血小板衍生膜微粒对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的影响(一)
β-环糊精及衍生物作为生物活性分子研究进展
β-环糊精及衍生物作为生物活性分子研究进展张严; 苏志桂; 张灿【期刊名称】《《药学研究》》【年(卷),期】2018(037)010【总页数】5页(P589-592)【关键词】β-环糊精; 包合物; 脂质稳态; 生物活性分子; 药效学【作者】张严; 苏志桂; 张灿【作者单位】中国药科大学天然药物活性组分与药效国家重点实验室江苏南京210009【正文语种】中文【中图分类】O636.12环糊精(cyclodextrin，CD)是由D-葡萄糖分子以1,4-糖苷键连接成的环状分子，呈中空圆筒型，空腔的内部呈疏水性，空腔开口处呈亲水性，目前常用的环糊精由6～8个D-葡萄糖分子组成，分别称为α、β和γ-环糊精[1]。
由于β-CD的疏水空腔可以与大部分亲脂性化合物通过主-客体相互作用实现有效包合，同时增加亲脂性化合物在水中的溶解性和生物利用度，因此在制药工业中被广泛使用[2]。
由于β-CD溶解度相对较低，且存在溶血作用，针对上述问题，目前已开发出多种基于β-CD的衍生物。
例如磺丁基醚-(SBE-)、羟丙基(HP-)和甲基(M-)取代β-CD羟基所得的β-CD衍生物具有更好的水溶性[3]。
由于β-CD可以与细胞内脂质如胆固醇和磷脂相互作用，并可促进细胞内胆固醇和其他脂质的外流，调节胞内胆固醇和其他脂质稳态，因而目前β-CD及其衍生物已作为生物活性分子应用于尼曼-皮克C型疾病(niemann-pick type C disease，NPC)、阿尔兹海默病(Alzheimer′s disease，AD)、缺血缺氧性脑病、动脉粥样硬化(Atherosclerosis，AS)、癌症等疾病中。
本文将综述近年来基于β-CD及其衍生物作为生物活性分子在上述疾病中的应用，为利用环糊精及其衍生物调控胞内脂质稳态实现疾病治疗提供参考。
1 环糊精治疗尼曼-皮克C型疾病的研究尼曼-皮克C型疾病(NPC)是尼曼-匹克C1型(NPC1)或尼曼-匹克C2型(NPC2)基因突变所导致的溶酶体脂质沉积病。
血小板来源的细胞外囊泡与疾病的研究进展
血小板来源的细胞外囊泡与疾病的研究进展作者：李婵娣陈煜森马晓瑭许小冰李嘉辉来源：《新医学》2021年第05期【摘要】血小板是从巨核细胞释放的小而无核的细胞，主要功能是止血，调节炎症，促进血栓形成，促进肿瘤的增殖、侵袭、转移以及调节免疫等，血小板活化是其发挥作用的关键，研究表明这些功能与血小板活化后释放的细胞外囊泡有关。
血小板活化后释放的细胞外囊泡包括微粒和外泌体，均表现出原细胞的特性，细胞外囊泡是一种非均匀的纳米级小泡，携带遗传物质（微小RNA、信使RNA等）、酶、蛋白质和小分子，介导细胞通讯。
该文就血小板来源的细胞外囊泡与疾病的相关研究进行综述，揭示其作为疾病标志物、靶向治疗的潜能。
【关键词】血小板;细胞外囊泡;微粒;外泌体;疾病Research progress on platelet-derived extracellular vesicles and diseases Li Chandi， Chen Yusen， Ma Xiaotang， Xu Xiaobing， Li Jiahui. Department of Neurology， Affiliated Hospital of Guangdong Medical University， Zhanjiang 524001， ChinaCorresponding author， Chen Yusen， E-mail：********************【Abstract】 Platelets are small and non-nucleated cells released from the megakaryocytes，which mainly function to stop bleeding， regulate inflammation， promote thrombosis， accelerate tumor proliferation， invasion and metastasis， and regulate immunity. Platelet activation is the key to its function. Previous studies have shown that these functions are associated with extracellular vesicles released after platelet activation. The extracellular vesicles released after platelet activation，including microparticles and exosomes， also exhibit the characteristics of original cells. Extracellular vesicles are non-uniform nano-scale vesicles that carry genetic materials （miRNA and mRNA， etc.）， enzymes， proteins and small molecules， and mediate cell communication. In this article， relevant studies on the association between platelet-derived extracellular vesicles and diseases were reviewed， aiming to unravel its potential as a disease biomarker and targeted therapy.【Key words】 Platelet;Extracellular vesicle;Microvesicle;Exosome;Disease血小板是从巨核细胞释放的小而无核的细胞，主要功能是止血，调节炎症，促进血栓形成，促进肿瘤的增殖、侵袭、转移以及调节免疫等，这些功能与血小板活化后释放的细胞外囊泡（EV）有关。
血小板对人肺癌细胞株A549凋亡的影响及机制初探
DOI ：10.3969/j.issn.1671-2587.2019.01.007*本课题受安徽省自然科学基金（No.1608085MH 229）资助作者单位：230001 合肥，中国科技大学附属第一医院检验科、输血科作者简介：李娟（1987–），女，安徽合肥人，检验技师，硕士，主要从事临床输血与检验相关研究工作，（E-mail ）942085342@ 。
通信作者：罗以勤，男，教授，主任医师，硕士生导师，（E-mail ）luoyiqin 2003@ 。
·基础实验· ·论著·血小板对人肺癌细胞株A549凋亡的影响及机制初探*李娟 罗以勤 方慢 王章飞【摘要】 目的 探讨血小板（PLT ）对肺癌细胞株A 549的影响及其可能的机制。
方法 通过流式细胞术检测PLT 对A 549细胞的凋亡作用；Western blot 检测PLT 和A 549细胞共培养后A 549细胞中ERK 1/2、JNK 、p-ERK 、p-JNK 、MMP–2、MMP–9、Bcl–2、Bax 蛋白的表达情况。
结果 应用流式细胞术的检测结果发现，血小板抑制A 549细胞的凋亡并能阻止化疗药物吉西他滨诱导的A 549细胞凋亡。
Western blot 结果显示PLT 和A 549细胞共培养48 h 后，A 549细胞中ERK 1/2、JNK 、p-ERK 、p-JNK 、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达明显增加，Bax 蛋白表达明显降低。
结论 血小板可增加A 549细胞中ERK 1 / 2、JNK 、p-ERK 、p-JNK 磷酸化，增加MMP-2、MMP-9和Bcl-2蛋白的表达; 降低Bax 蛋白表达，并抑制肺癌细胞株A 549的凋亡。
血小板可抑制A 549细胞的凋亡，且与血小板的浓度呈正相关。
【关键词】 血小板 肺癌细胞 凋亡 吉西他滨【中图分类号】 R 331.1+43 R 734.2 【文献标识码】 A 【文章编号】 1671-2587（2019）01-0020-04The Influence of Platelets on Apoptosis of Lung Cancer Cells LI Juan ，LUO Yi-qing ，FANG Man ，et al. Departments ofLaboratory Diagnostics and Blood Transfusion ，the First Hospital of USTC ，230001【Abstract 】 Objective To study the impact of platelet on tumor cell apoptosis which is associated with resistance of lung cancer cells to chemotherapy.Methods Flow cytometry was performed to detect the apoptosis of A 549 induced by PLT . The expression of ERK 1/2，JNK ，p-ERK ，p-JNK ，MMP 2，MMP-9，the Bcl-2，Bax was examined by Western blotting after co-culture of PLT with A 549 cells. Results The expression of ERK 1/2，JNK ，p-ERK ，p-JNK ，MMP-2，MMP-9，and Bcl-2 was significantly upregulated while Bax was decreased after 48h cultrue. Conclusions Platelets facilitated migration of A 549 cells in vitro ，which was positively correlated with the platelet concentrations. Platelets increased the phosphorylation of ERK 1/2，JNK ，p-ERK ，p-JNK; MMP-2 and the expression of MMP-2，MMP-9，and Bcl-2，but decreased the expression of Bax protein and inhibited the apoptosis of lung adenocarcinoma cells.【Key words 】 Platelets Lung adenocarcinoma cancer cells Apoptosis Gemcitabine肺癌是临床最常见的恶性肿瘤之一，其死亡率位居癌症前列。
米非司酮对人脐静脉内皮细胞增殖与凋亡的作用
米非司酮对人脐静脉内皮细胞增殖与凋亡的作用鹿群;赵兴波;李建峰;李继俊【期刊名称】《山东大学学报：医学版》【年(卷),期】2002(40)5【摘要】目的 :研究米非司酮 (MIF)对人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)增殖与凋亡的作用。
方法 :应用MTT比色法观察MIF对HUVEC细胞生长的影响 ;采用形态学观察、流式细胞术、免疫组织化学、DNA缺口原位末端标记法 (TUNEL)观察MIF作用前后HUVEC细胞增殖与凋亡变化。
结果:不同浓度MIF均能抑制HUVEC细胞生长。
MIF≤ 2 0 μmol L对细胞生长的抑制作用在第 2 4h达高峰 ,此后呈下降趋势。
MIF >2 0 μmol L对细胞生长产生剂量依赖性抑制作用。
用4 0 μmol L的MIF处理72h后,HUVEC细胞的增殖降低、凋亡率增加,P<0 .0 0 0 1;且伴随ER PR、VEGF表达的下降。
结论 :MIF具有抑制HUVEC细胞增殖、诱导HUVEC细胞凋亡的作用。
【总页数】3页(P442-444)【关键词】米非司酮;脐静脉内皮细胞;细胞增殖;细胞凋亡【作者】鹿群;赵兴波;李建峰;李继俊【作者单位】山东大学临床学院;山东省立医院中心实验室【正文语种】中文【中图分类】R984【相关文献】1.小檗碱对人脐静脉内皮细胞增殖与凋亡的作用 [J], 郝钰;徐泊文;郑宏;杭小同;邱全瑛;黄启福2.Parthenolide对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的作用研究 [J], 任琦;胡晓晟;姚雪艳;陶谦民;张力3.不同浓度的乌司他丁对人脐静脉血管内皮细胞增殖、凋亡、迁移及黏附作用的影响 [J], 林嘉宝;吴起;王甲汉4.过表达mimecan对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的作用初探 [J], 王晶;沈琼娜;张惠洁;胡小磊;陈凤玲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
脂多糖对人脐静脉血管内皮细胞的直接损伤作用
脂多糖对人脐静脉血管内皮细胞的直接损伤作用姚磊;孙宇;任成山;张征【期刊名称】《中国医师杂志》【年(卷),期】2001(003)005【摘要】Objective To study the directly injury effects of lipopolysaccharide(LPS) on human vascular endothelialcells(HVEC).Methods Lipopolysaccharide with different concentrations added into cultured vascular endothelial cells of human umbilical vein,at different phase after lipopolysaccharide being added,the concentrations of nitric oxide(NO),lactic acid dehydrogenase(LDH) were measured,and the adhesion of HVEC to polymorphonuclear leucocytes(PMN) were observed,the morphological changes of HVEC were detected by phase-contrast microscope.Results The NO content,LDH activity were obviously elevated with increase of LPS concentration(P＜0.01),the adhesion of HVEC to PMN was distinctly increased too(P＜0.01),and the cytopathiceffects(CPE) of HVEC were found.Conclusion LPS can stimulate and injure the HVEC,this injure could play a critical role in shock of infection.%目的探讨脂多糖(LPS)对人血管内皮细胞(HVEC)直接损伤作用。
血小板与动脉粥样硬化
垦堕堂奥笪煎銎查堡！旦堑ｊ！鲞箜ｊ塑！坐』鱼型ｉ竺垡！！丛：：ｉ！：堕！：ｉ血小板与动脉粥样硬化陈翅综述李剑施海明审校【摘要】动脉粥样硬化受多种遗传因素和外界因素的影响，其发病机制与血栓形成、脂质浸润及损伤炎症反应等有关。
研究证实，血小板参与动脉粥样硬化的形成，但其机制尚未阐明，可能与血小板激活引起炎症反应、血小板释放细胞因子、血小板介导内皮黏附以及相关脂蛋白调节有关。
【关键词】动脉粥样硬化；血小板；载脂蛋白Ｅ；细胞因子Ｄ（）Ｉ：１０．３９６９／ｉ．ｉｓｓｎ．１６７３—６５８３．２０１１．０３．００５动脉粥样硬化是一种以中等和大动脉斑片状内膜下增厚（动脉粥样化）为特征的病变，主要表现为动脉内膜下脂质沉积，并伴有平滑肌细胞和纤维基质成分的增殖，最终逐步发展形成动脉粥样硬化性斑块。
临床上以主动脉、冠状动脉及脑动脉多见，常导致管腔闭塞或管壁破裂出血等严重后果，已成为引起心、脑血管疾病的主要原因之一。
动脉粥样硬化受多种遗传因素和外界因素的影响口］，其发病机制主要涉及血栓形成、脂质浸润和损伤炎症反应，许多研究证实，血小板在动脉粥样硬化的发生发展过程中起着重要作用，本文就近年来的相关研究作一综述。
ｌ血小板与炎症反应血小板不仅具有促进血栓形成的作用，而且是炎症和动脉粥样硬化的重要关联体。
被激活后的血小板通过表达和释放炎症介质，诱导白细胞的炎症作用，促进内皮细胞活化及变性，形成动脉粥样硬化和血管血栓性病变［引。
Ｋｏｅｎｅｎ等［３］研究认为，血小板衍生的趋化因子可以介导炎症反应，引起白细胞对血管的损伤，使血管出现功能障碍，促进血管内膜增厚导致动脉粥样硬化。
进一步研究证实，血小板活化后可以大量表达基质细胞衍生因子一１，后者可以诱导ＣＤ３４＋干细胞分化成为巨噬细胞和泡沫细胞，导致白细胞向血管内皮细胞趋化，单核细胞向血管内膜下渗出形成泡沫细胞，引起动脉粥样硬化［４］。
此外，血小板还可通过促进树突状细胞作者单位；２０００４０上海。
PDGFR
• 2．PDGFR介导的信号通路
• PDGF与受体发生特异性结合使受体二聚化导致 受体的自体磷酸化和受体酪氨酸激酶激活，酪氨 酸残基暴露 SH2结构域／PTB结构域结合位点和 底物蛋白分子结合 ，从而激活细胞内信号转导通 路 。这些底物蛋自信号分子包括：生长因子 （PI3-K)的p85亚单位 、酪氨酸激酶Src家族 、 GTP酶激活蛋白(GAP)、信号转导与转录激活因 子(STAT)、磷脂酶 c-γ(PLC-γ)、酪氨酸特异磷酸 酶等。它们直接或间接活化下游激酶如丝裂原 活 化蛋白家族 、局部粘附激酶 (FAK)等，进而活化 转录因子启动靶基因的转录。
血小板衍生生长因子受体 PDGFR
陈晓婷
一、PDGFR的分子功能
• 1、PDGFR的生物功能 • 血小板衍生生长因子受体(PDGFR)是一种受体酪 氨酸蛋白激酶家族成员，能够促进细胞的趋化、 分裂与增殖，在机体生长发育、创伤修复等生理 过程中起积极重要的作用，并与肿瘤的发生密切 相关。PDGF与PDGFR结合触发受体的二聚复合 物形成，从而激活下游信号分子产生一系列生物 效应，可诱导肿瘤新生血管的形成，直接或间接 地促进肿瘤细胞增殖与迁移。是肿瘤血管发生过 程中起重要作用的信号通路 。
• IP3作为第二信使诱导 cmyc基因表达，使 细胞内 DNA合成加快；DG可激活PKC， PKC可使靶蛋白的丝氨酸和苏氨酸残基磷 酸化 ，产生生物效应。DG还可通过活化 Na+／K+泵，降低细胞内H+浓度，诱导cfos原癌基因的表达，促进细胞分裂 。
4
• ④STAT通路 ：活化的PDGFR或JAK激活 STAT，后者转移到胞核活化核膜上丝氨酸 或苏氨酸残基激酶 ，再作用于核内转录因 子 ，促进细胞生长和分裂 。
血管结构异常的先天性心脏病患儿中Ｖａｖ２基因突变的筛查和功能分析
心血管病学进展２０２３年８月第４４卷第８期 ＡｄｖＣａｒｄｉｏｖａｓｃＤｉｓ，Ａｕｇｕｓｔ２０２３，Ｖｏｌ．４４，Ｎｏ．８·论著·血管结构异常的先天性心脏病患儿中Ｖａｖ２基因突变的筛查和功能分析陈颖慧１ 冯奕源２ 冯炜琦１ 吴逸卓１ 鲁亚南３ 于昱１（１．上海交通大学医学院附属新华医院心血管发育与再生医学研究所，上海２０００９２；２．上海交通大学医学院附属新华医院核医学科，上海２０００９２；３．上海交通大学医学院附属新华医院儿心脏中心，上海２０００９２）【摘要】目的 通过全外显子组测序筛查血管结构异常类先天性心脏病（ＣＨＤ）致病候选基因Ｖａｖ２的新发突变ｃ．７０１Ｃ＞Ｔ：ｐ．Ｐ２３４Ｌ，探究Ｖａｖ２及其新发罕见突变对内皮细胞功能的影响，探索ＣＨＤ发生的可能分子机制。
方法 分析１１７例血管结构异常类ＣＨＤ患儿及２００例正常儿童的外周血全外显子组测序数据筛查Ｖａｖ２突变。
构建Ｖａｖ２野生型及突变型表达质粒，转染人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ），通过ｑＲＴ ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测Ｖａｖ２、下游Ｒａｃ１ｍＲＮＡ和蛋白的表达水平；通过ＣＣＫ ８、划痕试验和成管实验检测Ｖａｖ２及突变对ＨＵＶＥＣ增殖、迁移和成管能力的影响。
结果 在血管结构异常类ＣＨＤ患儿中发现的Ｖａｖ２罕见突变ｃ．７０１Ｃ＞Ｔ：ｐ．Ｐ２３４Ｌ，在对照组中未出现且从未被报道。
与野生型对比，Ｐ２３４Ｌ突变能降低Ｖａｖ２蛋白表达，ＣＣＫ ８、划痕试验和成管实验发现该突变影响Ｖａｖ２促进ＨＵＶＥＣ增殖、迁移和成管等血管生成相关的功能，但该突变不影响下游Ｒａｃ１本底ｍＲＮＡ和蛋白表达。
结论 Ｖａｖ２的错义突变影响Ｖａｖ２蛋白表达，进而损害Ｖａｖ２在ＨＵＶＥＣ中促进增殖、迁移和成管等血管生成相关的功能，可能是影响下游Ｒａｃ１激活而非本底表达导致的。
Ｖａｖ２是血管发育过程的关键分子，可能参与调控血管结构异常类ＣＨＤ发生，Ｐ２３４Ｌ突变导致Ｖａｖ２功能受损，进一步提供了Ｖａｖ２在血管结构异常类ＣＨＤ中可能的致病分子机制。
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血小板衍生膜微粒对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的影响(一)
作者：仲悦娇，陈宝安，黄成垠，李翠萍，高峰，费菲，裴孝平
【摘要】本研究探讨血小板衍生膜微粒对人脐静脉内皮细胞（humanumbilicalveinendothelialcells,HUVEC）增殖和凋亡的影响。
用不同浓度的凝血酶激活血小板释放出PMP，采用流式细胞术检测PMP的释放量，确定制备PMP时凝血酶的最佳应用浓度。
以体外培养HUVEC为载体,通过噻唑蓝(MTT)实验和流式细胞术研究不同浓度的PMP对HUVEC增殖和凋亡的影响。
结果表明，2、1.5、1.0和0.5U/ml凝血酶激活血小板后PMP的释放率分别为28.7、47.7、50.1和43.9%；HUVEC的增殖与PMP呈剂量依赖关系。
在培养液中添加40μg/mlPMP时，HUVEC增殖是空白对照组的1.8±0.3倍；10μl/ml 血管内皮细胞生长因子（VEGF）组的HUVEC增殖是空白对照组的1.9±0.5倍，两组之间无统计学差异，（p>0.05）；PMP能抑制HUVEC的凋亡，40μg/mlPMP组的细胞凋亡率为（3.9±0.4）%,明显低于空白对照组的细胞凋亡率（9.4±0.5)%（p0.05）。
VEGF（10μl/ml）对HUVEC细胞的凋亡无明显抑制作用,其凋亡率为（8.0±0.8）%。
结论：用1U/ml的凝血酶刺激血小板释放的PMP较为均一，且释放量最大，可促进HUVEC细胞的增殖并抑制其凋亡。
【关键词】细胞凋亡
bilicalVeinEndothelialCells
DepartmentofHematology,ZhongdaHospital,SoutheastUniversity,Nanjing210009,China;1JiangsuPr ovinceBloodCenter,Nanjing210042,China
es(PMP)ontheproliferationandapoptosisofhumanumbilicalveinendothelialcells(HUVEC).Differentc oncentrationsofthrombinwereadoptedtoactivatetheplateletssoastoreleasePMPs.Flowcytometry(F CM)wasadoptedtoevaluatetheefficienciesofdifferentconcentrationsofthrombintoreleasePMPs.By usingtheHUVECcultivatedinvitroasvector,theeffectsofPMPsontheproliferationandapoptosisofHUV ECwereinvestigatedbyMTTandFCM.TheresultsshowedthattheefficienciesreleasingPMPsfromplatel etsactivatedby2.0,1.5,1.0,0.5U/mlthrombinwere28.7,47.7,50.1and43.9%respectively;PMPsinduc edproliferationofHUVECinadosedependentmanner.Atthec oncentrationof40μg/mlPMPs,theprolife rationrateofHUVECwas1.8±0.3timesasmuchasblankcontrol,theproliferationrateingroupofvascular endothelialgrowthfactorwas1.9±0.5timesofasmuchasblankcontrol,therewasnostatisticdifference( p>0.05)paredwiththeapoptosisrateofcontrol(9.4±0.5)%，apoptosisrateinPMPgroup(40μg/ml)was(3.9±0.4)%(p0.05).TheadditionofVEGF(10μl/ml)didnotsuc cessfullypreventedapoptosisofHUVECwithapoptosisrateof(8.0±0.8)%.Itisconcludedthatplateletsac tivatedby1U/mlthrombingetsthebestefficiencyofPMPrelease,whichstimulatesproliferationofHUVE Candinhibitsitsapoptosis.
；humanumbilicalveinendothelialcell；proliferation；apoptosis
血小板衍生膜微粒（）是在血小板活化或降解过程中产生的直径为0.1-1.0μm的小囊泡颗粒，它含有多种特异性膜糖蛋白和生物活性受体，可通过与靶细胞的相互作用启动靶细胞的生物学效应。
研究表明，PMP可促进人造血干细胞、平滑肌细胞、骨细胞等的增殖。
最近研究证实了血管生成因子（和VEGF）的水平与PMP水平有着很强的相关性〔1〕，PMP能刺激内皮细胞增殖、迁移并影响细胞形态〔2〕，促进血管生成的发生和肿瘤的转移〔3〕，PMP有促进伤口和溃疡愈合的功能，而且不同的血小板内复合物能调控血管生成的不同阶段。
本研究通过PMP与人脐静脉内皮细胞（humanumbilicalveinendothelialcells,HUVEC)共同孵育观察PMP对HUVEC生长的影响。
RPMI1640干粉系美国Gibco公司产品。
小牛血清为杭州四季青生物工程公司产品，EDTA（二乙烯四乙酸二钠）溶液，MTT试剂为Fluka公司产品，血管内皮细胞生长因子（VEGF）为Sigma公司产品，流式细胞仪为BectobnDickinson公司产品，细胞凋亡检测试剂盒为BenderMedsystems公司产品，BCA蛋白浓度测定试剂盒购自碧云天生物技术有限公司。
血小板膜微粒的制备
将血小板悬液经500×g离心10分钟（22±2℃），沉淀物悬浮于缓冲液中(9mmol/LNa2EDTA、26.4mmol/lNa2HPO4、140mmol/LNaCl),并用缓冲液洗涤2次。
最后将洗涤的血小板悬浮于Tyrode缓冲液中(137mmol/LNaCl、12mmol/LNaCHO3、5.5mmol/L葡萄糖、2mmol/LKCl、1mmol/LMgCl、0.3mmol/LNaHPO4)。
调整血小板浓度为8×108/ml。
分别采用2、1.5、1.0和0.5U/ml的凝血酶激活血小板（放37℃恒温摇床上振荡30分钟）。
激活后的血小板（4℃，1600×g离心20分钟）,上清分离于另1试管中，于4℃，2700×g/min，离心1小时，并洗涤1次，沉淀物悬浮于Tyrode缓冲液中〔4，5〕。
PMP的鉴定及定量
用等量1％多聚甲醛固定PMP后采用CD61标记PMP,选择直径1μm的微粒以确定PMP直径阈值，并设定同型对照，用流式细胞仪分析不同浓度凝血酶作用后PMP释放的情况及PMP 制备的纯度。
采用BCA蛋白定量试剂盒检测PMP的浓度（以蛋白含量计），操作按试剂盒说明书进行。
HUVEC的培养
人脐静脉内皮细胞ECV304(引自中国科学院上海细胞生物研究所)接种于无菌培养瓶中，加入适量RPMI1640培养液（含10%的小牛血清、青霉素100U/ml、链霉素100U/ml）,于37℃、5%CO2及饱和湿度的培养箱中培养。
细胞呈单纯贴壁生长，每3-5天传代1次。
传代时用0.02%EDTA消化8-10分钟，用培养液吹打制成细胞悬液，按1×105浓度接种。
PMP对HUVEC增殖活力的影响
取对数生长期细胞,经0.25%胰蛋白酶消化后，制备单细胞悬液，调整细胞密度为2×104/ml，接种于96孔培养板,100μl/well，实验组加入不同浓度的PMP，另外设空白对照和10μl/mlVEGF 组，每组设3个复孔。
在37℃、5%CO2饱和湿度培养箱中培养24小时后,弃去培养液,加入5mg/mlMTT，10μl/well。
继续培养6小时后,弃去上清液,加入二甲亚砜(DMSO)150μl/well,振摇10分钟,使结晶物甲月替（formazan）充分溶解,在酶联免疫检测仪上测定490nm处各孔的光密度值(OD值)，计算细胞增殖率。
PMP对HUVEC凋亡的的影响
取对数生长期的HUVEC，用含40μg/mlPMP的RPMI1640培养液制备成细胞悬液（2×104/ml），常规培养24小时；同时设10μl/mlVEGF组和空白对照组。
将上述培养后的细胞，经0.25%胰蛋白酶消化，用冷PBS洗涤2遍，用50μl1×Annexin结合缓冲液悬浮细胞，加，室温避光放置10分钟，再加碘化丙锭（PI）10μl，混匀后室温避光放置5分钟，用冷PBS洗涤1遍，加300μl1×Annexin结合缓冲液重悬细胞后，立即在流式细胞仪上检测，以Annexin+/PI-判断为早期凋亡，Annexin+/PI+判断为晚期凋亡。