栉孔扇贝Chlamysfarr中抗氧化肽的分离纯化及性质研究_胡文婷
1期
胡文婷等 : 栉孔扇贝 ( Chlamy s farreri ) 中抗氧化肽的分离纯化及性质研究
15
产研究所酶工程开放实验室提供。邻苯三酚、 番 红花红为进口分装, DEAE Sephadex A- 50 、 Sepha dex G- 25 、Sephadex G-15 、 CM Sepharose FF 购于 Phar m acia 公司, 杆菌肽、 P 物质片段 ( 4- 11)、 二 肽 ( Phe-Ser) 购于 sigm a公司, 乙腈 ( 色谱纯 ) 购于 上海星狮生物工程有限公司, 其他试剂均为国产 商品试剂 (分析纯 ) 。 11 2 主要仪器 HI TAC H I 20PR- 52D 高速 冷 冻 离心 机, LKB 2021恒温层析冷柜 , G ilson Ⅲ型低压制备色谱, W a ters 2690高效液相色谱系统, LGJ 015 冷冻干燥机。 11 3 抗氧化肽的制备 11 31 1 扇贝提取蛋白的制备 将新鲜的扇贝 内脏团绞碎 , 加入 1B1 ( W /W ) 的生理 盐水匀浆, 4e 抽提 6h 后离心 ( 6000r /m in , 20m in )。取上清 用硫酸铵 分级 沉淀, 取 60 % ) 90% 饱 和度的 沉 淀 , 对 5mmo l /L T ris -H C l pH 71 5缓冲液透析至无 硫酸根离子。浓缩后的样品上 5mm ol /L T risHCl p H 71 5缓冲液平衡的 DEAE Sephadex A- 50 柱 (柱 规格 18mm @ 80mm ) , 采用浓度为 0) 012 m ol /L梯 度的 N aC l溶液洗脱, 部分收集, 每管 10 m, l 流速为 015m l/m in , 检测波长为 280n m。同时测定每管的 抗氧化活性, 合并蛋白峰, 浓缩后对 5 mm o l/L T ris HC l p H 71 5缓冲液进行透析并冻干。 11 31 2 抗氧化肽粗品的制备 将 01 36g 扇贝 提取蛋白溶于 100m l双蒸水 , 加入 01 018g 海洋低 温蛋白酶 YS - 80, 用 1m ol /L 的 NaOH 调 pH 至 91 0 , 于 30e 恒温水浴中酶解 24h 。酶解物经沸水 浴加热 10m in 后离心除去沉淀, 上 Sephadex G- 25 柱 ( 柱规格 16mm @ 600mm ), 以双蒸水进行洗脱, 流速为 31 0m l/m in , 检 测波 长为 280nm, 部分 收 集 , 每管 6m , l 合并蛋白峰 , 同时以未经水解的扇 贝提取蛋白作为参比。 11 4 抗氧化肽的纯化 PCF先经 CM Sepharose FF 阳离子交换柱层 析纯化 ( 柱规 格 30mm @ 160mm ), 上样缓 冲液为 2mm o l/L p H 31 0 Na2HPO4柠檬酸缓 冲液, 采用浓 度为 0) 015m ol /L 的 NaC l溶液梯度洗脱, 部分收 集, 每 管 2m ,l 流 速 为 110m l/m in , 检 测波 长为 280nm。测定每管的抗氧化活性, 合并蛋白峰 , 进 一步经反相高效液相色谱 ( RP-HPLC ) 分析, 使用 Sy mm etry C18 分 析 型 色 谱 柱 ( 5Lm, 319mm @ 150mm )、 W aters 2690 高效液相色谱系统, 上样溶液 为过膜去离子水, 以流动相为 0 % ) 30 % 的乙腈-水
第 37卷
第 1期
海
洋37, N o1 1 Jan1, 2 0 0 6
2 0 0 6 年 1 月
OCEANOLOG IA ET L I MNOLOG IA S I N ICA
栉孔扇贝 ( Chlamys farreri)中抗氧化肽的 * 分离纯化及性质研究
胡文婷
(中国水产科学研究院黄海水产研究所
化法 ( M arklund et al, 1974), 邻苯三酚 在碱性条 件下会发生自氧化, 生成有色中间产物和超氧阴 离子自由基 , 超氧阴离子自由基对自氧化有催化 作用。具体操作: 取 01 05m ol /L T ris -H C l pH 812 缓冲液 41 5m ,l 置 25e 水浴预热 20m in , 加 01 1m l 不同浓度的样品 , 215mm ol /L 邻苯三酚 01 4m ,l 混 匀后在 25e 水浴 中反应 4m in, 立即用维 生素 C 溶液终止反应, 测 A 299nm值。以蒸馏水代替样品做 空白组 , 按下式计算清除率并求得 IC 50 ( 半抑制浓 度 , 即达到 50 % 清除率所需要的样品浓度 )。 清除率 = ( A空白 - A样品 ) /A空白 @ 100 % 式中, A样品 、 A空白 分别为样品和空白的吸光值。 11 61 2 清除羟自由基 采用 F enton 反应体系 ( 陈学勤, 1996) , 亚铁离子催 化过氧化氢产生羟 自由基 , 该反应产生的羟自由基可使番红花红褪 色。抗氧化剂可清除羟自由基, 抑制番红花红褪 色。具体操作: 取 01 025mo l /L pH 714 的磷酸缓 冲液 1m , l 40Lg /m l的番红花红 1m , l 不同浓度样 品 01 5m ,l 3% 过 氧 化 氢 1m l ( 新 鲜 配 制 ), 01 945mm o l/L EDTA-F e 1m l ( 新鲜配制 ) , 混合 后在 37e 水浴中反应 30m in, 测 A 520nm 值, 空白组
1 材料与方法
11 1 材料和试剂 栉孔扇贝 ( Chlam ys farreri ) 由黄海水产研究 所小麦岛养殖实验基地提供, 内脏团为剥离扇贝 柱后的剩余部分。海洋蛋白酶 YS - 80 由黄海水
* 国家 / 8630计划资助项目 , 2003AA 625070号。胡文婷 , 硕士 , E-m ai:l huw en ting_0@ yahoo1 co m1 cn 1) 通讯作者 : 孙 谧 , 研究员 , 博士生导师 , Em a i: l sunm @ i ysfri 1 ac1 cn 收稿日期 : 2004 -11-14; 收修改稿日期 : 2004 -12- 21
孙
青岛
谧
1)
王跃军
青岛
266071; 青岛科技大学化工学院 266071 )
青岛
266042 )
(中国水产科 学研究院黄海水产研究所
提要 以栉孔扇贝内脏团为原料 , 对其中抗氧化肽的制备、 纯化及性质进行了研究。 首先 采用硫酸铵沉淀 、 DEAE-Sephadex A- 50 阴离子交换层析的方法 , 进行了扇贝提取蛋白的制备, 其次采用海洋蛋白酶 YS -80 水解 、 Sephadex G- 25凝胶层析的方法 , 进行扇贝抗氧化肽的制备, 获得多肽粗品 (海洋肽 , PCF ), 并进一步采用 C M Sepharose 阳离子交换层析和反相高效液相 色谱的方法 , 对扇贝抗氧化肽进行了纯化 , 结果得到组分 PCF- 3A, 反相高效液相显示为单一 峰 。采用茚三酮反应、 Sephadex G-15 凝胶层析和 AccQ1T ag 氨基酸分析柱 , 进行了 PCF- 3A 的 理化性质研究。 结果表明 , 茚三酮反应呈阳性 ; 分子量约为 794D; 由 7 种氨基酸组成 , 分别为 天冬氨酸、 甘氨酸 、 苏氨酸 、 丙氨酸 、 缬氨酸 、 赖氨酸和脯氨酸。 采用邻苯三酚自氧化体系和 F enton 反应体系对 PCF- 3A 的抗氧化活性进行了研究 , 发现该肽可有效清除羟自由基和超氧 阴离子 , 半抑制浓度 ( IC 50 ) 分别为 01 39m g /m l和 2185m g /m ,l 具有明显的抗氧化 、 抗衰老作用。 关键词 栉孔扇贝 , 抗氧化肽 , 分离纯化 , 性质 中图分类号 Q51413 自由基可造成机体的多种损伤和病变, 加速 机体的衰老。自由基 清除剂也称为抗氧 化剂可 清除体内多余的自由基, 从 而增强机体免 疫力, 延缓衰老。合成抗氧化剂 , 如 BH T、 BHA, 虽然有 较强的抗氧化能力, 但是却对人体构成多种潜在 的危害 ( Saiga et al, 2003) 。因此, 近年来寻找和 开发安全、 无毒的天然抗氧化剂的研究引起了广 泛关注 (沈文英等 , 2004 ; 孙虎山等, 2005) 。以一 定的蛋白为底物 , 在适宜的酶解作用下可产生具 有抗 氧 化 作 用 的 肽 类。 Chen 等 从 大 豆 蛋 白 ( 1998)、 Suetsuna 等 ( 2000a , b) 从酪蛋白、 沙丁鱼 肉的酶解产物中均分离得到了具有抗氧 化活性 的功能肽。酶解蛋白 制备的生物活性肽 具有生 理活性强、 安全可靠等优点 , 已成为新型 天然抗 氧化剂的主要来源。 我国沿海海域中蕴藏着丰富的蛋白资源 ( 陈 师勇等 , 2004 ; 于华华等, 2005) , 海洋贝类内脏团 中就包含许多具有较强生 理活性的蛋白 质。作 者通过水解扇贝内脏团中具有抗氧化 活性的蛋 白 , 得到了抗氧化活性肽 ) ) ) 海洋肽 ( PCF ) ( 王春 波等 , 1998)。通过动物及病理模型实验表明, 该肽 具有明显的抗皮肤衰老及抗紫外线对皮肤损伤作 用 (刘晓萍等, 2001 ; 贺孟泉等, 1998), 并且对小鼠 的肝脏和胸腺淋巴细胞的活性具有促进或保护作 用 (王玉贞等, 2001 ; 杜卫等, 2000)。本文中报道了 海洋肽的制备方法, 并在此基础上进一步对其中活 性物质的纯化及性质进行了研究。
溶液进行梯度洗脱。对各峰进行抗氧化活性测定。 11 5 抗氧化肽理化指标的测定 11 51 1 纯度鉴定 梯度。 11 51 2 分子量测定 采用反相 C 18 H PLC, 乙腈 采用 Sephadex G-15 凝胶
柱层析法测定, 柱规格为 10mm @ 950mm, 洗脱液 为 01 02m o l/L T r is-HC l p H 71 2 缓 冲 液, 内 含 01 15m ol /L NaC,l 流速为 110m l /m in , 检测波长为 280nm。以杆 菌肽 ( 1450D) 、 P 物 质片 段 ( 4 -11 , 966D) 、 二肽 ( Phe -Ser , 234D) 为标准分子量多肽。 11 51 3 氨基酸组成测定 取经纯化的抗氧化 肽 , 用 6m o l/L H C l在 110e 水解 22h, 将水解后的 样品全部转移至旋转蒸发仪内蒸干 , 用 01 1m o l/L HC l溶解定容 后进行柱前衍生 , 以 A ccQ 1T ag 氨 基酸分析柱 ( W aters , 31 9mm @ 150mm ) 进行氨基 酸组成的测定。 11 51 4 茚 三酮 反应 取样 品液 四 滴, 加 入 01 1 % 茚 三 酮 乙 醇 溶 液 2 滴 混 合 , 沸 水 浴 1) 2m in , 冷却后观察颜色变化。 11 6 抗氧化活性检测 11 61 1 清除超氧阴离子 采用邻苯三酚自氧
扇贝科染色体研究进展
扇贝科染色体研究进展胡丽萍;黄晓婷;张玲玲;陆维;包振民【期刊名称】《海洋科学》【年(卷),期】2013(000)008【摘要】扇贝科（Pectinidae）有300多个现存种，是双壳贝类中重要的一支，广泛分布于世界的各大洋中，并且具有重要的经济价值。
栉孔扇贝（Chlamysfa，．reri）、海湾扇贝似rgopectenirradial＇lSirradians）、虾夷扇贝（Patinopectenyessoensis）、华贵栉孔扇贝（Mimachlamysnobilis）是我国主要的扇贝养殖种类。
养殖年产量达120万t多，居世界首位。
随着近年来扇贝养殖业的快速发展，其遗传育种研究取得显著成果，细胞遗传学是遗传育种研究的基础，也是开展遗传育种工作的重要理论依据。
【总页数】7页(P130-136)【作者】胡丽萍;黄晓婷;张玲玲;陆维;包振民【作者单位】海洋生物遗传学与育种教育部重点实验室中国海洋大学海洋生命学院，山东青岛 266003; 烟台市水产研究所，山东烟台 264000;海洋生物遗传学与育种教育部重点实验室中国海洋大学海洋生命学院,山东青岛,266003;海洋生物遗传学与育种教育部重点实验室中国海洋大学海洋生命学院,山东青岛,266003;海洋生物遗传学与育种教育部重点实验室中国海洋大学海洋生命学院,山东青岛,266003;海洋生物遗传学与育种教育部重点实验室中国海洋大学海洋生命学院,山东青岛,266003【正文语种】中文【中图分类】Q343.2【相关文献】1.植物染色体标本的制备和染色体核型分析研究进展 [J], 丁鸿;邱东萍;陈少雄2.植物染色体标本的制备和染色体核型分析研究进展 [J], 丁鸿;邱东萍;陈少雄;3.常染色体和X染色体STR基因座遗传学应用研究进展 [J], 吴莉莉(综述);宋秀宇(审校)4.染色体核型分析及染色体显微分离技术研究进展 [J], 闫素丽;安玉麟;孙瑞芬;李素萍5.植物减数分裂染色体配对与染色体组分析的研究进展 [J], 郭军洋;陈劲枫;钱春桃;曹清河因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
海洋贝类活性肽生物活性及酶解制备研究进展_郑文文
72 中华中医药学刊海洋贝类活性肽生物活性及酶解制备研究进展郑文文,王令充,吴皓,栾合密,张坤(南京中医药大学海洋药物研究开发中心,江苏南京210029)摘 要:综述海洋贝类活性肽的主要生物活性、酶水解制备以及分离纯化手段,并展望其研究趋势和市场前景。
关键词:贝类;活性肽;生物活性;酶解;分离纯化中图分类号:R2-03 文献标识码:A 文章编号:1673-7717(2011)01-0072-03Progress i n Research on Shellfi s h B i o acti v e Pepti d es and Thei r Enzym ol y s i s Pr eparati o nZHENG W en -w en ,WANG L i ng -chong ,WU H ao ,LUAN H e -m ,i ZHANG K un(Research C enter ofM ari ne D rugs ,N an ji ng Un i versity of Ch i neseM ed i ci n e ,Nan ji ng 210029,Jiangs u ,Ch i na)A bstrac t :R ev ie w t he ma i n bioacti v ities ,enzy m atic hydro l ys i s o f she llfish pepti des and its pur ifi cation m e t hods .The f uture of its research trends and m arket pro spects put for w ard as w e l.lK ey w ords :she llfish ;activ i ty peptides ;b i oacti v ity ;enzym olysis ;purificati on 收稿日期:2010-08-11基金项目:国家海洋公益性行业科研专项基金项目(200705009);江苏省中医药管理局科研项目(LZ09023)作者简介:郑文文(1986-),女,山东烟台人,硕士研究生,研究方向:回角蛤利活性肽的研究。
栉孔扇贝BI-1基因的克隆与表达分析
栉孔扇贝BI-1基因的克隆与表达分析苗国英;亓海刚;李莉;阙华勇;张国范;胡晓丽【期刊名称】《海洋与湖沼》【年(卷),期】2014(0)6【摘要】本研究采用RT-PCR和RACE技术首次获得了栉孔扇贝(Chlamys farreri) BI-1基因(CfBI-1)cDNA全长序列,长度957bp,5 '和3'非编码区长度分别为48bp和195bp,开放阅读框为714bp,预测编码一个含有237个氨基酸的蛋白质,分子量为27kDa;结构预测显示,CfBI-1蛋白包含6个跨膜结构域.同源和分子进化聚类分析显示,CfBI-1蛋白序列与其他一些物种中的BI-1蛋白序列相似性很高,表明BI-1具有很高的保守性.通过荧光定量PCR的方法检测了CfBI-1 mRNA在栉孔扇贝正常组织中和在干露、脂多糖以及扇贝急性病毒性坏死症病毒刺激之后的表达水平的变化.结果表明,CfBI-1在栉孔扇贝各组织中广泛分布,其中闭壳肌中的表达量最高,血淋巴中的表达量最低.在干露和病毒刺激以后,CfBI-1基因表达水平较对照组都有显著上调(P＜0.05),表明CfBI-1基因可能参与了干露刺激和急性病毒性坏死症病毒感染后的细胞应激响应及其诱导的细胞凋亡过程.综合上述分析,我们认为CfBI-1基因在栉孔扇贝细胞凋亡调控过程中可能起到重要作用,可为栉孔扇贝凋亡相关基础研究提供参考.【总页数】7页(P1251-1257)【作者】苗国英;亓海刚;李莉;阙华勇;张国范;胡晓丽【作者单位】中国科学院海洋研究所青岛 266071;中国科学院大学北京 100049;中国科学院海洋研究所青岛 266071;中国科学院海洋研究所青岛 266071;中国科学院海洋研究所青岛 266071;中国科学院海洋研究所青岛 266071;中国海洋大学青岛 266003【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.利用瞬时表达技术分析小麦抗白粉病相关基因CAF1、BI-1和DAD1的功能 [J], 王瑜晖;辛明明;宋娜;彭福祥;唐华山;李映辉;倪中福;解超杰;孙其信2.慢病毒表达系统介导的RNAi技术靶向沉默Bi-1基因对鼻咽癌细胞生物学特性的影响 [J], 皮文;于长华;刘志标3.栉孔扇贝C型凝集素基因的克隆与表达研究 [J], 胥炜;王昊;宋林生;吴龙涛;常亚青;夏长革4.双靶点沉默hTERT和Bi-1基因诱导人鼻咽癌细胞凋亡的初步研究 [J], 何柯新;王会敏;麦静雯;邱萍英;徐鹏;张烨梓;洪剑浩;林裕龙5.栉孔扇贝钙调素类似蛋白基因的克隆及其与钙调素基因表达特征的比较分析 [J], 林亚;李世国;谢莉萍;张荣庆因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
水产加工副产物源抗氧化肽的研究现状与展望
水产加工副产物源抗氧化肽的研究现状与展望周德庆;李娜;王珊珊;刘楠;马玉洁【摘要】我国是水产资源大国,近年来的水产加工业发展较快,产生了大量水产品加工副产物.其中许多副产物的蛋白质含量较高,可通过酶解得到不同功能性活性肽,进而实现高值化的利用.提高对水产品加工副产物的利用不仅可以减少资源的浪费,提高资源利用率,而且对降低企业成本,增加企业经济效益,减少环境污染也具有重要现实意义.本文主要对水产品加工副产物制备抗氧化肽的来源、抗氧化肽分离纯化方法、抗氧化检测评价方法以及抗氧化肽作用机制的研究进展进行综述.【期刊名称】《水产学报》【年(卷),期】2019(043)001【总页数】9页(P188-196)【关键词】水产品;加工;副产物;抗氧化肽;研究进展【作者】周德庆;李娜;王珊珊;刘楠;马玉洁【作者单位】中国水产科学研究院黄海水产研究所,青岛海洋科学与技术试点国家实验室海洋药物与生物制品功能实验室,山东青岛 266071;中国水产科学研究院黄海水产研究所,青岛海洋科学与技术试点国家实验室海洋药物与生物制品功能实验室,山东青岛 266071;上海海洋大学食品学院,上海 201306;中国水产科学研究院黄海水产研究所,青岛海洋科学与技术试点国家实验室海洋药物与生物制品功能实验室,山东青岛 266071;中国水产科学研究院黄海水产研究所,青岛海洋科学与技术试点国家实验室海洋药物与生物制品功能实验室,山东青岛 266071;中国水产科学研究院黄海水产研究所,青岛海洋科学与技术试点国家实验室海洋药物与生物制品功能实验室,山东青岛 266071【正文语种】中文【中图分类】TS254.9《2017中国渔业统计年鉴》[1]显示，2016年我国水产品的生产总量达到6 901万t，已连续26年位居世界首位。
我国的水产品加工业发展迅速，产品种类不断增加，但在加工副产物综合利用方面存在很多不足，主要表现在精深加工层次低、高附加值产品少、环境污染重、综合利用率低[2]。
栉孔扇贝酶解液制备条件优化及其抗氧化性研究
栉孔扇贝酶解液制备条件优化及其抗氧化性研究严超;牟建楼;陈志周;刘亚琼;赵欢;齐晓茹【摘要】以栉孔扇贝为原料,以水解度和DPPH自由基清除率为指标,在单因素试验基础上,采用Box-Behnken方法,通过响应面试验优化酶解制备具有抗氧化性多肽的扇贝酶解液工艺,并对扇贝酶解液的DPPH自由基清除率、羟自由基清除率、总抗氧化活力和抗超氧阴离子活力进行测定.研究了蛋白酶种类、酶解时间、酶解温度、加酶量和固液比对栉孔扇贝酶解液抗氧化性的影响.结果表明:扇贝最佳酶解条件为选择中性蛋白酶、酶解时间4.7h、酶解温度43℃、加酶量3.5％、固液比(m/V)1 ∶ 5.在此条件下,DPPH自由基清除率达到68.21％,羟自由基清除率为33.74％,总抗氧化活力为0.086 U/mg prot,抗超氧阴离子活力为106.27 U/g prot.%With Chlamys farreri as raw material,degree of hydrolysis and DPPH radical scavenging rate are used as indicators.Based on the single factor test,the Box-Behnken method is used to optimize the enzymatic hydrolysis of scallop hydrolysate with antioxidative polypeptide by response surface test.DPPH free radical scavenging rate,hydroxyl radical scavengingrate,total antioxidant activity and anti-superoxide anion activity are measured.The effects of protease types,enzymolysis time,enzymolysis temperature,enzyme amount and solid-liquid ratio on the antioxidant activity of enzymatic hydrolysate of Chlamys farreri are studied.The results show that the optimal parameters of enzymolysis are as follows:using neutral protease,the enzymolysis time is 4.7 h,the enzymolysis temperature is 43 ℃,the enzyme amount is 3.5％,the solid-liquid ratio (m/V) is 1 ∶5.Under the optimum conditions,the scavenging rate of DPPH free radicaland hydroxyl radical is 68.21％ and 33.74％ respectively,the total antioxidant activity is 0.086 U/mg prot,the anti-superoxide anion radical activity is 106.27 U/g prot.【期刊名称】《中国调味品》【年(卷),期】2017(042)012【总页数】6页(P1-6)【关键词】栉孔扇贝;酶解;水解度;抗氧化性【作者】严超;牟建楼;陈志周;刘亚琼;赵欢;齐晓茹【作者单位】河北农业大学食品科技学院,河北保定071000;河北农业大学食品科技学院,河北保定071000;河北农业大学食品科技学院,河北保定071000;河北农业大学食品科技学院,河北保定071000;河北农业大学食品科技学院,河北保定071000;河北农业大学食品科技学院,河北保定071000【正文语种】中文【中图分类】TS201.25栉孔扇贝(Chlamys farreri)隶属于软体动物门(Mollusca)、瓣鳃纲(Lamellibranchia)、翼形亚(Pterimorphia)、珍珠贝目(Pterioida)、扇贝科(Pectinidae)[1]，是我国重要的海产贝类，其味道鲜美，受到广大消费者的喜爱。
华贵栉孔扇贝♀×栉孔扇贝♂远缘杂交的受精细胞学观察
华贵栉孔扇贝♀×栉孔扇贝♂远缘杂交的受精细胞学观察王珏;毕克;黄晓婷;张玲玲;胡景杰;包振民【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2006(000)006【摘要】用HOECHST33258对华贵栉孔扇贝(Chlamys nobilis)♀×栉孔扇贝(Chlamys farreri)♂的受精卵进行染色,在荧光显微镜下观察其受精细胞学过程.观察表明:栉孔扇贝的精子能够使华贵栉孔扇贝卵子受精.精子入卵后呈一圆形亮点,体积稍有膨大成球形;授精后成熟卵母细胞释放出第一极体和第二极体后,精核解凝、稀疏、泡状化,形成雄性原核(male pronucleus);雌性原核(female pronucleus)在完成两次成熟分裂之后,染色质去浓缩,扩散膨大;雌雄原核相互靠拢,当雌雄原核膨胀到最大程度时,发生融合,形成合子.受精卵能够正常发育,完成第一次卵裂,卵裂时细胞核分离未观察到异常现象.与华贵栉孔扇贝和栉孔扇贝种内交配对照组相比,异源受精卵的细胞学过程明显滞后,同时其发生过程具明显的不同步现象.实验中还观察到少数的雌核发育现象.【总页数】5页(P122-126)【作者】王珏;毕克;黄晓婷;张玲玲;胡景杰;包振民【作者单位】中国海洋大学生命科学与技术学部,海洋生物遗传学与种质工程实验室,青岛,266003;中国海洋大学生命科学与技术学部,海洋生物遗传学与种质工程实验室,青岛,266003;中国海洋大学生命科学与技术学部,海洋生物遗传学与种质工程实验室,青岛,266003;中国海洋大学生命科学与技术学部,海洋生物遗传学与种质工程实验室,青岛,266003;中国海洋大学生命科学与技术学部,海洋生物遗传学与种质工程实验室,青岛,266003;中国海洋大学生命科学与技术学部,海洋生物遗传学与种质工程实验室,青岛,266003【正文语种】中文【中图分类】S9【相关文献】1.栉孔扇贝、华贵栉孔扇贝及其种间杂交子代、种内交配子代的ISSR分析 [J], 刘广绪;包振民;胡景杰;王师;姚冰;战爱斌2.栉孔扇贝♀×华贵栉孔扇贝♂受精及早期胚胎发育过程的细胞学荧光显微观察 [J], 毕克;包振民;黄晓婷;王珏;赵洋;胡景杰3.栉孔扇贝(Chlamys farreri)与华贵栉孔扇贝(C. Nobilis)远缘杂交子代的胚胎发生及幼虫生长发育的初步研究 [J], 孙长森;包振民;王师;战爱斌;汪小龙;胡景杰4.墨西哥湾扇贝与华贵栉孔扇贝的远缘杂交 [J], 潘奕达;封杰;刘行;王文杰;潘英5.栉孔扇贝(♀)×虾夷扇贝(♂)受精细胞学观察 [J], 周丽青;杨爱国;刘志鸿;杜方勇;张立敬;王清印因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
扇贝抗氧化活性肽的制备及其活性的研究
硕士学位论文扇贝抗氧化活性肽的制备及其活性的研究PREPARATION OF SCALLOP OXIDATIONACTIVE PEPTIDE AND THE ACTIVITYRESEARCH张莉莉哈尔滨工业大学2013年6月国内图书分类号：S917.4 学校代码：10213国际图书分类号：570 密级：公开理学硕士学位论文扇贝抗氧化活性肽的制备及其活性的研究硕士研究生：张莉莉导师：王俊沪副教授申请学位：理学硕士学科：遗传学所在单位：海洋科学与技术学院答辩日期：2013年6月授予学位单位：哈尔滨工业大学Classified Index: S917.4U.D.C: 570Dissertation for the Master Degree in SciencePREPARATION OF SCALLOP OXIDATION ACTIVE PEPTIDE AND THE ACTIVITY RESEARCHCandidate：Zhang LiliSupervisor：Associate Prof. Wang Junhu Academic Degree Applied for：Master of ScienceSpeciality：GeneticsAffiliation：School of Marine Science andTechnologyDate of Defence：June, 2013Degree-Conferring-Institution：Harbin Institute of Technology哈尔滨工业大学理学硕士学位论文摘要氧化是导致人类疾病和发病的主要原因之一。
例如，自由基攻击蛋白质、脂质以及核苷酸导致细胞损伤和凋亡，进而可导致组织损伤，引起机体衰老，诱发肿瘤等恶性疾病。
本质上，所有的细胞组分和特定的成分都易受到自由基的影响。
经过大量研究证明，抗氧化肽能够起到清除自由基、螯合金属离子等作用。
栉孔扇贝(Chlamys farreri)外套膜一氧化氮合酶的研究术
孙虎 山 王 宜艳 王 晓安 孙修 勤２ 李 光友 ２
（．鲁 东 大 学生 命 科 学 学 院 烟 台 ２ ４ ２ ； ．国家 海 洋 局 第 一 海 洋 研究 所 １ ６０ ５ ２
提 要
采 用组 织 化 学 、免疫 组 化 和 生物 化 学方 法 对 栉孔 扇 贝外套 膜 中的一 氧 化 氮合 酶
套膜等在抗 感染免疫 反应 中的作 用及 贝类 神经一 内 分泌一 免疫调节的机 制等研究积 累资料 。
１ 材 料 与 方 法
１ ． 材 料 １
氨基 酸序列 。目前 ，国内对贝类 ＮＯ和 Ｎ Ｓ的研 Ｏ 究较少 。 幼生 等（０ １对钉 螺 Ｎ Ｓ的分布 进行 梁 ２０） Ｏ
栉 孔 扇 贝 （ ｈａ ｙ ａｒｒ 为 烟 台 芝 罘 湾 内 Ｃ ｌｍ ｓｆ ｒｅｉ ）
国家 ９ ３计 划 项 目资助 ， ９ ９ １０ ５号 。孙 虎 山 ， 士 ，教 授 ， — ｉ ｓｈｓ ａ＠ １３ ｏ ７ Ｇ１９ ０ ２ ０ 博 Ｅｍａ ：＿ ｕｈｎ ６ ． ｍ ｌ ｔ 收 稿 日期 ：０ ４ １—０ ２ ０—２２ ；收 修 改稿 日期 ： ０ ５０ —５ ２ ０ —４２
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２ 期
孙 虎 山等 ：栉 孔 扇 贝 （ ｈａ ｙ ｆｒｅｉ ￣ 膜一 氧化 氮 合 酶 的 研究 Ｃ ｌｍ ｓ ａｒｒ ￥ 套 ）
膜 内 Ｎ 和 Ｎ Ｓ及其在免疫 防御 中的作用的研 究， Ｏ Ｏ
国内外均未见报道 。作者采用组织化学 、免疫组化
贝 类 体 内 的 ＮＯ 具 有 神 经 传 导 （ ｏ ｓ ｒ ｅ ｌ Ｆ ｓｉ ｔａ ， ｅ
１９ ） ９ ９ 、运 动调节 （ ｂｙ ｓｉ ｔ ｌ２ ０ ） Ｋｏ ａ ａｈ ， ０ ０ 、学 习记 ｅａ 忆 （ ｏ ｅｔｏ ｔ ｌ１ ９ ） 免疫 防御 （ ｏ ｒｏ ｌ Ｒ ｂ ｒ ｎｅ ａ， ９ ６ 、 ｓ Ｇ ｕｄ ｎｅ ａ， ｔ
扇贝裙边酶解制备抗氧化肽的实验研究
62.61
T=422.211 n=16
注: A、B、C、D、E 分别表示温度、pH、加酶量、固液比、酶解时间. 各因素的水平设置见表 1. Note: A, B, C, D, E represent temperature, pH, enzyme quantity, S:L,and enzymolysis time, respectively. The levels of each factor are shown in table 1.
参照文献[9–10], 按照下列程序进行: 扇贝裙边→解冻→清洗搅碎→按比例加水匀 浆→调最佳 pH 值→按不同温度、pH 值、加酶量、 固液比、时间进行酶解→沸水浴灭酶 8 min→冷却 后离心 10 000 r/min, 30 min→取上清液→冻干→ 扇贝裙边多肽。 反应过程中以 0.1 mol/L 的 NaOH 标准溶液使 酶解液 pH 值保持在 7.4。 1.4 分析方法 1.4.1 抗氧化肽清除羟自由基能力的测定[11] 取 0.025 mol/L, pH值 7.4 的磷酸缓冲液 1 mL, 40 µg/mL的番红花红 1 mL, 供试药品 0.5 mL, 3%(体
极差 R
4 77.14 74.86 71.49 69.44 7.70
4 73.53 73.80 71.88 73.72 1.91
1 69.04 73.90 74.50 75.50 6.46
3 76.82 75.21 68.45 72.45 8.37
2 71.83 74.90 72.49 73.72 3.07
1. 中国水产科学研究院 黄海水产研究所, 山东 青岛 266071; 2. 青岛科技大学 化工学院, 山东 青岛 266042
摘要: 以扇贝(Chlamys farreri)裙边为研究对象, 通过海洋碱性蛋白酶水解获得抗氧化肽。研究酶解温度、pH值、 固液比、加酶量、酶解时间对酶解效果的影响。在单因素实验的基础上选取实验因素和水平, 采用L16(45)正交试 验, 根据Box- Behnken设计原理采用三因素三水平的响应面分析法, 对酶解条件进行优化研究。结果表明, 最佳酶 解条件为: 固液比 1:3.26(m/V), 加酶量 0.44 %(W/V), 温度 31.20 ℃, pH值为 9.0, 酶解时间为 1 h, 羟自由基清除率 为 83.78%, 与预测值的相对误差为 0.29%, 理论值与预测值基本一致, 预测模型能较好地反映实际情况。本研究旨 在为今后扇贝裙边蛋白的开发利用提供理论依据。[中国水产科学, 2011, 18(1): 214−221]
华贵栉孔扇贝闭壳肌蛋白的分离提取及性质
华贵栉孔扇贝闭壳肌蛋白的分离提取及性质摘要：以华贵栉孔扇贝为研究对象，对其闭壳肌蛋白组分进行分离，并对其氨基酸组成、分子质量分布和热稳定性进行检测分析。
结果表明：新鲜华贵栉孔扇贝闭壳肌中水分、粗蛋白含量分别为78.12%、18.19%；蛋白组分分离得到3 种组成蛋白，其中肌原纤维蛋白占总蛋白46.80%，基质蛋白占32.70%，肌浆蛋白占20.50%；氨基酸组成检测表明3 种蛋白组分氨基酸种类齐全，肌浆蛋白、肌原纤维蛋白、基质蛋白中必需氨基酸占氨基酸总量的百分比分别达到41.52%、38.96%、35.49%；十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析显示：肌浆蛋白亚基分子质量在16～105 kD之间分布广泛；肌原纤维蛋白组分分子质量大多介于35～50 kD和105 kD附近；基质蛋白组分在35～50 kD之间有2 条明显的条带，在71 kD附近也有一条带；热稳定性分析显示肌浆蛋白、肌原纤维蛋白、基质蛋白的变性温度分别为65.8、50.5、59.6 ℃。
关键词：华贵栉孔扇贝；闭壳肌；蛋白分离；氨基酸；十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳；差示扫描量热法Protein Isolation and Characterization of the Adductor Muscle of Chlamys nobilisZHU Yahui1，CAO Wenhong1，2，*，HAN Linsen1，ZHANG Chaohua1，2（1. College of Food Science and Technology，Guangdong Ocean University，Zhanjiang 524088，China；2.Guangdong Provincial Key Laboratory of Aquatic Products Processing and Safety，Key Laboratory of Advanced Processing of Aquatic Products of Guangdong Higher Education Institution，National Research and Development Branch Center for Shellfish Processing （Zhanjiang），Zhanjiang 524088，China）Abstract：Adductor muscle is an important edible part of Chlamys nobilis which has been processed and exploited as a rich source of protein due to its delicious taste. In this paper，amino acid analysis，molecular weight distribution and thermal stability were investigated on adductor muscle protein from Chlamys nobilis. The results demonstrated that the contents of moisture and protein in adductor muscle from Chlamys nobilis were 78.12% and 18.19%，respectively. Three protein components were isolated from adductor muscle including myofibrillar protein，myostromin and myosinogen representing 46.80%，32.70% and 20.5% of the total proteins，respectively. The analysis of amino acid composition indicated that a wide variety of amino acids were found in the three proteins with essential to total amino acid ratios of 41.52%，38.96% and 35.49% for myosinogen，myofibrillar protein and myostromin，respectively. sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gelelectrophoresis （SDS-PAGE）analysis showed that the subunitmolecular weights of myosinogen were in the range of16 ～105 kD，those of myofibrillar protein mostly ranged from 35 to 50 kD and near 105 kD，and myostromin had two obvious bands between 35 and 50 kD and one band near 71 kD. Thermal stability analysis indicated that the denaturation temperature of myosinogen，myofibrillar protein，mystromin was 65.8，50.5 and 59.6 ℃，respectively.Key words：Chlamys nobilis；adductor muscle；protein separation；amino acid；sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis （SDS-PAGE）；differential scanning calorimetry （DSC）。