酶联免疫
酶联免疫检测方法
酶联免疫检测方法
酶联免疫检测是一种常用的生物技术方法，它结合了酶标记和免疫反
应的原理，可用于检测生物样品中特定分子的含量，如蛋白质、抗体、激
素等。
具体步骤如下：
1.准备样品：从生物样品中提取目标分子，例如血液、尿液、细胞等。
2.免疫反应：将一定浓度的目标分子加入到反应孔中，并加入与目标
分子特异性的抗体，使两者发生免疫反应。
3.洗涤：对反应孔进行洗涤，以去除未与抗体结合的杂质以及剩余的
抗体。
4.添加荧光标记的二抗：向反应孔中加入荧光标记的二抗，使其与已
结合的抗体形成复合物。
5.洗涤：对反应孔进行再次洗涤，以去除未结合的荧光标记的二抗。
6.酶标记：向反应孔中加入用酶标记的物质（如酶标记的抗体），使
其与已结合的荧光标记的二抗形成复合物。
7.洗涤：对反应孔进行最后一次洗涤，以去除未结合的酶标记化合物。
8.反应染色：向反应孔中加入染色物质，使其与酶标记化合物发生颜
色反应，形成分析结果。
最终，检测结果可以通过测量反应孔中染色物质的光密度或荧光强度
来评估样品中目标分子的浓度。
酶联免疫检测方法具有高灵敏度、高特异
性和高通量等优点，广泛应用于医学、生物工程、食品安全等领域。
酶联免疫吸附法原理
酶联免疫吸附法原理酶联免疫吸附法（ELISA）是一种常用的免疫学实验技术，广泛应用于医学诊断、生物学研究和生物制药等领域。
该技术通过酶标记的抗体与特定抗原结合，再通过酶底物的反应产生可定量测定的色素或荧光信号，从而实现对抗原或抗体的检测和定量分析。
酶联免疫吸附法的原理主要包括固相酶联免疫吸附法和溶液相酶联免疫吸附法两种类型。
固相酶联免疫吸附法是最常见的类型，其原理是将抗原或抗体固定在微孔板上，再加入酶标记的抗体或抗原进行反应，最后通过底物的反应来测定结果。
而溶液相酶联免疫吸附法则是将酶标记的抗体或抗原与待测物体系中的抗原或抗体反应，再通过固相进行分离和检测。
酶联免疫吸附法的操作步骤一般包括以下几个关键步骤，包被、孵育、洗涤、检测和计量。
首先是将待检测的抗原或抗体包被在固相载体上，形成固相复合物。
然后加入酶标记的抗体或抗原，让其与待检测物发生特异性结合，形成夹心复合物。
接着进行洗涤步骤，以去除非特异性结合物质。
随后加入底物，使酶与底物发生反应，产生可测定的信号。
最后通过光度计或荧光计等设备对信号进行测定和计量，从而得出待检测物的含量或浓度。
酶联免疫吸附法具有高灵敏度、高特异性、操作简便、快速、经济等优点，因此被广泛应用于临床医学、生物学研究和生物制药等领域。
在临床医学中，ELISA技术常用于检测各种疾病的标志物，如肿瘤标志物、感染病原体抗体、药物残留等。
在生物学研究中，ELISA技术常用于蛋白质的定量分析、细胞因子的检测等。
在生物制药领域，ELISA技术常用于药物的质量控制和稳定性研究。
总之，酶联免疫吸附法作为一种重要的实验技术，在科研和临床领域发挥着重要作用。
随着生物技术的发展和进步，相信酶联免疫吸附法将会在更多领域展现出其巨大的应用潜力。
酶联免疫法;酶联免疫吸附试验法
酶联免疫法;酶联免疫吸附试验法
酶联免疫法（Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA）
是一种常用的免疫学实验技术，用于检测样本中特定蛋白质或其他
分子的存在。
酶联免疫法通过利用特异性抗体与特定抗原结合的原
理来进行检测。
这种方法的原理是将待检测的抗原或抗体与特定的
酶标记的抗体或抗原结合，然后通过酶的底物来检测酶的活性，从
而确定待检测物质的存在或浓度。
酶联免疫法主要分为直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA和间
接竞争ELISA等几种类型。
直接ELISA直接将被检测的抗原或抗体
吸附在固相载体上，然后加入与其特异性结合的酶标记的抗体或抗原，通过酶的底物来检测酶活性。
间接ELISA则是在固相载体上吸
附抗原后，再加入特异性抗体和酶标记的抗体，以增强检测的灵敏度。
竞争ELISA则是将待检测的抗原与酶标记的抗原竞争结合，通
过竞争程度来检测待检测物质的浓度。
间接竞争ELISA结合了间接ELISA和竞争ELISA的特点，可以用于检测抗体的浓度。
酶联免疫吸附试验法（Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种高度敏感和特异性的实验技术，广泛应用于医学诊断、生物学研究和生物制药工业等领域。
它的优点包括操作简便、成本
低廉、高通量性和可定量性等，因此被广泛用于检测疾病标志物、药物残留、植物病原体和基因工程产品等。
同时，酶联免疫法也有一些局限性，比如可能受到干扰物质的影响、需要一定的实验条件和设备等。
因此，在使用酶联免疫法时需要综合考虑其优缺点，并结合具体的实验要求来选择合适的方法和条件。
酶联免疫吸附的原理及应用
酶联免疫吸附的原理及应用原理酶联免疫吸附（Enzyme-linked immunosorbent assay，简称ELISA）是一种基于抗体与抗原的特异性结合反应和酶的活性产生关系，用于检测、定量和鉴定生物分子的方法。
ELISA的原理基于酶作为信号发生物，可通过酶的催化作用产生可测量的信号，从而实现对目标物质的检测。
抗体与抗原结合ELISA的基本原理是利用抗体与抗原特异性结合的特性进行目标物质的检测。
首先，在固定在试孔或试管表面的抗体上，加入待测样品，样品中的目标物质（抗原）与抗体特异性结合形成免疫复合物。
检测抗原经过一系列的洗涤步骤后，加入与抗体特异性结合的第二抗体，该第二抗体已与酶特异性结合。
这样，在试管或试孔中就形成了另一种特异性的结合，即抗体-抗原-二抗-酶。
信号产生加入了特定底物后，酶会催化底物的反应产生可测量的色或荧光信号。
信号测量信号的测量通常使用光谱仪器，例如酶标仪或荧光仪，对产生的色或荧光量进行测量，从而得到目标物质的浓度。
应用ELISA作为一种敏感、特异且相对快速的检测方法，在许多领域有着广泛的应用。
医学诊断ELISA在医学诊断中用于检测某些特定疾病的标志物。
例如，用于检测某些感染性疾病的抗体或抗原，如HIV、乙肝病毒等。
同时，ELISA也可用于监测某些自身免疫疾病的标志物，如自身抗体。
由于ELISA技术对抗体和抗原高度特异性，能够提供高度准确的诊断结果。
药物研发ELISA在药物研发领域中也有广泛应用。
例如，ELISA可用于检测药物在体内的代谢产物，从而了解药物的药代动力学特性。
此外，ELISA还可用于检测药物在体内的浓度，评估药物的安全性和疗效。
农业检测ELISA在农业领域中也有重要应用。
例如，ELISA可用于检测农作物中的农药残留，从而保障农产品的质量和安全。
此外，ELISA还可用于检测农作物中的病原体，及时发现植物病害并进行控制。
环境监测ELISA在环境监测中也有一定的应用。
酶联免疫法 半定量
酶联免疫法半定量
酶联免疫法（ELISA）是一种常用的生物化学分析方法，用于检
测样品中特定蛋白质的存在。
该方法利用酶标记的抗体与待检测物
质结合，然后通过酶的底物转化产生可测量的信号。
酶联免疫法可
以分为定性和半定量两种，定性用于确定样品中是否存在特定抗原，而半定量则可以测量样品中抗原的相对浓度。
在酶联免疫法半定量中，通常会利用标准曲线来确定待测样品
中抗原的浓度。
首先，制备一系列已知浓度的标准溶液，然后将它
们与相同的酶标记抗体反应，生成标准曲线。
接下来，将待测样品
与酶标记抗体反应，测量其信号强度，并通过标准曲线确定其浓度。
酶联免疫法半定量具有操作简单、灵敏度高、特异性强等优点，因此在临床诊断、生物医学研究和生物制药等领域得到广泛应用。
然而，该方法也存在一些局限性，如对样品的处理和操作技术要求
较高，以及可能受到干扰物质的影响等。
总的来说，酶联免疫法半定量是一种重要的生物化学分析方法，能够准确、快速地测量样品中特定抗原的相对浓度，为科研和临床
诊断提供了有力的工具。
随着技术的不断进步和改进，相信这一方法在未来会有更广泛的应用和发展。
酶联免疫吸附的原理和步骤
酶联免疫吸附（ELISA）是一种常用的免疫学实验技术，广泛应用于医学、生物学、生物化学、环境监测等领域。
它主要是通过酶标记抗体或抗原与待检测样品中的特定分子发生特异性反应，利用酶的催化作用来检测目标物质的存在量和浓度。
一、酶联免疫吸附的原理酶联免疫吸附的原理是基于免疫学和酶学的原理。
它利用抗体和抗原之间的特异性结合关系来检测待测物质的存在和浓度。
ELISA的原理主要分为两种类型：直接ELISA和间接ELIS A。
直接ELISA是将酶标记的抗体或抗原直接与待检测物质结合，然后用底物检测酶的活性，从而测定待检测物质的存在和浓度。
间接ELISA是将待检测物质与特异性抗体结合，再加入酶标记的二抗与第一抗体结合，最后用底物检测酶的活性，从而测定待检测物质的存在和浓度。
二、酶联免疫吸附的步骤酶联免疫吸附的步骤主要分为以下几个方面：1.涂层：将抗体或抗原涂在微孔板上，使其与微孔板表面结合。
2.阻断：用蛋白质或其他物质阻止非特异性结合。
3.样品加入：加入待测样品，使其与涂层的抗体或抗原发生特异性结合。
4.洗涤：用缓冲液洗去未结合的物质。
5.酶标记的抗体或抗原加入：加入酶标记的抗体或抗原，使其与待测物质结合。
6.洗涤：用缓冲液洗去未结合的物质。
7.底物加入：加入底物，使其与酶发生反应，产生可测量的信号。
8.停止反应：加入停止反应剂，停止底物的反应。
9.测量：用酶标仪或光度计测量信号的强度，从而计算出待测物质的存在量和浓度。
三、酶联免疫吸附的实际应用酶联免疫吸附在医学、生物学、生物化学、环境监测等领域都有广泛的应用。
1.医学应用：酶联免疫吸附可以检测血清中的病原体抗体，如乙肝病毒、艾滋病毒等；检测血清中的肿瘤标志物，如癌胚抗原、前列腺特异性抗原等；检测血液中的药物浓度，如抗生素、抗癌药物等。
2.生物学应用：酶联免疫吸附可以检测细胞因子、酶、蛋白质等生物分子的存在和浓度，用于研究生物学过程和疾病机制。
3.环境监测应用：酶联免疫吸附可以检测水、土壤、空气中的污染物，如重金属、有机物、农药等，用于环境监测和污染物的快速检测。
酶联免疫吸附试验过程
酶联免疫吸附试验过程一、什么是酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断中的免疫学检测技术。
它通过利用酶标记的抗体或蛋白质与待测物或已知的抗原/抗体结合反应，在底物的作用下产生可定量检测的颜色反应，从而确定待测物的含量。
二、酶联免疫吸附试验的基本原理酶联免疫吸附试验主要涉及以下几个关键步骤：1. 固相抗原/抗体的固定将待测物（如抗原或抗体）吸附于固相材料（如微孔板或磁珠）表面，形成固定点。
一般采用非特异性吸附（如通过静电相互作用或亲和力学吸附）将蛋白质固定于固相材料上。
2. 样品或标准品的加入将含有待测物的样品或已知浓度的标准品加入至固相材料上，使待测物与固相抗原/抗体产生特异性结合。
3. 特异性抗体的结合加入与待测物特异性结合的酶标记抗体（如HRP标记的抗体），使其与待测物（抗原或抗体）形成复合物。
4. 用底物发生化学反应加入底物（如TMB或ABTS）作用于酶标记的抗体，使其发生特异性的化学反应，产生可定量检测的颜色反应。
5. 反应终止通过加入反应终止剂（如酸溶液或碱溶液）停止底物的反应。
终止后，颜色反应的强度与待测物的浓度呈正相关。
6. 光密度的测定使用酶标仪或分光光度计测定底物发生反应后的光密度值，通过比较标样/标准曲线，确定待测物的浓度。
三、酶联免疫吸附试验的优点和应用酶联免疫吸附试验具有以下优点：1.高灵敏度：能够检测到非常低浓度的待测物，通常在ng/mL至pg/mL的范围内。
2.高特异性：通过特异性抗体的配对，能够准确鉴定待测物与特定抗原/抗体的结合。
3.高通量性：在微孔板上可以同时检测多个样品，提高了检测效率。
4.易操作性：试验步骤相对简单，不需要复杂的仪器设备。
5.可定量性：通过与标准曲线比较，能够准确测定待测物的浓度。
酶联免疫吸附试验在生物医学研究和临床诊断中有着广泛的应用：1.免疫学研究：可用于研究各类抗体的水平、亲和力、免疫反应动力学等，揭示免疫系统的功能和机制。
酶联免疫胶体金法
酶联免疫胶体金法（enzyme-linked immunogold assay，ELIGA）是一种常用的免疫试验方法，用于检测特定抗原或抗体的存在。
它结合了酶标技术和胶体金技术的优点，具有高灵敏度和高特异性的特点。
酶联免疫胶体金法的原理是将与特定抗原或抗体结合的胶体金标记物用作检测信号。
标记的胶体金微粒具有良好的稳定性和可视性，能够在光学显微镜下观察到。
该方法主要包括以下步骤：
1. 样品处理：对待检样品进行处理，如提取目标抗原或抗体。
2. 固相吸附：将处理后的样品加入固相吸附物（如酶标板、膜片等），使目标物质固定在上面。
3. 阻断：用适当的阻断液封闭非特异性吸附位点，减少假阳性反应。
4. 孵育：加入特异性原抗体或特异性标记的抗原，使其与固相上的目标物质结合。
5. 清洗：通过洗涤的方式去除未结合的物质，减少背景干扰。
6. 标记：加入胶体金标记物，使其与特异性抗体或抗原结合。
7. 可视化：使用适当的显色底物，使得胶体金变成颜色或形成可见沉淀。
8. 停止反应：加入停止液或停止酶作用，使反应停止。
9. 分析：使用光学显微镜或分光光度计等设备对结果进行观察和分析。
酶联免疫胶体金法广泛应用于生物医学研究、临床诊断和生物工程领域，可用于检测病原微生物、肿瘤标记物、抗体、激素等生物分子的存在和定量分析。
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分子生物学与生物化学课程论文酶联免疫（ELISA）检测方法学院:山西农业大学信息学院系部:农业与生命科学系专业:生物技术班级:102班学号:2010010229姓名:高淼时间:2013年5月5日酶联免疫（ELISA）检测方法摘要：酶联免疫法简称ELISA，是酶免疫测定技术中应用最广的技术。
其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。
常用的ELISA法有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原，后者用于测定特异抗体。
关键词：ELISA基本方法抗体抗原前言：1971年瑞典学者Engvail和Perlmann,荷兰学者Van Weerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，即酶联免疫测定法(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA)。
ELISA现在已成为目前分析化学领域中的前沿课题，它是一种特殊的试剂分析方法，是在免疫酶技术(immunoenzymatic techniques)的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。
由于ELISA具有快速、敏感、简便、易于标准化等优点，使其得到迅速的发展和广泛应用。
尽管早期的ELISA 由于特异性不够高而妨碍了其在实际中应用的步伐，但随着方法的不断改进、材料的不断更新，尤其是采用基因工程方法制备包被抗原，采用针对某一抗原表位的单克隆抗体进行阻断ELISA试验，都大大提高了ELISA的特异性，加之电脑化程度极高的ELISA检测仪的使用，使ELISA更为简便实用和标准化，从而使其成为最广泛应用的检测方法之一。
一、基本原理将抗原或抗体结合到某种固相载体，并保持其免疫活性，将抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留酶的活性，也不会改变抗体的免疫学特性。
而常用的标记酶有辣根过氧化物酶（HRP)、碱性磷酸酶（AKP)等。
①在测定时，把受检标本和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体反应；滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型，出现颜色反应。
因此，可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应，颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。
此种显色反应可通过ELISA检测仪进行定量测定，这样就将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来，使ELISA方法成为一种既特异又敏感的检测方法。
二、其原理的免疫学基础抗原、抗体：抗原是能在机体中引起特异性免疫应答的物质。
抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。
Ig 分五类，即IgG、IgA、IgM、IgD 和IgE。
与免疫测定有关的Ig 主要为IgG 和IgM。
②抗原抗体反应：抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡，具有特异性、可逆性、敏感性3个重要性质。
用于标记抗体或抗抗体的酶须具有下列特性：有高度的活性和敏感性；在室温下稳定；反应产物易于显现；能商品化生产。
目前应用较多的有辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等，其中以HRP 应用最广。
1、辣根过氧化物酶（HRP）过氧化物酶广泛分布于植物中，辣根中含量最高，从辣根中提取的称辣根过氧化物酶（HRP），是由无色酶蛋白和深棕色的铁卟啉构成的一种糖蛋白（含糖量18％），分子量约40000，约由300个氨基酸组成，等电点为pH 3-9，催化反应的最适pH 值因供氢体不同而稍有差异，一般多在pH 5左右。
此酶溶于水和50％饱和度以下的硫酸铵溶液。
酶蛋白和辅基的最大吸收光谱分别为275nm 和403nm。
辣根过氧化物酶催化反应对Ｈ２Ｏ２具有很高的专一性。
在ＨＲＰ催化荧光分析中讨论荧光底物的结构，将有助于揭示酶催化反应机一，对提高分析方法，灵敏度将有着极其重要的应用价值和深远意义。
③2、碱性磷酸酶系从小牛肠粘膜和大肠杆菌中提取，由多个同功酶组成。
它们的底物种类很多，常用者为硝基苯磷酸盐，廉价无毒性。
酶解产物呈黄色，可溶，最大吸收值在400nm。
酶的活性以在pH10反应系统中，37℃1分钟水解1μg 磷酸苯二钠为一个单位。
④AP 也有发荧光底物（磷酸4-甲基伞酮），可用于ELISA 作荧光测定，敏感度较高于用显色底物的比色法。
三、基本方法ELISA 的分类至今尚无统一的标准。
有些学者根据有关的交献,提出以下三种常用的测定方法（1）测定抗体的间接法；(2)测定抗原的双抗体夹心法；(3)测定抗原的竞争法。
⑤1、间接法测抗体间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。
操作步骤如下⑥：⑴将抗原包被在固相载体上，形成固相抗原，洗涤除去未结合的抗原及杂质。
⑵若样品中含有抗体，则结合为抗原-抗体复合物，经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体。
其他抗体及血清中的杂质由于不能与固相抗原结合，在洗涤过程中被洗去。
⑶再加入酶标二抗体，则结合为抗原-抗体-酶标抗体复合物，洗涤后，固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。
⑷酶催化底物并显色，颜色深度代表标本中受检抗体的量。
本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断。
间接法的优点是只要变换包被抗原就可利用同一酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法。
间接法成功的关键在于抗原的纯度。
虽然有时用粗提抗原包被也能取得实际有效的结果，但应尽可能予以纯化，以提高试验的特异性。
2、双抗体夹心法测定抗原双抗体（原）夹心法检测抗原（体）的常见方法，应用针对抗原两个不同决定族的⑦两种单抗分别作为固相载体和酶标抗体检测溶液中的抗原。
操作步骤如下：⑴将抗抗体包被在固相载体上，形成固相抗体，洗涤除去未结合的抗体及杂质。
⑵如样品中含有抗体，则结合为抗抗体-抗体复合物，洗涤除去其他未结合的物质。
⑶加入抗原及酶标抗体，则结合为抗抗体-抗体-抗原-酶标抗体复合物，彻底洗涤未结合的酶标抗体。
此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。
⑷酶催化底物并显色，根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。
根据同样原理，将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物，即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体。
在临床检验中，此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原，（适用于二价以上抗原,不能测小分子半抗原）例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等⑧。
只要获得针对受检抗原的异性抗体，就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。
如抗体的来源为抗血清，包被和酶标用的抗体最好分别取自不同种属的动物。
如应用单克隆抗体，一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗，分别用于包被固相载体和制备酶结合物。
这种双位点夹心法具有很高的特异性，而且可以将受检标本和酶标抗体。
3、竞争法检测抗原或小分子半抗原、抗体，以测抗原为例，使待测抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合，竞争法可用于测定抗原，也可用于测定抗体。
其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。
标本中抗体量越多，结合在固相上的酶标抗体愈少，因此阳性反应呈色浅于阴性反应。
以测定抗原为例，受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合，因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比。
操作步骤如下：⑴将特异抗体与固相载体连接，形成固相抗体。
洗涤。
⑵待测管中加受检标本和一定量酶标抗原的混合溶液，使之与固相抗体反应。
如受检标本中无抗原，则酶标抗原能顺利地与固相抗体结合。
如受检标本中含有抗原，则与酶标抗原以同样的机会与固相抗体结合，竞争性地占去了酶标抗原与固相载体结合的机会，使酶标抗原与固相载体的结合量减少。
参考管中只加酶标抗原，保温后，酶标抗原与固相抗体的结合可达最充分的量。
洗涤。
⑶加底物显色：参考管中由于结合的酶标抗原最多，故颜色最深。
当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化抗原时，可用此法检测特异性抗体。
竞争法测抗体有多种模式，可将标本和酶标抗体与固相抗原竞争结合，抗HBc ELISA一般采用此法。
另一种模式为将标本与抗原一起加入到固相抗体中进行竞争结合，洗涤后再加入酶标抗体，与结合在固相上的抗原反应。
抗HBe的检测一般采用此法。
四、注意事项：在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括：⑴固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。
其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。
目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。
不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。
⑵包被抗体（或抗原）的选择：将抗体（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好，吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。
吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响，一般多采用4℃18～24小时。
蛋白质包被的最适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg/ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。
选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。
对于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。
⑶酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定；然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度）在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
⑷酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。
有些供氢体（如OPD等）有潜在的致癌作用，应注意防护。
底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。
通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。
底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。
五、前景ELISA是一种非均相的酶免疫检测技术，具有敏感性高、特异性强、重复性好的实验诊断方法，由于其试剂稳定、易保存、操作简便、结果判断较客观等因素，由于其试剂稳定、易保存、操作简便、结果判断较客观等因素，以及既适宜于大规模筛查试验又可以用于少量标本的检测，既可以做定性试验也可以做定量分析等优点，已广泛应用于微生物学、寄生虫学、肿瘤学和细胞因子等领域⑨。
ELISA的影响因素较多，加强质量管理才能充分发挥其方法学的优点。
测定技术的发展主要在于方法学的发展，而方法学的发展依托于试剂生产技术不断进步更新和型标记物的应用。
目前，分子生物学正在并最终肯定会让我们对整个生命科学有一个全面而彻底的认识，其对免疫测定技术发展的影响也是直接而又有效的，它使我们对以前一些难以检测的生物活性物质的测定变得轻而易举，并且大大提高了检测的灵敏度和特异性。
参考文献：①ELISA在食品动植物及其产品安全检测中的应用《口岸卫生控制》2003年第5期孙永江任立新②王重庆,分子免疫学基础,北京:北京大学出版社,1997③辣根过氧化物酶催化反应在荧光分析中的应用《天津化工》1999年第3期杜建云唐波④碱性磷酸酶辣根过氧化物酶结合物在包虫病Elisa中对比应用李华苏东明温博贵《江西医学院学报》1988年01期⑤细胞-酶联免疫吸附试验及其应用[期刊论文]《检验医学》ISTIC PKU-2006年z1期朱晴晖⑥生物技术概论，周选国，第七章，生物技术与食品，食品检测⑦临床输血与检验>2001年4期>双抗原夹心法与间接法检测抗-HIV(1+2)的比较⑧Reen DJ.1994.Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA).Methods Mol Biol.32:461-6.⑨李金明．定量聚合酶链反应技术．中华检验医学杂志，2002（2），123。