乳腺癌HER2检测指南(2014版)概要解读
HER2基因扩增检测试剂盒说明书
HER2基因扩增检测试剂盒（荧光原位杂交法）说明书【产品名称】通用名称：HER2基因扩增检测试剂盒（荧光原位杂交法）英文名称：Zyto Light SPEC HER2/CEN17 Dual Color Probe Kit【包装规格】货号Z-2020-5：5测试/盒货号Z-2020-20：20测试/盒【预期用途】本试剂盒用于检测经10%中性缓冲福尔马林固定、石蜡包埋的乳腺癌组织切片中HER2基因的扩增状态。
本试剂盒尤其适用于免疫组织化学HER2（ERBB2）蛋白检测结果为不确定的标本的检测。
HER2基因扩增是确定靶向治疗适应症的重要指标，基于本试剂盒未与具体药物联合进行临床评价，临床医生应在本检测结果基础上结合患者病情、药物适应症、治疗反应及其他检测结果对患者的个体化治疗进行综合判断。
【检验原理】荧光原位杂交技术（Fluorescent In Situ Hybridization, FISH）是一种以荧光标记的核酸探针与组织中的特异核酸分子进行杂交的技术，其基本原理是利用荧光标记的核酸探针在变性后根据碱基互补配对原则准确识别待检样本中的靶核酸序列，经退火复性后形成靶DNA与核酸探针杂交体，通过荧光检测系统（荧光显微镜）直接观察和分析染色体或基因的数量或结构的状态。
本试剂盒内HER2/CEN17双色探针液（以下简称为探针）设计序列来源图见图1和图2。
将样本经福尔马林固定、石蜡包埋后制成4±1μm厚度的切片，固定于粘性玻片上。
切片经预处理后，将HER2/CEN 17双色探针液与待测样本DNA变性、杂交。
杂交完成后，通过一系列洗涤缓冲液洗去未结合探针，并用DAPI（4，6-二咪基-2-联苯基吲哚）对样本中的细胞核复染成蓝色。
DAPI是一种蓝色荧光素，为DNA特异性染色剂。
探针杂交信号可通过配置相应滤光片的荧光显微镜进行观察。
在显微镜下观察细胞核内的荧光信号，对HER2基因（绿色荧光染料ZyGreen：激发波503nm，发射波528nm，同FITC）和CEN17着丝粒（橙红色荧光染料ZyOrange：激发波546nm，发射波572nm，同罗丹明）信号进行计数，计算比值（HER2/CEN17），从而判断HER2基因状态。
乳腺癌her2标准
乳腺癌her2标准乳腺癌HER2检测标准主要包括以下几个方面：1. HER2基因扩增：荧光原位杂交（FISH）法是检测HER2基因扩增的金标准。
根据《2014年NCCN乳腺癌临床实践指南》和《乳腺癌HER2检测指南2014版》，FISH检测结果可分为以下三种：- 阳性：HER2基因拷贝数≥2.0；- 阴性：HER2基因拷贝数<2.0；- 模糊：HER2基因拷贝数在2.0~2.9之间。
2. HER2蛋白表达：免疫组化（IHC）法是检测HER2蛋白表达的主要方法。
根据《乳腺癌HER2检测指南2014版》，HER2蛋白表达可分为以下四种：- 阳性：细胞膜染色强度为3+，即大量细胞呈强阳性；- 阴性：细胞膜染色强度为0或1+，即少量或无细胞呈阳性；- 弱阳性：细胞膜染色强度为2+，即部分细胞呈阳性；- 不确定：细胞膜染色强度为1+或2+，但无法明确判断。
3. 检测策略：指南推荐采用IHC与FISH相结合的检测策略。
对于IHC检测结果为阳性的病例，需进一步进行FISH检测以确认HER2基因扩增状态。
对于IHC检测结果为阴性的病例，一般无需进行FISH检测。
4. 应用场景：所有乳腺原发性浸润性癌患者均应进行HER2检测。
复发灶和转移灶的HER2检测也有助于评估患者病情和选择合适的治疗方案。
5. 治疗指导：HER2阳性乳腺癌患者对某些靶向药物（如赫赛汀）敏感，治疗效果更佳。
HER2基因扩增状态和蛋白表达水平可作为预测药物治疗效果的重要依据。
在实际操作中，应遵循相关指南和规范进行HER2检测，以指导临床诊疗。
同时，加强临床病例沟通和实验室质量控制，确保检测结果的准确性和可靠性。
乳腺癌HER2指南更新要点对判读结果的影响及HER2阳性乳腺癌的特征
Advances in Clinical Medicine 临床医学进展, 2021, 11(4), 1558-1565Published Online April 2021 in Hans. /journal/acmhttps:///10.12677/acm.2021.114223乳腺癌HER2指南更新要点对判读结果的影响及HER2阳性乳腺癌的特征吴思雨¹，魏志敏¹，徐瑞祥²，曾满芹¹，张龙宵¹，董娴宁¹1青岛大学附属医院病理科，山东青岛2青岛大学附属医院脊柱外科，山东青岛收稿日期：2021年3月12日；录用日期：2021年4月7日；发布日期：2021年4月15日摘要目的：比较2014版与2019版乳腺癌HER2检测指南对乳腺癌中人表皮生长因子受体2 (HER2)基因扩增与蛋白表达状态判读结果的影响及其临床意义。
方法：根据2014版与2019版判读标准对青岛大学附属医院的3102例乳腺癌标本进行重新判读，并对结果异同之处进行分析。
结果：1、在依据2014版及2019版标准判读的免疫组织化学(IHC)结果中，2019版判读结果为不确定的病例数减少，阴性病例数增加，经计算，两版结果差异有统计学意义(X² = 1604.13, P < 0.05)。
2、在依据2014版及2019版判读的荧光原位杂交(FISH)结果中，2019版判读结果为阳性及不确定的病例数减少，阴性病例数增加，经统计学检验，两版结果差异有统计学意义(P = 0.000, P < 0.05)。
3、HER2阳性组和阴性组的组织学分级、肿瘤大小等临床病理学特征的差异有统计学意义。
结论：HER2阳性组和阴性组的组织学分级、肿瘤大小等临床病理学特征均有显著差异(P < 0.05)。
采用2019版指南使乳腺癌HER2检测阴性率提高，阳性率及不确定率有所下降，应用2019版乳腺癌HER2检测指南判读结果更明确，在乳腺癌治疗方面具有更好的适用性。
如何看懂乳腺癌常见免疫组化指标
如何看懂乳腺癌常见免疫组化指标如何看懂乳腺癌常见免疫组化指标一、引言乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，其免疫组化诊断在肿瘤病理学中起到至关重要的作用。
免疫组化指标可以帮助医生确定乳腺癌的类型、分级和预后，并指导治疗方案的选择。
本文将详细介绍乳腺癌常见的免疫组化指标及其解读。
二、ER（雌激素受体）和PR（孕激素受体）乳腺癌细胞中常常表达雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR）。
检测ER和PR的免疫组化指标通常使用核染色法，以确定它们在乳腺癌中的表达。
阳性结果表明乳腺癌细胞对激素的依赖性较高，这对激素阻断治疗的选择具有重要意义。
三、HER2（人类表皮生长因子受体2）HER2是乳腺癌中的一个重要标志物。
通过免疫组化检测HER2的表达水平，可以确定乳腺癌的HER2阳性或阴性状态。
HER2阳性乳腺癌通常表明肿瘤具有更侵袭性和不良预后，但也为使用靶向治疗药物如Trastuzumab提供了重要依据。
四、Ki-67Ki-67是一个细胞增殖标记物，其通过免疫组化技术可以确定乳腺癌细胞的增殖活性。
Ki-67阳性指标的高表达通常与乳腺癌的预后较差相关，并可作为治疗效果和复发风险的重要指标。
五、p53p53是一个肿瘤抑制基因，在乳腺癌的发生和发展中起着重要作用。
免疫组化检测p53的表达可以判断乳腺癌的分子亚型和预后，且对临床疗效有一定预测价值。
六、附件本文档附带乳腺癌常见免疫组化指标的检测方法、技术细节和解读标准的详细说明。
读者可参考附件以获取更全面的信息。
七、法律名词及注释本文中涉及的法律名词及其注释：1.标志物：指一种可以在特定情况下对某个过程、状态或疾病进行诊断、预测或监测的物质或指标。
2.靶向治疗药物：指针对癌症特定靶点的药物治疗方法，可避免对正常细胞的毒害。
3.恶性肿瘤：癌症的一种，具有侵袭性和转移性。
八、全文结束。
her-2判读标准
her-2判读标准HER-2（人类上皮细胞生长因子受体2）是一种与乳腺癌相关的蛋白质，是一种细胞表面受体。
对于HER-2的判读标准对于乳腺癌的诊断和治疗非常重要。
本文将介绍HER-2判读标准以及其在乳腺癌中的应用。
一、HER-2判读标准概述HER-2判读标准是根据HER-2蛋白在乳腺癌组织中的表达程度来进行评估的。
目前国际上最广泛采用的HER-2判读标准是由美国临床肿瘤学会（ASCO）和美国病理学和实验室医学会（CAP）联合发布的指南。
根据这一指南，HER-2的表达程度主要通过免疫组织化学（IHC）和原位杂交（FISH）两种方法来进行判读。
二、免疫组织化学（IHC）判读标准免疫组织化学是通过对乳腺癌组织切片进行染色来评估HER-2的表达程度。
根据IHC染色结果的分级，HER-2的表达程度分为0、1+、2+和3+四个级别。
其中，0级表示未检测到HER-2的表达，1+级表示HER-2表达很弱，2+级表示HER-2表达中度，3+级表示HER-2表达强烈。
三、原位杂交（FISH）判读标准原位杂交是通过对乳腺癌组织进行分子遗传学检测来评估HER-2的表达程度。
FISH结果通常使用HER-2基因扩增比（HER-2/CEP17）来表示，其中HER-2基因扩增比大于2.2被认为是HER-2阳性，小于1.8被认为是HER-2阴性，介于1.8和2.2之间被认为是HER-2结果不确定。
四、HER-2判读标准应用于乳腺癌治疗策略HER-2的判读标准对乳腺癌的治疗策略具有重要意义。
HER-2阳性的乳腺癌通常对激素治疗不敏感，但对靶向治疗药物如曲妥珠单抗（Trastuzumab）和帕妥珠单抗（Pertuzumab）非常敏感。
因此，准确判读HER-2表达程度对于决定是否进行靶向治疗具有重要意义。
五、HER-2判读标准的局限性和新进展HER-2的判读标准有一定的局限性。
由于标本制备和实验操作等因素，可能导致判读结果存在误差。
为了克服这些问题，近年来研究者们提出了一些新的方法，如基于基因测序的HER-2评估方法，为HER-2的判读提供了更准确和可重复性的方法。
乳腺癌her2的判读标准
乳腺癌her2的判读标准乳腺癌HER2的判读标准乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，其中HER2阳性乳腺癌是乳腺癌的一个重要亚型。
HER2是一个原癌基因，其过度表达会导致癌细胞快速生长和扩散。
因此，准确判读HER2状态对于乳腺癌的诊断和治疗具有重要意义。
一、HER2检测方法目前，常用的HER2检测方法包括免疫组织化学（IHC）和荧光原位杂交（FISH）。
IHC是通过抗原-抗体反应来检测HER2蛋白的表达水平，而FISH则是通过检测HER2基因的扩增情况来判断HER2状态。
这两种方法各有优缺点，通常需要根据具体情况选择合适的方法进行检测。
二、HER2判读标准1.IHC判读标准IHC判读标准主要根据HER2蛋白的表达水平将乳腺癌分为四个等级：0、1+、2+、3+。
其中，0和1+为HER2阴性，2+为HER2不确定性，3+为HER2阳性。
具体而言，0表示没有HER2蛋白表达；1+表示HER2蛋白表达较弱；2+表示HER2蛋白表达中等，需要进一步进行FISH检测确认；3+表示HER2蛋白表达强烈，为HER2阳性乳腺癌。
2.FISH判读标准FISH判读标准主要根据HER2基因的扩增情况将乳腺癌分为两个等级：阴性和阳性。
具体而言，如果每个癌细胞中HER2基因的平均拷贝数大于6个，或者HER2/CEP17比值大于2.0，则判断为HER2阳性；否则为阴性。
此外，FISH检测还可以进一步分为完全扩增和部分扩增两种情况，其中完全扩增的乳腺癌更具有侵袭性。
三、HER2状态对乳腺癌治疗的影响HER2状态是乳腺癌治疗的重要参考因素之一。
对于HER2阳性的乳腺癌患者，可以选择针对HER2的靶向药物进行治疗，如曲妥珠单抗等。
这些药物可以抑制HER2的表达和功能，从而减缓癌细胞的生长和扩散。
而对于HER2阴性的乳腺癌患者，则可以选择其他类型的药物进行治疗。
因此，准确判读HER2状态对于制定个性化的治疗方案具有重要意义。
总之，乳腺癌HER2的判读标准包括IHC和FISH两种方法，需要根据具体情况选择合适的方法进行检测。
乳腺癌主要分子病理指标检测结果的解读与分析
乳腺癌主要分子病理指标检测结果的解读与分析乳腺癌是一种常见的恶性肿瘤，其分子病理学指标检测结果对于患者的诊断、治疗和预后评估具有重要意义。
本文将对乳腺癌主要分子病理指标检测结果进行解读与分析。
1.雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR）：ER和PR是乳腺癌的重要预测因子之一、阳性结果表明肿瘤对激素敏感，从而可以应用内分泌治疗。
阴性结果可能表明激素治疗的效果有限，患者可能需要其他治疗方法。
2.人类表皮生长因子受体2（HER2）：HER2是一个重要的预后因子，阳性结果表明HER2基因放大或蛋白过表达，提示患者对抗HER2靶向治疗可能有良好的反应。
阴性结果意味着HER2靶向治疗对患者无效，需要考虑其他治疗方案。
3.Ki-67：Ki-67是一种细胞增殖标记物，其高表达与肿瘤侵袭性和不良预后相关。
Ki-67的阳性结果表明肿瘤细胞增殖活跃，需要更积极的治疗方式。
阴性结果则表示肿瘤生长较缓慢，预后可能较好。
4.基因检测：包括BRCA1和BRCA2等基因的突变检测。
这些基因的突变与乳腺癌的遗传易感性相关，阳性结果表明患者可能存在遗传性乳腺癌风险，需要采取更严密的监测和干预措施。
5.肿瘤标志物：如CA15-3和CA27.29等。
这些标志物的升高可能与乳腺癌的复发和预后不良相关，可以用于监测患者的疗效和复发风险。
总之，乳腺癌主要分子病理指标检测结果的解读与分析可以帮助医生了解患者的肿瘤特征和预后风险，从而制定个体化的治疗方案。
然而，需要注意的是，分子病理指标检测结果只是辅助诊断和治疗决策的一个方面，最终的治疗方案应综合考虑患者的整体情况。
Her-2解读
曲妥珠单抗
可以用于新辅助、辅助、复发或转移病人 新辅助时总疗程仍为1年
曲妥珠单抗用法
每周方案：首次4mg/Kg ，随后2mg/Kg 每3周方案：首次8mg/Kg，随后6mg/Kg
曲妥珠单抗停药指征
LVEF较治疗前绝对数值下降≥16%，或 LVEF低于正常范围且较治疗前绝对数值下 降≥10%，暂时停药。 LVEF持续下降超过8周，或3次以上因心脏 问题而中断曲妥珠单抗治疗，应永久停止使 用。
Her-2解读
慈溪市人民医院 刘轶群Fra bibliotekHer-2的中文名
人表皮生长因子受体2
意义
预后指标：阳性----预后差 预测指标：靶向药物的使用
检测方法
IHC（免疫组化） ISH（原位杂交）：包括 荧光原位杂交FISH
显色原位杂交CISH 银增强原位杂交SISH
Her-2阳性定义
IHC（+++） ISH阳性 IHC（++）经进一步FISH、CISH、SISH 检测到Her-2基因扩增阳性
可以针吸组织检测Her-2以行新辅助治疗 复发或转移乳腺癌需重新检测Her-2状态
抗Her-2药物
曲妥珠单抗（赫赛汀） 拉帕替尼（不推荐辅助治疗中用） 帕妥珠单抗（国内未上市） Kadcyla（T-DM1）
曲妥珠单抗
不推荐与蒽环类药物同时使用（心脏毒性） 可与紫杉醇、多西他赛、吉西他滨、卡培他 滨、长春瑞滨联合使用 辅助治疗时间为1年 联合化疗时，化疗应持续6-8周期
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105】乳腺癌HER2检测指南(2014版)概要2014-09-01四川病理来源：中华病理学杂志正确检测和评定乳腺癌的HER2蛋白表达和基因扩增状态对乳腺癌的临床治疗和预后判断至关重要。
HER2检测结果不仅涉及患者是否适合针对HER2的靶向治疗，并且对内分泌治疗、化疗方案的选择及预后评估起指导作用。
乳腺癌HER2检测指南(2014版)结合我国实际情况，在《乳腺癌HER2检测指南(2009版)》的基础上，补充相关领域的新内容和新观点。
现摘选其检测方法部分如下。
一、检测方法推荐采用免疫组织化学(IHC)法检测HER2受体蛋白的表达水平，应用原位杂交(in situ hybridization，ISH)法检测HER2基因扩增水平。
ISH包括荧光ISH ( fluorescence insitu hybridization，FISH)和亮视野ISH。
常用的亮视野ISH方法有显色ISH(chromogenic in situ hybridization，CISH)和银增强ISH(silver—enhanced in situ hybridization，SISH)。
本指南推荐IHC与ISH相结合的检测策略。
二、检测时机及临床病理联系所有乳腺原发性浸润癌都应进行HER2检测。
只要能获取肿瘤组织，对复发灶或转移灶也应该进行HER2检测。
如HER2检测结果为不确定，则应使用另一种检测方法进行检测，或对该患者的其他样本进行检测。
加强临床病理沟通有助于对HER2检测结果的正确诠释和对HER2靶向治疗疗效的客观评价。
临床医师和病理医师均需注意HER2检测结果是否与组织病理学特征相符，如组织学分级为1级的浸润癌通常为HER2阴性，包括浸润性导管癌、经典型浸润性小叶癌、小管癌、黏液癌、筛状癌、腺样囊性癌等。
如检测结果为阳性，则视为检测结果与组织病理学特征不符合，需要核实诊断或重新检测。
三、HER2检测流程乳腺癌标本一般可先经IHC检测。
IHC 3+为HER2阳性，IHC 0和1+为HER2阴性。
IHC 2+为HER2不确定病例，需进一步应用ISH的方法进行HER2基因扩增状态检测，也可以选取不同的组织块重新检测或送条件更好的实验室进行检测。
四、组织标本的制备1．标本类型：(1)手术切除标本；(2)粗针穿刺活检标本；(3)麦默通活检标本。
2．标本固定：所有乳腺癌标本离体后都应尽快固定(1 h内)。
固定时应将标本每隔5～10 mm切开，并可在组织间嵌入纱布或滤纸等物。
固定液量与所浸泡组织的比例应足够。
固定时间以6—72 h为宜。
3．固定液类型：4％中性(磷酸缓冲)甲醛固定液。
4．组织切片：(1)未染色的切片置于室温不宜超过6周，以防抗原丢失。
(2)用于IHC 染色者切片厚度以3～5μm为宜，ISH法以4—5μm为宜。
(3)完成检测的切片，IHC和亮视野ISH可按常规长期保存，FISH结果应立即照相存档并于一20℃保存，建议至少保存3个月备查。
(4)各种检测方法均应有HE染色切片作为对照。
五、染色要求与结果判读建议使用我国食品药品监督管理总局认证的检测试剂盒，对自行组配的检测系统则必须经过严格的内、外部质量控制，建立完善的实验室标准操作程序(SOP)，并与权威机构批准的检测试剂盒进行比对，以保证检测结果的可靠性。
(一) IHC1．观察程序：应先在低倍镜下观察整张切片，判断染色是否满意及是否存在HER2表达的异质性。
正常乳腺上皮不应出现强的细胞膜着色。
只评定浸润癌的着色情况，导管原位癌的着色不能作为评定对象。
观察细胞膜着色的浸润癌细胞的比例及着色强度，若出现细胞质或细胞核着色提示IHC染色效果不理想或组织处理不佳，建议调整染色条件或更换组织后再行染色。
判读时应避开组织边缘及组织处理不佳(如明显挤压)的癌组织。
2．结果判读及注意事项：结果判读标准(按每张切片计；图1，2)：0：无染色或≤10％的浸润癌细胞呈现不完整的、微弱的细胞膜染色；1+：>10％的浸润癌细胞呈现不完整的、微弱的细胞膜染色；2+：有两种情况，第一种为>10％的浸润癌细胞呈现不完整和／或弱至中等强度的细胞膜染色，第二种为≤10％的浸润癌细胞呈现强而完整的细胞膜染色；3+：>10％的浸润癌细胞呈现强而完整的细胞膜染色。
对于2+的病例，应该用ISH做进一步检测，也可以选取不同的组织块重新检测或送条件更好的中心实验室进行检测。
当出现下列情况时HER2状态为无法判读(indeterminate)，包括标本处理不当、严重的组织挤压或边缘效应、检测失败等。
应在报告中注明HER2状态无法判读的可能原因，并建议再次获取样本进行HER2检测。
在乳腺浸润性微乳头状癌和部分有分泌现象的乳腺癌中，有时浸润癌细胞的细胞膜已呈很深的棕褐色，但却并未呈闭环状完整着色，存在一定程度的不连续性和间断胜，此时至少应视为HER2 2+，并需要行ISH检测进一步明确HER2状态。
建议在HER2 IHC 检测报告中包括如下内容：患者信息(包括姓名、性别、年龄、门诊／住院号)、送检医师姓名、送检日期、标本信息(包括病理号和蜡块号)、标本部位和类型、抗体信息(克隆号／生产商)、检测方法、是否使用图像分析、对照设置情况、样本量是否适合评估、判读结果(O、1+、2+、3+)、检测结论(如阳性、不确定、阴性、无法判读)。
3．质量控制：包括抗体的选择、抗原修复方法、染色及其他相关实验室技术，均应严格按SOP进行。
IHC自动染色系统更易达到标准化，但也应进行严格的比对试验和程序优化，且需要对机器进行定期维护。
IHC染色须设立对照，以不同染色程度的组织芯片作为对照为最佳。
被检测切片中癌旁正常乳腺上皮细胞是很好的阴性内对照。
利用计算机图像分析有利于判断的准确性和可重复性，但必须经过病理医师确认其结果，且设备使用前必须进行校验。
(二) FISHFISH技术通过荧光标记的DNA探针与细胞核内的DNA靶序列杂交。
在荧光显微镜下观察并分析细胞核内杂交于DNA靶序列的探针信号，以获得细胞核内染色体(或染色体片段)上基因状态的信息。
目前进行HER2基因状态检测的探针多为同时含有HER2基因和该基因所在的第17号染色体着丝粒(CEPl7)序列的双探针，也可采用仅含有HER2基因的单探针。
1．观察程序：应在低倍镜下观察整张FISH切片，初步判断检测质量以及是否存在HER2扩增的异质性。
要求至少找到2个浸润癌区域，计数至少20个浸润癌细胞。
也可以参照IHC切片先确定可能存在扩增的浸润癌区域，然后于100倍物镜下通过特异通道滤光片观察HER2和CEP17信号，并进行信号计数和比值计算。
2．结果判读及注意事项：应选择细胞核大小一致、核的边界完整、二脒基苯基吲哚(DAPI)染色均一、细胞核无重叠、信号清晰的细胞。
随机计数至少20个浸润癌细胞核中的双色信号。
在观察信号时，应根据情况随时调节显微镜的焦距，准确观察位于细胞核不同平面上的信号以免遗漏。
判读标准(图3～5)：双探针ISH：(1)当HER2／CEP17比值≥2.0时，为HER2阳性；HER2／CEP17比值<2.0，但平均HER2拷贝数／细胞≥6.0时也为HER2阳性。
扩增细胞应均质、连续，且占浸润癌的10％以上。
需要注意的是对于HER2／CEP17比值≥2.0，但平均HER2拷贝数／细胞<4.0的病例是否应该视为ISH阳性目前尚存一定争议。
建议对这部分病例在报告中加以备注，提示目前的认识争议，建议临床医师参考IHC检测结果并与患者进行必要的沟通。
(2)HER2／CEPl7比值<2.0且平均HER2拷贝数／细胞<2.0时为HER2阴性。
(3)HER2／CEP17比值<2.0且平均HER2拷贝数／细胞<6.0，但i>4.0时为HER2 ISH 结果不确定。
单探针1SH：肿瘤细胞平均HEt／2拷贝数／细胞<4．0为无扩增；肿瘤细胞平均HER2拷贝数／细胞≥6.0为扩增。
扩增细胞应均质、连续，且占浸润癌的10％以上。
平均HER拷贝数／细胞在4～6之间为不确定。
若众多HER2信号连接成簇时可不计数，直接视为基因扩增。
对于ISH结果不确定的病例．需要再计算20个细胞核中的信号或由另外一位分析者重新计数。
如仍为临界值，则应行IHC检测(若FISH前未行)，也可以选取不同的组织块重新检测。
建议在HER2 FISH检测报告中包括如下内容：患者信息(包括姓名、性别、年龄、门诊／住院号)、送检医师姓名、送检日期、标本信息(包括病理号和蜡块号)、标本部位和类型、探针信息、检测方法、是否使用图像分析、对照设置情况、样本量是否适合评估、判读结果(包括评估的细胞数量、平均HER2拷贝数／细胞、平均CEPl7拷贝数／细胞、平均HER2拷贝数／平均CEPl7拷贝数的比值)、检测结论(如阳性、不确定、阴性、无法判读)。
3．质量控制：(1)内对照：使用上述同时含有HER2基因和CEPl7序列的混合探针时，组织中≥75％的细胞核显示出双色信号时视为杂交成功，并且双色信号互为对照，癌与非癌细胞互为对照。
出现下列情况时应视为FISH检测失败，包括：①对照样本未出现预期结果；②浸润癌病灶太小，难以观察到两个浸润癌区域并计数；③可计数信号的细胞<75％；④>10％的荧光信号位于细胞核外；⑤细胞核结构难以分辨；⑥有强的自发荧光。
(2)外对照：应选择已知FISH阳性和阴性的标本片(或采用厂家提供的对照片)作为外对照，且杂交染色结果与预期相符。
(3)如有可能，建议设置低扩增对照。
4．关于第17号染色体数目：FISH双探针检测中加入CEPl7探针的目的是为了在检测HER2基因的同时检测第17号染色体数目，从而将第17号染色体的非整倍体和单纯的HER2基因扩增，尤其是低水平的扩增区分开。
但近年来的研究显示整条第17号染色体的多体罕见，CEP17的多体并不能代表整条第17号染色体多体。
部分乳腺癌中第17号染色体存在HER2基因和着丝粒的共同扩增。
越来越多的学者认为，与HER2／CEPl7比值相比，HER2拷贝数对于HER2基因扩增的判断更为重要。
因此在HER2 FISH检测结果中除报告HER2／CEPl7比值外，还应分别报告HER2拷贝数和CEPl7的数值。
5．关于HER2基因的异质性：浸润性乳腺癌中HER2表达或扩增可存在异质性。
虽然HER2基因异质性的临床意义目前仍不明确，但它可导致IHC与ISH检测、原发灶与转移灶、穿刺标本与手术切除标本的检测结果不一致。
在ISH计数之前，应观察整张切片或使用IHC确定可能存在HER2扩增的区域。
需要强调的是，即使存在异质性，但只要扩增细胞连续、均质，且占浸润癌10％以上，就应明确报告为ISH阳性。