弧菌属
弧菌属
弧菌有100多种，广泛分布于自然界，尤以水中最多见。 形态短小呈弧形或杆形，菌体一端有鞭毛，能活泼运动， 革兰氏染色阴性，培养特性为喜碱怕酸，皆有内毒素，霍 乱弧菌可产生外毒素；大多数弧菌不致病，能引起人体致
病的有以下几种：
1，霍乱弧菌：是引起人类霍乱病的烈性病原菌；
2，不凝集弧菌（non-agglutinable vibrio, NAG）, 即 不被抗霍乱弧菌免疫血清所凝集的弧菌，有很多种，小部 分可引起人类致病，发生霍乱样腹泻；
为7.6-8.2;对酸敏感； 3， 生长迅速： ◆ 碱性蛋白胨水生长为浑浊，表面形成菌膜；
◆ 碱性琼脂培养基生长有菌落较大、扁平、湿 润、 边缘整齐、透明似水滴；
◆ 亚碲酸钾的平皿上，菌落呈黑色。
（三）、生化反应：
1， 糖发酵反应：霍乱弧菌能发酵蔗糖、甘露糖、 产酸不产气；不分解阿拉伯糖
2， V-P试验：大多Eltor型V-P试验为阳性；而经 典型为阴性；
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第2次 1826-37(11) +++ +++ +++ +++ +++ ++
第3次 1846-62(16) +++ +++ +++ +++ +++ -
第4次 1864-75(11) +++ +++ +++ +++ +++ -
第5次 1883-87(4) +++ +++ +++ +++ -
17弧菌属
（2）鞭毛、菌毛 、粘液素酶 ）鞭毛、 （3）O139还具有多糖荚膜和特殊 还具有多糖荚膜和特殊LPS ） 还具有多糖荚膜和特殊 毒性决定簇
22．所致疾病 、所致疾病
引起烈性肠道传染病的霍乱，为我国的法定传染 病（甲类），表现为剧烈的上吐下泻，导致严重 表现为剧烈的上吐下泻， 表现为剧烈的上吐下泻 的脱水、酸中毒、痉挛、尿闭、休克和死亡。 的脱水、酸中毒、痉挛、尿闭、休克和死亡 人类在自然情况下是霍乱弧菌的唯一易感者，主 要通过污染的水源或饮食物经口传染（粪口途 （ 径）。患者出现上吐下泻，泻出物呈“米泔水 出现上吐下泻，泻出物呈“ 出现上吐下泻 样”，并含大量弧菌，此为本病典型的特征。 并含大量弧菌，此为本病典型的特征
霍乱弧菌O1群血清型 霍乱弧菌 群血清型
01多克 01多克隆抗 出现频 血清型 多克 多克隆抗 (抗原组分 隆抗体 体 抗原组分) 抗原组分 率 A B C 小川型 ＋ ＋ ＋ － 常见 (AB) 稻叶型 (AC) 彦岛型 (ABC) ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ 常见 造成流 行 是 是 未知
＋ 极少见
A1
二 硫 键
毒性部分
A亚单 位(1个)
A2 与受体结合
B亚单 位(5个)
致 病 机 理：
B亚单位与小肠粘膜上皮细 胞GM1神经节苷脂受体结合， 介导A亚单位进入细胞
A亚单位裂解为A1和A2两 条多肽，A1亚单位发挥毒 性作用
A1
G蛋白
Gs
活化腺苷酸环化酶
ATP
cAMP
胞内cAMP↑，导致肠腺 上皮细胞分泌功能亢进，分 泌Na+、K+、HCO3-和水， 大量水和电解质在肠腔堆积 ，引起剧烈腹泻与呕吐 死亡 率高达60%。
第十七章
弧菌属
霍乱弧菌古典生物型与EI Tor生物型的区别
鉴别试验 溶血试验 鸡红细胞凝集试验 VP试验a 多黏菌素B抑制试验 第IV组噬菌体裂解试 验 古典生物型 -(+) + + EI Tor生物型 +(-) + +(-) -(+) -(+)
抗原结构与分型
H抗原：特异性较低，为弧菌属所共有。 H抗原无保护作用。
O抗原：特异性高，根据O抗原的特异性差别，分为139个血清群。
O1群：3个血清型，即原型（稻叶型）、异型（小川型）、 中间型（彦岛型)； 2个生物型，即即古典生物型和EI Tor生物型 ； O2-O138群:非O1群；
O139群：
O1和O139是引起霍乱病流行的病原菌。
生物学性状
抵抗力
霍乱弧菌对热及消毒剂抵抗力弱，在55℃湿热中 15min即死亡，对酸的抵抗力更弱，在正常胃酸中仅能 存活4min，该菌在河水中能存活较长时间。 霍乱弧菌对氯敏感，用漂白粉处理排泄物可达达 消毒目的。 EI Tor 生物型比古典生物型的抵抗力强。
所致疾病
致病性和免疫性
人类是霍乱弧菌的唯一易感者，一般认为摄入108～1010个细 菌才可导致发生霍乱。
传染源：污染的水源与食物。
传播途径：胃肠道。 致病过程： 霍乱的潜伏期为1d左右，但可短短至数小时或长至几天。霍 乱的发病多较突然，一般以剧烈的腹泻开始，继之为呕吐，个别 病人可伴随腹绞痛。每日大便次数可达数次至数十次。腹泻物多 为水样为米泔水样。临床可见严重脱水、电解质紊乱和代谢性酸 中毒。病人可死于肾功能衰竭和休克，但大多数病人如脱水能得 到及时纠正，可在3～7d内恢复。
标本
分离培养（PH8.0～9.0硷性蛋白胨水或硷性琼脂平板） 涂片镜检； 可疑菌落 生化反应； 血清学玻片凝集检查。 快速诊断 可用荧光菌球检查法或SPA协同凝集试验检测霍乱弧菌。
弧菌属
四、防治原则
及时发现，隔离，治疗病人 做好疫情报告 切断传播途径：改善社区环境，加强水源管理 疫苗预防接种 治疗关键：及时补充液体和电解质，预防大量失 水导致的低血容量性休克和酸中毒。
二 副溶血性弧菌
一、生物学性状
嗜盐（halophilic）：在培养基中以 含3.5％的NaCl最为适宜。
不耐热，不耐酸。
有单鞭毛，运动活泼，无芽孢。
二、致病性与免疫性
致病物质： 耐热直接溶血素和耐热相关溶血素 所致疾病：食物中毒 传播方式： 经烹饪不当的海产品或盐腌制品传播 因食物容器或砧板生熟不分污染本菌 临床表现： 潜伏期 5 ～ 72 小时，可从自限性腹泻至中度霍 乱样病症。
三、微生物学检查法 标本：采患者粪便、肛拭或剩余食物。
霍乱弧菌对热、干燥、日光、化学消毒 剂和酸均很敏感。 霍乱弧菌古典生物型对外环境抵抗力较 弱，E1-Tor生物型抵抗力较强。
二、致病性与免疫性
（一）致病物质
1.鞭毛、菌毛
鞭毛运动 --- 穿过肠粘膜粘液层，接近肠壁 上皮细胞。 菌毛---定居于小肠上皮细胞。
2.霍乱肠毒素
导致严重的腹泻与呕吐。
（二）所致疾病
四、防治原则
治疗可用抗生素。
小结
弧菌都是有鞭毛的格兰阴性菌，成弧状或 杆状。 通常经消化道传播，引起腹泻、呕吐等症 状。 主要有霍乱弧菌和副溶血性弧菌。
霍乱弧菌与副溶血性弧菌比较
细菌名称 霍乱弧菌 培养要求 致病要点
嗜碱 引起霍乱（剧烈 （pH8.8~9.0） 腹泻、米泔样便）
副溶血性弧菌
弧菌属
弧菌属（Vibrio）
是一大群菌体短小，弯曲 成弧形的革兰阴性菌 广泛分布于自然界，以水 中最多 与人类感染常见有霍乱弧菌、 副溶血性弧菌
致病性弧菌
古典生物型（Classical biotype） 埃尔托生物型（EL-Torbio-type）。
一、生物学性状
1、形态与染色
革兰染色阴性；弧性或逗点状；在病人“米泔水” 样便中呈“鱼群”样排列；
有一根单鞭毛，运动非常活泼，呈鱼群穿梭样或流 星状，
有菌毛和性菌毛，0139群有荚膜。
致病性弧菌
弧菌属（Vibrio）
弧菌属，为一大群菌体短小、弯曲成弧形的 革兰阴性菌
主要特点
有单鞭毛，运动活泼 培养要求为碱性环境 自然界广泛分布，以水中最多 只要有霍乱弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌
一、霍乱弧菌
霍乱主要表现为剧烈的呕吐、腹泻、失水，死亡率 甚高。属于国际检疫的烈性传染病。
诊断
标本采集：患者粪便、肛拭或剩余食物 分离培养：SS琼脂平板或嗜盐菌选择平板 嗜盐性试验与生化反应 诊断血清进行鉴定
防治
治疗可用抗菌药物 严重病例需输液和补充电解质
抵抗力
El Tor生物型和其它非01群霍乱弧菌 在外环境中的生存力较古典型为强
不耐酸，在正常胃酸中仅能存活4分钟 水中存活长，河水、井水、海水中1-3周 怕热，100℃1-2分钟死亡
致病物质
ToxR蛋白调控的ctxA、ctxB、tcp、zot、ace等基 因
不受ToxR蛋白调控的毒力因子基因hlyA和hap
生化反应：
过氧化氢酶、氧化酶阳性 发酵多种糖类，产酸不产气 还原亚硝酸盐，吲哚反应阳性 霍乱红反应阳性，不同生物型生化反应不同 （当培养在含硝酸盐及色氨酸的培养基中，产生靛基质与亚硝
酸盐，在浓硫酸存在时，生成红色，称为霍乱红反应）
抗原的构造与分群
有不耐热H抗原和耐热的O抗原。
弧菌科
不耐热的H抗原
为共同抗原
耐热的O抗原
具有群特异性和型特异性，是霍乱弧菌分群和 分型的基础
分型
根据O抗原的不同，现有155个血清群 O1群、O139群引起霍乱
O139血清群的抗原编码基因中出现了36kb的新基因 缺少了O1群高分子量的O抗原侧链 与O1群抗血清无交叉反应，但可与O22血清群和 O155血清群产生交叉反应，遗传学特征和毒力基因 与O1群相似。
培养特性
TCBS琼脂平板: 0.5~2.0mm大小，蔗糖不发酵而呈蓝绿色菌落 普通血平板: 不溶血或只产生α溶血 从腹泻患者中分离到的菌株95%以上在我妻（wagatsuma）琼脂上产生 β溶血现象，称为神奈川现象（Kanagawa phenomenon, KP） 嗜盐性选择平板: 较大，圆形，隆起，稍浑浊，半透明或不透 明，无粘性
（二）生物学特性
1. 形态
革兰阴性杆菌，有鞭毛（极单毛），无荚膜， 无芽胞
2. 抗原结构
耐热的菌体（O）抗原，具有群特征性，副溶 血性弧菌的O抗原有13种 鞭毛抗原，不耐热，无型特异性
3．培养特性
营养要求不高 在无盐培养基上不能生长，最适合生长的 氯化钠浓度为3.5%，超过8%不能生长 最适pH为7.7~8.0，但pH9.5时仍能生长， 最适生长温度为30~37℃ 在碱性胨水中经6~9h增菌可形成菌膜
用于霍乱弧菌的鉴别试验
霍乱红试验 霍乱弧菌有色氨酸酶和硝酸盐还原能力。 霍乱弧菌和其他弧菌均有此种反应 粘丝试验（String Test） 弧菌属细菌除副溶血性弧菌部分菌株外，均有此反应 O/129敏感试验 O/129 （2，4－Diamino－6，7－Diisopropylpteridine，2，4二氨基 －6，7－二异丙基喋啶） 10μg及150μg纸片周围出现任何大小的抑菌环均为敏感。 O1群和非O1群霍乱弧菌均敏感。 但已有对O/129耐药的菌株出现。用此试验作鉴定时，需特别谨 慎。需结合其他试验结果如耐盐生长试验等综合考虑
弧菌属
三、微生物学检查
烈性传染病及时做出疫情报告
四、防治原则
1.切断传播途径。
2.治疗
1）及时补液和电解质，预防大量失水导致的低血 容量性休克和酸中毒是治疗霍乱的关键； 2）抗生素
强化
1.悬滴标本中呈穿梭样运动的细菌是 A.大肠埃希菌 B.伤寒沙门菌 C.幽门螺杆菌 D.霍乱弧菌 E.变形杆菌 2.根据霍乱弧菌鞭毛的数量和位置，它属于 A.周毛菌 B.从毛菌 C.双毛菌 D.单毛菌 E.无鞭毛细菌
• 疾病特征： 1）胃部的炎症，胃酸产生的改变和组织的 破坏； 2）一旦定植，尤其导致的炎症可持续数年， 甚至终生。
4.微生物检测 检测尿素酶活性 1）胃镜检查时“搭车”采样，快速尿素酶检测 2）13C呼气试验（吃一粒药，吹口气） 4.治疗 胃黏膜保护剂+抑酸剂+抗菌治疗
1.形态与染色 革兰染色阴性，常排列成 S形或海鸥状。
2.培养特性 微需氧菌 3.生化反应 尿素酶丰富，可迅速分解 尿素释放氨，是鉴别该菌 的主要依据之一。
4.致病性 与免疫性 传染源： 传播途径：粪口途径 致病相关因素： 1）Hp能在其他细菌很难生存的胃中生存；（可产生酸 抑制蛋白，封闭胃酸的产生；尿素酶分解食物中的尿 素产生氨气，缓解局部胃酸的杀菌作用；） 2）黏附性强； 3）免疫产生的细胞因子，引起胃酸的大量分泌并造成 胃上皮细胞程序性死亡。
副溶血弧菌
主要引起食物中毒，是我国沿海地区食物中毒最常见的一种 病原菌。该菌引起的食物中毒经烹饪不当的海产品或盐腌制 品传播。临床表现：腹痛、腹泻、呕吐和低热。水样粪便， 但恢复较快。该菌具有嗜盐性。 某单位发生了以呕吐、腹泻呈水样便为主要症状的食物中毒, 防疫站调查后认定为与吃新鲜海蜇丝拌凉菜有关。 问题: 1)如何进行微生物学诊断? 2)请问致病菌可能是什么?
微生物学--弧菌
分离培养与鉴定
分离培养 粪便或肛拭标本：直接接种改良Campy-BAP
选择平板 血、脑脊液标本：布氏肉汤增菌后转种分离培
养基 微氧环境培养 不同细菌培养温度不同
Key Points
革兰阴性逗点状或S形的菌,运动活泼 微需氧：最佳生长环境为含5%O2、10% CO2、
85%N2 最适生长温度因菌种而异 营养要求高 氧化酶、触酶阳性，不能利用、不发酵各种糖类，
（3）快速诊断：O1和O139抗体做玻片凝集
（4）霍乱毒素的测定
二 分离培养和鉴定
初次分离用pH8.5碱性蛋白胨水，经4～6小时 液体表面大量繁殖，形成菌膜。
二 分离培养和鉴定
TCBS（硫代硫酸盐-枸橼酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板）
霍乱弧菌在TCBS琼脂平板上形成 发酵蔗糖的较大的黄色菌落
含亚碲酸钾的培养基：4号琼脂 庆大霉素琼脂
临床意义 (致病因素)
1.侵袭力
进入小肠，鞭毛、菌毛、分泌黏液，O139群有荚膜
穿过小肠黏膜表面黏液层
黏附于小肠黏膜上皮细胞刷 状缘的微绒毛上大量繁殖
临床意义 (致Βιβλιοθήκη 因素)2.霍乱肠毒素 MW：80000-90000 A1:活性亚单位 21812 A2:连接亚单位 5000 B：结合亚单位
霍乱弧菌肠毒素（CE, cholera enterotoxin）
鉴
定
定
生物学特性（培养特征）
需氧或兼性厌氧 营养要求不高，嗜盐（无盐不生长,最适盐浓度
3%） TCBS上形成绿色菌落
副溶血弧菌在TCBS 上菌落
鉴定特征
革兰阴性弧菌或杆菌，动力（＋） 氧化酶（＋），临床分离株脲酶常（＋） TCBS上绿色菌落、氯化钠生长试验 神奈川现象(+) 各种生化试验 TDH和TRH的检测：毒素和基因检测
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第11章弧菌属（Vibrio）
弧菌属：菌体短小，弯曲成弧形的革兰阴性菌。
广泛分布于自然界，以水表面最多。
一、霍乱弧菌（V ibrio cholerae）
（一）生物学性状
1. 形态与染色：G－，弧型或逗点状，单鞭毛；液体中，运动非常活泼，呈穿梭样；涂
片中，排列整齐，呈鱼群状。
人工培养后呈杆状。
2. 培养特性：耐碱不耐酸，在pH8.8～9.0的碱性蛋白胨水、碱性琼脂平板上生长良好－－
增菌。
能在无盐培养基中生长（区别其它弧菌）在TCBS培养基上生长。
过氧化氢酶阳性，氧化酶阳性，能发酵常见的单糖、双糖和醇糖，产酸不产气。
3. 抗原构造与分型：根据O抗原不同，现已有155个血清群，其中O1群、O139群引起霍乱，两者在抗原性方面无交叉。
△根据表型差异，O1群霍乱弧菌可分为两个生物型：古典生物型和El T or生物型。
4.抵抗力：El Tor生物型和其它非01群霍乱弧菌，在外环境中的生存力较古典型为强。
对热和一般消毒剂敏感。
（1）不耐干——干燥时易死亡，水环境中可存活两周（水源性传播，水性爆发）
（2）不耐酸——正常胃酸4min
（3）不耐热——100℃，1-2min
（4）对氯敏感
二、致病性与免疫性
（一）致病物质
1.霍乱肠毒素：已知最强致泻毒素
（1）A亚单位（1个）——使细胞内cAMP水平升高，主动分泌Na+、K+、HCO3－和水，
导致严重的腹泻与呕吐。
（2）B亚单位（5个）——与小肠粘膜上皮细胞GM1神经节苷脂受体结合，介导A亚单
位进入细胞。
2. 鞭毛：鞭毛运动有助于细菌穿过肠粘膜表面粘液层而接近肠壁上皮细胞。
菌毛：是细菌定居于小肠所必须的因子。
（二）所致疾病
1. 霍乱：烈性肠道传染病，甲类法定传染病。
在自然情况下，人类是霍乱弧菌的唯一易感者。
传染源：患者及无症状感染者。
传播途径：粪-口途径，通过污染的水源或食物如海产品（贝壳类）
正常胃酸条件下，10*8细菌方能引起感染。
2. 临床表现：剧烈的腹泻和呕吐（米泔水样腹泻），大量水分和电解质丧失（1L/H），代谢
性酸中毒、低碱血症、低容量性休克和肾衰竭（死亡率高达60％）。
3. 临床分期：
1)潜伏期：2-3天
2)吐泻期：剧烈吐泻、米泔样，每日数十次，持续2-3天
3)脱水期：严重吐泻引起水电解质紊乱，脱水酸中毒，肾衰、循环衰竭、休克、死亡
4. 表现：神志不安、淡漠“霍乱面容”，
脱水貌：眼窝下陷，舟状腹，肌痉挛等
5. 恢复期：吐泻停止、紊乱纠正、症状消失、病程平均为3-7天
（三）免疫性
感染霍乱弧菌后，机体可获得牢固免疫力，再感染少见。
抗肠毒素抗体（anti-B sub-unit）
和抗菌抗体(anti-O Ag)。
霍乱弧菌引起的肠道局部黏膜免疫是霍乱保护性免疫的基础。
肠道局部粘膜免疫（SIgA）起主要作用。
O1群与O139群无交叉免疫保护作用。
（四）病原学诊断要快速、准确，并及时做出疫情报告。
1. 标本：污染的水样、食物和粪便，病人肛试子
标本要及时培养或放入Cary-Blair保存液中，不宜用甘油盐水保存。
2. 直接镜检：悬滴法观察细菌呈穿梭样运动；涂片可见G－弧菌，鱼群状排列。
3. 分离培养：碱性蛋白胨水或选择培养基增菌TCBS 选择培养基
4. 血清学鉴定：玻片凝集反应。
五、防治原则
1. 控制传染源
（1）切断传播途径：改善社区环境，加强水源管理
（2）提高易感者免疫力：疫苗预防接种B亚单位－全菌灭活口服疫苗；基因工程减毒活菌苗；基因工程亚单位疫苗。
2. 治疗关键：及时补充液体和电解质，预防大量失水导致的低血容量性休克和酸中毒。
抗生素可加速清除细菌，减少毒素的产生。