化学诱导法――卵母细胞去核新策略
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图" 诱导去核辅助的核移植程序
卵母细胞对 %&’& 的耐受程度 从目前的资料来看， 不同动物卵母细胞对 ;0<0 的敏感
程度有所不同。在牛、 羊、 小鼠的去核研究中， 采用 HC! *P<Q ! 的浓度， 而在兔的去核研究中， 所用浓度为 HCA （ 试剂均 *P<Q ! 为 R$*<1 公司产品） 。据笔者观察， 用 HCA 的含 *P<Q ;0<0 培 ! 养液处理小鼠卵母细胞， 会使核染色质高度浓缩成小团， 而 HC! *P<Q 组则相对较松散。另外， ;0<0 处理时间的长短对 ! ［ ］ ［ ］ 去核率的影响尚有不同看法， 9=1%0> ?" 和 @1*-$4$ "J 等的结果 而 表明， ;0<0 处 理 !J K (J<$% 获 得 相 对 较 高 的 去 核 率，
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生 物 工 程 学 报 !"#$%&% ’()*$+, (- .#(/%0"$(,(12
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()*+& # 动物品种 @A;?)" 小鼠
去核率下降。
表 # 不同遗传背景卵母细胞的去核率及克隆胚胎的发育率 (,& &-./+&)012- 3)0& 24 22/50&6 710, 8144&3&-0 9&-&01/ *)/:932.-8 )-8 8&;&+2<’&-0 3)0& 24 /+2-&8 &’*3526 去核率 （?(E K (HE ） J!E ?ME K "HHE ?"E ACDE 卵裂率 (HE（LJP"?"） — — — （?JP"(L） "! — — — — — — （"MHPMAH） MA （J"P"HA） !LE — — — — — — 囊胚率 !?E（JHP"?"） — — — ?E（!P"(L） — — — — — — "!E（JHPMAH） （"!PJ"） ?(E — — — MME K JJE ! 只胎儿 克隆后代数 ! 只健康 " 只健康 参考文献 ［"J］ ［"L］ ［?H］ ［?"］ ［?"］ ［?H］ ［"D］ ［"L］ ［"(］
［!$］ 一种蛋白质合成抑制剂 ） 联合处理小鼠 M! 期卵母 EST， 细胞， 去 核 率 达 到 "#U 。 可 是 据 7)HA-9PA 3V 等 先 后 报 ［!&， !>］ 道 ， 分别应用 74Q1EST 和 74Q 处理的去核卵母细胞与
中图分类号
［!］ ［$］ 随着体细胞核移植技术的迅速发展， 克隆绵羊 、 牛 、 ［&］ ［>］ ［6， ［5］ #］ 小鼠 、 山羊 、 猪 、 猫 纷纷诞生。但是显而易见， 各种动 ［2］ 物的克隆效率依然很低 。为了完善这一技术， 人们不断地
［!6］ 将供体基因组移植到胞质中。 W8<L9H9 和 Z(H)9; 研究所的 ［ ］ [8HG8009;9 等 $% 分别将卵丘细胞与 SM1! 7V 细胞核直接注入
! 化学诱导去核法简短的发展历程
（ 7I(G(H9K-， OL)P8 和 M((0 首先报道应用鬼臼亚乙苷 74Q，
［!!］ 一种 C+3 拓扑异构酶抑制剂 ） 和放线菌酮 （ E@B)(A-R9.9K-，
的去核率， 并有克隆小鼠和兔克隆胎儿的产生。
（图 !） " C-.- 诱导去核法辅助的核移植程序
"#! （ ’(） 程序 $%&% 诱导去核 目前， 应用于小鼠、 兔、 牛和羊上的 C-.- 诱导去核程序 主要包括以下几个环节： 选择体内或体外成熟的 MJJ 期卵母 细胞， 激活后 （Y(HI8BI9,8I9(;， 在特定时间内置于一定浓度 Y* 8） 的含 C-.- 培养液中作用一段时间， 再经 S(-BAHI 染色， 检查 去核效果。该方法成败的关键在于对各个环节的时间控制 （49.- 8K.9;9HI08I9(;） 。 "#" $%&% 诱导去核后的注核程序 选取去核完全的卵母细胞作为受体胞质， 通过两种方法
化学诱导法— — —卵母细胞去核新策略
王 强" 顾 玲 张 涌
（西北农林科技大学生物工程研究所， 杨凌 5!$!%%）
摘
要
哺乳动物体细胞克隆技术在过去的几年里取得了飞速发展， 但是核移植的效率依然很低。于是人们不断
的从各个方面进行探索， 去核方法随之也成为其中的一个热点。但是传统的物理去核存在着技术要求高、 耗费时 间长、 对细胞损伤大的缺点， 作为思路转换的产物， 一种新的卵母细胞去核技术— — — C-.- 诱导去核引起了各国科 学家的广泛关注。文章着重介绍了 C-.- 诱导去核辅助的核移植程序， C-.- 诱导去核成功率的影响因素， C-.- 诱 导去核方法对卵母细胞及克隆胚胎的影响， 并结合作者从事的研究对该方法目前存在的问题及某些环节可能的改 进措施提出了看法。无论如何， C-.- 诱导去核方法的有效应用仍然需要作进一步的深入研究。 关键词 诱导去核， 脱羰秋水仙碱 （C-.-B()B9;-） ， 核移植， 克隆效率 D2!& 文献标识码 E 文章编号 !%%%1&%#! （$%%&） %#1%5#&1%>
B)" 小鼠 @AB@I)" 小鼠 牛 山羊 兔
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注： !示激活卵母细胞去核率 S 去核卵母细胞数 P 激活卵母细胞数 示作者未作该项研究 其余为总去核率 S 去核卵母细胞数 P 总处理卵母细胞数 “—”
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王
强等： 化学诱导法— — —卵母细胞去核新策略
从各个角度进行探索。在核移植过程中， 供体核 （ F80@(G)8HI） 与受体胞质 （E@I(G)8HI） 是重构胚的两个重要组件， 尤其后者对 于促进核重塑及胚胎进一步发育至关重要。因此， 获得具有 良好发 育 潜 能 的 去 核 卵 母 细 胞 是 动 物 成 功 克 隆 的 关 键 因
［"］ 素 。与之相应， 去核方法也就成为核移植研究的一个重点。
［?"］ 细胞对激活的敏感程度不同 ， 而且经化学去核的卵母细胞 ［"M］ 。同时较强的激活刺 的卵龄严重影响重构胚胎的卵裂率 ［??］ 激往往使第二极体不能排出， 形成两个或多个原核 ， 导致
小鼠进行了类似的研究， 虽然它们的去核率无太大区别， 但 在随后的重构胚发育能力方面表现出严重的品系依赖性。 另外 @A;?)" 小鼠在不同实验室报道的去核率有很大差距，
［ ］ 各自的 F14G122$%$ 等 ?H 认为， ;0<0 分别处理 "J、 MH、 !J<$% 后，
)$*+ " （ ,-./012 321%4502 144$4306 7$38 9:）
! 影响 ;0<0 诱导去核成功率的因素
结合当前小鼠、 兔、 牛和羊的研究结果与笔者正在从事 的部分实验加以综合分析， 我们认为影响 ;0<0 诱导去核成 功率的主要因素有以下三个方面。 !"# 卵母细胞的遗传背景 从目前的研究来看， 不同动物甚至同种动物不同品系的 卵母细胞的 诱 导 去 核 成 功 率 也 有 很 大 差 异 （表 "） 。 9=1%0>
［"L］
。据我们在实验过程中的初步统计， 昆白系小鼠卵母
细胞在激活后 H K J<$% 进行 (J<$% 的 ;0<0 处理， 去核率在 （资料待发表） 。因此不同遗传背景的卵母细胞进 !HE 左右 采取的时间间隔有所不同， 这很可能与它们 行 ;0<0 处理时， 各自的细胞周期进程不同步有关。一般来说， ;0<0 处理应 向末期 在激活卵母细胞由第二次减数分裂后期 （ I%1G8140）
［!#］ 。这一报道引起 隆小鼠出生， 大大提高了小鼠的克隆效率 ［!5］ 了各国科学家的广泛关注， 该方法先后被应用于兔 、 山 ［!2］ ［!"］ ［$%， $!］ 羊 、 牛 和小鼠 的卵母细胞去核研究， 且得到了较高
目前， 人们主要是通过显微操作机械性的去除核染色质 来获得受体胞质。但该方法却存在着技术要求高、 耗费时间 长、 对细胞损伤大的缺点。于是作为一种思路转换的产物化 学诱导去核法产生了 （以下简称诱导去核， J;KLB-K1-;LB)-8I9(;， 。其主要原理是应用破坏微管稳定的药物 （M9B0(IL/L)-1K-1 J7） 处理激活的卵母细胞， 借以干扰染色体的正常 HI8/9)9N9;< K0L<） 分离和纺锤体的功能， 促使核内所有染色质随同极体一起排 出， 进而获得核移植所需的受体胞质。与物理去核相比， 它的 主要优点有： 操作简单、 物理损伤小、 胞质丢失少、 重复性好， 适合于大规模的卵母细胞去核和克隆动物的生产。鉴于目前 国内尚无相关报道及该方法乐观的应用前景， 笔者结合正在 从事的部分实验研究对脱羰秋水仙碱 （一种破坏微管的药物， 以下简称 C-.-） 诱导去核法作一综述。 C-.-B()B9;-，
2022-2023学年福建省三明市一中高二下学期第一次月考生物试题
2022-2023学年福建省三明市一中高二下学期第一次月考生物试题1.关于生态系统组成成分的叙述，正确的是（）①凡是细菌、真菌都是分解者②凡是自养型生物都是生产者③植物都是生产者④动物都是消费者⑤异养型生物都是消费者⑥细菌可能是生产者、消费者、分解者A．②⑥B．②③C．①⑤D．②⑤2.下图是一个农业生态系统模式图，关于该系统的叙述，错误的是（）A．沼气池中的微生物是该生态系统的分解者B．微生物也能利用农作物通过光合作用储存的能量C．沼渣、沼液作为肥料还田，使能量能够循环利用D．多途径利用农作物可提高该生态系统的能量利用效率3.有关生态系统能量流动说法正确的是（）A．一种蜣螂专以大象粪为食，则该种蜣螂最多能获取大象所同化能量的20%B．一只狼捕食了一只兔子，则这只兔子中约有10%~20%的能量流入到狼的体内C．农民在农田中锄草，灭虫的主要目的的之一是合理调整生态系统中能量流动的关系D．输入某生态系统的能量等于生产者固定的太阳能总量，要远大于该生态系统内各营养级能量之和4.根据生态系统的结构和功能，下列叙述错误的是（）A．营养级越高的生物种群体内积累的有毒物质越多，所获得的能量越少B．人工鱼塘生态系统中消费者同化的能量往往大于生产者所固定的太阳能C．“桑基鱼塘”生态系统与普通水稻田生态系统相比实现了能量的多级利用D．水产养殖业，为充分利用生产者所固定的能量，应以食物链长的鱼类为养殖对象5.如图是生态系统中碳循环示意图，箭头表示碳的流动方向，下列说法正确的是（）A．该生态系统的结构包括A、B、C、D、EB．该生态系统中食物链可表示为：A→D→E→BC．碳循环进行的同时一定伴随着能量流动和信息传递D．碳是以二氧化碳的形式在生物群落与无机环境之间及生物群落内部往复循环6.下列关于生态系统中信息传递的叙述，正确的是（）A．生态系统中的信息只能来源于同种或异种的生物B．动物可通过特殊的行为在同种或异种生物间传递信息C．植物生长素对植物生长的调节属于信息传递中的化学信息D．牧草生长旺盛时，为食草动物提供采食信息，这对食草动物有利，对牧草不利7.冻原生态系统因其生物的生存条件十分严酷而独具特色，有人曾将该生态系统所处的地区称为“不毛之地”。
人教版生物选修3：专题3专题综合检测
(时间90分钟，满分100分)一、选择题(本题包括25小题，每小题2分，共50分)1.下列关于胚胎工程的说法不．正确的是()A．胚胎工程指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术B．胚胎工程技术包括胚胎移植、体外受精、胚胎分割、胚胎干细胞培养等技术C．胚胎工程的理论基础是哺乳动物受精、早期胚胎发育的规律和体外受精D．胚胎工程是基因工程、细胞工程的最后技术环节解析：选C。
根据胚胎工程概念可知胚胎工程指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术。
主要技术包括胚胎移植、体外受精、胚胎分割、胚胎干细胞培养等技术。
胚胎工程的理论基础是哺乳动物体内受精、早期胚胎发育的规律。
基因工程、细胞工程的操作对象是早期胚胎，最终要用胚胎移植技术移植到动物体内产生后代或生物制品，因此胚胎工程是基因工程、细胞工程的最后技术环节。
2.初级卵母细胞的减数第一次分裂完成于()A．排卵前，在卵巢内B．受精前，在卵巢内C．排卵前，在输卵管D．受精时，在输卵管内解析：选A。
卵泡(含次级卵母细胞和第一极体)的形成和在卵巢内的储备，是在出生前(胎儿时期)完成的，减Ⅱ是在精子和卵子的结合过程(即受精过程)中完成的。
3.据报载，一名高龄妇女顺利产下一名试管婴儿，为这个家庭带来了福音，在生物学上试管婴儿技术属于()A．有性生殖、体外受精B．无性生殖、体内发育C．有性生殖、体内受精D．无性生殖、体外发育解析：选A。
试管婴儿技术是精子和卵细胞在体外培养条件下受精，属于有性生殖。
4.早期胚胎体外培养的过程中，下列哪一项条件是不．需要的()A．消毒灭菌B．适宜的温度C．充足的光照D．适宜的养料和激素解析：选C。
动物细胞离体必须在无菌条件下培养，在细胞的分裂过程中，需要适宜的温度，一定的营养物质和激素等，但不需要阳光。
5.体外受精常用的采卵方法有()①用促性腺激素处理后，从输卵管冲取卵子②化学诱导法③电刺激法④从活体动物卵巢吸取卵母细胞A．①②B．②③C．①④D．③④解析：选C。
生物中图版自我小测：第一单元第三章第二节良种化胚胎工程
自我小测一、选择题1．供、受体母牛选择好后，要用激素进行同期发情处理的原因是（)A．防止受体牛不愿意接受胚胎B．只有受体与供体的生理状态相同，被移植的胚胎才能继续正常发育C．为了使发情排卵后各段时间内的变化不同D．同期发情处理后，卵细胞和精子受精结合能力强2．在胚胎移植的整个过程中,与之无关的激素是( ）A．促性腺激素B．雌激素C．孕激素D．雄激素3．供体的胚胎移植到受体后，在孕育过程中其遗传性状不会受受体的影响,下列关于其原因的说法正确的是( ）A．因为供体胚胎的遗传性状是由供体胚胎内的基因决定的B．因为性状表现只与供体有关,与受体无任何关系C．性状表现分为可遗传性状和不遗传性状D．不遗传性状也不会受受体环境的影响4．一对夫妇因不孕症向医生求助，医生利用试管婴儿技术帮助他们拥有了自己的孩子.在培育试管婴儿的过程中，下列技术中不是必须使用的是（）A．体外授精B．胚胎的体外培养C．植入前胚胎的遗传学检测D．胚胎移植5．体外授精常采用的采卵方法有( )①用促性腺激素处理后，从输卵管中冲取卵子②化学诱导法③电刺激法④从活体动物卵巢中吸取卵母细胞⑤从屠宰场废弃卵巢中采集卵母细胞A．①②③B．②③④C．①③⑤D．①④⑤6．哺乳动物体外授精的过程是（）①采卵②收集精子③卵母细胞的人工培养④精子获能处理⑤精子和成熟卵子在培养液中共同培养⑥精子用CaCl2处理⑦卵母细胞用一定浓度肝素溶液处理⑧体外授精⑨受精卵培养7．下列说法中错误的是（）A．可以借助工具直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞B．电刺激法只适于收集猪、犬等家畜的精子C．在体外授精前,必须对精子进行获能处理D．获能的精子和培养成熟的卵子,可以在体外完成受精过程二、非选择题8．在克隆技术出现之前，育种工作者已经开始采用胚胎分割移植方法来尽快繁育更多的优质牛。
这种育种技术的主要步骤是：将经过人工授精得到的受精卵在试管内培养到8个细胞的胚胎时,将胚胎均等分割为4份，再分别移植到不同母牛的子宫内发育、分娩,就能得到所需要的小牛。
生物选修三综合检测试题含答案_人教版
生物选修三检测试题〔一〕一、选择题1.在基因工程操作过程中，E•coli DNA连接酶的作用是A．将任意两个DNA分子连接起来B．连接具有一样黏性末端的DNA分子，包括DNA分子的根本骨架和碱基对之间的氢键C．只连接具有一样黏性末端的DNA分子的根本骨架，即磷酸二酯键D．只连接具有一样黏性末端的DNA分子碱基对之间的氢键2．以下有关基因工程技术的表达，正确的选项是A．重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和载体B．所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列C．选用细菌为基因表达载体的受体细胞是因为质粒易进入细菌细胞且繁殖快D．只要目的基因进入受体细胞就能成功实现表达3.基因工程是在DNA分子水平上进展设计施工的。
在基因操作的根本步骤中，不进展碱基互补配对的是A.人工合成目的基因B.目的基因与运载体结合C.将目的基因导入受体细胞D.目的基因的检测表达4.水母发光蛋白由236个氨基酸构成，其中有三种氨基酸构成发光环，现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记。
在转基因技术中，这种蛋白质的作用A.促使目的基因导入宿主细胞中B.促使目的基因在宿主细胞中复制C.使目的基因容易被检测和选择D.使目的基因容易成功表达5.以下属于PCR技术的条件的是①单链的脱氧核苷酸序列引物②目的基因所在的DNA片段③脱氧核苷酸④核糖核苷酸⑤DNA连接酶⑥DNA聚合酶⑦DNA限制性切酶A.①②③⑤B.①②③⑥C.①②③⑤⑦D.①②④⑤⑦6.人的糖蛋白必须经质网和高尔基体进一步加工合成，通过转基因技术，可以使人的糖蛋白基因得以表达的受体细胞是A、大肠杆菌B、酵母菌C、T4噬菌体D、质粒DNA7.在基因诊断技术中，所用的探针DNA分子中必须存在一定量的放射性同位素，后者的作用是A．为形成杂交的DNA分子提供能量B．引起探针DNA产生不定向的基因突变C. 作为探针DNA的示踪元素D．增加探针DNA的分子量8．在基因表达载体的构建中，以下说确的是①表达载体组成至少包括目的基因、标记基因、启动子、终止子②有了启动子才能驱动基因转录出mRNA③所有基因表达载体的构建是完全一样的④终止子的作用是使转录在所需要的地方停顿A．②③B．①②④C．①②③D．②③④9.科学家将含人的α—胰蛋白酶基因的DNA片段，注射到羊的受精卵中，该受精卵发育的羊能分泌含α一抗胰蛋白质的奶。
《动物细胞核移植与体细胞克隆》 知识清单
《动物细胞核移植与体细胞克隆》知识清单一、动物细胞核移植的概念动物细胞核移植是一种将供体细胞核移入去核的卵母细胞中，使其重组并发育成新个体的技术。
这一技术的出现为动物的繁殖和遗传改良提供了新的途径。
简单来说，就是把一个细胞的细胞核取出来，放到另一个去掉细胞核的细胞里，然后让这个组合起来的细胞像正常细胞一样生长和发育。
二、动物细胞核移植的基本步骤1、供体细胞的准备选取具有优良性状的供体细胞，通常是处于细胞周期 G0 期或 G1期的细胞。
这是因为这些细胞的染色体相对稳定，有利于细胞核的移植和后续的发育。
2、受体细胞的准备受体细胞一般选择去核的卵母细胞。
卵母细胞体积大、易操作，且含有丰富的营养物质和促进细胞核重新编程的因子。
去核的方法有多种，比如通过显微操作去除细胞核，或者使用化学物质诱导去核。
3、细胞核的移植将供体细胞核通过显微操作技术注入到去核的卵母细胞中，形成重组细胞。
4、重组细胞的激活使用物理或化学的方法激活重组细胞，使其开始细胞分裂和发育。
5、胚胎培养与移植将激活后的重组胚胎在适宜的条件下进行培养，待胚胎发育到一定阶段后，移植到代孕母体的子宫内，让其继续发育直至出生。
三、体细胞克隆体细胞克隆是基于动物细胞核移植技术发展而来的。
它是指利用体细胞（非生殖细胞）作为供体进行细胞核移植，从而获得与供体遗传物质相同的个体。
体细胞克隆的意义在于：1、可以大量复制具有优良性状的个体，提高农业和畜牧业的生产效率。
2、对于保护濒危物种具有重要价值，能够增加物种的数量。
3、在医学领域，有助于研究疾病的发生机制和开发新的治疗方法。
四、体细胞克隆的应用1、农业方面（1）可以克隆具有优良性状的家畜，如产奶量高的奶牛、生长速度快的肉牛等。
（2）有助于改良家畜的品种，提高肉质、产奶量、产蛋量等经济性状。
2、医学领域（1）利用克隆技术可以生产出大量用于医学研究的动物模型，如患有特定疾病的小鼠，以便更好地研究疾病的发病机制和治疗方法。
高三生物：3.2《体外受精和早期胚胎发育》教案(新人教版选修3)
第2节体外受精和早期胚胎发育[重难点]重点：1.体外受精在家畜快速繁殖中的重要意义2.哺乳动物体外受精技术的主要操作步骤难点：1.卵母细胞的采集和培养2.精子的采集和获能[知识精讲]教材梳理知识点一试管动物技术试管动物技术是指通过人工操作使卵子和精子在体外条件下成熟和受精，并通过培养发育为早期胚胎后，再经移植产生后代的技术。
注意：1.试管动物技术的生殖方式是有性生殖。
但要特别注意题目是怎样问的，如果是问试管动物，那么是有性生殖，如果是问克隆过程中的胚胎移植，那么是无性生殖。
2.试管动物技术涉及到的生物技术有体外受精和胚胎移植技术。
知识点二体外受精哺乳动物的体外受精主要包括：卵母细胞的采集、精子的获能和受精。
1.卵母细胞的采集和培养卵母细胞采集的方法和操作的要领：方法〔1〕：对实验动物小鼠、兔和小家畜猪、羊等卵母细胞采集时，可先用促性腺激素处理，使其排出更多的卵子，然后在适当的时间从输卵管冲取卵子，并使其直接与获能的精子在体外受精。
方法〔2〕：从刚屠宰的雌性动物体内摘取卵巢，再从卵巢中采集卵母细胞。
方法〔3〕：直接从活体动物的卵巢中采集卵母细胞，叫活体采卵。
需借助超声波探测仪、内窥镜或腹腔镜，直接从活的动物卵巢中吸取卵母细胞。
后两种方法适用于大家畜和大动物。
采集的卵母细胞需在体外人工培养成熟后才能与获能的精子受精。
2. 精子的获能〔1〕采集精子的方法及要求：采集精子的方法主要有假阴道法、手握法和电刺激法。
假阴道法是用特制的假阴道，满足雄性动物交配时对压力、温度和润滑度的要求。
同时要配备有与供精动物相适应的台畜，训练动物爬跨台畜，借假阴道收集精液。
手握法是通过徒手或戴乳胶手套的手，直接把握雄性动物阴茎，施以适当压力和刺激即可引起射精，并可收集富含精子部分的精液。
电刺激法是采用特制的电极伸入动物的直肠直接刺激位于腰荐部的射精中枢引起射精，此方法只适用于野生或某些经济动物。
此外，对于啮齿类的实验动物可在处死后从附睾尾收集精液。
受体细胞的获取和去核
受体细胞的获取和去核用于核移植的受体细胞有去除原核的合子、2-细胞期胚胎卵裂球和成熟卵母细胞〔包括激活后的卵母细胞〕三种，这三类受体细胞用于动物克隆都得到过克隆动物。
第一类去除原核的合子，最早是由Illmensee和Hoppe (1981)报道，他们将卵裂球细胞核直接注入去除原核的合子中获得了克隆小鼠。
第二类是早期胚胎，如Tsunoda等将8－细胞卵裂球移入去核的2细胞的卵裂球中也获了克隆小鼠。
第三类受体即是去核的MII期卵母细胞，这是哺乳动物核移植中使用最多的一类受体。
去核方法有：盲吸法：刚刚成熟的MII期卵母细胞的核(实际上是染色体或纺锤体)总是处于第一极体附近，因此，以第一极体为指示，吸去第一极体和其下方的1/4-1/3的胞质，就可以去除MII期卵母细胞的核，因为没有染料示踪核的位置，故该方法称为“盲吸法”。
该方法简单易行，对卵子的损伤较少。
其缺点是随着卵龄的增加，卵母细胞核和第一极体都会发生移动，不能准确地估计核的位置，影响去核的效果。
DNA染色示踪去核法：卵母细胞用DNA特异性染料Hochest33342染色后，借助荧光显微镜的紫外光使结合了染料的DNA发出蓝色荧光。
该方法的去核率可以达到100%。
缺点是:长时间的紫外线照射会损伤卵母细胞，造成胚胎发育降低。
一般可通过缩短紫外线照射时间(小于15秒)和避免直接照射卵母细胞(检查吸取的胞质部分的荧光)的方法克服这一缺点。
因此，该方法目前仍被方法使用。
另外也有人尝试用对活细胞损伤较小的长波激发光进行示踪，如绿光激发的Sybr14(激发波长485nm，发射波长520nm)和用红光激发的若丹明(激发波长550-580nm发射波长605nm)，但是Sybr14在连续光照下容易发生淬灭，而若丹明不能透过活细胞膜，必须通过注射的方式才能进入卵母细胞内部[30]末期去核法：将MII期卵母细胞激活，待排出第二极体后，去除第二极体及其下方的少量胞质，因为，此时卵母细胞染色体与第二极体连在一起，因此只要去除少量胞质就可以达到去核目的，去核成功率可以达到98%，远高于盲吸法。
《利用动物细胞工程改良动物细胞》 导学案
《利用动物细胞工程改良动物细胞》导学案一、学习目标1、了解动物细胞工程的基本概念和主要技术。
2、掌握动物细胞培养的方法和应用。
3、理解动物细胞核移植的原理和过程。
4、认识动物细胞融合的方法和意义。
5、探讨动物细胞工程在改良动物细胞方面的应用和前景。
二、学习重难点1、重点（1）动物细胞培养的条件和过程。
（2）动物细胞核移植的技术流程。
（3）动物细胞融合的诱导方法。
2、难点（1）动物细胞培养中细胞生长特性和细胞株、细胞系的概念。
（2）动物细胞核移植中核供体和核受体细胞的选择及去核方法。
（3）动物细胞融合中杂种细胞的筛选和培养。
三、知识链接1、细胞的结构和功能：复习细胞的基本结构，如细胞膜、细胞质、细胞核等，以及细胞的生命活动，如新陈代谢、分裂、分化等。
2、生物技术的发展：了解基因工程、发酵工程等生物技术的基本原理和应用，为学习动物细胞工程打下基础。
四、学习过程（一）动物细胞工程概述1、概念：动物细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，在细胞水平上进行的操作，以获得人们需要的生物产品或细胞本身。
2、主要技术：包括动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等。
（二）动物细胞培养1、概念：从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。
2、过程（1）取材：从健康动物体内取出组织块。
（2）分散细胞：使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理组织块，使细胞分散。
（3）原代培养：将分散的细胞接种到培养瓶中，在适宜条件下培养。
（4）传代培养：当细胞生长到一定密度时，进行分瓶培养。
3、条件（1）无菌、无毒的环境：对培养环境和所用器具进行无菌处理，添加一定量的抗生素，定期更换培养液以清除代谢产物。
（2）营养：包括糖、氨基酸、无机盐、维生素等，通常还需要添加血清、血浆等天然成分。
（3）温度和 pH：温度一般为 365±05℃，pH 为 72 74。
（4）气体环境：95%空气和 5%CO₂，CO₂的作用是维持培养液的pH。
核移植去核方法显微操作去核法、梯度离心、紫外光短时间照射、化学物质处理等
核移植去核方法显微操作去核法、梯度离心、紫外光短时间照射、化学物质处理等核移植去核方法-显微操作去核法、梯度离心、紫外光短时间照射、化学物质处理所谓细胞核移植技术，就是将供体细胞核移入除去核的卵母细胞中，使后者不经过精子穿透等有性过程即无性繁殖即可被激活、分裂并发育成新个体，使得核供体的基因得到完全复制。
以供体核的来源不同可分为胚细胞核移植与体细胞核移植两种。
【哺乳动物核移植技术研究进展】哺乳动物核移植是将外源的一个细胞核与一个去核卵母细胞结合，产生遗传上同质的动物的技术。
它在动物育种、制备转基因动物、基因治疗及器官移植等方面具有重大的作用。
具体方法『1供体核的获得』供体核可以是早期胚胎细胞、胚胎千细胞和体细胞。
早期都采用合子核到64细胞期的胚胎细胞核质体分裂球作供体细胞核，80年代开始，随着胚胎干细胞(embryostemcells，ES)的建立和对其研究的深入，人们对胚胎干细胞在核移植方面的应用前景寄予厚望，但ES建系太困难，仅在小鼠上获得成功。
TeruhikoWakayama等利用ES系克隆小鼠，结果有29%的重构胚在体外能发育到囊胚阶段，移植给假孕小鼠有8%胚胎附植并产下小鼠。
1997年Dolly羊的出现，开始了体细胞的核移植，并发展很快。
1.1胚细胞用0.2%链霉蛋白酶预处理胚胎，溶去胚胎的胶膜及透明带，分离出单个卵裂球。
消化透明带的时间是影响卵裂球质量的重要因素，作用时间短，透明带不能充分消化，卵裂球不易获得;作用时间长，则影响到卵质膜，容易破裂，在操作时容易失败。
因此，在分离卵裂球时应在解剖镜下监视透明带的消化过程，当透明带变薄，膨胀适度时就应移出，再用适当口径的吸管吹打使之分离。
另外，苏格兰学者Campbell等显微分离胚盘细胞并在体外进行缺血饥饿传代培养，诱使细胞处于"静止"状态，以便调整染色体结构，从而有助于核的重组与发育，他们使用这种方法建立了绵羊TNT4细胞系，该细胞形态类似于胚胎干细胞，但更扁平、上皮化。
第2章细胞工程章节测试(解析版)
第2章细胞工程章节测试一、单选题1 .某科研机构，致力于研究亚洲的一种珍稀的猫科动物的繁育问题，经过长期研究与实践，取得了突破性进展，可以通过胚胎工程技术，让家猫代孕而繁育，主要步骤如图所示，下列相关叙述正确的是（ ）A.代孕的家猫会对移植的胚胎产生免疫排斥所以移植前要给家猫服用免疫抑制剂B.早期胚胎需要培养至原肠胚期才能移植至家猫子宫C.在受精阶段如果透明带和卵细胞膜未及时发生相应的生理反应将会产生双胞胎或多胞胎D.刚收集到的卵子和精子不能直接用于受精2 .实验小鼠皮肤细胞培养（非克隆培养）的基本过程如图所示。
下列叙述错误的是（） 甲 --------------- 乙 --------------- 丙一皮肤组织-"皮肤细胞--培养细胞1 A.甲过程需要对实验小鼠进行消毒B.乙过程对皮肤组织可用胰蛋白酶处理C.丙过程得到的细胞大多具有异倍体核型D.丁过程得到的细胞具有异质性3 .下列过程不需要用到显微镜的是（）A.胚胎分割B.核移植C.构建染色体组型D.体外受精4 .下列关于细胞工程的叙述，错误的是（）A.去除植物细胞壁和分散动物组织细胞均需用酶处理B.脱分化和再分化所需的营养和激素等条件完全不同C.电刺激可以诱导植物原生质体融合或动物细胞融合D.细胞融合技术是研究肿瘤和新品种培育的重要手段5 .下列有关试管动物的说法，正确的是（） 该动崽 下科幼产猫物 实险小鼠 培养细胞2对该猫科 动物进行 催情处理A.试管牛所采用的技术中包含克隆技术和体外受精、胚胎移植B.卵子在受精前也要经历类似精子获能的过程C.试管婴儿技术让无法产生生殖细胞的夫妇得到自己的孩子D.试管动物的繁殖方式为无性生殖6.菊花的植物组织培养过程如下图，下列相关说法错误的是（）A.外植体一般选用分化潜力大的幼嫩茎段B.①②过程需要进行消毒和无菌操作以避免发生杂菌污染C.愈伤组织细胞一直处于不断增殖状态，易受诱变因素的影响D.②、③分别是脱分化、再分化过程，细胞增殖方式均为有丝分裂7.利用植物的茎尖或叶片、茎段，在无菌条件下，培养在人工配制的培养基上，使它发育成完整的植株。