四环素差向异构体LCMS分析
注射用替加环素质量评价
. 232 .中国抗生素杂志2021年3月第46卷第3期文章编号：1001-8689(2021)03-0232-07收稿日期：2020-12-02作者简介：刘海玲，女，生于1975年，副主任药师，主要从事抗生素药品质量分析，E-mail : ***************注射用替加环素质量评价刘海玲 曹晓云 郭福庆 杨倩 张宇 王冲 张琳(天津市药品检验研究院，天津 300070)摘要：目的 评价国内上市的注射用替加环素的质量状况。
方法 按照国家评价性抽验计划总体要求，采用现行质量标准进行检验，并开展探索性研究，从多方面对注射用替加环素的质量进行了综合性评价。
结果 按现行质量标准检验，12批次注射用替加环素的合格率为100%。
此次评价性抽验样品的现行质量标准包括1个进口药品注册标准和6个局颁标准，设定的检查项目、采用的检测方法和规定的限度各不相同。
经过探索性研究，优化了有关物质检查液相色谱系统；建立了HPLC-ELSD 法测定乳糖含量测定，发现一家生产企业的辅料乳糖含量偏低，降低了替加环素在贮藏期的稳定性。
结论 注射用替加环素整体质量较好，现行质量标准有待统一提高。
生产企业需对乳糖的含量进行监控。
关键词：注射用替加环素；评价性抽验；质量分析中图分类号:R978.1 文献标志码: AQuality assessment of tigecycline for injectionLiu Hai-ling, Cao Xiao-yun, Guo Fu-qing, Yang Qian, Zhang Yu, Wang Chong, and Zhang Lin(Tianjin Institute for Drug Control, Tianjin 300070)Abstract Objective To evaluate the quality of tigecycline for injection. Method According to the general requirements of national assessment programs, the statutory standard methods combined with exploratory researches were used to evaluate the quality of tigecycline for injection. Results 12 batches of tigecycline for injection were inspected according to the legal standard, and the qualified rate was 100%. There were six standards of China Food and Drug Administration and one standards for the registration of imported drugs, and the methods and limits were not consistent. The exploratory research showed that the low lactose content in a production enterprise reduced the stability of tigecycline during its storage. Conclusion The quality of tigecycline for injection was good, and the current quality standard needs to be improved. Manufacturers need to monitor the lactose content.Key wordsTigecycline for injection; Evaluative testing; Quality analysis第一作者：刘海玲，1997年毕业于华西医科大学药学院，就职于天津市药品检验研究院抗生素室，主要从事抗生素药品检验及药品质量研究工作。
水产品中四环素类药物残留的超高效液相色谱-串联质谱法测定
水产品中四环素类药物残留的超高效液相色谱-串联质谱法测定林荆;张金虎;郑宇;杨勇;余钗;吴文凡【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2010(031)020【摘要】建立同时测定水产品中6种四环素类药物残留的超高效液相色谱.串联质谱(UPLC-MS/MS)分析方法.用0.01mol/L Na2EDTA-Mcllvaine磷酸盐缓冲溶液提取,样液过滤后正己烷除脂,经Oasis HLB固相萃取柱净化,甲醇洗脱,氮气吹干缓冲液定容后,用反相液相色谱分离,电喷雾正离子模式离子化,用多反应监测模式(MRM)监测,三重四级杆质谱测定,外标法定量.该法对四环素类药物在5.0～50.0μg/kg范围内呈线性关系,相关系数r在0.9969～0.9999之间,在5.0、10.0、25.0、50.0μg/kg添加水平,回收率为61%～97%,相对标准偏差(RSD)为1.3%～5.7%,其柃出限达2.5μg/kg,方法操作简便,稳定性好,选择性好,灵敏度高.【总页数】4页(P286-289)【作者】林荆;张金虎;郑宇;杨勇;余钗;吴文凡【作者单位】福清出入境检验检疫局,福建,福清,350300;福清出入境检验检疫局,福建,福清,350300;福清出入境检验检疫局,福建,福清,350300;福清出入境检验检疫局,福建,福清,350300;福清出入境检验检疫局,福建,福清,350300;福清出入境检验检疫局,福建,福清,350300【正文语种】中文【中图分类】O657.63【相关文献】1.超高效液相色谱-串联质谱法测定冻烤鳗中4种四环素类药物残留 [J], 邱旭;张健玲;黄慧贤;林银婷2.超高效液相色谱-串联质谱法测定鳗鱼中四环素类药物残留 [J], 连文浩3.高效液相色谱-串联质谱法测定水产品中的4种四环素类药物残留量 [J], 刘艳萍;冷凯良;王清印;王志杰;孙伟红;王瑜;邢丽红4.超高效液相色谱-串联质谱法测定牛乳、发酵乳\r和乳粉中四环素类药物残留 [J], 段国霞;张立佳;吕志勇;莫楠;谢瑞龙;刘丽君;李翠枝;胡雪5.高效液相色谱-串联质谱法测定水产品中的磺胺类药物残留 [J], 范珺因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
四环素分子结构和性质
四环素类药物—— 四环素的分子结构与性质一．四环素的分子结构Tetracyclines 结构：多环并四苯羧基酰胺碳 核：{氢化并四苯（四环）}● 发色团：酮基和烯醇基共轭双键系统，决定颜色和紫外特征吸收：365nm-350nm● 功能团：二甲胺基（pKa=7.5),酚羟基(pKa=6.5),三羰基甲烷系统（pKa=3.3)pI=5.4酰胺基。
● 四环素类型OHOOHOOHONH 2N CH 3CH 3OH可变部分基本结构二．四环素的性质 物理性质性状：该盐酸盐为黄色结晶性粉末；无臭，味苦；有引湿性；在空气中稳定，遇光色渐变深，在碱性溶液中易破坏失效。
在水中溶解，在乙醇中略溶，在氯仿或乙醚中不溶。
对革兰氏阳性和阴性细菌，各种立克次氏体、螺旋体、大型病毒等有抑制作用。
用于治疗肺炎、斑疹伤寒、阿米巴痢等。
供口服。
但有呕吐、恶心、腹泻等副作用。
可由金霉素脱氯制得，或由培养能产生四环素的放线菌的发酵液中提取。
密度：1.644g/cm3熔点：172-174℃ (dec.)沸点：790.622°C at 760 mmHg闪点：431.953°C蒸汽压：0mmHg at 25°C旋光性：四环素类抗生素分子中具有不对称碳原子，因此有旋光性，可用于定性、定量分析。
溶解度:4>pH>8,可得到高浓度水溶液，过剩的酸能防止水解，pH=4.5—7,.2时难溶于水。
化学性质（一）酸碱性本类抗生素的母核上C4位上的二甲氨基[-N(CH3)2]显弱碱性;C10位上的酚羟基(-OH)和两个含有酮基和烯醇基的共轭双键系统(式中虚线内所示部分)显弱酸性,故四环素类抗生素是两性化合物.遇酸及碱,均能生成相应的盐,但在碱性水溶液中不稳定，故多制成盐酸盐，临床上多应用盐酸盐。
（二）稳定性固体干品相当稳定，可存放5年以上，效价无明显下跌，溶液除DCTC外，均不稳定。
对氧化剂包括空气中的O2都不稳定，碱性时特别易氧化，颜色变深。
高效毛细管电泳分离四环素类抗生素及测定四环素中杂质
Determination of Two Constituents in Compound EnalaprilMaleate Tablets by C apillary Zone ElectrophoresisChen Haifeng and Wang Jie(S handong Institute f or Drug Con trol,Jinan ,250012)Abstract:A simultaneous determ ination of tw o constituents in enalapril maleate compoundtablets by capillary zone electrophoresis w as reported.With caffeine as internal standard and 20m mol/L borax 20m mol/L NaH 2PO 4(4 9 5 1,pH 8 6)as running buffer,the tw o constituents w ere separated w ithin 7minutes.The linear rang es of enalapril maleate and hy drochlorothiazide w ere 80~640 g /mL(r =0 9999)and 50~400 g /mL(r =0 9993),respectively.T he average re coveries(n =5)w ere 101 0%and 101 1%,RSD w ere 1 0%and 1 7%,respectively. Key words:capillary zone electrophoresis(CZE),enalapril m aleate,hydrochlorothiazide高效毛细管电泳分离四环素类抗生素及测定四环素中杂质祝仕清 牛长群 张惠敏(华北制药集团有限责任公司研究所 石家庄 050015)摘要 采用高效毛细管电泳法将四环素、4 差向四环素、脱水四环素、脱水差向四环素、二甲胺四环素、去甲基金霉素及土霉素完全分离,并测定了四环素中杂质。
鸡肉组织中四环素类药物残留检测与分析
鸡肉组织中四环素类药物残留检测与分析四环素类药物是一类广泛应用于家禽养殖行业的抗生素，其能够有效预防和治疗家禽疾病，提高养殖效益。
由于错误或滥用该类药物，导致鸡肉中出现了四环素类药物残留情况，对人体健康构成了潜在的危害。
对鸡肉组织中四环素类药物残留进行检测和分析，对于保障食品安全至关重要。
检测鸡肉组织中四环素类药物残留的方法有很多种，常见的方法包括高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）、液相色谱-质谱联用法（LC-MS/MS）等。
HPLC是一种常用的检测方法，其原理是通过将样品中的化合物分离开来，并利用检测器对其进行分析。
在检测四环素类药物残留时，可以选择合适的色谱柱和流动相来实现分离，然后通过紫外检测器对目标化合物进行定量分析。
LC-MS/MS则结合了液相色谱和质谱技术的优点，具有灵敏度高、选择性好等特点，是目前最常用的检测方法之一。
其原理是通过液相色谱将样品中的化合物分离开来，然后利用质谱技术对分离出的化合物进行定性和定量分析。
除了上述的方法，还可以利用免疫分析技术（如酶联免疫吸附测定法）对四环素类药物进行快速检测，但其通常灵敏度较低。
在实际检测中，样品的处理和准备是非常重要的环节，常见的处理方法包括酸化处理、溶剂萃取和反相萃取等。
为了提高准确性和可靠性，通常会配备对照标准品进行定量分析，并采用国家标准方法进行检测。
对鸡肉组织中四环素类药物残留进行检测和分析的方法有很多种，每种方法都有其适用的场合和特点。
在实际应用中，应根据实际需要选择合适的方法，并严格按照标准操作，以确保检测结果的准确性和可靠性。
只有这样，才能有效保障鸡肉食品的安全，保护人民的健康。
除脂固相萃取小柱结合LC-MSMS测定猪肉中四环素类残留量
0.25 g 盐酸多西环素（农业部环境保护科研检测所）、 0.2 g 盐酸金霉素（Dr.Ehrenstorfer）和 100 μg·mL-1 盐
酸土霉素（中国食品药品检定研究院）标准物质。乙
腈（赛默飞世尔科技有限公司）、甲酸（阿拉丁试剂
上海有限公司）、甲醇和乙酸乙酯（默克股份有限公
司），为色谱纯；柠檬酸和磷酸氢二钠（国药集团化
学试剂有限公司）、乙二胺四乙酸二钠（四川西陵化
工有限公司），为分析纯。
1.2 实验条件
色谱柱 -ACQUITY UPLC BEH C1（8 2.1 mm×50 mm， 1.7 μm）。离子化模式：电喷雾电正离子模式（ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱSI+）；
质谱扫描方式：多反映监测（MRM）；气帘气（CUR）：
241.32 kPa；离子化电压（IS）：5 500 V；离子源温度
（TEM）：550 ℃；GS1：50 ℃；GS2：50 ℃；进样量： 3 μL；色谱柱流速：0.300 0 mL·min-1。洗脱梯度见表 1，
质谱条件见表 2。
表 1 洗脱梯度和质谱条件表（单位：%）
时间 /min
流动相 A-0.1% 甲酸水
流动相 B-0.1% 甲酸乙腈
0.00
AB4500）、超声波清洗器（江苏省昆山市淀山湖镇， KQ5200DB）、氮吹仪 ( 上海安普实验科技股份有限 公司，EFAA-DC24)、冷冻离心机（美国贝克曼公司、 ALLEGRAX-30R）、分析天平（梅特勒 - 托利多仪器 有限公司，AL204）、旋转蒸发仪（BUCHI 科技有限 公司，ROTAVAPORR210）、涡旋振荡器（海门市其 林贝尔仪器制造有限公司，VOJEX-5）、6 mL Captiva EMR-Lipid 和 HLB 小柱（安捷伦科技有限公司）、 0.22 μm 有机滤膜、注射器及色谱瓶。
实验五 薄板层析法鉴定四环素成品纯度
内蒙古科技实验三 薄板层析法鉴定四环素成品纯度特别提示：做实验前自己携带铅笔、直尺和小刀，点样画线用一、实验目的和要求1．考察四环素成品中是否混有差向四环素，鉴别其纯度，并与粗品比较；2．熟悉薄板层析法的操作。
二、实验原理CH 3CH 32CH 3CH 32四环素结构式 差向四环素结构式四环素是抗菌谱广、毒性小、极少过敏、耐药较严重。
抑制细菌生长、作用较弱（不及青霉素类或链霉素类）。
在酸性或碱性溶液中不够稳定，能够形成差向四环素，进而影响药品的药效。
因此，各国药典都对差向四环素含量进行不同程度的控制。
薄板层析法（简称TLC ）是色层分离法中的一种操作形式。
将固定相在平板上铺成薄层，样品点在薄层上，然后在适当的流动相中展层。
薄板层析具有分离效率较高、展开时间短、设备简单和操作方便等优点，常用于分析鉴定中。
该实验的分离机理是分配层析机理，即固定相为吸附在硅藻土上的液体，利用各组分在固定相和流动相中不同程度的分配而达到层析分层目的。
利用阻滞因数R f 值来表征各组分的差别移动。
)()()()(R r R f 的移动距离前缘在同一时间流动相的移动距离浓度中心溶质 四环素易溶于流动相液体；差向四环素易溶于固定相液体。
因此，四环素的R f 大于差向四环素的R f 。
内蒙古科技大学三、材料和溶液配制1．硅藻土：取薄板层析用硅藻土50g ，加25 mL 浓盐酸和250 mL 水，搅拌煮沸10min ，冷却，过滤，用蒸馏水洗，直至洗液对刚果红指示剂不显颜色，然后用丙酮：氯仿：乙酸乙酯=3：1：1的液体洗涤，过滤，105℃烘箱干燥。
2．pH7的EDTA 溶液：取37．2克乙二胺四乙酸二钠盐（EDTA ），溶解在900 mL 左右的蒸馏水中，用浓氨水调节pH 到7，再用蒸馏水稀释至1000 mL ；3．EDTA 缓冲液：在40 mL 甘油中，加入10 mL 聚乙二醇400，摇匀即得20％(W/V)聚乙二醇400的甘油溶液[1]，再加入950 mL pH7 EDTA 溶液[2]，摇匀即得EDTA 缓冲液。
SPE-LC-MS／MS检测不同水产品组织中四环素类药物残留的方法研究
类抗生素是少数被允许使用的常用药物之一 。由于 抗生素可诱导机体内产生抗药菌株 ， 造成人体免疫功 能下降， ２ ０ ０ ６年 欧 盟 全 面禁 止抗 生 素 作 为饲 料 添 加 剂 。欧盟 、 美 国和 中 国等 多个 国家 和地 区已相 继制 定
近年 ， 高效液相色谱 （ Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ）结 合 紫 外 检 测 器 － ６ ］ 、 荧光 检 测 器 和 质 谱 检 测 器 佗 先 后 被 用于 水产 品 中 四环 素类 药 物 残 留 的检 测 。 中 国现 行 水产 品 中 四环 素类 的检 测 标 准 方 法 均 为 高效 液 相 色
化 的方 法 ， 建 立 了鲤 、 鳗、 海 参 和河 豚 鱼 组 织 中 四 环
ห้องสมุดไป่ตู้
（ ＭＲ Ｌ ） 为１ ０ ０ ｂ ￣ ｇ ／ ｋ ｇ ¨ ， 国际食 品法 典委 员 会 （ Ｃ Ａ Ｃ） 和 日本 肯 定 列 表 规 定 其 最 大 残 留 限 量 （ ＭＲ Ｌ） 为
２ ０ ０ ｋ ｇ 。
四环素类 （ ｔ ｅ ｔ ｒ ａ ｃ ｙ ｃ ｉ ｉ ｎ ｅ ｓ ， Ｔ Ｃ ｓ ） 药 物作 为水 产养 殖 饲料 的药物 添加 剂 ， 同时起 到促 生 长和 预 防各种 疾病 的作 用 ， 其 用 量 约 占抗 生 素 类 药 物 添 加 剂 总 量 的 ５ ７ ％ 左 右 。综 合 分 析 中 国 、 欧盟、 美 国 和 日本 等 主要 水 产 品生产 国家 和地 区 的药物 使 用情 况可 知 ： 四环 素
２ ０ １ ７， ７ （ ３ ） ： ４ ４— ５ １ ］
关键词 ： 水产 品 ； 四环素类药物 ； 固相萃取 ； 液相色谱 一串联质谱
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1.9e4 1.5e4 1.0e4 5000.0 0.0 0.0 4.36
0.0 0.0
1.0
2.03.04来自05.06.0
7.0
11.0
12.0
13.0
14.0
15.0
Max. 1.9e4 cps.
4-Epioxytetracycline Oxytetracycline
3.28
8.0 9.0 10.0 Time, min XIC of +MRM (7 pairs): 479.100/444.100 Da ID: 5 from Sample 5 (5ppb-methond2) of 11-01.wiff (Turbo Spray), Smoothed, Smoothed 2.3e4 2.0e4 1.5e4 1.0e4 5000.0 0.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 Time, min 9.0 10.0 9.27
0
2
10
15
25 min
■ Compounds Mixture-1 1. Tetracycline 2. Oxytetracycline 3. Chlortetracycline 4. 4-epitetracycline 5. 4-epioxytetracycline 6. 4-epichlortetracycline
Max. 2.7e4 cps.
2.5e4 2.0e4 1.5e4 I n t e n . . .
I n t e n . . . I n t e n . . .
4-Epitetracycline
3.50
5.74
Tetracycline
1.0e4 5000.0 8.0 9.0 10.0 Time, min XIC of +MRM (7 pairs): 461.100/426.100 Da ID: 3 from Sample 5 (5ppb-methond2) of 11-01.wiff (Turbo Spray), Smoothed, Smoothed
1.0
2.0
3.0
4.0
5.0
6.0
7.0
11.0
12.0
13.0
14.0
15.0 Max. 2.3e4 cps.
Chlortetracycline 4-Epichlortetracycline
7.66
11.0
12.0
13.0
14.0
15.0
注解:以上结果所用的标准稀释溶液是由国外的客户提供。每对差向异构体的相互转换结果都能很清楚的被检测到。 在检测过程中可能会有部分的样品丢失或者样品瓶中的四环素会发生一些降解，因此，虽然样品的配制浓度应为 5ppb，但实际的浓度可能会低于5ppb。 3/3
N HO H2N O
HO
O H2N
N
H
OH HO H
N O H2N
H
HO H
Cl
OH O OH
O
OH
OH
OH O O
OH
OH
OH
O
OH O
OH
OH
1. Tetracycline C22H24N2O8 Exact Mass: 444.15
1. Oxytetracycline C22H24N2O9 Exact Mass: 460.15
1. Chlortetracycline C22H23ClN2O8 Exact Mass: 478.11
2/3
XIC of +MRM (7 pairs): 445.100/410.100 Da ID: 1 from Sample 5 (5ppb-methond2) of 11-01.wiff (Turbo Spray), Smoothed, Smoothed
LC- MS of Tetracyclines (四环素 )
Shiseido China
1/3
<LC-MS/MS>
■ HPLC conditions Column :CAPCELL PAK C18 MG M.Phase :A) 0.1 vol% HCOOH B) CH3CN Flow rate Temp. Detection Inj.Vol. Sample S3 2.0 mm i.d. ×150mm
B%
B% 15%(0min)->15%(2min)->30%(10min)->50%(15min)->15%(15.1min)
50
:0.2 mL/min :40℃ :MS/MS, positive (QTRAP 5500) :10 µL (5ppb, each) :5 ppb each.
30 15 10