常用的临床免疫学检测技术
常用免疫学检验检测技术
要点一
总结词
要点二
详细描述
蛋白质分析的常用技术
免疫印迹技术是一种用于分离、检测和识别蛋白质的常用 技术。该技术通过将蛋白质混合物在凝胶上进行电泳分离 ，然后将其转移到膜上，再与特异性抗体结合，最后通过 显色反应检测目标蛋白质。免疫印迹技术具有高灵敏度、 高特异性和可同时检测多个蛋白质的特点，广泛应用于生 物学、医学和生物工程领域。
注意事项
由于放射性同位素具有放射性，操作过程中需要注意安全防护，避免对操作人员和环境造成污染。同 时，由于放射免疫分析需要使用放射性同位素标记的抗原，因此成本较高。
优缺点分析
优点
放射免疫分析具有较高的灵敏度和特异性， 可以用于痕量物质的定量检测；操作简便， 易于自动化；测量结果准确可靠。
缺点
由于使用放射性同位素，操作过程中存在安 全风险；成本较高，需要特殊仪器和实验室 条件；对于某些样品，可能存在交叉反应或 非特异性干扰。
化学发光免疫分析（CLIA）
总结词
快速、高灵敏度的定量检测技术
详细描述
化学发光免疫分析是一种基于化学发光反应 的免疫分析技术，通过测量化学发光反应过 程中释放的光子数量来检测抗原或抗体的浓 度。该技术具有快速、高灵敏度和低背景干 扰的优点，广泛应用于传染病、肿瘤标志物
和激素等生物分子检测领域。
免疫印迹技术（Western Blot）
05
其他常用免疫学检验检测技术
时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）
总结词
高灵敏度、高特异性的定量检测技术
详细描述
时间分辨荧光免疫分析是一种基于荧光能量共振转移的免疫分析技术，通过测量荧光标 记物的发射光谱来检测抗原或抗体的浓度。该技术具有高灵敏度、高特异性和低背景干
临床免疫学检验项目
临床免疫学检验项目一、引言临床免疫学检验项目是通过检测人体免疫系统的功能和免疫相关指标，以辅助临床诊断和监测疾病进展的一种重要实验室检查方法。
免疫学检验项目广泛应用于各个领域，包括感染病、自身免疫病、肿瘤、器官移植、过敏性疾病等。
二、常见的临床免疫学检验项目1. 免疫球蛋白检测免疫球蛋白（Immunoglobulins，Ig）是人体内最重要的抗体，可分为IgG、IgA、IgM、IgD和IgE等不同类型。
通过检测免疫球蛋白的水平，可以评估人体免疫系统的功能状态，判断是否存在免疫缺陷或免疫异常。
2. 细胞免疫功能检测细胞免疫功能检测主要包括淋巴细胞亚群分析、细胞因子检测和免疫细胞功能评价等。
淋巴细胞亚群分析可通过检测CD4+和CD8+T 细胞的比例，评估免疫系统对感染和疾病的应答能力。
细胞因子检测可以检测IL-2、IL-6、IFN-γ等细胞因子的水平，用于评估炎症反应和免疫调节功能。
免疫细胞功能评价可以通过检测免疫细胞的增殖、杀伤力和吞噬功能等指标，评估免疫细胞的功能状态。
3. 自身抗体检测自身抗体是指机体免疫系统异常产生的针对自身组织或器官的抗体。
自身抗体检测可以帮助诊断自身免疫病，如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎等。
常见的自身抗体检测项目包括抗核抗体（ANA）、类风湿因子（RF）、抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCAs）等。
4. 过敏原检测过敏原检测是通过检测人体对特定过敏原的免疫反应，帮助诊断和治疗过敏性疾病。
常见的过敏原检测方法有皮肤划痕试验、血清特异IgE抗体检测和免疫球蛋白E（IgE）介导的组织释放试验等。
5. 肿瘤标志物检测肿瘤标志物检测是通过检测体液或血清中特定蛋白质的水平变化，辅助肿瘤的早期诊断、疾病进展监测和预后评估。
常见的肿瘤标志物检测项目包括癌胚抗原（CEA）、前列腺特异性抗原（PSA）、甲胎蛋白（AFP）等。
三、临床意义和应用临床免疫学检验项目在临床诊断和治疗中具有重要意义。
通过对免疫学指标的检测，可以辅助诊断免疫缺陷病、自身免疫病、感染病等，并评估疾病的严重程度和预后情况。
临床免疫学检验方法与应用
临床免疫学检验方法与应用免疫学是一门研究机体对抗病原体、维持免疫平衡的科学，其在临床诊断中起着举足轻重的作用。
免疫学检验方法多种多样，能够准确地检测机体的免疫状态，有助于诊断和治疗各种疾病。
本文将介绍几种常见的临床免疫学检验方法及其应用。
1. ELISA法ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种常用的免疫学检验方法，通过酶标法测定抗体或抗原的存在量。
ELISA法可用于检测HIV、乙肝、梅毒等疾病的抗体水平，也可用于测定药物浓度或病毒载量。
由于ELISA法操作简便、灵敏度高，因此在临床诊断中得到广泛应用。
2. 免疫荧光法免疫荧光法是一种通过检测抗体或抗原在细胞或组织中的荧光信号来进行免疫检测的方法。
免疫荧光法被广泛用于自身免疫性疾病的诊断，如风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等。
通过观察免疫荧光信号的强度和分布，可以判断患者的免疫状态和疾病程度。
3. 免疫印迹法免疫印迹法（Western Blot）是一种通过检测抗体与特定抗原结合而形成的免疫复合物来进行检测的方法。
免疫印迹法主要用于检测蛋白质的表达水平和鉴别不同蛋白质。
在临床上，免疫印迹法常用于肿瘤标记物的检测和分析，有助于早期发现恶性肿瘤。
4. 细胞免疫学方法细胞免疫学是研究机体免疫细胞及其功能的学科，其方法主要包括细胞毒活性测定、淋巴细胞亚群分析、细胞因子测定等。
这些方法在免疫性疾病、感染性疾病和移植排斥反应的诊断和治疗中起着关键作用。
5. 其他免疫学检验方法除了上述几种常见的免疫学检验方法外，还有许多其他方法，如流式细胞仪、PCR法、化学发光法等。
这些方法在特定疾病的诊断和治疗中有其独特的应用价值，为临床医生提供了更多的诊断手段和治疗选择。
总结免疫学检验方法在临床诊断中发挥着不可替代的作用，能够帮助医生准确判断患者的免疫状态和疾病情况，指导治疗方案的制定和调整。
不断发展的免疫学技术为医学进步提供了强大的支持，相信随着科学技术的不断创新和进步，免疫学检验方法将在临床应用中发挥越来越重要的作用。
免疫学检测技术及应用
划痕法
细胞因子的检测技术
一、 生物学检测技术 二、 免疫学检测技术 三、分子生物学检测技术
依赖细胞株测定法 ELISA法
分子杂交、PCR 等检测mRNA
细胞因子检测的特点
• 样品含量低 •样品具有时效性 •生物效应特异性差
Figure 14-12
细胞因子的功能
Cell activation
／immunogold staining)
（一）免疫荧光技术(又称荧光抗体技术) 原理：用荧光素(如异硫氰酸荧光素、罗
丹明B200等) 标记抗体(荧光抗体)，用荧光 抗体浸染细胞或组织切片，抗原与荧光抗体 结合，于荧光显微镜下观察荧光，确定被检 抗原的存在。
免疫荧光技术包括：
直接法
间接法
间接补体增强法
ELISA法： 直接法 间接法 双抗体夹心法(双位点法) 竞争法
ELISA
(三) 同位素标记技术(isotope-labelling technique) 放射免疫分析(radioimmunoassay,
RIA) 是一种用放射性同位素分析抗原抗体反应 相结合方法。 优点：灵敏度高, 可检测0.001pg／mL
Direct and indirect immunofluorescence staining of membrane antigen (mAg).
（二）免疫酶技术(immunoenzymatic techniques)
是将抗原抗体反应与酶催化底物的作用 相结合的一种方法。
主要有两种类型： 1.免疫酶染色 2.酶免疫测定（enzyme immunoassay, EIA）
•3H-胸腺嘧啶核苷参入法（3H-TdR）: 间接观察DNA 合成含量。灵敏度高，具有放射性。 •四甲基偶氮唑盐法（MTT）: MTT商品名为噻唑蓝。 原理：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶可将外源性 MTT还原成蓝紫色结晶-甲瓒（formazan）, DMSO使 其溶解，酶标分析仪检测。简便，灵敏度高，稳定性 差。
临床分析中的免疫学检测技术
临床分析中的免疫学检测技术免疫学检测技术在临床分析中起着至关重要的作用。
它通过检测和分析免疫系统相关的指标，为医生提供了诊断和疾病监测的有力工具。
本文将介绍几种常见的免疫学检测技术，并探讨它们在临床分析中的应用。
一、酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)酶联免疫吸附试验是一种常见的免疫学检测技术。
它基于抗原-抗体的特异性反应，通过酶标记的抗体与待测物质结合，再通过底物的酶反应转变为可定量测量的光学信号。
在临床中，ELISA广泛应用于病原体检测、肿瘤标志物监测、自身免疫疾病诊断等领域。
例如，ELISA可以用于检测HIV抗体、乙肝病毒表面抗原等感染性疾病的诊断。
此外，它还可以用于监测肿瘤标志物如癌胚抗原(CEA)、前列腺特异性抗原(PSA)等以及自身免疫疾病的相关指标。
二、流式细胞术(Flow Cytometry)流式细胞术是一种高精度和高通量的免疫学检测技术。
它通过将细胞悬液经过单个细胞形成的窄流柱后，利用激光光源和多种激光解译系统对细胞进行多参数的定量分析。
在临床中，流式细胞术被广泛用于免疫表型分析、细胞凋亡检测以及免疫荧光染色分析等。
例如，流式细胞术可以用于检测白血病和淋巴瘤中的异常细胞、测定淋巴细胞亚群、检测细胞表面标记物等。
三、蛋白质微阵列技术(Protein Microarray)蛋白质微阵列技术是一种高通量的免疫学检测技术。
它通过将多种特异性抗体或抗原固定在基质上，与待测样品进行反应后，利用检测系统测量样品中多种免疫反应产物的定量和定性信息。
在临床中，蛋白质微阵列技术可以用于潜在致病因子的筛查、疾病标记物的发现以及蛋白质相互作用的研究。
例如，它可以用于检测某些癌症中的肿瘤抗原、检测病毒感染中产生的抗体以及筛选特定药物的作用靶点。
四、实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction, qPCR)实时荧光定量PCR是一种敏感且高效的免疫学检测技术。
常见免疫学检测方法
常见免疫学检测方法免疫学检测方法是一种通过检测人体免疫系统中特定分子或细胞的存在、数量或功能来评估免疫系统状态的方法。
这些方法在临床诊断、药物研发和疾病监测等领域起着重要作用。
本文将介绍几种常见的免疫学检测方法。
一、酶联免疫吸附试验（ELISA）酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种常见的免疫学检测方法，广泛应用于疾病的诊断和研究中。
ELISA基于抗原与抗体的特异性结合原理，通过固相支持物上的抗原或抗体与待测样品中的相应抗体或抗原结合，然后用酶标记的二抗或二抗-抗体复合物来检测结合物质的存在。
ELISA方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便的特点，可用于检测多种物质，如病原体、抗体、激素等。
二、流式细胞术流式细胞术（Flow Cytometry）是一种利用激光技术对细胞进行快速、高通量的分析和分选的方法。
该方法通过将待测细胞标记上与特定抗原结合的荧光染料，然后通过激光束照射，测量细胞上荧光信号的强度和特征，以获得细胞的相关信息。
流式细胞术可用于细胞表面标记物的检测、细胞周期分析、细胞凋亡检测等。
此外，流式细胞术还可以进行单细胞分选，用于获得特定细胞亚群进行进一步的研究。
三、免疫组化免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）是一种通过将抗体与待测组织中的特定抗原结合来检测抗原在组织中的分布和表达水平的方法。
免疫组化方法首先将待测组织样本进行处理，使其能够与抗体发生特异性反应，然后使用荧光染料、酶标记物或金标记物等标记抗体，通过显色或荧光信号来显示抗原的分布情况。
免疫组化方法可用于病理诊断、研究组织中特定蛋白的表达和定位等。
四、免疫电泳免疫电泳（Immunoelectrophoresis）是一种结合电泳和免疫学的方法，用于检测和鉴定蛋白质分子。
免疫电泳通过电泳将蛋白质在凝胶中分离，然后在凝胶上进行抗体与蛋白质的反应，形成免疫沉淀线，通过观察免疫沉淀线的形状和位置来判断蛋白质的类型和数量。
常用的临床免疫学检测技术【可编辑全文】
可编辑修改精选全文完整版常用的临床免疫学检测技术第一讲免疫浊度技术一、免疫浊度法基本原理免疫浊度法是可溶性抗原、抗体在液相中特异结合，产生一定大小的复合物，形成光的折射或吸收，测定这种折射或吸收后的透射光或散射光作为计算单位。
二、免疫比浊法的特点：1、自动化免疫分析稳定性好，敏感性高(达ng/L)、精确度高（CV<5%)，干扰因素少，结果判断更加客观、准确，也便于进行室内及室间质量控制。
2、自动化免疫分析快速、简便，结果回报时间短，便于及时将各种信息向临床反馈，又可节约大量人力物力，利于大批量样品的处理。
3、自动化免疫分析能更好地避免标本之间的污染及标本对人的污染。
4、自动化免疫分析可利用多道计数器、测光仪，同一份样品同时测定几十种和临床有关的分析项目，血清用量少，具有明显的应用优势。
三、免疫浊度法分类（一）透射光免疫浊度法透射光免疫浊度法是个极简便的方法，测定方式是测定入射光因反射、吸收或散射后的衰减，读数以吸收光单位（A）或OD表示，这种A值反映了入射光和透射光的比率。
（二）散射比浊法散射比浊法应用越来越多，且有替代其他免疫定量法的趋势。
散射比浊的原理是根据雷利(Rayleigh)公式提出的，当复合物较小时（<3*10）呈全透射，透射与散射相当。
当复合物大于入射光波的1/20时，形成不对称前向散射，在90o以前的角度测量散射光皆取得最佳效果，散射光的量代表复合物的量。
1、终点散射比浊法2、速率散射比浊法速率法的灵敏度与特异性都优于终点法，前者的灵敏度比后者高出3个数量级之多，但终点法稳定性好。
所谓速率，是在某单位时间内形成大于3*10以上的复合物量（不是积累数），当仪器测定到某一时间单位内形成的速率下降时，即出现速率峰，该峰值的高低，即代表抗原的量。
速率散射比浊法有三大特点：1、时间快，一般在30-60s之内就可完成测试；2、比较准确，因其测定形成速率，抗原多，速率快；3、节省试剂。
免疫学检验常用的方法
免疫学检验常用的方法
免疫学检验是临床医学中非常重要的一门学科，主要用于诊断疾病的发病机制、检测疾病的标志以及评估疾病的预后。
下面列举几种常用的免疫学检验方法: 1. 抗体检测：抗体检测是免疫学检验中最常用的方法之一。
它主要用于检测患者体内是否存在特定病原体的抗体，例如乙肝抗原抗体检测、艾滋病抗体检测等。
2. 抗原检测：抗原检测是指通过检测患者体内是否存在特定抗原来诊断疾病的方法。
例如，流感病毒抗原检测可用于诊断季节性流感。
3. 免疫荧光检测：免疫荧光检测是一种常用的免疫学检验方法。
它主要用于检测细胞内的蛋白质、抗体等分子。
例如，免疫荧光染色可用于检测宫颈鳞状细胞中 HPV 病毒的存在。
4. 聚合酶链反应 (PCR) 检测：聚合酶链反应检测是一种用于检测病原体的分子生物学方法。
它主要用于诊断病毒、细菌等病原体感染。
例如，PCR 检测可用于诊断 HIV 感染。
5. 免疫细胞检测：免疫细胞检测是一种用于评估免疫系统功能的方法。
它主要用于检测免疫细胞的数量和功能，例如，流式细胞术可用于检测免疫细胞的表型。
以上是几种常用的免疫学检验方法。
除此之外，还有免疫印迹法、生物传感器法、纳米颗粒法等先进的检测技术，这些技术不仅可以提高检测的灵敏度和特异性，还可以降低检测的成本。
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常用的临床免疫学检测技术第一讲免疫浊度技术一、免疫浊度法基本原理免疫浊度法是可溶性抗原、抗体在液相中特异结合，产生一定大小的复合物，形成光的折射或吸收，测定这种折射或吸收后的透射光或散射光作为计算单位。
二、免疫比浊法的特点：1、自动化免疫分析稳定性好，敏感性高(达ng/L)、精确度高（CV<5%)，干扰因素少，结果判断更加客观、准确，也便于进行室内及室间质量控制。
2、自动化免疫分析快速、简便，结果回报时间短，便于及时将各种信息向临床反馈，又可节约大量人力物力，利于大批量样品的处理。
3、自动化免疫分析能更好地避免标本之间的污染及标本对人的污染。
4、自动化免疫分析可利用多道计数器、测光仪，同一份样品同时测定几十种和临床有关的分析项目，血清用量少，具有明显的应用优势。
三、免疫浊度法分类（一）透射光免疫浊度法透射光免疫浊度法是个极简便的方法，测定方式是测定入射光因反射、吸收或散射后的衰减，读数以吸收光单位（A）或OD表示，这种A值反映了入射光和透射光的比率。
（二）散射比浊法散射比浊法应用越来越多，且有替代其他免疫定量法的趋势。
散射比浊的原理是根据雷利(Rayleigh)公式提出的，当复合物较小时（<3*10）呈全透射，透射与散射相当。
当复合物大于入射光波的1/20时，形成不对称前向散射，在90o以前的角度测量散射光皆取得最佳效果，散射光的量代表复合物的量。
1、终点散射比浊法2、速率散射比浊法速率法的灵敏度与特异性都优于终点法，前者的灵敏度比后者高出3个数量级之多，但终点法稳定性好。
所谓速率，是在某单位时间内形成大于3*10以上的复合物量（不是积累数），当仪器测定到某一时间单位内形成的速率下降时，即出现速率峰，该峰值的高低，即代表抗原的量。
速率散射比浊法有三大特点：1、时间快，一般在30-60s之内就可完成测试；2、比较准确，因其测定形成速率，抗原多，速率快；3、节省试剂。
（三）粒子强化免疫浊度测定法粒子强化免疫浊度测定法的基本原理是，选择一种大小适中，均匀一致的胶乳颗粒吸附或交联抗体后，当遇到相应抗原时，则发生聚集，单个胶乳颗粒在入射光波长之内，光线可透过。
当两个胶乳颗粒凝聚时，则使透射光减少，这种减少的程度与胶乳凝集成正比，当然也与抗原量成正比。
四、免疫比浊法的临床应用（一）检测项目1、免疫功能监测：免疫球蛋白G、A、M，免疫球蛋白轻链κ、λ，补体C3、C4测定。
2、心血管疾病监测:载脂蛋白A、B，脂蛋白(a)，C-反应蛋白等。
3、炎症状况监测:C-反应蛋白，a-酸性糖蛋白，触珠蛋白，铜蓝蛋白等。
4、风湿性疾病检测：ASO、RF、CRP5、肾脏功能检测：尿微量白蛋白，a-微球蛋白，β-微球蛋白，转铁蛋白，免疫球蛋白G等。
6、营养状态监测：白蛋白，前白蛋白，转铁蛋白等。
7、凝血及出血性疾病的检测：抗凝血酶Ⅲ，转铁蛋白，触珠蛋白等。
8、血脑屏障监测：脑脊液白蛋白，免疫球蛋白G、A、M。
（二）免疫浊度法测定中应注意的问题1、伪浊度的影响伪浊度形成原因很复杂，主要是抗血清含有非特异性的交叉反应性杂抗体成分；增浊剂浓度和反应时间掌握不当；样品本身的浊度处理不当；试剂的污染和变质；器材尤其是比色杯等不够清洁等因素。
2、非特异性散射光的影响免疫浊度法经常受内源性光散射的干扰，为避免这些非特异性光散射的影响，应用透射比浊法时需保证抗体组分在3％以下，散射比浊法需保证在0.5％以下。
3、钩状效应的影响钩状效应存在于各种免疫测定方法中，在免疫浊度测定中也十分明显。
现在很多仪器已具有检查钩状效应的功能，一经发现便可对样品稀释后复测。
当病人症状与检测结果明显不符时，应怀疑其存在。
第二讲固相酶免疫测定技术一、固相酶免疫测定的原理和类型（一）ELISA的原理基于抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。
结合在固相载体表面的抗原或抗体保持其免疫学活性，抗原或抗体的酶结合物既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。
在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。
用洗涤的方法使固相载体上形成抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。
加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。
由于酶的催化效率很高，故可极大地放大反应的结果，从而使测定方法达到很高的敏感度。
ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。
在这种测定方法中有三个必要的试剂：1、固相的抗原或抗体；2、酶标记的抗原或抗体；3、酶反应的底物。
根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具体条件，可设计出各种不同类型的检测方法。
（二）ELISA反应的类型：1、双抗体夹心法检测抗原最常用的方法，操作步骤如下：（1）将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。
洗涤除去未结合抗体及杂质。
（2）加受检标本，与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。
洗涤除去其他未结合物质。
（3）加酶标抗体。
固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。
彻底洗涤未结合的酶标抗体。
此时，固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。
（4）加底物显色。
夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。
根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。
在临床检验中，此法适用于检测各种蛋白质等大分子抗原，例如乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、甲胎蛋白（AFP）、促绒毛膜性腺激素（HCG）等。
双抗体夹心法只适用于二价或二价以上较大分子抗原的检出和定量分析，而不能用于半抗原等小分子的测定。
2、间接法测抗体间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相抗原结合的受检抗体，故称为间接法。
操作步骤如下：(1) 将特异性抗原与固相载体联结，形成固相抗原。
洗涤除去未结合的抗原及杂质。
(2) 加稀释的受检血清。
血清中的特异性抗体与固相抗原结合，形成固相抗原抗体复合物，经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体。
其他免疫球蛋白及血清中的杂质由于不能与固相抗原结合，在洗涤过程中被洗去。
(3) 加酶标抗免疫球蛋白（酶标抗抗体，一般为酶标抗人IgG )。
它与固相复合物中的抗体相结合，从而使该抗体间接地标记上酶。
清洗后，固相载体上的酶量与特异性抗体的量相关。
(4) 加底物显色。
颜色深度与标本中受检抗体量相关。
本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断。
本法的主要缺点为受检标本须经稀释（1:50-1:20）的后才能进行测定，否则血清中高浓度的非特异性IgG和其他干扰物质会引起阴性本底过高，影响结果的判断。
3、双抗原夹心法反应模式与双抗体夹心法类似。
用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。
同属抗体检测，与间接法不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。
在间接法不适用时（例如包被抗原中的杂质可与酶标记的抗入IgG反应），可试用此法。
此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因此其敏感度相对高于间接法。
在临床检验中，抗HBs的ELISA常采用本法。
4、竞争法测抗体当相应抗原材料中含有与抗入IgG反应的物质，而且不易得到足够的纯化抗原进行包被时，可用此法检测特异性抗体．其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。
标本中抗体量愈多，结合在固相上的酶标抗体愈少。
因此阳性反应呈色较浅于阴性反应。
由于抗原的难得，在包被时多采用捕获法，即先包被与抗原相应的抗体，然后加入抗原，形成固相抗原。
5、竞争法测抗原小分子抗原和半抗原因缺乏可作夹心的二个或二个以上的位点，因此不能用双抗体夹心法进行测定。
竞争法的原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合。
标本中抗原量愈多，结合在固相上的酶标抗原愈少。
因此标本中抗原含量较多的，反应呈色较含量少的为淡。
小分子激素，药物等的ELISA测定多用此法。
6、捕获法测IgM抗体IgM抗体的检测用于传染病的早期诊断中。
间接ELISA一般仅适用于检测IgG抗体。
如用酶标记的抗人IgM作为二抗进行间接ELISA测定IgM抗体，标本中同时存在的不同浓度的IgG抗体将与IgM抗体竞争，而使结合在固相抗原上的IGM抗体相应减少。
另外标本中如含有类风湿因子、也会产生干扰。
因此用一般的间接法测定IgM抗体不能得到准确的结果。
在捕获法中，用抗人IgM抗体包被固相，以捕获血清标本中的IgM （其中包括针对抗原的特异性IgM抗体和非特异性IgM）。
然后加入抗原，此抗原仅与特异性IgM相结合。
继加酶标记针对抗原的特异性抗体，再与底物作用，呈色即与标本中的特异性IgM成正相关。
此法常用于病毒性感染的早期诊断。
二、酶免疫测定的发展和应用（一）ABC-ELISAABC为亲和素(avidin)、生物素（biotin）、复合物（complex）的略语。
亲和素是一种糖蛋白，可以和4个生物素分子紧密结合。
可与蛋白质、糖类和酶等多种类型的大小分子形成生物素化的产物。
生物素与亲和素的结合，虽非属免疫反应，但特异性强，亲和力大，二者一经结合就极为稳定。
由于一个亲和素分子有四个生物素分子的结合位置，可以连接更多的生物素化的酶分子，形成一种类似晶格的复合体。
因此如把生物素亲和素系统与ELISA偶联起来，就可大大提高ELISA的灵敏度。
ABC-ELISA可分为酶标记亲和素-生物素（labeled avidinbiotin,LAB）法和桥连亲和素-生物素（bridge avidin biotin, BRAB）法二种。
前者将酶标记在亲和素分子上；后者通过BNHS 分别制成酶-生物素和抗体-生物素，通过亲和素搭桥将二者结合起来。
利用生物素-亲和素系统对荧光免疫技术的敏感度也有明显的放大作用。
ABC- ELISA已广泛用于细菌、病毒、寄生虫感染等的诊断中。
（二）酶联免疫电转移印斑法Burnette于1981年建立酶联免疫电转移印斑法（enzyme linked immunolectrotransfer blot, EITB），并称之为西部印斑(Western blot). EITB分三个阶段进行。
第一阶段为SDS-聚丙烯酞胺凝胶电泳（SDS-PAGE）。
抗原等蛋白样品经SDS处理后带阴电荷，在聚丙烯酞胺凝胶中从阴极向阳极泳动，分子量越小，泳动速度越快。
此阶段分离效果肉眼不可见（只有在染色后才显出电泳区带）．第二阶段为电转移。
将在凝胶中已经分离的条带转移至硝酸纤维素膜上。
选用低电压（100V）大电流（(1-2A)，通电45分钟转移即可完成。
此阶段分离的蛋白质条带肉眼仍不可见。
第三阶段为酶免疫定位。
将印有蛋白质条带的硝酸纤维素膜（相当于包被了抗原的固相载体）依次与特异抗体和酶标记第二抗体作用后，加入能形成不溶性显色物的酶反应底物，使区带染色。