高速逆流色谱分离研究吴茱萸、肾蕨的药用化学成分

摘要................................................................................................................................I Abstract..........................................................................................................................II 目录..............................................................................................................................III 第1章前言 (1)

1.1高速逆流色谱发展简介 (1)

1.2高速逆流色谱工作原理 (1)

1.3高速逆流色谱溶剂系统的选择和优化 (2)

1.4高速逆流色谱的优点的和缺点 (3)

1.5高速逆流色谱在科研及工业生产中的应用 (3)

1.6本研究的目的和意义 (4)

第2章吴茱萸化学成分的研究 (5)

2.1吴茱萸属植物化学成分和药理活性研究概况 (5)

2.1.1概述 (5)

2.1.2吴茱萸属植物化学成分研究进展 (5)

2.1.3药理活性研究进展 (6)

2.2荧光光谱法分析BSA与生物碱的相互作用 (7)

2.3材料与方法 (8)

2.3.1材料 (8)

2.3.2植物提取物的制备 (9)

2.3.3提取物的预分离 (9)

2.3.4重结晶法分离吴茱萸组分FS2中的化合物 (11)

2.3.5高速逆流色谱法分离吴茱萸组分FR3-A3中的化合物 (12)

2.3.6荧光猝灭法研究组分FR3-A3分离产物与牛血清蛋白的亲和力 (15)

2.4结果 (16)

2.4.1重结晶法分离结果 (16)

2.4.2高速逆流色谱法分离结果 (17)

2.4.3化合物的结构鉴定 (24)

2.4.4吴茱萸喹啉碱与牛血清蛋白的相互作用 (27)

2.5本章讨论 (30)

第3章肾蕨化学成分和活性的研究 (32)

3.1蕨类植物药用化学成分研究概述 (32)

3.2肾蕨科植物化学成分和药理活性研究概况 (33)

3.3薄层层析色谱TLC分析法 (33)

3.4材料与方法 (34)

III

3.4.1材料 (34)

3.4.2肾蕨抗氧化活性测试 (34)

3.4.3提取物及其不同极性部位的制备 (35)

3.4.4乙酸乙酯部位的预分离和薄层色谱分析 (35)

3.4.5高速逆流色谱分离 (36)

3.5结果 (38)

3.5.1抗氧化试验结果 (38)

3.5.2薄层层析色谱结果 (39)

3.5.3高速逆流色谱分离结果 (39)

3.5.4化合物的结构鉴定 (41)

3.6本章讨论 (42)

参考文献 (44)

附图 (48)

攻读学位期间的研究成果 (56)

致谢 (57)

第1章前言

1.1高速逆流色谱发展简介

高速逆流色谱(High-speed counter-current chromatography，简称HSCCC)是逆流色谱(CCC)技术上的一个重要发展，在上世纪80年代由美国国立卫生院Ito博士研发[1]，现在逐渐发展成为一种备受关注的液-液分配色谱分离技术。

液相色谱(LC)是分析化学中被广泛使用的分离方法，逆流色谱(CCC)是其中一个分支，逆流色谱的原始模型是Craig等研制的逆流分配技术(CCD)[2]，但因其工作周期耗时数天和有机溶剂消耗量大等问题，逆流分配法没有得到推广使用。以CCD为基础发展出来的逆流色谱技术成为了分析化学方法中的一个新的研究热点，Ito等人在逆流分配技术的基础上于1970年研发出比逆流分配法分离效率更高的逆流色谱仪[3]。逆流色谱仪操作简便，被广泛用于复杂样品中化合物的分离与纯化。近年来关于逆流色谱的应用研究的文献报道也在成倍增长。1981年，Ito结合了逆流色谱和螺管行星式离心技术，进一步发展出了高速逆流色谱仪，缩短了样品分离时间，且HSCCC的理论塔板数较之传统CCC也有大幅度提高，但因为对极性溶剂体系的固定相保留能力低，所以上世纪80年代的高速逆流色谱仪不能有效地分离样品中的极性化合物。为了扩大了HSCCC的应用范围，集成的螺旋盘和螺旋管组件被用于HSCCC仪器的制造，螺旋柱串联连接，增强了HSCCC对溶剂体系的固定相保留能力，此后HSCCC可适用于二肽、多肽甚至于蛋白质的分离[4,5]。现阶段的HSCCC仪器按样品进样量的范围可分为分析型、科研制备型和工业制备型三大类：分析型高速逆流色谱仪分离时间短，效率高，溶剂消耗小，可用于样品分离体系建立的前期测试；科研制备型适合进行前期最佳分离工艺的研究、指纹图谱的研究和样品分析检测研究；适合进行天然产物、中草药、化学合成物质、抗生素等中、小分子类物质的分离，分离产物可用于进行后续的科学研究；工业制备型的样品进样量达200mL，生产量大，稳定性好。

1.2高速逆流色谱工作原理

高速逆流色谱的分离原理与一般的柱色谱类似，都是利用化合物在固定相和流动相的分配系数的差异来达到分离效果，但是分离载体与一般的柱色谱不同，其固定相和流动相都以液体形式存在，互不相溶的有机溶剂在混合与静置后可以分为上下两相液体溶剂，一般情况下，处于上层的液体(轻相)作为固定相，即上