乙酰辅酶A羧化酶(ACC)活性检测试剂盒说明书微量法
羧酸酯酶(CarE)活性检测试剂盒说明书__微量法UPLC-MS-4401
微量法羧酸酯酶（CarE）活性检测试剂盒说明书注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：UPLC-MS-4401规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体100mL×1瓶4℃保存试剂一粉剂×1瓶4℃保存试剂二粉剂×1瓶-20℃保存试剂三液体30mL×1瓶4℃保存溶液的配制：1、试剂一：临用前先加入1.25mL无水乙醇，震荡使其大部分溶解，再加入8.75mL试剂三，震荡至充分溶解；2、试剂二：临用前取16mL试剂三加入试剂二瓶中震荡使其充分溶解，临用前配制。
本试剂溶解后为淡黄色，且在常温下不稳定，建议根据样本量取适当配好的试剂二置于冰上待用，剩余试剂分装后置于-20℃保存，禁止反复冻融。
产品说明：哺乳动物CarE，也称脂族酯酶（aliesterase），广泛分布于组织和器官，属于丝氨酸水解酶家族。
CarE催化含酯键、酰胺键和硫酯键的内源性与外源性物质水解，但不能催化水解乙酰胆碱及其类似物。
CarE参与脂质运输和代谢，并且与多种药物、环境毒物以及致癌物的解毒和代谢有关，有机磷农药可结合并且抑制CarE活性。
CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯，固蓝显色；在450nm光吸收增加速率，计算CarE活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、研钵/匀浆器、蒸馏水。
操作步骤:一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每200万细菌或细胞加入400μL提取液，超声波破碎细胞（功率20%，超声3s，间隔10s，重复30次）；然后15000rpm，4℃，离心10min，取上清（若上清不够澄清，建议重复上述离心步骤），置于冰上待检。
组织乙酰辅酶A羧化酶(ACETYL-COACARBOXYLASE)活
组织乙酰辅酶A羧化酶（ACETYL-COA CARBOXYLASE）活性光度法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途组织乙酰辅酶A羧化酶（ACETYL-COA CARBOXYLASE）活性光度法定量检测试剂是一种旨在通过底物乙酰辅酶A和碳酸氢盐受到乙酰辅酶A羧化酶的催化反应后，进而由丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶连续循环法反应系统，测定产生ADP过程中，伴随的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）的氧化反应，即采用光度法测定其氧化后峰值的变化，以分析组织裂解样品中乙酰辅酶A羧化酶活性的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种组织裂解萃取液样品（动物、人体）、部分或完全纯化酶样品中乙酰辅酶A羧化酶活性的定量检测，以及抑制剂和激活剂的筛选。
产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，高度敏感。
技术背景乙酰辅酶A羧化酶（Acetyl CoA Carboxylase；ACC；EC6.4.1.2），又称为乙酰辅酶A碳酸氢盐连接酶（Acetyl CoA：bicarbonate ligase-ATP），是ATP依赖性含生物素酶，参与脂肪酸生物合成。
哺乳动物乙酰辅酶A羧化酶单体分子量为225－250Kd，含有许多磷酸化位点，以及1个生物素辅基位点、2个催化位点和1个异构（allosteric）位点。
乙酰辅酶A羧化酶催化生物素辅基（prosthetic group）的羧基化反应，然后将生物素上的羧基转移到辅酶A上，产生丙二酰辅酶A（malonyl CoA），成为长链脂肪酸合成前的关键步骤。
AMP活化蛋白激酶（AMP-Activated Kinase；AMPK）调节该酶的活性，而十四烷基氧糠酸（5-(tetradecyloxy)-2-furoic acid；TOFA）抑制该酶的活性。
基于底物乙酰辅酶A（acetyl CoA）和碳酸氢盐，在ATP的存在下，受到乙酰辅酶A羧化酶的催化，获得产物丙二酰辅酶A和ADP，进而通过丙酮酸激酶（pyruvate kinase；PK）和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase；LDH）反应系统中，还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（oxidized nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），其吸光峰值的变化（340nm），来定量分析乙酰辅酶A羧化酶的活性。
鱼乙酰辅酶A羧化酶(ACC)elisa试剂盒活性
Fish ACC
ELISA Kit Instructions
Use:
This ELISA kit is for quantitative detecting Fish ACC activity in specimens of cells culture supernates, body fluids, tissues homogenate, serum, and plasma. The kit is for scientific research use only. Not for diagnostic or therapeutic procedures.
8. 保存：如果样品不能立即检测，应将其分装，-70 ℃保存，避免反复冷冻。保存过程中如出现沉淀，应再次离心。血液标
本尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解
冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
操作步骤： 1. 取出试剂盒，室温（20-25℃）放置 30 分钟。 1
2. Washing solution: prepare washing solution in the proportion of 1:30. Mix gently to avoid foaming.
Sample collection and storage:
1. Cell culture supernatants: After centrifugation at 1000xg for 15 minutes, collect supernatants with a sterile tube. 2. Cells: After washing cells 3 times with PBS, adjust the cell concentration to 104-106/ml; cells are broken down either through
乙酰胆碱酯酶试剂盒说明书
乙酰胆碱酯酶试剂盒说明书人胆碱乙酰化酶(CHAc)ELISA试剂盒说明书本试剂盒仅供体外研究使用!预期应用ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中CHAc含量。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗CHAc抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗CHAc抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的CHAc呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1. 酶联板:一块(96孔)2. 标准品(冻干品): 2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为10 ng/ml，做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释)后，分别稀释成10 ng/ml，5 ng/ml，2.5ng/ml，1.25 ng/ml，0.625 ng/ml，0.312 ng/ml，0.156 ng/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml，临用前15分钟内配制。
如配制5 ng/ml标准品:取0.5ml (不要少于0.5ml ) 10 ng/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3. 样品稀释液:1×20ml。
4. 检测稀释液A:1×10ml。
5. 检测稀释液B:1×10ml。
6. 检测溶液A:1×120μl(1:100)临用前以检测稀释液A 1:100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100μl/孔)，实际配制时应多配制0.1-0.2ml。
如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
7. 检测溶液B:1×120μl/瓶(1:100)临用前以检测稀释液B 1:100稀释。
乙酰辅酶a羧化酶系名词解释
乙酰辅酶a羧化酶系名词解释正常人约占人群的1%，少数种族有高达50%，如大脑性麻痹病人，但此现象仅见于少数的种族。
1、乙酰辅酶A羧化酶(acetyl-CoAse)：在生物体内，乙酰辅酶A是由丙酮酸氧化为草酰乙酸和FAD的中间代谢产物。
其最终分解产物乙酰辅酶A则进入三羧酸循环，参与了包括糖、脂肪、蛋白质等的许多重要反应，因而是一种十分重要的底物。
由于某些疾病或药物所致，这类酶的活力降低甚至消失，导致三羧酸循环障碍，使大量中间代谢产物不能进入三羧酸循环而堆积在细胞内，从而影响细胞代谢的正常进行，造成机体出现一系列功能紊乱。
该酶系由两条多肽链组成，分别位于两侧四个相邻的位置，它们在膜外区域相互靠近而又保持一定的距离，从而形成具有双膜结构的疏水尾，在核糖体结合位点的四周，存在着12对各自独立的疏水作用位点，它们可以彼此重叠，并与膜上的组蛋白H构成疏水膜。
该系统具有多样性的活性形式，在病理情况下也表现出了多样性的活性模式。
2、乙酰辅酶A脱氢酶(acetyl-CoA oxidoreductase)：乙酰辅酶A是其重要的脱氢终产物。
脱氢酶能催化乙酰辅酶A的脱氢反应，其基本结构为多肽链。
该酶系由5个多肽链组成，每条多肽链又由10~14个氨基酸残基组成，位于细胞质膜上，分布在细胞质中。
每一条多肽链又分为两个亚单位。
其中第一个亚单位是磷酸化后的脱氢酶，第二个亚单位是多聚化酶，即催化活性部位。
在不同疾病过程中，存在着由于酶缺陷所引起的异常代谢状态，称之为代谢性疾病。
当代谢性疾病发生时，由于缺乏相应的酶或酶量减少或功能不全，造成乙酰辅酶A转变为乙酰乙酸的速率降低，不能及时将堆积在线粒体内膜和高尔基体上的乙酰辅酶A转运到胞浆内进行代谢，结果导致乙酰乙酸在胞浆内大量积累，发生脂质过氧化作用，造成组织损伤。
因此，测定线粒体、高尔基体中的乙酰辅酶A的水平就能诊断代谢性疾病。
1）特征性：合成乙酰辅酶A需要几个步骤，但该酶的基本反应单位只有一个，是一个结构简单、重复单位，含有4个半胱氨酸残基的二硫键，而且是顺式，故该酶可作为本身或一些共同反应单位的一个缩写词来描述。
乙酰辅酶a羧化酶催化的反应
乙酰辅酶a羧化酶催化的反应乙酰辅酶A羧化酶是一种重要的酶类，在细胞内起着关键的催化作用。
它参与了糖、脂肪和蛋白质的代谢过程，从而为细胞提供所需的能量和合成物质。
本文将围绕乙酰辅酶A羧化酶的催化反应展开讨论。
乙酰辅酶A羧化酶主要催化的反应是将乙酰辅酶A转化为柠檬酸。
这是一种重要的反应，被称为三羧酸循环或Krebs循环，是细胞中能量代谢的关键步骤之一。
乙酰辅酶A羧化酶催化乙酰辅酶A转化为柠檬酸的过程中，需要一个辅助物质——辅酶A。
辅酶A是一种由维生素B5（泛酸）和腺苷酸（AMP）组成的化合物，它与乙酰辅酶A结合形成一个稳定的化合物。
这种结合使乙酰辅酶A羧化酶能够催化乙酰辅酶A的转化反应。
乙酰辅酶A羧化酶催化的反应是一个复杂的化学过程。
首先，乙酰辅酶A与辅酶A结合形成一个活化复合物。
然后，乙酰辅酶A羧化酶催化活化复合物中的乙酰辅酶A分子失去一个乙酰基团，生成一个中间产物——乙酰酯。
接着，乙酰酯与柠檬酸结合，生成一个稳定的产物——柠檬酰辅酶A。
最后，柠檬酰辅酶A与水反应，生成柠檬酸。
乙酰辅酶A羧化酶催化的反应是一个氧化反应。
在反应过程中，乙酰辅酶A中的乙酰基团被氧化成为一个羧基。
这个氧化反应释放出大量的能量，用于细胞内其他代谢过程的进行。
乙酰辅酶A羧化酶催化的反应还受到一些调控因子的影响。
例如，ATP和NADH是反应的抑制剂，而ADP和NAD+是反应的促进剂。
这些调控因子能够调节乙酰辅酶A羧化酶的活性，使其适应细胞内能量需求的变化。
乙酰辅酶A羧化酶催化的反应在细胞内发生在线粒体的基质中。
线粒体是细胞内的能量中心，许多重要的代谢反应都发生在这里。
乙酰辅酶A羧化酶作为线粒体内的一个关键酶，在能量代谢中起着至关重要的作用。
乙酰辅酶A羧化酶催化的反应是细胞内能量代谢不可或缺的一部分。
通过将乙酰辅酶A转化为柠檬酸，乙酰辅酶A羧化酶提供了细胞所需的能量和合成物质。
这个反应的催化过程复杂而精确，受到多种调控因子的影响。
新的乙酰辅酶A羧化酶(ACC)抑制剂及其在糖尿病、肥胖症和代谢综合征
申请人：艾博特公司 地址：美国伊利诺伊州 国籍：US 代理机构：中国专利代理(香港)有限公司 更多信息请下载全A羧化酶(ACC)抑制剂及其在糖尿 病、肥胖症和代谢综合征中的应用
专利类型：发明专利 发明人：Y·G·古,X·徐,M·韦茨伯格,H·沈 申请号：CN200780005668.3 申请日：20070215 公开号：CN101384 568A 公开日：20090311
丙酮酸羧化酶(PC)活性检测试剂盒说明书
丙酮酸羧化酶（PC）活性检测试剂盒说明书微量法货号: BC0735规格: 100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体110 mL×2瓶2-8℃保存试剂一液体15 mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体5 mL×1瓶2-8℃保存试剂三粉剂×1瓶-20℃保存试剂四粉剂×1瓶-20℃保存试剂五液体2 mL×1瓶2-8℃保存试剂六液体5 μL×1支2-8℃保存试剂六稀释液液体5 mL×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1、试剂三：临用前加入3 mL蒸馏水溶解；可分装后-20℃保存，避免反复冻融；2、试剂四：临用前加入2 mL蒸馏水溶解；可分装后-20℃保存，避免反复冻融；3、试剂六：液体置于试剂瓶内EP管中。
临用前按试剂六：试剂六稀释液=1:428（V:V）的比例稀释试剂六备用，现用现配；4、工作液的配制：按照试剂二：试剂三：试剂四=2:1:1的体积比例充分混匀，现用现配。
产品说明：丙酮酸羧化酶(pyruvate carboxylase，PC，EC 6.4.1.1)广泛存在于动物、霉菌和酵母的线粒体中，但在植物体和大部分细菌中却不含此酶。
是供给草酰乙酸的主要补充反应，是糖异生过程的第一个限速酶。
PC不可逆的催化丙酮酸、ATP、CO2和水生成草酰乙酸、ADP和Pi，苹果酸脱氢酶进一步催化草酰乙酸和NADH生成苹果酸和NAD+，在340nm下测定NADH氧化速率，即可反映PC活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器用品：紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤;一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1.0 mL提取液，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
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乙酰辅酶A羧化酶（ACC）活性检测试剂盒说明书微量法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC0415
规格:100T/48S
产品简介：
乙酰辅酶A羧化酶（Acetyl-CoA carboxylase，ACC）在生物体内催化乙酰辅酶A羧化生成丙二酰辅酶A，是脂肪酸和许多次生代谢产物合成的关键酶。
ACC的活性在一定程度上决定了脂肪酸的合成速度和含油量的高低。
ACC能够催化乙酰辅酶A、NaHCO
和ATP生成丙二酰辅酶A、ADP和无机磷，钼蓝与磷酸根生成660nm
3
有特征吸收峰的物质，通过钼酸铵定磷法测定无机磷的增加量来测定ACC活性。
试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计/酶标仪、天平、低温离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、漩涡震荡仪、水浴锅、蒸馏水、冰盒、EP管。
产品内容：
提取液一：液体110mL×1瓶，4℃保存；
提取液二：液体1mL×1支，-20℃避光保存；
试剂一：液体10mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存。
临用前加入2.5mL试剂一，充分溶解待用；可分装后-20℃保存，避免反复冻融；
试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存。
临用前加入2mL双蒸水，充分溶解待用；可分装后-20℃保存，避免反复冻融；
试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前加入5mL双蒸水，溶解后4℃保存一周；
试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前加入5mL双蒸水，溶解后4℃保存一周；
试剂六：液体5mL×1瓶，室温保存；
标准品：10μmol/mL标准磷贮备液1mL×1支，4℃保存；
提取液的配制：按提取液一：提取液二=990：10（V：V）的比例配制，根据样本量现配现用，禁止将提取液二一次性全部加入提取液一混匀分装待用。
O：试剂四：试剂五：试剂六=2:1:1:1的比例配制，配好的工作液应为工作液（定磷剂）的配制：按H
2
浅黄色。
若变色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，工作液应现配现用。
注意：配试剂最好用新的烧杯、玻璃棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后，8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
细菌或细胞：按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
血清（浆）：直接测定。
二、测定步骤：
1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至660nm，蒸馏水调零。
2、临用前将试剂一、试剂二、试剂三在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）预热10min。
3、将10μmol/mL标准液用蒸馏水稀释为1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078μmol/mL的标准溶液备
用。
4、操作表：
酶促反应：(在1.5ml离心管中依次加入下列试剂)
试剂名称对照管测定管
试剂一（µL）90
试剂二（µL）-50
试剂三（µL）-40
样本（µL）1010
37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）准确反应30min后，沸水浴5min（盖紧，以防止水分散失），冷却后，10000g，25℃离心5min，取上清。
定磷反应：
试剂名称标准管空白管对照管测定管标准溶液（μL）20---H
O（µL）-20--
2
上清液（µL）-2020
工作液（µL）180180180180
混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）反应30min，冷却至室温，在660nm处，蒸馏水调零，记录各管吸光值A，分别记为A标准管、A空白管、A对照管和A测定管。
ΔA=A测定管-A对照管，ΔA标准=A标准管-A空白管。
标准管、空白管只要做一次即可，每个测定管需要设一个对照管。
三、ACC活性计算
1、标准曲线的绘制：
以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA带入方程得到x（μmol/mL）
2、ACC活性的计算：
（1）按蛋白浓度计算
酶活定义：每小时每毫克组织蛋白产生1μmol无机磷的量为一个ACC活力单位
ACC酶活（U/mg prot）=x×V总÷（V样×Cpr）÷T=20x÷Cpr。
（2）按样本质量计算
酶活定义：每小时每g组织产生1μmol无机磷的量为一个ACC活力单位。
ACC酶活（U/g鲜重）=x×V总÷（V样×W÷V样总）÷T=20x÷W。
（3）按照细菌或细胞数量计算
酶活定义：每小时每104个细菌或细胞产生1μmol无机磷的量为一个ACC活力单位。
ACC酶活（U/104cell）=x×V总÷（V样×细胞数量（万个）÷V样总）÷T
=20x÷细胞数量（万个）。
（4）按液体体积计算
酶活定义：每小时每mL液体产生1μmol无机磷的量为一个ACC活力单位。
ACC酶活（U/mL）=x×V总÷V样÷T=20x。
V总：酶促反应总体积，0.1mL；V样：加入样本体积，0.01mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，0.5h；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL，蛋白浓度自行测定；W：样本鲜重，g。
注意事项
1、工作液（定磷剂）应现配现用，正常颜色为浅黄色，如有变色或变蓝则均为失效。
2、此法具有微量、灵敏、快速的特点。
所以对测定所用试管或EP管等试验器材均要求严格无磷。
3、显色结束后应立即检测。
4、当ΔA大于1.5时，建议将样本用提取液稀释后再进行测定。