抗精子抗体直接法和间接法检测比较研究

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直接ELISA法与间接ELISA法检测HIV抗体的对比分析

直接ELISA法与间接ELISA法检测HIV抗体的对比分析

直接ELISA法与间接ELISA法检测HIV 抗体的对比分析作者:乔健健来源:《中国实用医药》2012年第21期【摘要】目的合理选择检测试剂,建立一种准确的ELISA检测方法。

方法直接ELISA 法和间接ELISA法对不同血液标本分别进行HIV抗体的检测,并对结果进行比较分析。

结果间接ELISA法检测后会出现不同例数的假阳性结果,而直接ELISA法未出现假阳性结果。

结论直接ELISA法检测结果假阳性率低,作为新一代试剂,可逐步取代间接ELISA法。

【关键词】酶联接免疫吸附剂测定法;直接ELISA法;间接ELISA法;HIV;检测检测人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus,HIV)抗体的常用实验方法有蛋白印迹法、酶联接免疫吸附剂测定(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay, ELISA)法、胶体金法等。

ELISA法的操作步骤简便,试剂成本较低,检测灵敏度较高,尤其适合于标本的快速批量检测,因而我国血站、卫生防疫部门更常使用ELISA法进行血液筛查和检测[1]。

ELISA法有直接检测法和间接法,间接ELISA法会造成较大的假阳性检测结果,浪费原本紧张的临床血液资源,打击了一部分献血者的参与积极性,甚至会出现不良社会影响和纠纷[2]。

为了合理选择检测试剂,建立一种准确的ELISA检测方法,本文采用直接ELISA法和间接ELISA 法分别进行HIV抗体的检测,并对结果进行比较分析,现报告如下。

1 资料与方法1.1 标本来源随机选取本中心接收的血液标本314例,采用间接ELISA法检测结果HIV阳性8例的血液标本,经过上级确认实验室确认的HIV阳性3例的血液标本。

1.2 仪器ETI-MAX3000型全自动酶免分析仪。

1.3 试剂检测所用的质控血清为卫生部临床检验中心提供。

间接ELISA法试剂盒分别购自国内公司 (A)与公司 (B)。

直接ELISA法为双抗原夹心法,所用国产试剂盒购自国内某公司(C),进口试剂盒购自日本某公司(D)。

免疫不孕中抗精子抗体ELISA检测的研究进展

免疫不孕中抗精子抗体ELISA检测的研究进展

江西医学检验2007年8月第25卷第4期・综述・不孕问题是人类生殖研究中—个重要课题,据国内外统计,不孕症发病率逐年上升,我国已婚妇女中约20%患有不孕症。

引起不孕的原因很多,其中免疫性因素约占10%~30%,而在免疫性不孕中,最常见的是抗精子抗体(AsAb)所导致的生殖障碍[1]。

精子作为一种隐蔽性抗原,与机体免疫系统接触后可产生同种或自身免疫反应,产生抗精子抗体。

对男性而言,精子为自身抗原,正常情况下血睾屏障阻碍其与机体免疫系统的接触,不会产生精子的自身免疫反应。

当血睾屏障遭到破坏(如手术、外伤,感染等),就会产生AsAb;对女性而言,精子为异己抗原,正常情况下,精浆中的免疫抑制因子抑制女性对精子抗原的免疫应答,且女性生殖道局部免疫系统具有较强的免疫调节作用,所以一般情况下女性并不产生AsAb。

但是当生殖道粘膜破损、感染、精液缺乏免疫抑制因子时导致AsAb的产生。

早在1988年国内就有文献报道通过检测AsAb来辅助诊断临床女性不孕[2],而且检测抗精子抗体对探讨不孕症治疗有重要的临床意义。

近年来人们对AsAb做了大量研究,它在免疫性不孕中的作用正日益受到医学界的关注。

因此,建立一种特异性强,敏感性高,重复性好的检测AsAb的方法对临床免疫性不孕症的诊断和治疗是至关重要的。

目前抗精子抗体的检测方法很多,包括凝集试验(FD)、精子制动试验(STT)、混合抗球蛋白反应试验(MARtest)、免疫珠试验(IBT)、放射免疫方法(RIA)等。

其中FD、STT检测需要新鲜的活精子且不能对免疫球蛋白定位。

IBT敏感、特异性强但操作繁琐、人为因素多。

MAR简便快捷但检测的抗体特异性不高。

RIA易对环境造成影响(放射性废物),因此不宜作为常规方法。

这些缺点限制了上述方法的临床应用。

八十年代初,国外学者将ELISA方法引入了抗精子抗体的检测[3,4],最重要的是ELISA方法具有不需新鲜活精子,既可定性或定量,又可测定Ig类别,结果判断客观,操作简便快捷,灵敏,特异性强,重复性好,易判断结果,成本亦低,且可批量检测等诸多优点[5,6]而受到许多学者的认可,目前在临床上应用较广泛。

抗精子抗体检测的临床重要性

抗精子抗体检测的临床重要性
1 男性 产 生AS B的原 因 A C o d uy等 [ 出 了男 性 产生 A A 的原 因包 hu hr 2 1 提 SB
的男 性避 孕 方 法 , 行输 精 管 结扎 术 男 性 是 研究 男 性 A A 的理 想人 群 。 者与 同事 对输 精管 结扎 术后 男 SB 笔 性 A A 的情 况 作 了一 系列 的研 究 。首先 研 究 了 SB
4 .%。用 同样 的方法 研 究 输精 管 吻 合术 后 精 液 中 6 4 A A 的情 况 , 果 显 示 : 精 管 吻 合 术后 精 液 中精 SB 结 输
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括生 殖 道 损伤 、 生殖 道 炎症 、 生殖 道 机 械性 梗 阻 、 性 传 播 疾病 的病 原体 附在精 子上 作 为抗原 等 。任 何 原
s mi a l s n e i a c s a d S n e n lp a ma a d c r c l v mu u n O o .Va e tn z d me e e t e g o d l rt e A AB r s a c . s co f e n w r h o d mo e h S e e r h i o f We u e B n C s d I T a d S MC t ee t AS n t e s ra e o s e ao o r m h r xma a ee e s o o d tc AB o h u fc f p r tz a f m o t e p o i lv s d fr n f v s co z d me n h e n at r a o a o tmy T e r l t n h p b t e S n n e t u ie s so a e tmie n a d t e s me fe s v s s v o . h ea i s i ewe n A AB a d i f ci sd s a e f o o t e mae e r d ci e ta t v r o e e a d c y tr h d s h l rp o u t r c , a i c l n r p o c iim w r e iwe , S a o s o h mp ra c f v c e e r ve d O s t h w t e i ot n e o s r e i g s me AB i ig o i o l n e t i . c e n n e n AS n d a n ss fma e if ri t ly

抗精子抗体应该如何检查?

抗精子抗体应该如何检查?

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导语:抗体它是一种人体免疫系统它是抵抗外界感染的一种产物,一般情况下抗体的产生需要抗原,只有有了抗原之后才会产生抗体,在众多的抗体中有一
抗体它是一种人体免疫系统它是抵抗外界感染的一种产物,一般情况下抗体的产生需要抗原,只有有了抗原之后才会产生抗体,在众多的抗体中有一种抗体叫做抗精子抗体,这种抗体在人体中属于比较特殊的一种,它的主要作用就和名字一样是用来杀死男性精子的,在男性或者女性的体内都有这种抗体的存在,他的存在可能会导致人出现不孕不育的情况,那么抗精子抗体应该如何检查呢?
抗精子抗体注意事项:
(1)某些女性生殖道的酶系统缺陷时不能降解进入的精子抗原,使进入的精子保持其抗原性,刺激女性产生抗精子抗体,抗体在宫颈液中,导致精子凝集或制动,造成女性不孕。

(2)抗精子抗体必须结合男性的精子量、精子数及精子活动功能的检查。

女性还要检查月经周期、排除其他感染及器官病变,方可判断是否影响生育功能。

抗精子抗体检查过程:
抗精子抗体的测定原理:
(1)试管-玻片凝集试验:将精子悬液与被检血清于玻片上反应,镜检有无出现精子的凝集现象。

(2)免疫珠结合试验:采用包被羊抗人IgG、IgA和IgM的亲水性聚丙烯酰胺凝胶珠(免疫珠),与待测标本或精子作用后,观察有无出现精子-免疫珠凝集的混合集团,此法可用来检测精子表面的结合抗体,亦可检测血清(或宫颈黏液)中的抗精子抗体。

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抗精子抗体的测定方法及临床意义

抗精子抗体的测定方法及临床意义

抗精子抗体的测定方法及临床意义抗精子抗体是一种自体免疫体,其产生的主要原因是精子与身体内其他细胞区分不清,被免疫细胞识别为外来抗原而产生免疫反应。

当免疫系统产生的抗体反应与精子结合时,会对精子的结构和功能产生影响,从而影响男性的生殖能力。

测定抗精子抗体的方法及其临床意义是一项很重要的诊断技术。

测定抗精子抗体的方法有很多种,包括粘附试验、穿透试验、间接免疫荧光法和直接免疫荧光法等。

其中,间接免疫荧光法和直接免疫荧光法是目前临床上使用最为广泛的方法。

这两种方法的原理是通过标记抗体或免疫球蛋白与待检测样本中的抗体相互作用,结合凝集素或荧光素等物质来检测精子表面的抗原抗体反应情况。

常见的抗精子抗体的临床意义主要表现在影响男性生殖系统的能力,包括影响精子的形态、数量和运动能力等。

抗精子抗体引起的不育症是男性不育症的一种重要类型。

尽管不育症的原因各不相同,但抗精子抗体的检测对于常见的不育症病因的查明和确定具有重要的临床意义。

使用抗精子抗体的测定方法对于患者的诊断和治疗方案的制定有着极大的帮助。

在对一些男性患者进行精液检查后发现,他们虽然具有生育能力,但却难以成功地让妻子怀孕。

在这种情况下,医生通常会考虑进行抗精子抗体的检测。

如果检测结果显示存在抗精子抗体,那么就需要根据具体情况制定针对性的诊断和治疗方案。

在临床实践中,对于存在抗精子抗体的患者采取合理的治疗措施,可以有效地提高患者的生育能力。

具体治疗方案可根据每位患者的具体情况而定,包括口服药物、局部治疗和手术治疗等。

抗精子抗体是一种常见的自身免疫反应物质,它对男性的生殖系统功能影响很大。

因此,采用有效的测定方法来检测抗体的存在状态及水平,并根据具体情况制定针对性的治疗方案,是保障男性生育能力的重要手段。

医生和病人分别需要重视抗精子抗体的检测及治疗,在实践中逐步完善相应的临床流程和治疗方案,以提高患者的生育能力,解决不育症问题。

ELISA_直接法与间接法的区别

ELISA_直接法与间接法的区别

ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体.在这种测定方法中有三个必要的试剂1)固相的抗菌素原或抗体,即"免疫吸附剂"(immunosorbent);(2)酶标记的抗原或抗体,称为"结合物"(conjugate);(3)酶反应的底物.根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件,可设计出各种不类型的检测方法.ELISA可分类是根据抗原抗体的结合情况来分类的。

主要有以下几种类型:(直接法也称一步法)1 双抗体夹心法测抗原双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法,操作步骤如下:1) 将特异性抗体与固相载体联结,形成固相抗体.洗涤除去未结合的抗体及杂质.2) 加受检标本,保温反应.标本中的抗原与固相抗体结合,形成固相抗原抗体复合物.洗涤除去其他未结合物质.3) 加酶标抗体,保温反应.固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合.彻底洗涤未结合的酶标抗体.此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关.4) 加底物显色.固相上的酶催化底物成为有色产物.通过比色,测知标本中抗原的量.在临床检验中,此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原,例如HBsAg,HBeAg,AFP,hCG等.只要获得针对受检抗原的异性抗体,就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法.如抗体的来源为抗血清,包被和酶标用的抗体最好分别取自不同种属的动物.如应用单克隆抗体,一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗,分别用于包被固相载体和制备酶结合物.这种双位点夹心法具有很高的特异性,而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应,作一步检测.在一步法测定中,当标本中受检抗原的含量很高时,过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合,而不再形成"夹心复合物".类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象,此时反应后显色的吸光值(位于抗原过剩带上)与标准曲线(位于抗体过剩带上)某一抗原浓度的吸光值相同(参见1.3.2,图1-4),如按常法测读,所得结果将低于实际的含量,这种现象被称为钩状效应(hook effect),因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落.钩状效应严重时,反应甚至可不显色而出现假阴性结果.因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常增高的物质(例如血清中HBsAg,AFP和尿液hCG等)时,应注意可测范围的最高值.用高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应.假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇,例如HBsAg的a决定簇,也可用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物.但在HBsAg的检测中应注意亚型问题,HBsAg 有adr,adw,ayr,ayw4个亚型,虽然每种亚型均有相同的a决定簇的反应性,这也是用单抗作夹心法应注意的问题.双抗体夹心法测抗原的另一注意点是类风湿因子(RF)的干扰.RF是一种自身抗体,多为IgM型,能和多种动物IgG的Fc段结合.用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有RF,它可充当抗原成份,同时与固相抗体和酶标抗体结合,表现出假阳性反应.采用F(ab')或Fab片段作酶结合物的试剂,由于去除了Fc段,从而消除RF的干扰.双抗体夹心法ELISA试剂是否受RF的影响,已被列为这类试剂的一项考核指标。

抗精子抗体


湿热蕴积型:抗精子抗体滴度(比值)较高,罹病时间较短,月经量多,且颜色较暗,或有血块,白带发黄, 或伴外阴瘙痒、盆腔炎症,或有精液过敏史,身重肢怠,面红目赤,口干而渴,喜冷食,小便发黄,大便臭秽, 舌苔厚腻或黄腻,脉滑或数。治疗可用清利湿热法。本法可明显缓解生殖道局部渗出,避免对精子抗原再吸收, 也可避免感染因子对抗原的免疫反应,从而阻止AsAb的继续产生。
的检查时间
一般来说抗精子抗体检查时间是没有限制的,随时可以检查。但只是针对男性来说。女性则是最好在月经35天检查;月经干净3-5天做阴道镜,动态数字化子宫输卵管造影和阴道彩超,一般就可以确诊。
的检测人群
(1)不育男子: ①精子自发凝集;②有睾丸外伤、手术或活检史; ③输精管阻塞;④有输精管吻合手术 史;⑤有生殖道感染史。
与生育
有一位青年结婚三年没有孩子,夫妇俩来到国家计划生育委员会科学技术研究所的不育门诊。经过多次精液 化验,指标完全正常。然后又经过对双方血液,及男方精液与女方宫颈粘液的免疫学检查,医生告诉他:在他的 精液和血清中存在一种抗精子抗体,这可能是造成他们不育的原因。抗精子抗体是怎样产生的呢?
众所周知,人的机体存在一个具有特殊防御功能的系统───免疫系统。这是人们赖以生存、抵抗各种致病 菌侵袭的强有力的武器。人的免疫系统功能有时会发生障碍,这可能是先天性的,也可能是后天获得性的(如艾 滋病)。在这种情况下,人会很快死去,否则,只能生活在与世隔绝的密闭罩子中。
人体的免疫功能由亿万个各种不同的淋巴细胞所执行。被特殊抗原所激活的淋巴细胞产生两种不同的免疫反 应,即体液免疫和细胞免疫反应。一旦异物侵入身体的某个部位,淋巴细胞就像亿万个武装起来的战士,立即调 兵遣将,前仆后继,勇往直前,在白细胞、巨噬细胞等配合下,直至消灭这些入侵之敌。然而免疫反应并不都对 个体有利,有时可引起变态反应。在正常情况下,淋巴细胞有分辨自身组织和异物的能力。但是在病理状态下, 免疫识别功能发生错误判断,或者人体组织在某种外因诱发下发生某种改变,造成免疫系统对自身组织发起攻击, 使自身组织遭到损伤和破坏。这就是自身免疫性疾病,例如红斑狼疮、免疫性肾病等。另外,人体有些组织由于 某种屏障隔绝,不能被免疫系统识别。例如精子的抗原发生在个体发育后期,晚于免疫耐受期,所以精子特异抗 原具有自动和同种免疫原性。并且在正常情况下,由于解剖学原因,精子是与血循环系统隔绝的,从来没有与淋 巴细胞相遇,所以不会发生免疫反应。一旦由于生殖道损伤或炎症,使它们相遇,则会发生免疫反应,产生抗精 子抗体。

血清抗精子细胞抗体监测

血清抗精子细胞抗体监测血清抗精子细胞抗体监测是一种常见的实验室检测方法,用于评估男性或女性体内是否存在抗精子细胞的抗体。

本文将介绍血清抗精子细胞抗体监测的原理、方法以及其在临床应用中的意义。

一、原理血清抗精子细胞抗体是指人体免疫系统产生的抗体与精子细胞结合形成复合物。

抗精子细胞抗体可通过抑制精子活动性、干扰精子-颗粒结合或抑制精子在卵子上结合来影响生育能力。

血清抗精子细胞抗体水平的异常增高或低下,可能是生育问题的潜在原因。

二、方法1. 血清抗精子细胞抗体检测可以通过间接免疫荧光法、间接ELISA 法和直接粘连抗体法等多种方法进行。

2. 典型的检测方法是间接免疫荧光法。

该方法利用患者血清中的抗精子细胞抗体与标记有荧光染料的抗人免疫球蛋白结合,观察是否有荧光信号产生。

若荧光信号呈阳性,说明患者体内存在抗精子细胞抗体。

3. 间接ELISA法是另一种常用的检测方法,它利用酶标记技术检测血清中的抗精子细胞抗体。

该方法的原理与间接免疫荧光法类似,但主要通过光谱变化或颜色反应来判断结果。

4. 直接粘连抗体法是直接将患者血清与精子细胞接触,观察是否有抗体与精子细胞表面结合形成凝集反应。

该方法简单但结果容易受到其他因素的干扰。

三、临床应用血清抗精子细胞抗体监测在临床上具有重要意义。

1. 对于不孕不育患者,抗精子细胞抗体检测可以帮助判断是否存在抗体相关的原因。

一些研究表明,男性抗精子细胞抗体阳性与精子凝聚、运动能力下降等问题密切相关;女性抗精子细胞抗体阳性可能导致卵子与精子结合困难,从而影响受孕。

2. 对于反复流产的女性,抗精子细胞抗体检测可以帮助筛查是否存在免疫相关因素。

一些研究表明,女性抗精子细胞抗体阳性与流产率升高之间存在关联。

3. 抗精子细胞抗体检测可以评估抗精子细胞免疫疾病的治疗效果。

通过监测治疗前后的抗体水平变化,可以评估治疗方案的有效性,指导临床诊断和治疗。

综上所述,血清抗精子细胞抗体的监测对于不孕不育及反复流产患者的诊断和治疗具有重要意义。

抗精子抗体的检测方法


关键词: 抗精子抗体; 不育, 男性; 精子计数 中图分类号: ) * * % + % ! 文献标识码: , (以上方法都已有试剂盒出售, 具体操作方法试剂盒内 均有说明。 ) 除以上传统的方法以外, 近年来, 国内外研究人员在抗 精子抗体的检测方法做了较多研究, 对传统方法做了一些改 进, 同时也建立了很多较为实用的新方法, 力图使其更加快 捷、 敏感、 特异。 ! 改进的 " # $ % &法 [ ] 抗体夹心竞争 ! + ! 8 9 4 0 ,法 ( 由健康男性精液制 ! + ! + ! 材料与试剂 " 人精子膜抗原: [ ] [ ] * : 备 。#兔抗人精子膜抗血清: 制备方法参照卢氏法 。$ 酶标兔抗人精子膜抗体的制备: 采用过碘酸钠一步法, 最佳 工作浓度为! 。 ; % " " 以< (6 ) 将兔抗人精 ! + ! + & 方法: 1 0 = ’ + % 的碳酸盐缓冲液 子膜抗体稀释至& / , 包被聚苯乙烯反应板, / 孔, "> 9 ! " ") ? 5 , 常法洗板, 加封闭液, (明胶 & / ,体 * :@ !A *@过夜, + :5 9 积分数为" 的 ) / 孔, , 洗板后加精 B : / C D $ * "& " ") ? * : @!A / , 子膜抗原 (以 < =# + *" + " !> E ? 9D 1 0$3! ; : " 稀释) ! " " / 孔, 将板密封后 ? * :@ !A后洗板。以上步骤可提前作好, ) ( / * @保存备用。然后加待测血清或精浆 ! ; ! " 稀释) : ") 9 孔, 阳性对照以 ! 稀释的兔抗人精子膜抗血清代替, 阴 ; ! " " 性对照用混合阴性标本, 然后加酶标兔抗人精子膜抗体 ( ! ; ) / 孔, 振荡摇匀, 放* , 常法洗板, : ") ? :@ !A F D G$= F ( " " & & 显色, 室温避光& , / 终止反应, 测 "> H I&> E ?9= 0 F * ’ &I > & * 各孔吸光度 (!) 值。 精密度符合方法学要求; 以抗体包 ! + ! + ( 优点 特异性强; 被模板与直接包被精子膜抗原比较能减少标本的非特异吸 附, 克服了非特异反应问题; 处理后的反应板可 * @ 密封保 存(个月。

ELISA直接法与间接法的区别

ELISA可‎用于测定抗原‎,也可用于测定‎抗体.在这种测定方‎法中有三个必‎要的试剂1)固相的抗菌素‎原或抗体,即"免疫吸附剂"(immuno‎s orben‎t);(2)酶标记的抗原‎或抗体,称为"结合物"(conjug‎a te);(3)酶反应的底物‎.根据试剂的来‎源和标本的情‎况以及检测的‎具体条件,可设计出各种‎不类型的检测‎方法.ELISA可‎分类是根据抗‎原抗体的结合‎情况来分类的‎。

主要有以下几‎种类型:(直接法也称一‎步法)1 双抗体夹心法‎测抗原双抗体夹心法‎是检测抗原最‎常用的方法,操作步骤如下‎:1) 将特异性抗体‎与固相载体联‎结,形成固相抗体‎.洗涤除去未结‎合的抗体及杂‎质.2) 加受检标本,保温反应.标本中的抗原‎与固相抗体结‎合,形成固相抗原‎抗体复合物.洗涤除去其他‎未结合物质.3) 加酶标抗体,保温反应.固相免疫复合‎物上的抗原与‎酶标抗体结合‎.彻底洗涤未结‎合的酶标抗体‎.此时固相载体‎上带有的酶量‎与标本中受检‎抗原的量相关‎.4) 加底物显色.固相上的酶催‎化底物成为有‎色产物.通过比色,测知标本中抗‎原的量.在临床检验中‎,此法适用于检‎验各种蛋白质‎等大分子抗原‎,例如HBsA‎g,HBeAg,AFP,hCG等.只要获得针对‎受检抗原的异‎性抗体,就可用于包被‎固相载体和制‎备酶结合物而‎建立此法.如抗体的来源‎为抗血清,包被和酶标用‎的抗体最好分‎别取自不同种‎属的动物.如应用单克隆‎抗体,一般选择两个‎针对抗原上不‎同决定簇的单‎抗,分别用于包被‎固相载体和制‎备酶结合物.这种双位点夹‎心法具有很高‎的特异性,而且可以将受‎检标本和酶标‎抗体一起保温‎反应,作一步检测.在一步法测定‎中,当标本中受检‎抗原的含量很‎高时,过量抗原分别‎和固相抗体及‎酶标抗体结合‎,而不再形成"夹心复合物".类同于沉淀反‎应中抗原过剩‎的后带现象,此时反应后显‎色的吸光值(位于抗原过剩‎带上)与标准曲线(位于抗体过剩‎带上)某一抗原浓度‎的吸光值相同‎(参见 1.3.2,图1-4),如按常法测读‎,所得结果将低‎于实际的含量‎,这种现象被称‎为钩状效应(hook effect‎),因为标准曲线‎到达高峰后呈‎钩状弯落.钩状效应严重‎时,反应甚至可不‎显色而出现假‎阴性结果.因此在使用一‎步法试剂测定‎标本中含量可‎异常增高的物‎质(例如血清中H‎B sAg,AFP和尿液‎h CG等)时,应注意可测范‎围的最高值.用高亲和力的‎单克隆抗体制‎备此类试剂可‎削弱钩状效应‎.假使在被测分‎子的不同位点‎上含有多个相‎同的决定簇,例如HBsA‎g的a决定簇‎,也可用针对此‎决定的同一单‎抗分别包被固‎相和制备酶结‎合物.但在HBsA‎g的检测中应‎注意亚型问题‎,HBsAg 有‎a dr,adw,ayr,ayw4个亚‎型,虽然每种亚型‎均有相同的a‎决定簇的反应‎性,这也是用单抗‎作夹心法应注‎意的问题.双抗体夹心法‎测抗原的另一‎注意点是类风‎湿因子(RF)的干扰.RF是一种自‎身抗体,多为IgM型‎,能和多种动物‎I gG的Fc‎段结合.用作双抗体夹‎心法检测的血‎清标本中如含‎有RF,它可充当抗原‎成份,同时与固相抗‎体和酶标抗体‎结合,表现出假阳性‎反应.采用F(ab')或Fab片段‎作酶结合物的‎试剂,由于去除了F‎c段,从而消除RF‎的干扰.双抗体夹心法‎E LISA试‎剂是否受RF‎的影响,已被列为这类‎试剂的一项考‎核指标。

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表 1 MA 与 B s &关 系 R Ah
身血清精 子抗体 ( AA ) B sb 阳性率 , 以明确那 种检测方 法更 具 有 临床 意义 。
1 资料 与 方法
11 一般 资料 : 4例男性均来 自我 院不 孕不 育 门诊 就 . 1 2
诊的不育患者 , 均身体健康 , 性生活正常 , 男性患者及其 配偶 均经不孕 不育常 规检查 , 龄 2 4 , 年 2~ 7岁 不育 年 限 2 2年 。被 检患者分 别取其血清 和精液 以供 检查 。 ~1
2 结 果
2 1 14 男性 不 育患 者 的精子 膜表 面抗 体 阳性结 果 . 2 例 l例 , 9 阳性率 为 1.% ; 53 在精 子 膜 表 面抗 体 阳性 结 果 的l 9例病 例 中 , 为 血 清 AA 5例 sb阳性 (63 )在 精 2 .% , 子 膜表 面抗 体 阴性 的 15例病 例 中 , 0 血清 AA sb阳性 2 6 例 (48 ) 2 .% 。两 者差 异 无 统 计 学 意 义 ( P>00 ) .5 。结 果表明: 两种 方 法检 测 到 的 AA sb没有相关 性 , 表 l 见 。
维普资讯
四 川 I 20 等: 07年 8 第 2 ( 8期 ) .cu nMei 1.u a ,07 l .8 . 月 8卷 第 ' ha ; / dv I m l20 , 2 . 8 a o
・ 83 ・ 9
抗 精 子 抗 体 直 接 法 和 间 接 法 检 测 比 较 研 究
育患者的精 液标本进行抗精 子抗体检测 。结 果 MA -sA R A b阳性率 为 1 .%, AA 5 3 B s b阳性率 2 % , 5 两者差异 显著 ; 而在 MA ̄A b阳性和 阴性结果病例 中采 用 B s b 法同时检 测 A A , I sA - AA 方 s b 阳性 率分别 为 2 .% 、48 两组 问比较 差异 无统 63 2 .%,
12 方法 .
121 精 液标 本采 集 : 性 患 者 检 测 前 禁 欲 3~5d .. 男 , 以手 淫法取 精 液 标 本 ,7【 化 后 做 常 规 分 析 检 查 和 3a液 = 精 子膜 表 面抗体 检 测 。血 清 标 本 : 留取 精 液 同一 天 与 取静 脉 血 3 l分 离血清 置 一 o m, 2 ℃冰 箱贮 存待 检 。 122 精 子 膜表 面抗 体检 测 : .. 试剂 盒 购 自安 徽 安科 生
陈 可 , 蔡 敏, 包华 琼 , 万 凌
( 庆市 人 口和 计 划 生 育 科 学 技 术 研 究 院 , 庆 402 ) 重 重 000
【 要 】 目的 比较 两种方法检 测抗精子抗体 的情况。方法 摘
采用 M RAA 和 B s b A -sb A 两种 方法对 1 例 男性不 A 2 4
量检 测 、 液 中 AA 精 sb含 量 检 测 及 结 合 在 精 子 膜 表 面 的 AA s b检测 。WH O推荐 检测 抗精 子抗 体 ( s b 的方 AA ) 法是 混 合抗 球 蛋 白反 应 试 验 ( M ) 接 法 , 直 已在 国 内 外 生殖 医学 领 域 中 推广 应 用 。本 文 比较 分 析 了 20 06 年 9月至 20 07年 3 在我 院检测 的 14例 男性 不育 患 月 2 者采用 M R法直接检测精 子膜表 面抗体 阳性率 和 自 A
计 学意义( 0 0 ) P> .5 。结 论
M RA A A -s b和 B sA A b两种 方法在监测 A A s b的结果 没有相关性 ; 采用 M R法能检 出活动精 A
子表 面附着的抗精子抗体 , 更具有临床意 义, 这 有助于免疫性不育的诊断和治 疗。
【 关键词 】 抗精子抗体 ; 混合抗球蛋 白试验 ( A )免疫性不孕 MR; 【 中图分类号 】 R34 9 【 文献标识码 】 B 【 文章编号 】 1 4 512c)8 89 2 0 - 0(070. 3. 00 r 0 0
22 14例 男 性不 育 患 者 中采 用 M R直 接 检 测 精 子 . 2 A 膜 表面 抗体 法 ( RAA )阳性 病例 共 l , MA .sb , 9例 阳性 率 1.% ; 53 采用 B s b法 检 测 血 清 中 AA AA s b阳 性 病 例 有 3例, l 阳性 率 2 % 。两 种 方 法 检 测 的 AA 5 a b阳 性 率 差
免疫 性 不孕 是男 性 不 育 症 的 主 要 原 因 之一 , 测 检 抗精 子 抗体 对免 疫性 不育 诊断有 重 要意 义 。根 据世 界 卫生 组 织 ( O 调查 , 育 男 性 中约 1% ~3 %AA )其可通过多种机制影响生 育过 程 … 。AA s b的检测方 法 主要包 括 血 清 中 A A sb含
物公司 , 检测 I 类精子抗体。直接法检测 : g G 取液化后 新鲜 精 液 2t 0 d于载 玻片 上 , 2t 加 o A液 ( 化 sB ) a 敏 R C, 混合 均匀后 置室温 1s然后 加入 2t B液 ( 5; o a 羊抗 人 IG血 清 )混 合 均 匀 后 加 盖 玻 片 ,mn后 在 相 差 显 微 g , 3i 镜 ( o ) 察 。精 子 膜 表 面无 AA , 见 精 子 在 相 ×40 观 sb可 互 粘 附 的敏化 B ( 羊红 细胞 ) 自由泳 动 , 子 膜 C绵 中 精 表面有 AA 在 , sb存 则敏 化 sB R C粘 附 于 精子 并 一 起 扭 动 。至少计数 10 0 个活动精子 , 计算粘附有 sB R C的活 动 精 子在 总活 动 精 子 中 的百 分 比 。阳性 率 R=( 附 粘
于 sB R C的活动精子数/ 计数 总活动精子数 ) 0 %。 ×10 尺≤l%判 为阴性 , 0 尺≥l%判 为 阳性 。 0 123 A A .. B s b检测采 用 酶联免 疫 吸附 法 ( LS , 剂 E 1A)试 盒购 自上海玉 兰生物技术 研究所 。本法测定 的 AA sb主 要是精 子制动抗 体 IG g 。将 阳性 、 对照血 清做参 比 , 阴性 终反应 为蓝色 者为 阳性 , 色或淡蓝 色为阴性 。 无 124 统计 学 方法 : .. 统计 学 分析采 用 分析 。
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