参芪扶正注射液的药效成分

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合物的谱学数据与文献中报道的芒柄花素 -7-O-β-D葡萄糖 苷 (formononetin-7-O-β-D-glucopyranoside)数 据相一致[ 2] 。 3.3化合物 3
白色针状结晶 (甲醇 ), mp230 ～ 232℃, 盐酸 镁粉反应阴性 , 三氯化铁 -铁氰化钾显色反应阳性 , 其 1 H-NMR(DMSO-d6 , 300MHz)谱 中 δ8.29 (1H, s)为异黄酮类化合物 2位特征质子信号 , δ:10.83 (1H, s), 9.03(1H, s)为 两个酚羟 基质子信 号 , 7.96(1H, d, J=8.8Hz)、 6.93(1H, dd, J=8.8, 2.2Hz)、 6.86(1H, d, J=2.2Hz), 为黄酮 A环上 质子信号 , 7.05(1H, br.s)、 6.95(2H, br.s)为 黄酮 B环上质子信号 ;δ3.79(3H, s)为一甲氧基 质子信号 。 该化合物的谱学数据与文献中报道的毛 蕊异黄酮的数据基本一致[ 1] , 且与课题前期分离鉴 定的毛蕊异黄酮 共薄层检测 , 薄层行为完全 一致 , 故鉴定其为毛蕊 异黄酮 (calycosin), 即 为 7, 3′-二 羟基 -4′-甲氧基异黄酮 。 3.4化合物 4
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图 1 化合物 1 ～ 9和 11的结构
3 结构鉴定
3.1化合物 1 白色针晶 (甲醇 ), mp257 ～ 258℃, 三氯化铁 -
铁氰 化 钾 显 色 反 应 阳 性 , 其 1H-NMR(DMSO-d6, 300MHz)谱中 δ8.34(1H, s)为异黄酮类化合物 2 位特征质子信号 。 δ10.83(1H, s)为一个酚羟基质 子信号 , δ:7.51(2H, d, J=8.8Hz)、 6.99 (2H, d, J=8.8Hz)为黄酮 B环 AA′BB′偶合系统的质子 信号 ;7.97 (1H, d, J=8.8Hz)、 6.94 (1H, dd, J=8.8, 2.1Hz), 6.87(1H, d, J=2.1Hz)为黄酮 A环上 AMX耦合系统质子信号 , δ3.79(3H, s)为 一甲氧基质子信号 , 以上氢谱数据与文献中报道的 芒柄花素数据相一致[ 1] , 与课题前期分离鉴定的芒 柄花素共薄层检测 , 薄层行为完全一致 , 故鉴定其 为芒柄花素 (formononetin), 即为 7-羟基 -4′-甲 氧基 异黄酮 。 3.2化合物 2
[ 摘要 ] 目的 :研 究参芪扶正注射液的药效物质基础 。 方法 :利用多种色 谱方法进 行成分分离 , 根据物理化 学性质和波谱学数据分 析对化合物进行结构鉴定 。 结果 :从注射 液原料粉中 分离得到 12个化合 物 , 分别 鉴定为芒 柄花素 (formononetin, 1)、 芒柄花素 -7-O-β-D-葡萄 糖苷 (formononetin-7-O-β-D-glucopyranoside, 2)、 毛蕊异 黄酮 (calycosin, 3)、 毛蕊异黄 酮 -7-O-β-D-葡萄糖苷 (calycosin-7-O-β-D-glucopyranoside, 4)、 9, 10-二甲氧基 紫檀烷 -3-O-β-D-葡 萄糖苷 (9, 10-dimethoxypeterocarpan-3-O-β-D-glucopyranoside, 5)、 黄 芪 甲 苷 (astragalosideⅣ , 6)、 异 黄 芪 皂 苷 Ⅰ (isoastragalosideⅠ , 7)、 异黄芪皂苷 Ⅱ (isoastragalosideⅡ , 8)、 乙酰黄 芪皂苷 Ⅰ (acetylastragalosideⅠ , 9)、 5-羟甲基 糠醛 (5-h·roxymethyl-furaldeh· e, 10)、 丁香苷 (syringin, 11)、 果糖 (fructose, 12)。 结论 :该 制剂以 黄酮苷 及皂苷为 主要药效成分 。
2 提取分离
注射液干燥原料粉 (200g)经水分散完全溶解 , 经 AB-8 大 孔吸 附 树 脂 , 依 次 以水 、 30%、 60%、 90%的 乙 醇 进行 洗 脱 , 得到 各 洗 脱 部分 41, 72, 37, 15g。 30%、 60%乙醇洗脱部分分别经硅胶柱色 谱 , 以氯仿 -甲醇梯度洗脱 , 得到馏分经反复硅胶柱 色谱 、 凝胶柱色谱 、 重结晶等方法得到化合物 1 ～ 12, 部分化合物结构见图 1。
[ 关键词 ] 参芪扶正注射液 ;药效成分 ;结构鉴定
近年来 , “鱼腥草 ” 等中药注射剂事件时 有发 生 , 这已成为社 会关 注的 一大 焦点 。 而 中 药注 射 剂最突出的问题 集中 在其药 效物质 基础不 明及 现 行的质量标准要求偏低 , 因此成为制约中药注射 剂发展的一 大瓶 颈 , 亟待 改进 。 参 芪扶 正 注射 液 是由传统补气中药党参 、 黄芪经提取后配制而成 的大输液 , 为中药二 类新药 , 1996 年经 卫生部 批 准试生产 , 1999年经 国家药品 监督管理 局批准 正 式生产 , 主要用于肿瘤的辅助治疗 、 冠心病、 心 绞痛等病症 。自上市以来取得了良好的社会效益 和巨大的经 济效 益 。 组方 的两 味中 药 黄芪 、 党 参 均为名贵中药 。 《中国药典 》 (2005 年版一部 )收 载的黄芪为豆科植物蒙古黄芪 [ Astragalusmembranaceus(Fish.)Bge.var.mongholicus(Bge.) Hsiao] 和膜荚黄芪 (Astragalusmembranaceus(Fish.)Bge. 的干燥根, 但目前因蒙古黄芪野生资源丰富、 栽 培量大 , 因此常作为注射剂生产的主要原料, 而 党参多以山 西产为 主 。 作 为一个 临床 应用 多年 并 且有效的中药制剂 , 参芪扶正注射液的活性物质 基础并不十分明确 , 二者配伍后化学组分将可能 产生有别于 单味 植物 药的 新 组分 。 为 此 , 本文 为 探讨其真正的药效物质基础, 为后续的质量改进 提供参考 , 经 AB-8型大孔吸附树脂初步分离 处理
DO I :10.13313/j .issn.1673 -4890.2009.08.006
2009年 8月 第 11卷 第 8期
中国现代中药 ModernChineseMedicine
化学成分
Aug.20 09 Vol.11 No.8
参芪扶正注射液的药效成分■
吴迪 1 , 李行诺2 , 吴立军 2 , 高慧媛 2＊ (1.辽宁省公安厅刑科所 , 辽宁 沈阳 110032; 2.沈阳药科大学中药学院 , 辽宁 沈阳 11色谱 及凝胶 色谱 进行 化 学成分分离 , 得到了 12 个化合物 , 根据其物 理化 学性质和光谱数据确定了它们的结构 , 研究结果 为后续的工作提供了必要依据 。
1 仪器与材料
DK-98-1 型恒温水浴锅 (天津市泰斯 特仪器有 限公 司 ), Bruker-ARX-300 型 核 磁 共 振 仪 (TMS 为内标 )、 Bruker-AV-600 型 核磁 共 振 仪 (TMS为 内 标 ), YanacoMP-S3 熔 点 测 定 仪 (温 度 未 校 正 )。 AB-8大孔吸附 树脂 (天津 树脂厂 ), 柱色谱 用硅胶 (200 ～ 300 目 )、 薄层 色 谱用 硅 胶 (青岛 海洋化 工 有 限公 司 )。 色 谱 用 试 剂 均 为 分 析 纯 。 参芪 扶正 注 射 液 干 燥原 料 粉 (利 民 制 药 厂 , 批 号 2 0 0 60 1 07 )。
2009年 8月 第 11卷 第 8期
中国现代中药 ModernChineseMedicine
Aug.20 09 Vol.11 No.8
学数据与文献报道的毛蕊异黄酮 -7-O-β-D-葡萄糖苷 (calycosin-7-O-β-D-glucopyranoside)数据相一致[ 1] 。 3.5化合物 5
白色针状 结晶 (甲醇 ), mp205 ～ 208℃, 10% 硫酸 -乙醇显淡黄色 , Molisch反应阳 性 , 薄层 酸水 解检出葡萄 糖 。1H-NMR(DMSO-d6 , 600MHz)谱中 给出 1组苯环上 AMX偶合系统的特征质子信号 , δ: 7.42(1H, d, J=8.5Hz)、 6.72(1H, dd, J=8.5, 2.3Hz)、 6.55(1H, d, J=2.3Hz);结合质子信号 7.00 (1H, d, J= 8.2Hz)、 6.53 (1H, d, J = 8.2Hz), 推测结构存在 1个 1, 3, 4-三取代及 1个 连四取代苯环 ;3.73(3H, s)、 3.70(3H, s)为两 个甲氧基质子信号 , 4.85(1H, d, J=7.6Hz)为糖 端基质子信号 , 由其偶合常数确定葡萄糖端基构型 为 β型 。13 C-NMR(DMSO-d6 , 75MHz)数据如下 , δ: 158.6(C-3 )、 156.3 (C-4a)、 152.8 (C-9)、 151.1 (C-10a)、 133.4 (C-10)、 132.1 (C-1)、 121.7 (C6b)、 118.9 (C-7)、 114.1 (C-11b)、 110.6 (C-2)、 105.2(C-8)、 104.1(C-4)、 100.4(C-1′)、 78.3(C11a)、 77.2 (C-5′)、 76.6 (C-3′)、 73.3 (C-2′)、 69.8 (C-4′)、 65.8 (C-6)、 60.8 (C-6′)、 60.0 (9OCH3 )、 56.2(10-OCH3 )、 39.8(C-6a)。 与文 献报 道 9, 10-二甲氧基紫檀烷 -3-O-β-D-葡萄糖苷数据相 一致[ 3] , 故鉴定其为 9, 10-二甲氧基紫檀烷 -3-O-βD-葡 萄 糖 苷 (9, 10-dimethoxypeterocarpan-3-O-β-Dglucopyranoside)。 3.6化合物 6
白色粉末 (甲醇 ), mp217 ～ 219℃, 三氯化铁 铁氰化钾显色反应阴性 , Molisch反应阳性 , 薄层酸 水解检出葡 萄糖 。 其 1 H-NMR(DMSO-d6 , 300MHz) 谱中 δ8.45(1H, s)为异黄酮类化合物 2位特征质 子信号 。该化合 物苷元部分的 1H-NMR谱数据与化 合物 1对比 , 除 10.83(1H, s)的酚羟基质子信号 消失外 , 其余信号则十分接近 。 在 13 C-NMR(DMSOd6 , 75MHz) 中 , δ: 100.1、 73.2、 76.5、 69.7、 77.3、 60.7为一组葡萄糖上的碳信号 , 结合氢谱中 糖端基质子信号 δ5.11(1H, d, J=7.0Hz), 确定 糖端基构型 为 β 构型 , 其余 碳信 号归 属 如下 , δ: 174.7 (C-4)、 161.5 (C-7)、 159.1 (C-4′)、 157.1 (C-9)、 153.7(C-2)、 130.2(C-2′, 6′)、 127.0(C5)、 124.1 (C-1′)、 123.4 (C-3)、 118.5 (C-10 )、 115.7(C-6)、 113.7(C-3′, 5′)、 103.5(C-8)。该化