱子：选择合适的柱子，并进行柱子的准备工作，如柱子平衡、填充柱子缓冲液等。
3.5.2开始实验：根据实验要求，点击软件界面上的“开始”按钮，系统将自动进行色谱分离纯化实验。
实验过程中，可以实时观察色谱曲线，控制运行参数。
AKTA使用操作
AKTA使用操作1先打开AKTA开关后再开电脑2打开软件UNICORN，进入到SytemControl3冲洗系统：泵(Pump)—Pumpwahbic—PumpA-选择On单击执行(E某ecute)，立即执行指令，冲洗充满系统，之后会自动结束4设置报警：AlarmQmon—Alarmpreure---highalarm---在参数(Parameter)下面输入新的数值Mpa（根据柱子的信息设置5），单击执行(E某ecute)，立即执行指令5设置流速：泵(Pump)--流量(Flow)—在参数(Parameter)下面输入数值（流速FlowRate），设置一个较小的流速，一般0.5mL/min。
单击执行(E某ecute)，立即执行指令，单击关闭(Cloe)关闭对话框6接注：在冲洗状态运行中接柱子，先打开柱子上端，注满液体，先松松接入接头，去掉柱子下端堵头并接上接头，稍紧，待下接头有液体流出，充满接柱孔后旋紧，然后拧紧柱子上面接头。
7平衡：冲洗平衡柱子一个柱体积到基线稳定，期间可在接口2和6之间接上样品环，注射冲水洗干净，再用buffer冲洗并充满，注射器不拔，等待上样8上样：窗口进入到Flowpath—Injectionvalve—选择load，单击执行(E某ecute)。
取下注射器，用新的注射器吸取适量的样品（根据样品环的容量，注射器中不要带入气泡）从注射口缓慢的注入样品，注射器不可拔掉。
注射完成后，把load改为inject—inert，Alarm&Mon---AutozeroUV--inert，单击执行(E某ecute)开始上样，走4mL左右时，样品应已从样品环完全进入系统，把inject改为load，单击执行(E某ecute)，等待出峰收样，同时摆好收样器的位置，准备接收管。
9收样：出峰时设置Frac---fractionation900---在参数(Parameter)下面输入数值，一般0.5mL—1mL，单击执行(E某ecute)，结束收样时end结束，保存结果10：处理：洗脱样品结束后处理系统，先用水冲洗一个柱体积到基线稳定，暂停，换NaOH冲洗至少一个柱体积到基线稳定，再用水冲洗一个柱体积到基线稳定，测PH为7.0，暂停，换20%乙醇（Ethanol）冲洗至少一个柱体积到基线稳定，11：拆柱：先拆下面，取下后松接上堵头，旋松上面的接头，旋紧下面堵头，取下上面接头，柱子上端注满液体，接上端堵头。
akta操作注意事项
AKTA蛋白纯化层析系统操作规程
1、使用前，根据自己所要分离蛋白的性质确定所需的分离柱及缓冲液，打开计算机及仪器，但不要急于打开软件，等计算机与仪器连接再打开软件，此过程大约需要3-5分钟。
2、将纯水先抽滤脱气（使用≤0.45μm的滤膜），然后选择流路连到机器上，先洗泵，然后给机器一个流速和压力。
选择的最高压力须小于柱子所能承受的压力极限。
3、将柱子连接到仪器上，接柱子时，须等进液管中的液体出来，将柱子的一头与进液管通过接头连接，先不要拧的太紧，等液体从柱子的另一头流出，再用接头将其与出液管相连拧紧，再将进液管端拧紧，这样防止柱子中进入气泡，影响分离效果。
4、柱子接上后，换上配好的缓冲液（须抽滤脱气）用缓冲液平衡至仪器的各条基线都平后，再上样。
5、上样时，必须通过滤膜过滤（0.22μm），具体上样体积视样品浓度而定，采用不同的上样环上样。
6、仪器使用完毕，切记要用纯水清洗泵和柱子，洗柱直至各条基线都平为止，防止盐和粒子结晶于泵和柱子使机器报废。
若长期不用，再用20%的乙醇清洗系统和柱子,防止泵和柱子生长微生物（这一步非常重要）。
7、仪器的PH计每隔一段时间（一个月）须校准一次。
紫外流动池也需定期清洗（三个月）。
生物技术中心仪器管理人：李红兵
2006年10月15日。
AKTA层析仪使用操作规程(AKTA蛋白纯化系统经典培训资料)
ÄKTApurifier层析仪使用操作规程1、开机打开仪器的主电源，打开电脑电源。
待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁）。
双击桌面上UNICORN图标，进入操作界面。
2、准备工作溶液和样品所有的工作溶液和样品必须经过0.45µm的滤膜过滤，样品也可高速离心后取上清备用。
当缓冲液中含有有机溶剂（如乙腈、甲醇），需在使用前用低频超声脱气10min。
3、清洗及管道准备首先将A1管道放入缓冲液或平衡液，binding buffer中，将B1管道放入高盐溶液中或elution buffer，在system control窗口点击工具栏内的manual，选择 pump→pump wash basic，选中A1,B1管道为ON， execute。
泵清洗将自动结束。
4、安装层析柱在manual里选择pump→flow rate，输入流速1ml/ml，insert；选择Alarm&mon→alarm pressure，设置high alarm（输入填料的耐受压力，可在填料说明书中查到），insert，execute。
待InjectionValve的1号位管道流出水后接入柱子的柱头，稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉接入管道连上紫外流动池。
5、开始纯化：1）等待柱子平衡好了（观察电导COND，pH的数值和变化趋势）就准备上样了。
此时将紫外调零，选择Alarm&mon→autozero，exectue。
2）用样品环上：将样品吸进注射器，推掉气泡，从injectionValve的3号位推入（进样量不得低于样品环的体积的2倍）推好后不要取下注射器。
在manual里选择flowpath→injectionValve→inject，execute。
3）用泵上样：点击pause，将A1放入样品中，点击countine，待样品上完后，再将A1放入到平衡液中继续清洗柱子。
2),3)选择一种方式4）洗脱：上样后用缓冲液尽量将穿透峰洗回基线。
akta 操作规程
akta 操作规程操作规程是指为了规范化、标准化工作流程，确保工作的安全和高效进行而制定的一系列规范和步骤。
以下是关于akta操作规程的一份示例，总字数为1200字。
一、引言akta操作规程旨在确保在akta工作流程中的每个步骤都按照标准程序和最佳实践进行操作，以保证最佳的实验结果和避免任何潜在的风险和错误。
二、适用范围本操作规程适用于所有参与akta工作流程的工作人员，包括实验室技术人员、研究人员等。
三、定义1. akta：一种用于蛋白质纯化的仪器。
2. 标本：指待处理的蛋白质溶液。
四、工作准备1. 检查akta设备是否正常运作，并进行必要的维护和保养。
2. 准备所需的试剂和耗材。
3. 检查仪器和试剂的质量和有效期。
五、样品处理1. 按照相关的实验方案和标准操作程序将标本添加到akta设备中。
2. 设置合适的参数，如流速、压力等，以确保蛋白质纯化的效果最佳。
3. 监测纯化过程中的各项参数，如pH值、溶液浓度等，及时进行调整。
4. 在工作过程中严格遵守个人防护要求，如戴手套、穿实验服，并避免直接暴露于有害化学物质中。
5. 严格按照规定的时间和步骤进行样品处理，避免任何错误。
六、数据记录与分析1. 在整个纯化过程中，准确记录关键步骤和操作参数。
2. 在操作过程中及时记录实验结果，包括纯化效果、产率等。
3. 对结果进行合理的分析和解释，并进行必要的调整和改进。
七、安全措施1. 在操作过程中，严格遵守实验室的安全规定，使用个人防护设备。
2. 防止刺激性、致敏性和有毒性物质的接触，并妥善处理废弃物。
3. 在有害气体、溶液或物质存在的情况下，确保有良好的通风条件。
八、仪器维护与清洁1. 在每次使用后及时进行仪器的维护和保养，检查仪器的功能是否正常。
2. 仪器清洁要求按照实验室的相关规定进行，保持工作区域的干净整洁。
九、问题解决1. 在操作过程中遇到任何问题，应立即与相关人员进行沟通和协调，确保问题及时解决。
AKTA蛋白纯化系统操作
AKTA蛋白纯化系统操作AKTA蛋白纯化系统是当前蛋白纯化工作经常用到的一组设备，自动化程度很高。
AKTA系统依据不同的配置，可以分为AKTA EXPLORER、AKTA PILOT、AKTA PURIFIER等多种型号的设备。
以下以AKTA EXPLORER为例简单介绍 AKTA蛋白纯化系统的一般操作。
1、认识AKTA。
AKTA explorer 是为方法开拓及研究应用而设计的全自动液相色谱系统。
该色谱系统的分离装置有三个主要组件，在底部平台的左侧整齐堆起（Fig 1）。
它们是：FIG 1、AKTA EXPLORER主机• Pump-900 为双通道高效梯度泵系列。
在AKTAexplorer 100，流速范围0.01-100 ml/min，压力高达10 Mpa（泵名为P-901）。
在AKTA explore10，流速范围0.001-10 ml/min，压力高达25 Mpa（泵名为P-903）。
• Monitor UV-900，同时监控190－700 nm 范围内高达3 个波长的多波长紫外-可见（UV-Vis）监测器。
（针对部分AKTA PURIFIER机型，尚有UPC-900监测器可供选择，光源为汞灯光源，一次可以监控一个波长，安装滤光片后，可以在选择的波长范围内进行切换。
）• Monitor pH/C-900，在线电导和pH 监测的组合监测器。
Fig 2、AKTA EXPLORER硬件模式图AKTA EXPLORER系统的主要组成部件可以用模式图表示（Fig 2）。
组成部件，如混合器、柱及不同的阀安装在右边部分。
打开装阀的门可全部看到。
柱被挂在装阀的门的外侧。
分离装置由UNICORN 软件控制。
软件安装于一独立的电脑主机之中，在电脑与色谱系统之间的通信由数据采集装置CU950进行控制。
2、一般操作2.1 开机按位于底部平台前左侧的ON/OFF 按钮，打开色谱系统，然后打开电脑电源。
待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁）。
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AKTA设备常见问题及解决方法--气泡
AKTA purifier以及AKTA avant系列液相色谱系统均采用柱塞泵作为液体传输的动力系统，柱塞泵具有精度高并能提供较高压力等优点。
为了让设备能长期正常使用，就需要我们日常对设备尤其是系统泵做一些简单的维护保养并及时解决一些常见问题。
AKTA 设备柱塞泵的泵头分为前后两个腔体，前腔是正常缓冲液的流路；后腔是泵后润洗流路，后腔润洗液为20%乙醇。
为保证柱塞泵长期正常运转，就需要保证后腔润洗液正常循环并定期更换。
为了保证日常的分离纯化工作正常进行，我们建议大家对所有用于AKTA纯化设备的缓冲液以及20%乙醇溶液都需要进行过滤以及脱气处理，避免层析系统以及层析柱堵塞及进气泡，影响层析效果。
一般建议缓冲液脱气处理的方法有负压抽滤，超声脱气等。
气泡从哪里来？
具体使用AKTA进行实验过程中，当我们所用到的缓冲液未经脱气处理时，实验过程中会有小微气泡逐渐从缓冲液中释放出，聚集在管路当中，小微气泡聚集多了以后会进入泵腔甚至层析柱，导致纯化效率降低；另外由于缓冲液更换、层析柱的拆卸和安装等操作可能也会使AKTA泵腔或层析柱出现进气泡的情况，大家也不必过分担心，可以通过一些操作排除泵腔和层析柱气泡。
怎么来排气泡？
1、当系统上未连接层析柱时，我们发现设置了一定泵流速，但是系统出口看不到有液
体流出或液体流出速度明显低于设置的流速，这很可能就是泵腔进气泡了，我们可以先分别拧松泵头上黑色的排气阀口，然后将注射器插入抽气发口，快速抽动注射器，这时注射器抽出液体的同时会带走泵腔中的气泡，也可以重复抽几次确保气泡排除。
2、当系统上连接层析柱运行但又没有样品进柱子时，我们观察到280nm的紫外检测信
号出现快速剧烈的波动，这时就是有气泡进入到层析柱中了。
这将会导致层析填料利用率下降，纯化效果下降。
如果您使用的层析柱为Hitrap 层析柱、XK层析柱或Hiscale层析柱，您可以将902限流阀（反压阀）连接到紫外流通池后部，然后将报警压力设置为层析填料的压力+0.2Mpa或层析柱压力限值中较小一个，然后用不超报警压力但尽可能快的液体流速就可以将气泡排除层析柱。
但对于自装的比较大的层析柱或者层析柱中进入的气泡过多，就需要重新装填层析柱。
泵后润洗如何排气泡？
泵后腔润洗液具有两个作用，一个作用是作为润滑剂，保证柱塞的正常运转，另一个作用是将泵后腔残余的离子及时去除，保证不会存在盐结晶损伤柱塞的密封圈。
因此需要保证泵后润洗液正常循环，并定期更换。
泵后腔润洗液为20%乙醇，新鲜配制的20%乙醇会一直产生气泡，小气泡聚集就会形成较大的气泡。
因此，20%乙醇最好也需要进行脱气处理。
当我们发现泵后腔润洗管路中有一些气泡存在，我们就需要注意观察一下。
如果泵后腔循环管路的入口（白色管路）处于20%乙醇液面以下，泵后腔润洗管路的回流口（黑色注射器接头）可以滴出液体，这属于正常情况，不必担心。
但有时润洗管路会有长段气泡存在，泵后腔润洗管路的回流口（黑色注射器接头）不能滴出液体时，就需要用注射器从泵后腔润洗回流口（带黑色注射器接头）快速抽20%乙醇溶液，将气泡带出，保证泵后腔润洗管路液体可以循环即可。
此时另一端润洗管路必须存在于20%乙醇液面以下。
但是，有时我们可能会忘记更换泵后润洗的20%乙醇。
泵后腔润洗管路中润洗液长期不循环。
当我们发现这种情况再用注射器快速抽20%乙醇溶液时，发现次循环管路不能抽通。
发生以上情况主要是因为在A泵和B泵间单向阀门（单向阀为灰白色）由于长期没有液体循环而堵塞。
解决方法:单向阀上有箭头，需要记住箭头方向，以便处理完单项阀门后再将阀门安装回原位；将单向阀连同前后管路从泵头上拆下来，然后将单向阀拧开；在有平面一侧滴一滴水或20%乙醇，接着将单向阀螺丝拧紧，重新复原单向阀；接着将单向阀门在桌面或墙面轻轻摔打约10次，再用注射器沿着单向阀箭头方向抽液体或推液体，此时单向阀堵塞问题就可以解决了，如果没有解决，重复操作一次；最后将单向阀按原来方向安装回原位，用注射器抽通泵后腔的泵后润洗液（20%乙醇）即可。
但如果发现泵后腔单向阀门及管路中有褐色、绿色等其他颜色，并且采用以上方法也不能解决阀门堵塞问题。
可能是因为泵后腔润洗管路长期不保养导致，出现细菌污染堵塞单向阀门，此时就需要联系GE healthcare维修工程师了。